成年猪肺动脉内皮细胞的体外培养

目的：建立成年猪肺动脉内皮细胞（PAEC）的体外培养方法，为研究PAEC的功能提供新的实验模型。方法：采用游离血管外翻消化的方法进行体外培养，并对其进行鉴定和分泌功能的观察。结果；形态学和免疫学等鉴定方法证实，实验中培养中细胞为PAEC，同时具有良好分泌内皮素的生理功能。结论：建立的成年猪PAEC的体外培养方法，可做为研究PAEC在各种病理变化中作用机制的实验模型。     

川芎嗪对培养牛肺动脉内皮细胞分泌NO、TF和TFPI的影响

川芎嗪是心、脑血管疾病防治中的有效药物。资料表明 ,川芎嗪具有改善疾病状态下的内皮细胞的功能[1] 。但川芎嗪对血管内皮细胞合成和分泌一氧化氮(ＮｉｔｒｉｃＯｘｉｄｅ ,ＮＯ) ,组织因子 (ＴｉｓｓｎｅＦａｃｆｏｒＴＦ)及组织因子途径抑制物 (ＴｉｓｓｕｅＦａｃｔｏｒＰａｔｈｗａｙＩｎｈｉｂｉｔｏｒＴＦＰＩ)有无影响 ,目前尚未见报道。因此 ,我们在培养的新生牛肺动脉内皮细胞 (ＢｏｖｉｎｅＰｕｌｍｏｎａｒｙＡｒｔｅｒｙＥｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ,ＢＰＡＥ)上 ,观察了川芎嗪对血管内皮细胞合成和表达ＮＯ、ＴＦ和ＴＦＰＩ的影…     

大鼠脑微血管内皮细胞的原代培养与鉴定

目的 探讨大鼠脑微血管内皮细胞培养方法.方法 5～7d龄SD大鼠脑皮质用胶原酶消化得到脑微血管段后,接种于培养瓶进行原代培养.培养的细胞采用倒置显微镜进行形态学观察,免疫荧光法鉴定Ⅷ因子相关抗原,MTT法测定细胞活力.结果 倒置显微镜下细胞呈单层“铺路石样”排列的典型特征;Ⅷ因子相关抗原免疫荧光检测得阳性细胞率达95％...     

迷迭香酸拮抗H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡及作用机制

目的研究迷迭香酸(Rosmarinic acid,RA)对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞株ECV304凋亡的抑制作用及其机制。方法以H2O2诱导ECV304细胞凋亡为模型,用MTT比色法检测RA对细胞活性的影响;流式细胞仪检测法和Tunel法检测RA对细胞凋亡率的影响;用Western-blotting检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白的表达情况和第24hcaspase-3活性。结果用0.5mmol/LH2O2孵育细胞24h细胞凋亡明显。不同浓度的RA(1、3、10μmol/L)预处理细胞后,呈浓度依赖性的增加内皮细胞活性,降低细胞凋亡率,并且Bcl-2蛋白表达呈浓度依赖性的上调,而Bax蛋白的表达和caspase-3蛋白活性呈浓度依赖性下降。结论迷迭香酸可以拮抗H2O2诱导的内皮细胞凋亡,其抑制内皮细胞凋亡与激活Bcl-2活性有关。     

