不同基因型丙型肝炎病毒RNA定量分析

目的　根据定量 PCR检测结果 ,了解血清不同基因型 HCV- RNA的含量 .方法　采用荧光定量 PCR和逆转录巢式定性 PCR同时检测 16 6例丙肝患者的血清 HCV- RNA,再进行酶切分型 .计算各型 HCV- RNA平均含量 .结果　定量 PCR阳性血清 (131例 ) HCV- RNA含量在 1× 10 4 .0 4～ 1×10 8.1 1拷贝· m L- 1 .HCV- 型 (10 6例 )、HCV- 型 (18例 )和 / 混合型 (3例 ) RNA平均滴度分别为 1× 10 6 .88± 2 .0 1拷贝· m L- 1 ,1× 10 5.79± 1 .82 拷贝· m L- 1 和 10 5.50± 1 .6 2 拷贝· m L- 1 .结论　定性和定量检测结果有很好的一致性 .HCV- 型病毒含量显著高于 HCV- 型 .     

定量聚合酶链反应检测血清中HCV RNA^＋

目的：探讨定量聚合酶链反应用于检测丙型肝炎病毒HCV含量变化的意义。方法：用信号引物能量转移定量聚合酶链反应（PCR），检测68例丙型肝炎患者血清HCVRNA水平。结果：其HCVRNA含量范围103～1011拷贝／ml，急性丙肝106.83±3.72拷贝／ml，慢性丙肝106.54±2.67拷贝／ml，而无症状携带者104.95±2.16拷贝／ml。血清HCVRNA水平同ALT水平呈相关。结论：丙肝病毒感染后HCV复制水平与肝损害相关，定量检测HCVRNA的水平变化是预测和评价干扰素疗效的重要指标。     

肝炎基因诊断芯片对丙型肝炎病毒基因分型检测的初步研究

目的 研究丙型肝炎病毒（HCV）基因分型诊断芯片的制备和其对丙型肝炎患者血清HCVRNA基因分型诊断的准确性。方法 根据丙型肝炎病毒5′端非编码区末端（5UTR）和C区设计引物和特异性探针,将设计的20条特异性寡核苷酸探针用核苷酸合成仪合成后,配制成浓度为50μmol/ml的点样液,用点样仪点到特殊处理的玻片介质上,制成丙型肝炎病毒基因分型诊断芯片,收集HCVRNA阳性的丙型肝炎患者血清60份作为实验组,健康人血清60份作为对照组,用荧光定量PCR仪对两组血清进行HCVRNA定量检测,实验组血清HCVRNA含量均大于500拷贝/ml,对照组血清HCVRNA含量均小地500拷贝/ml,两组血清进行HCVRNA分离纯化,逆转录反应,巢式PCR扩增后,分别用基因芯片,HCVRNA核酸序列测定法（美国Li-Cor核酸序列测定仪）进行双盲丙型肝炎基因分型检测。结果 实验组血清基因诊断芯片检测均为阳性;基因分型;1b型46例,3a型3例。3b型3例,2a型2例,2b型2例,混合型1b 2a2例。1b 3b型2例;核酸序列测定分型1b型50例,3a型3例,3b型3例,2a型2例,2b型2例;基因诊断芯片检测和核酸序列测定检测的基因分型结果符合率为93.3%。对照组血清基因芯片检测匀阴性。结论 肝炎病毒基因诊断芯片可以用于检测血清HCVRNA,并进行基因诊断分型,准确率较率。     

基因芯片法对丙型肝炎病毒RNA的基因型分析

目的：制备丙型肝炎病毒(HCV)基因的分型诊断芯片，检测其对丙型肝炎患者血清HCVRNA基因分型诊断的价值。方法：根据HCV 5′端非编码区末端(5′UTR)和C区设计引物和特异性探针，将设计的20条特异性寡核苷酸探针用核苷酸合成仪合成后，配制成50μmol／ml的点样液，用点样仪点到特殊处理的玻片介质上，制成HCV基因分型诊断芯片。收集HCVRNA阳性的丙型肝炎患者血清30份作为实验组，健康人血清30份作为对照组。用荧光定量PCR仪对两组血清进行HCVRNA定量检测，实验组血清HCVRNA含量均大于5()()copies／ml，对照组血清HCVRNA均为阴性。两组血清进行HCVRNA分离纯化、逆转录反应、巢式PCR扩增后，分别用基因芯片与核酸序列测定法进行双盲HCV基因分型检测。结果：实验组血清基因诊断芯片检测均为阳性；基因分型1b型23例，3a型2例，3b型1例，2a型1例，2b型1例，混合型1b 2a1例，1b 3b型1例；核酸序列测定分型1b型25例，3a型2例，3b型1例，2a型1例，2b型1例；两种方法检测的基因分型符合率为93．3％。对照组血清基因芯片检测均阴性。结论：制备的HVC基因诊断芯片可以用于检测血清HCVRNA，并进行基因诊断分型，准确率较高。     

