RASSF1A 基因对胃癌SGC7901细胞NF-κB活性的影响

目的 探讨RASSF1A基因对人胃癌SCC7901细胞NF-KB活性的影响.方法 电泳迁移实验分析RASSF1A基因转染前后SGC7901细胞NF-kB活性的变化.蛋白印迹和免疫细胞化学检测RASSF1A基因转染前后SGC7901细胞P65蛋白的表达.结果 与未转染组和转染空白载体组比较,转染RASSF1A基因组SCC7901细胞的NF-kB活性明显降低,P65蛋白的表达明显减少.结论 RASSF1A基因可能通过抑制P65的表达、降低NF-kB活性抑制从而抑制胃癌SGC7901细胞生长.     

RASSF1A基因对胃癌SGC7901细胞蛋白表达谱的影响

目的探讨RASSF1A基因对胃癌SGC7901细胞蛋白表达谱的影响。方法建立SGC7901和RASSF1A-SGC7901细胞双向凝胶电泳图谱,筛选和鉴定部分分离较好的差异蛋白质点。RT-PCR验证差异基因mRNA的表达。结果建立了分辨率较高、重复性较好的RASSF1A-SGC7901细胞和SGC7901细胞的二维凝胶电泳图谱。筛选出8个差异蛋白质点,包括galectin-1,TRP-14,ACBP,PSMB5,PSMB4,TIM,vimentin及CD79α。RASSF1A过表达诱导了胃癌细胞SGC7901的galectin-1、TRP-14、ABCP的mRNA表达上调。结论 galectin-1,TRP-14及ABCP可能参与了RASSF1A抑制胃癌细胞SGC7901的生长。     

氧化苦参碱对人胃癌SGC-7901细胞株生长的影响

目的观察氧化苦参碱对人胃癌SGC-7901细胞株体外增殖率的影响情况。方法噻唑蓝（MTT）比色测定法确定氧化苦参碱对胃癌SGC-7901细胞存活抑制作用。结果试验浓度下氧化苦参碱对SGC-7901细胞增殖抑制作用呈剂量依赖性，当浓度为12mg／ml时，对SGC-7901增殖的抑制率最大，达到87．63％。结论氧化苦参碱对人胃癌SGC-7901细胞的增殖具有明显的抑制作用。     

索拉菲尼对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡和P-ERK表达的影响

目的：探讨多分子靶向药物索拉菲尼（sorafenib）对体外人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡的影响及对癌细胞P-ERK表达的影响,并探讨其可能机制。 方法：以MTT法检测索拉菲尼对SGC-7901细胞的杀伤抑制作用;免疫细胞化学法检测胃癌细胞内P-ERK蛋白的表达;流式细胞仪检测胃癌细胞凋亡的变化情况。 结果：索拉菲尼对胃癌细胞生长增殖具有抑制作用,随药物浓度的增加作用也增强,呈剂量—时间双效应关系(P<0.05);经索拉菲尼处理的SGC-7901细胞的P-ERK表达明显下降(P<0.05);细胞凋亡率增高(P<0.05)。 结论：sorafenib在体外对SGC-7901细胞具有明显的抑制作用,主要机制为抑制其P-ERK表达,从而抑制其增殖和促进凋亡。     

转染Caspase-1基因对人胃癌细胞株生物学特性影响的研究

目的 探讨转染Caspase-1基因对胃癌细胞生物学特性的影响。方法 将人凋亡基因Caspase-1的重组逆转录病毒导入胃癌细胞株X-108。对转染阳性细胞的体外增殖、细胞培养液中CEA含量及裸鼠致瘤性进行分析。结果 导入的Caspase-1基因使细胞增殖周期发生变化，G1期细胞数目增多，S期细胞数目减少。转染细胞培养液CEA含量有下降趋势胃癌细胞株X-108-Caspase-1体外生长速度明显受抑，裸鼠体内致瘤性降低．肿瘤生长缓慢。结论 Caspase-1不能促使X-108胃癌细胞凋亡，但可以使其增殖受抑，肿瘤细胞的恶性程度降低。     

