基因敲除技术在胰岛素抵抗研究中的应用

基因敲除技术的发展与应用为胰岛素抵抗的研究提供了有效的手段。本文综述了近年来应用该技术对胰岛素信号通路及效应器中特异基因敲除后对胰岛素抵抗发生发展的影响．并为其治疗与药物的开发提供思路。     

DNA重组技术与医药的未来

可以预期,由 DNA 重组技术或称遗传工程所导致的生物学革命,对医学和医药工业的某些领域特别是生物制品的生产将产生巨大的影响。其影响可能有如下几个方面。1.改进一些药品的现有生产方法DNA 重组技术可使目前得自天然来源或半合成方法的一些生物制品改变为发酵法生产。例如,已研究成功的人胰岛素,原来是通过猪胰岛素的半合成法制得;人生长激素,     

基因工程课程内容的更新与教学方法的反思

基因工程课程是生物工程、生物技术和生物制药等专业的必修课,包括基因操作原理与基因工程实践两部分内容。它为分子生物学研究提供技术支持,为工程应用提供理论指导。随着DNA合成与测序技术的发展以及新型DNA组装与编辑技术的兴起,基因工程的概念持续升级,基因工程的课程内容和教学方法都需要进行相应的更新与改革。本文就此内容展开论述。     

胰岛素对淋巴细胞免疫活性的调节作用

以四氧嘧啶糖尿病小鼠为模型,观测模型鼠免疫细胞活性及胰岛素对其脾淋巴细胞DNA合成及白细胞介素2(IL-2)产生的影响。实验结果表明,病鼠在高血糖低胰岛素状态下淋巴细胞DNA合成及IL—2的产生均明显降低(均P<0.01)。将病鼠脾淋巴细胞悬浮于含胰岛素的培液内,其淋巴细胞DNA合成及IL-2产生均显著升高。     

POLH基因实时荧光定量PCR检测条件的建立

研究表明,环境化学污染物可以引起各种类型的DNA损伤,而POLH基因与DNA损伤所引起的细胞内反应即DNA的跨损伤合成(translesion synthesis,TLS)有关.因此,有必要寻找出一种敏感度极高的方法来检测POLH基因在mRNA水平上的表达变化,从而为探讨POLH基因在环境化学污染物所诱导的跨损伤DNA合成中的分子作用机制提供相应的线索.     

胰岛素类似物的研究与其在临床治疗糖尿病中的应用进展

近年来，科学家利用基因脱氧核糖核酸（DNA）重组技术，改变胰岛素肽链上某些部位的氨基酸组合和等电点，并增加六聚体的强度；或对胰岛素氨基酸的序列进行修饰，或在分子上增加脂肪酸链，加大与白蛋白的结合，均改变了普通胰岛素的理化和生物学特征，从而研制出较常规人胰岛素更适合人体生理需要以控制血糖的胰岛素，并合成了一系列胰岛素类似物（Insulin similitude），亦被称为“速效胰岛素”或餐时胰岛素（Mealtime insulin）。目前，已上市用于临床的有赖脯胰岛素、门冬胰岛素、赖谷胰岛素、甘精胰岛素、地特胰岛素等。其中，前三者为短效胰岛素类似物，后二者为长效胰岛素类似物。     

基因医学中基因治疗的研究和开发

在休斯敦的Baylor医学院由20多名研究者组成的基因医学公司，主要从事合成载体生产和DNA表达技术的基因药品研究和开发（R＆D）。最近透露，第一种试用于临床的基因药品，就能在局部释放高浓度的类胰岛素生长因子（IGF－1）。估计在1994年上半年得到美国IND批准。此药可用于因外伤所致大量肌肉损伤的恢复和够关节周围肌肉再生及其他修复术；还可治疗恶病质的骨疏松和周围神经病变。基因医学关键在于新基因的转移技术，只要靶基因适合某一种细胞和组织，此种基因在这种细胞内以新的方式控制蛋白质表达。这些研究将和药品治疗一样能应用…     