荧光聚合酶链反应定量检测丙型肝炎患者血清中HCV RNA及其意义

目的：为了解丙型肝炎患者血清HCVRNA含量与疾病程度及血清丙氨酸转氨酶（ALT）水平的关系。方法：采用荧光聚合酶健反应（PCR）的方法，对105例不同临床类型丙型肝炎患者的血清HCVRNA进行定量检测。结果：丙型肝炎血清HCVRNA含量在103～109．5拷贝／ml之间。无症状HCV感染者血清HCVRNA含量（105.2±1.8拷贝／ml）显著低于急性丙型肝炎患者（107.5±2.4拷贝／ml）、慢性丙型肝炎患者（107.8±3.1拷贝／ml）及肝硬化（107.6±2.5拷贝／ml）。相关分析显示，慢性丙型肝炎病毒血症水平与血清ALT呈显著正相关。结论：高水平的HCV复制可能在肝损害和肝脏疾病的进展中发挥着重要作用。     

武威地区丙型肝炎基因分型情况分析

目的:了解武威地区丙型肝炎基因分型特征,为HCV感染者的个体化治疗提供科学依据.方法:实时荧光定量RT-PCR检测70例抗-HCV阳性血清标本,并对血清标本PCR扩增基因片段,测定核苷酸序列进行基因分型.结果:70例标本中HCV1b型38例,占54%;HCV2a型21例,占30%;HCV1b/2a混合型9例,占13%;HCV2b型2例,占3%.结论:武威地区HCV基因型主要为1b型,其次为2a型,同时存在1b/2a混合型和2b型,与相邻城市HCV基因型分布比较有一致和差异.     

PCR-RDB技术在HCV基因分型中的应用研究

目的:评价PCR-RDB技术在丙型肝炎病毒(HCV)基因型检测中的临床实际应用价值。方法:随机收集经实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测HCV RNA含量大于1×103 IU/ml血清样本总计158份,其中无临床症状丙型肝炎病毒携带者90例,慢性丙型肝炎(CHC)患者48例,肝硬化(HS)患者16例,肝癌(LC)患者4例。全部血清样本应用PCR和反向斑点杂交技术(RDB)进行HCV基因分型检测,并对检测结果进行统计学分析。结果:所有标本HCV基因分型成功,其中1b型78例,2a型65份,3a型3例,3b型2例,6a型2例,1b和2a混合感染型8例。不同疾病组HCV不同基因型分布差异无统计学意义。结论:HCV基因型与疾病类型无相关性;PCR-RDB杂交技术适用于临床实验室开展HCV基因型检测。     

出入境人员HCV基因型与血清HCV载量及ALT相关性研究

目的 探讨出入境人群HCV的基因分型，并分析HCV不同基因型与病毒载量、ALT活性水平的相互关系。方法 对72542名出入境人员进行HCV抗体检测，对抗-HCV阳性标本进行HCV基因分型。以荧光定量PCR测定HCVRNA载量，同时检测ALT活性。结果 共发现197份标本呈抗-HCV阳性，阳性率为0．27％，其中出境人员阳性率为0．24％。入境人员阳性率为0．31％。抗-HCV阳性标本经PCR检测基因分型后发现110份标本含有HCVRNA，共发现5种基因型，其中1b占40．0％、6a占30．0％、2a占14．5％、1a占8．2％、2b占7．3％。中国大陆人群与中国香港及其他国家人群的各基因型分布无明显差异。各基因型群间与HCVRNA载量差异具有统计学意义（P〈0．05），2a型人群HCVRNA载量明显高于其他各型人群（P〈0．05）。不同基因型人群间ALT水平差异无统计学意义。HCV RNA拷贝量与ALT活性无相关性。结论 HCV-1b为优势基因型。对HCV基因分型以厦PCR病毒载量和LAT活性检测。实行HCV实时监测具有重要的意义。     

微板核酸杂交技术对江西地区HCV基因分型的观察

目的 采用微板核酸杂交-ELISA技术对HCV RNA进行基因分型。方法 采用PCR、核酸杂交和酶联显色技术，首先将HCV RNA进行RT-PCR扩增，并将扩增产物加入预先包被对HCV通用探针的徽孔板，再加入HCV各基因型显色探针，同时进行微板核酸杂交-ELISA显色，对江西地区129例临床诊断为丙肝RNA阳性患者血清中的HCVRNA进行基因分型研究。结果 江西地区HCV基因型可分为1b、2a、2b、3a、3b、6a、la／2a、1b／2a、1b／3a、1b／6a、3a／5a、2a／3a共12种单一基因型和混合基因型，其中以1b基因型为主，占50．39％；慢性丙肝患者的基因型较为复杂，存在较高比例的混合基因型。结论 江西地区HCV感染者以1b基因型为主．PCR徽板核酸杂交-ELISA方法可以准确、快速、简便进行HCV基因分型，在探讨HCV的流行病学及观察药物对各基因型的疗效方面具有重大的意义。