ets-1反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC-7901侵袭力的影响

目的　研究ets 1反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC 790 1侵袭力的影响。方法　应用ets 1反义、正义寡核苷酸转染SGC 790 1细胞 ,并设磷酸盐缓冲液 (PBS)对照组。转染后应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测ets 1mRNA的变化 ,应用Transwell小室检测体外侵袭力的变化 ,并应用裸鼠胃癌皮下转移模型检测对体内侵袭力的影响。结果　转染ets 1反义寡核苷酸后 ,ets 1mRNA表达降低 (0 .42 3± 0 .0 86vs 0 .815± 0 .176、0 .80 7± 0 .169,P <0 .0 1) ,侵过小室滤膜细胞数目减少 (97.1± 11.1vs 198.7± 18.3、2 0 5 .8± 2 2 .2 ,P <0 .0 1) ,裸鼠胃癌生长明显受到抑制 (1.2 8±0 .13vs 1.18± 0 .11、0 .60± 0 .11,P <0 .0 1)。结论　ets 1反义寡核苷酸能够抑制胃癌细胞株SGC 790 1的侵袭力     

小分子干扰RNA特异性抑制胃癌SGC7901细胞人端粒酶催化亚单位基因表达的研究

目的构建针对人端粒酶催化亚单位(human telomerase catalytic subunit,hTERT)基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体pU6-hTERT-siRNAs,观察其对胃癌SGC7901细胞hTERT基因的特异性抑制作用。方法采用报告基因质粒pCX-GFP(5510bp)和含有鼠U6启动子pU6(3300bp)质粒,设计合成针对绿色荧光蛋白(GFP)基因的发夹RNA(shRNA)序列,构建SHi-pU6-GFP质粒。应用Lipofeetamine^TM 2000将pCX-GFP质粒和SHi-pU6-GFP质粒转染K562细胞、SGC7901细胞,并用荧光显微镜观察转染效果。设计合成针对hTERT的siRNAs,构建重组pU6-hTERT-siRNAs质粒。Lipofectamine^TM 2000介导pU6-hTERT-siRNAs质粒转染SGC7901细胞。分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)定性和定量检测hTERT基因表达情况。结果质粒pU6和SHi-pU6-GFP经EcoRV和XbaⅠ酶切电泳后,前者出现3300bp和约300bp条带,而后者出现3300bp和约350bp条带,与实验设计的针对GFP的shRNA长度相符。说明本实验已成功构建了针对绿色荧光蛋白GFP基因的SHi-pU6-GFP质粒。K562细胞和SGC7901细胞中分别观察到转染pCX-GFP质粒和SHi-pU6-GFP质粒前后发绿色荧光的细胞数目明显减少。定性、定量检测SGC7901细胞转染pU6-hTERT-siRNAs组hTERT基因表达抑制。结论针对hTERT基因设计的siRNAs表达质粒可以特异性抑制SGC7901细胞hTERT基因表达。     

miR-214对胃癌细胞SGC7901侵袭和转移能力的影响

目的:探讨miR-214对胃癌细胞侵袭和转移能力的影响及其可能作用机制。方法:应用miRanda,TarBase v.5c靶基因预测网站分析miR-214与PTEN mRNA的可能结合位点,分别将miR-214模拟物(mimics),拮抗物(inhibitors)和无关序列转染到SGC7901细胞株,以空白转染组为阴性对照,用Western blot的方法比较各组细胞PTEN蛋白的表达,用Transwell侵袭小室检测各组细胞侵袭能力的变化。结果:Western blot结果显示,miR-214 mimics转染组的SGC7901细胞中PTEN蛋白表达较其余各组显著降低(均P<0.05),Transwell侵袭小室检测结果表明,miR-214 mimics转染组的细胞侵袭细胞数明显多于其余各组(均P<0.05)。结论:miR-214能促进胃癌细胞侵袭和转移,其机制可能与抑制PTEN的表达有关。摘要     