质粒DNA类基因治疗药物的研究现状及发展趋势

基因治疗是将外源基因导入人体以纠正基因缺陷的方法，通过转录和翻译实现对细胞基因表达的调控，从而合成特异性蛋白治疗相关疾病。质粒DNA是经基因工程改造过的环状DNA分子，其结构简单，具有自主复制能力，可以携带治疗基因导入人体细胞，被广泛用于基因治疗的研究中。目前已上市及正处于临床研究的基于质粒DNA的基因药物包括cambiogenplasmid、Tavo等。对遗传病、恶性肿瘤等适应证，质粒DNA的基因治疗比传统的治疗方案有明显优势。CRISPR-Cas9等相关的质粒基因编辑技术成为质粒DNA类基因治疗的一大研发趋势，基因枪、聚合物纳米载体等递送系统以透皮给药、静脉注射等方式为质粒DNA导入体内提供了更多可能。基于质粒DNA类的基因治疗已成为基因治疗领域的一种理想技术手段。     

表皮生长因子对肝细胞DNA合成作用的体内与体外研究

本文应用单克隆抗溴脱氧脲嘧啶抗体(Monoclonal anti-bromodeoxyuridine)标记DNA 技术和流式细胞术(Flow cytometry)对表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)、胰高血糖素(G)和胰岛素(I)对犬鼠肝细胞DNA 合成的刺激作用分别进行了体内和体外研究。     

DNA家族改组技术的进展及应用

DNA家族改组(DNA family shuffling)是一项高效的体外进化技术,该技术利用自然界中具有同源序列的基因家族--如来自不同种属的相同基因以及同一种属的相关基因等进行改组,为蛋白质定向进化和结构--功能关系分析等研究提供了有效获得突变文库的方法.近年来,DNA家族改组技术不断取得新的发展,应用领域日益扩展,在生物合成途径的改造、植物抗病能力的加强、环境污染的治理、医药工业的发展、异源表达体系的建立等方面都发挥了重要作用.文章综述了这项技术在近年来的新发展和新应用,并展望了DNA家族改组技术的发展前景.     

胰岛素制剂现状

<正> 随着糖尿病(DM)研究的深入,近年来对胰岛素制剂提出了越来越高的要求。一方面是胰岛素原料药的质量,如高纯化胰岛素的使用,半合成和全合成人胰岛素的出现等;另一方面是剂型和给药途径,如各种注射用制剂,非注射给药剂型的研制和胰岛素滴注泵的使用等。本文拟就应用和研究中的胰岛素制剂作一概述。一、胰岛素原料药当今的胰岛素原料药主要区别在于动物的种属、纯度和价格。八十年代重组DNA技术全     

基因工程的原理和方法

<正> 基因工程是指在体外通过酶促反应将目的基因或异源DNA片段与适当基因载体(vector)进行重组,形成杂种DNA分子,然后将其转化进入细菌,酵母等受体细胞进行增殖和表达,从而产生基因编码的多肽或蛋白质的过程。比如,胰岛素通常是从猪、牛、羊等动物胰脏中提取的。现在人们可以把编码胰岛素分子A链和B链的基因分别与质粒进行重组,然后用重组质粒转化大肠杆菌,使大肠杆菌生产出胰岛素的A链和B链,最后在体外组     

胰岛素类似物的研究进展

随着社会的发展,人类生存环境、生活方式的改变,糖尿病的发病率逐年攀升,糖尿病已成为21世纪人类健康的主要威胁之一.而胰岛素是糖尿病患者（不管是1型或是2型）终生依赖的药物.但胰岛素不能口服,如果能找到非肽类胰岛素类似物,可以通过口服降血糖,同时又安全无毒,这类小分子物质无疑将会给糖尿病患者带来福音.因此世界各国的科学家都在致力于寻找能替代目前胰岛素的药物,尤其是上世纪80年代后期,应用DNA重组技术合成长效胰岛素类似物开创了糖尿病治疗的新时代.     