松多酚对牛肺动脉内皮细胞抗氧化活性影响

目的 探讨松多酚对H₂O₂引起的牛肺动脉内皮细胞（BPAECs)氧化损伤的保护作用。方法 采用H₂O₂诱导BPAECs建立氧化损伤模型,实验设对照组、模型组、松多酚高、中、低（0.5、0.1、0.05 mg/mL)剂量组;噻唑蓝法检测细胞存活率,试剂盒法检测抗氧化酶活性、丙二醛含量等。结果 与对照组比较,模型组BPAECs存活率[（0.71±0.03)%]下降,超氧化物歧化酶（SOD)、过氧化氢酶（CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px)活力[分别为（24.67±0.69)、（41.95±0.58)、（24.38±1.67）U/mg prot]下降,MDA含量[（5.83±0.04）mmol/mL]升高;与模型组比较,松多酚0.5 mg/mL组BPAE[JP2]Cs可明显提高细胞存活率[（1.64±0.03)%],SOD、CAT和GSH-Px[JP]酶活力[分别为（53.62±1.24)、（61.01±1.10)、（48.62±0.82)U/mg prot]明显升高,MDA含量[（1.96±0.00)mmol/mL]明显降低,蛋白质羰基含量降低;呈剂量-效应关系。结论 松多酚对H₂O₂诱导氧化损伤的BPAECs具有保护作用。     

900MHz微波电磁辐射对原代培养的大鼠脑皮质神经元的谷氨酸AMPA受体2及胞内钙离子浓度的影响

目的　研究非“致热效应”强度的微波 (90 0MHz)电磁辐射对分离式原代培养的大鼠脑皮质神经元谷氨酸受体 2 (GluR2 )及胞内钙离子浓度的影响。方法　将大鼠脑皮质神经元暴露于 90 0MHz的连续性微波电磁辐射 (SAR =3 .2 2W Kkg、2 .2 3W kg、1. 15W kg) ,进行每天 2小时、连续 4天 (或 6天 )及一次性 12小时暴露(SAR =3. 2 2W kg) ,观察其对上述指标的影响。结果　免疫组织化学及激光扫描共聚焦显微镜研究显示 ,SAR =3. 2 2W kg、2 . 2 3W kg、1. 15W kg时 ,微波使暴露组神经元的GluR2表达明显下调 (P <0 . 0 1) ,同时使胞内钙离子浓度明显上调 (P <0 . 0 1)。结论　 90 0MHz微波电磁辐射 (SAR =3 .2 2W kg、2. 2 3W kg、1. 15W kg)对神经元GluR2表达及胞内钙离子浓度的影响具有蓄积效应 ,且具有一定的剂量反应关系 ,一次性微波暴露的影响在一定程度上是可逆的 ,所选微波对神经元的影响属于电磁辐射的非“致热效应”。     

血管紧张素Ⅱ对缺氧血管内皮细胞内Ca^2＋浓度的影响及地尔硫卓的保护作用

目的观察缺氧条件下血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人大血管内皮细胞内Ca^2＋浓度变化的影响,以及地尔硫卓对其的保护作用,为进一步的临床研究提供药理学基础。方法将培养的血管内皮细胞分为4组：对照组、缺氧组、缺氧＋AngⅡ组和缺氧＋AngⅡ＋地尔硫卓组。应用激光共聚焦显微镜测量各组内皮细胞内Ca^2＋浓度。结果上述4组血管内皮细胞内Ca^2＋浓度（荧光值）分别为28.46±5.29、40.08±7.80、51.66±8.93、35.49±7.79。缺氧组、缺氧＋AngⅡ组细胞内Ca^2＋浓度明显高于对照组（P〈0.01）;缺氧＋AngⅡ＋地尔硫卓组细胞内Ca^2＋浓度明显低于缺氧组、缺氧＋AngⅡ组（P〈0.01）,接近于对照组（P〉0.05）。结论缺氧及AngⅡ可引起血管内皮细胞内Ca^2＋浓度增加。地尔硫卓能阻止缺氧及AngⅡ引起的内皮细胞内Ca^2＋浓度升高,对细胞内Ca^2＋超载具有保护作用。     

1，2－二氯乙烷对大鼠神经细胞内钙离子浓度的影响

[目的]用体外实验方法研究1,2-二氯乙烷（1,2-DCE）染毒后大鼠神经细胞内钙离子（Ca^2＋）浓度的变化。[方法]体外培养新生SD大乳鼠脑皮质细胞,分别用0．5、1．0、2．0mL/L1,2-DCE染毒,另设对照组,观察各组神经细胞形态学变化。同时应用激光共聚焦显微镜测定各组细胞内Ca^2＋浓度,探讨1,2-DCE对大鼠神经细胞内Ca^2＋浓度的影响。[结果]神经细胞染毒后,神经细胞形态发生明显改变：胞体肿胀崩解、胞核模糊不清、突触变短变粗、细胞间连接减少、细胞膜不完整;随着染毒剂量的增高,神经细胞损伤的严重程度呈上升趋势。各染毒组神经细胞活力较对照组有所下降,差异有统计学意义（P〈0．01）;染毒2h后随着染毒剂量的增加,各组神经细胞内Ca^2＋浓度呈上升趋势,各染毒组细胞与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）;染毒24h后,低、中剂量组与对照组细胞内Ca^2＋浓度比较差异有统计学意义（P〈0．01）,高剂量组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。[结论]1,2-DCE可以导致神经细胞水肿坏死,有剂量依赖关系,神经细胞内Ca^2＋浓度亦见升高,提示Ca^2＋可能与1,2-DCE致神经细胞中毒性脑水肿有关。     

石蟹炮制对钙离子煎出量影响的探讨

石蟹为古生代节肢动物石蟹及其他近缘动物的化石。“石蟹生南海 ,又云是寻常蟹尔 ,年月深久 ,水沫相着 ,因化成石 ,每遇海潮即漂出 ,……点目良。” (引自《本草纲目》)具有清肝明目、消肿解毒的功效 ,主要成分为碳酸钙。古今常运火煅醋淬法炮制 ,究其目的是因部分钙盐受热分解成钙的氧化物。同时 ,钙离子易被机体吸收 ,使血液中钙的含量增加 ,止血作用增强。为此钙煎出量大小与临床关系甚密。现试用不同炮制方法 ,比较石蟹钙的煎出量 ,探求最佳炮制方法。材料与方法1　仪器与试剂　Ｌａｍｂｄａｌ2紫外—可见分光光度计 (美国ＰＥ公司生产 …     

微波辐照对培养血管内皮细胞Nrf2的磷酸化作用

目的 研究微波辐照对参与抗氧化应激反应调节的转录因子（Nrf2）的磷酸化作用。方法 培养的ECV304细胞接受微波辐照，辐照后2，4，8，24h进行指标测定。用免疫共沉淀-放射自显影法测定Nrf2磷酸化水平；用Western blot、r-^32P-ATP标记液闪法分别测定蛋白激酶C（PKC）表达量和活性。结果 微波辐照后2，4，8h，Nrf2磷酸化水平比未辐照细胞明显增强（P〈0．05），4h达到峰值，24h回复到正常水平；同时PKC的蛋白表达量在辐照后2，4，8h也比对照细胞明显增加，PKC的活性在这一时段比对照分别增加了36％，93％，47％（P〈0．05）。辐照后24h，PKC含量和活性均下降到正常水平。辐照后PKC含量和活性变化与Nrf2磷酸化水平的变化在时效上有一致性。结论 微波辐照可引起培养血管内皮细胞Nrf2磷酸化水平在一定时段内增强，该过程与PKC激活有关。     

高甘油三酯血清对牛主动脉内皮细胞一氧化氮合酶基因表达的影响及其机制的研究

目的研究高甘油三酯血清(HTS)对原代牛主动脉内皮细胞(BVEC)一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的影响及其可能机制。方法采用Western印迹法从蛋白质水平检测高甘油三酯血清对牛主动脉内皮细胞eNOS和一氧化氮(NO)活性的影响。在证实其效应的基础上,采用Western印迹法检测经HTS作用后,PKC-MAPK-MAPKK信号转导通路的改变。进一步从Ⅳ型高脂蛋白血症血浆提取极低密度脂蛋白(VLDL)(HTG-VLDL)并采用Western印迹法研究HTG-VLDL对eNOS的蛋白质表达的影响。结果HTS以浓度依赖的方式抑制eNOS的蛋白质表达,减少一氧化氮的产生,并以剂量和时间依赖的方式促进MAPK的磷酸化,而经PKC、MAPKK和MAPK抑制剂预处理后,HTS对eNOS的蛋白质表达的抑制作用更明显;另外发现HTG-VLDL可抑制eNOS的蛋白质表达水平。结论HTS抑制eNOS的蛋白质表达水平,可能部分通过HTG-VLDL对eNOS的影响,但未经PKC-MAPKK-MAPK通路,而且PKC-MAPKK-MAPK可能参与了eNOS正常的蛋白质表达,HTS增加MAPK的磷酸化水平有可能是一种细胞自身保护机制。     