基因重组体的培养工程

基因重组技术在应用于医学、生物学等基础领域的各种研究的同时,期望扩大应用于工业化生产和农业诸领域.然而,重组DNA实验之初,基于有造成预想不到生物事故的可能性,先是美国,继后各国纷纷制定重组DNA实验法规.日本于1979年亦制定了法规,尔后对DNA重组体的安全性作了评价,才放宽了DNA重组实验的法规.同时,利用重组技术,成功地生产出胰岛素、干扰素、生长激素等物质.今后,预料DNA     

供产生抗生素链霉菌种间基因转移用的DNA无性繁殖系

新抗生素的产生或抗生素结构和效能的改变主要通过化学的途径,如半合成抗生素或生物学的途径,如突变生物合成。近年来生物遗传工程学无论在理论研究或应用方面都有很大的发展,利用 DNA 体外重组和基因克隆化以及原生质体融合的技术已越来越受刭重视,这些新技术的应用无疑将为创制新抗生素开辟广阔的前景。本期介绍两篇译文供读者了解这方面的研究概况。     

重组大鼠pEGFP-N1-IGF-1基因表达质粒的构建

目的构建胰岛素样生长因子1基因的真核表达质粒(pEGFP-N1IGF-1),为基因治疗脊髓损伤(SCI)提供前提。方法应用反转录聚合酶链反应(RTPCR)方法从大鼠肝脏组织总RNA中提取并扩增胰岛素样生长因子1(IGF1)基因的全长cDNA,并将该基因连接克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFPN1上,以构建重组质粒pEGFPN1IGF1。结果实验从大鼠肝脏组织中提取总RNA,以RTPCR方法获取编码IGF1基因的全序列cDNA。构建IGF1cDNA真核表达质粒时将能发出绿色荧光的EGFP报告基因融合在IGF1基因,并经酶切后DNA电泳鉴定及DNA测序证实结果。结论构建重组质粒pEGFPN1IGF1成功,实验中将能发出绿色荧光的EGFP报告基因融合在IGF1基因的3′端,并以编码柔软肽段的核苷酸连接,既保留了IGF1的神经营养活性,又便于基因治疗中可检测到蛋白表达。     

原发性高血压及胰岛素抵抗与ACE基因多态性的关系

胰岛素抵抗是独立的心血管病的危险因素,在EH的发生发展中起重要作用.ACE基因I/D多态性与高血压胰岛素抵抗的研究较少,而且ACE基因I/D多态性与原发性高血压的关系仍有许多争论.本课题主要研究老年高血压患者胰岛素抵抗与ACE基因多态性的关系,为临床高血压病的诊断和治疗提供依据.     

高通量DNA测序技术在抗体新药研发中的应用

自2005年首次报道了一种基于微乳液PCR技术的高通量DNA测序技术 (high-throughput DNA sequencing technology) 以来, 高通量DNA测序平台已经发展为基因组和各种基因文库序列检测的强大工具。大容量的抗体基因库是目前获得抗体新药的基础, 高通量DNA测序技术为从海量的抗体基因库中快速发现功能抗体分子提供了可能。本文就近几年高通量DNA测序技术在抗体基因库的多样性分析, 抗体CDR3区的高通量测序、频率分析、功能基因发现及各种展示技术与高通量DNA测序技术的对接应用等方面进行了综述, 以期为抗体新药的研发提供一条新的技术路线。     

神经酰胺在胰岛素抵抗中的作用及干预研究进展

胰岛素抵抗是代谢综合征的重要的病理特征,其中神经酰胺在胰岛素抵抗发生、发展中起到了重要作用。神经酰胺能激活细胞凋亡通路,增加线粒体膜通透性,诱导内质网应激,抑制胰岛素信号传导通路,从而降低胰岛素敏感性,诱导胰岛素抵抗;通过丝氨酸棕榈酰转移酶抑制剂、腺苷酸活化蛋白激酶激活剂、基因干预或运动等方法,干预神经酰胺合成和代谢,可以改善胰岛素抵抗。本文将阐述神经酰胺与胰岛素抵抗的关系以及干预研究进展。     

基因工程大肠杆菌肠毒素菌苗研究进展

在传染性腹泻中产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)的作用已引起人们的高度重视。DNA重组技术的发展,为研制大肠杆菌肠毒素基因工程菌苗提供了新途径。本文叙述了大肠杆菌肠毒素的结构及其基因分析,介绍了基因工程菌苗的研究近况。