Ghrelin抑制棕榈酸诱导的人血管内皮细胞凋亡

目的 探讨ghrelin能否抑制棕榈酸诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡.方法 人脐静脉内皮细胞分别在含0.3 mM棕榈酸的培养基中孵育24 h,培养基中如或不加ghrelin,流式细胞仪Annexin V/PI法检测凋亡,分光光度计检测caspase-3活性,应用DCFH-DA通过流式细胞仪检测细胞内活性氧.结果 内皮细胞暴露于含棕榈酸的培养基24 h与不加棕榈酸相比细胞凋亡显著增加、caspase-3活性增加,加入ghrelin (100 nM) 24 h显著降低棕榈酸诱导的细胞凋亡、降低caspase-3活性.棕榈酸增加细胞活性氧,而ghrelin能够抑制棕榈酸对细胞活性氧的影响.结论 Ghrelin可以抑制棕榈酸诱导的血管内皮细胞凋亡,降低caspase-3的活性及活性氧生成,ghrelin具有一定的防治动脉粥样硬化作用.     

二硫化碳对血管内皮细胞的氧化损伤作用

目的为了探讨二硫化碳(CS2)致动脉粥样硬化(AS)的毒作用机理。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(ECV304)用浓度0(溶剂对照)、10、100、1000、10000μmol/L的CS2染毒,共培养24h。应用倒置显微镜观察内皮细胞(EC)损伤;鲁米诺依赖的化学发光法(L-CL)测定培养液过氧亚硝基阴离子(ONOO-)水平以观察细胞氧化损伤程度。结果镜下观察染毒24h后内皮细胞有不同程度的损伤,其中以10000μmol/L CS2染毒组最为严重,并有明显细胞脱壁现象;24h染毒培养液化学发光强度有随着CS2浓度增高而增强的趋势(F=34.60,P<0.05),其中10000μmol/L CS2染毒组明显高于其它各组(P<0.05);CS2浓度与内皮细胞培养液ONOO-水平呈正相关(r=0.998,P<0.05)。结论CS2可促使内皮细胞产生大量自由基,包括ONOO-,以至氧化抗氧化失衡,从而导致血管内皮细胞的氧化损伤。     

苯扎贝特逆转高甘油三酯血清下调内皮细胞一氧化氮合酶基因表达的机制探讨

目的研究苯扎贝特逆转高甘油三酯血清（HTS）下调原代牛主动脉内皮细胞（BVEC）一氧化氮合酶（eNOS）基因表达的可能机制。方法在前期研究证实HTS下调原代牛主动脉内皮细胞（BVEC）一氧化氮合酶（eNOS）蛋白质表达的基础上,采用Western印迹法检测苯扎贝特对HTS诱导的eNOS蛋白质表达水平下调的影响;在证实其效应的基础上研究其信号转导机制。结果发现苯扎贝特可以完全消除HTS对eNOS的抑制作用,经PPARα、PI3K、MAPKK和MAPK抑制剂预处理后,苯扎贝特逆转HTS下调eNOS的蛋白质表达的作用明显减弱。结论证实了苯扎贝特可以纠正HTS对eNOS的抑制作用,其效应的发挥既通过依赖于PPARα的方式,也可以经PI3K/MAPK/MAPKK信号通路介导。     

CGRP对缺氧缺血新生鼠脑细胞内游离Ca2+的影响

目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对缺氧缺血新生鼠脑细胞内游离Ca2+的影响及对脑损伤的保护作用.方法 7日龄SD大鼠制成HIE模型.⑴药物治疗组于模型后即给CGRP 3μg*kg-1*d-1,腹腔内注射,共3d;⑵生理盐水组每天给予同剂量生理盐水腹腔内注射;⑶正常对照组(假手术组).各组于3d后断头取脑,采用钙荧光指标剂Fura-2AM法测定脑细胞胞浆游离钙浓度[(Ca2+)].结果生理盐水组脑细胞内钙含量最高,(129.47±17.21nmol/L)与正常对照组(93.72±24.16nmol/L)比较有显著差异P＜0.01,而药物治疗组(103.35±12.46nmol/L)与正常对照组比较无显著差异.结论 CGRP能阻止新生鼠缺氧缺血脑损伤后细胞钙内流,降低细胞膜对Ca2+通透性可能是CGRP对脑缺氧缺血保护作用的重要机制.     

芳烃类有机溶剂对原代培养神经胶质细胞的谷氨酸重摄取的影响

[目的 ]研究芳烃类有机溶剂对原代培养大鼠神经胶质细胞的谷氨酸重摄取的影响。 [方法 ]取新生SD大鼠的海马神经胶质细胞进行原代培养 ,培养 2周后 ,用芳烃类有机溶剂 (甲苯、二甲苯和乙苯 )染毒 ,染毒浓度为 3mmol/L、6mmol/L和 9mmol/L ,染毒时间为 4h、12h和 2 4h ,并设空白对照组和赋形剂蓖麻油组 ,染毒后 ,观察神经胶质细胞的存活率、乳酸脱氢酶 (LDH)活性以及氨基酸重摄取的变化。 [结果 ]染毒后 ,神经胶质细胞摄取谷氨酸的能力显著下降(P <0 0 5 ) ,有明显的剂量 反应关系 (r =0 87,P <0 0 1) ,当染毒浓度为 9mmol/L浓度时 ,抑制率达 70 %以上 ;但染毒后神经胶质细胞的存活率与对照组相比无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,LDH的活性差异亦无显著性 (P >0 0 5 )。 [结论 ]芳烃类有机溶剂对神经胶质细胞本身的致死性毒作用较小 ,但对神经胶质细胞的谷氨酸重摄取功能有较强的抑制作用     

纳米氧化铈对过氧化氢所致大鼠肺泡巨噬细胞氧化损伤的影响

目的研究纳米氧化铈对过氧化氢致大鼠肺泡巨噬细胞NR8383氧化损伤的影响。方法将对数生长期的NR8383细胞分别暴露于终浓度为5、10、20、50、100μg/ml纳米氧化铈(20 nm)悬液孵育24 h,再加入新鲜配制的终浓度为100μmol/L的过氧化氢刺激细胞2 h,另设对照(PBS)组及过氧化氢(100μmol/L)组。采用CCK-8法检测NR8383细胞的细胞活性,采用酶标法检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量,并测定细胞内谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)的水平。结果与对照组相比,过氧化氢对NR8383细胞造成氧化损伤,细胞的存活率下降25.25%。与过氧化氢组相比,5μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞的存活率较高,而100μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞的存活率较低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);且随着纳米氧化铈染毒浓度的升高,NR8383细胞的存活率呈下降的趋势。与过氧化氢组相比,对照组NR8383细胞的LDH释放量较低,50μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞的LDH释放量较高,差异有统计学意义(P0.05);而5、10μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞的LDH释放量有所降低,但差异均无统计学意义(P0.05)。且随着纳米氧化铈染毒浓度的升高,NR8383细胞的LDH释放量呈上下波动。与过氧化氢组相比,对照组NR8383细胞内GSH的水平升高,而ROS的水平上升;5、10μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞内的ROS水平均下降,而10μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞内的GSH水平上升,差异均有统计学意义(P0.05)。随着纳米氧化铈染毒浓度的升高,NR8383细胞内的SOD、GSH呈上下波动,ROS的水平呈逐渐升高的趋势。结论低浓度(5、10μg/ml)的纳米氧化铈颗粒可以缓解过氧化氢对NR8383细胞造成的氧化损伤,对细胞起到保护作用。     

T-2毒素对原代培养的小鼠睾丸间质细胞睾酮合成的影响

目的 探讨T-2毒素对原代培养的小鼠睾丸间质细胞(Leydig cells)睾酮合成的影响.方法 建立健康清洁级成年雄性昆明小鼠睾丸间质细胞原代培养模型,使细胞悬液密度为5×10~3个/ml,采用改进3β-羟基类固醇脱氢酶(HSD)染色法进行纯度鉴定.将其分为空白对照[0 ng/ml人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,hCG)+0 mol/L T-2毒素]组、诱导对照(10 ng/ml hCG+0 mol/L T-2毒素)组、10 ng/ml hCG+10~(-9)mol/L T-2毒素组、10 ng/ml hCG+10~(-8)mol/T~(-2)毒素组、10 ng/ml hCG+10~(-7) mol/L T-2毒素组,培养24 h后检测睾酮含量.结果 新鲜分离的小鼠睾丸间质细胞在有血清培养液中培养24h后,细胞贴壁良好,其纯度在90%以上.在10ng/ml hCG诱导下,原代培养的小鼠睾丸Leydig细胞培养液中睾酮合成量明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).与诱导对照组相比,10 ng/ml hCG+10~(-7)、10~(-8)、10~(-9)mol/的T-2毒素染毒组培养液中睾酮合成量均降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);且睾酮合成量随着T-2毒素染毒浓度的升高而降低.结论 T-2毒素可以直接降低原代培养的小鼠Leydig细胞睾酮合成功能.

Abstract：

Objective To investigate the effects of T-2 toxin on testosterone biosynthesis in primary cultured Leydig cell derived from the mouse testis.Methods Leydig cells isolated from Kunming male mice were adjusted to 5×10~5/ml and the purity was identified by the modified 3β-hydroxysteroid dehydrogenase(HSD) staining method.Blank control group(treated with 0 n/ml hCG and 0 mol/L T-2 toxin),inductive control group(treated with 10 ng/ml hCG and 0 mol/L T-2 toxin),low dose T-2 toxin exposure group(treated with 10 ng/ml hCG and 10~(-9) mol/L T-2 toxin),middle dose T-2 toxin exposure group(treated with 10 ng/ml hCG and 10~(-8) mol/L T-2 toxin) and high dose T-2 toxin exposure group(treated with 10 ng/ml hCG and 10~(-7) mol/L T-2 toxin)were designed,respectively.The testosterone level was measured after 24 h of incubation.Results After 24 hours culture in liquid medium contained serum,the fresh isolated Leydig cells grew well and the purity exceeded 90%.Through 10 ng/ml hCG induce,the testosterone level of Legdig cells increased significantly and the difference compared to blank control was of statistical sense (P<0.05).Compared to inductive control group,the testosterone level in Legdig cells decreased significantly in all T-2 toxin exposure groups with a dose dependant manner (P<0.05 or P<0.01).Conclusion T-2 toxin can directly decrease the testosterone biosynthesis of the primary Leydig cells derived from the mouse testis.     

微囊藻毒素-LR对人肝癌HepG2细胞活性氧生成和脂质过氧化的影响

目的 观察非细胞毒性剂量的微囊藻毒素-LR(MC-LR)对人肝癌HepG2细胞活性氧(ROS)生成和脂质过氧化的影响。方法 调整HepG2细胞的密度为1×104/孔,分别加入终浓度为0（溶剂对照,0.1％ DMSO）、3、10、30、100 μmol/L的MC-LR溶液染毒4、24h。采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检...