尾型同源盒基因2沉默对人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP多药耐药性的逆转

目的探讨尾型同源盒基因2（Cdx2）沉默对逆转人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP多药耐药性的影响。方法将对数生长期的人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP接种于培养板中,分为3组：感染RNA干扰Cdx2基因沉默重组慢病毒载体（pLL—Cdx2-shRNA）作为实验组;感染慢病毒空载体作为阴性对照组;空白对照组不做任何处理。Westernblot及RT—PCR检测Cdx2及凋亡相关基因C—myc、cyclinD1、survivin等蛋白及mRNA表达水平;MTT法检测3组细胞对化疗药物阿霉素、5．氟尿嘧啶、顺铂的敏感性;流式细胞技术检测3组细胞阿霉素的泵出率、细胞周期分布及细胞凋亡情况。计量资料用面±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用SNK—q检验,计数资料采用,检验。结果实验组、阴性对照组、空白对照组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP中各蛋白相对表达量：Cdx2分别为0．187±0．060、0．535±0．033、0．567±0．014,C—myc分别为0．086±0．004、0．379±0．006、0．354±0．004,cyclin D1分别为0．016±±0．005、0．141±0．003、0．162±0．008,survivin分别为0．276±0．012、0．672±0．009、0．517±0．313,与阴性对照组和空白对照组比较,实验组上述蛋白表达量明显下降,差异有统计学意义（F=247．385,3．353,597．882,98．628,P〈0．05）。实验组、阴性对照组、空白对照组mRNA相对表达量：cdx2分别为0．184±0．010、0．894±0．056、0．837±0．049,c—myc分别为0．212±0．022、0．538±0．021、0．545±0．032,cyclinD1分别为0．045±0．009、0．163±0．009、0．157±0．010,survivin分另4为0．401±0．027、0．824±0．016、0．782±0．056,与阴性对照组和空白对照组比较,实验组上述基因mRNA表达量明显下降,差异有统计学意义（F=243．776,161．793,138．523,118．426,P〈0．05）。MTT法检测实验组、阴性对照组和空白对照组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP阿霉素Ic50值分别为（0．12±0．05）mg／L、（0．33±0．08）mg／L、（0．39±0．15）mg／L,5-氟尿嘧啶Ic50值分别为（0．52±0．13）mg／L、（4．10±1．25）mg／L、（4．05±1．44）mg／L,顺铂Ic50值分别为（0．82±0．13）mg／L、（2．81±0．50）mg／L、（3．28±1．03）mg／L。实验组、阴性对照组、空白对照组中人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对阿霉素泵出率分别为0．21％、0．37％和0．35％。与阴性对照组和空白对照组比较,实验组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对阿霉素、5一氟尿嘧啶和顺铂的Ic。值及对阿霉素的泵出率显著降低,差异均有统计学意义（F=8．101,13．854,15．159,X2=7．106,P〈0．05）。实验组、阴性对照组与空白对照组人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDPG0／G1期细胞比例分别为17．87％、34．71％、37．20％,与阴性对照组和空白对照组比较,实验组G0／G1期细胞减少,差异有统计学意义（X^2=1．055,P〈0．05）;实验组G1／M期的细胞比例为11．93％,细胞凋亡率为31．13％,均明显高于阴性对照组的0．26％、16．58％和空白对照组的0．35％、13．18％,差异有统计学意K（X^2=2．249,11．030,P〈0．05）。结论Cdx2基因沉默可有效提高人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP对化疗药物的敏感性,增加化疗药物在胃癌细胞内的蓄积浓度,逆转人胃癌耐顺铂细胞SGC7901／DDP的耐药性。     

木犀草素基于JAK/STAT信号通路对SGC7901胃癌细胞的作用

目的:研究木犀草素基于JAK/STAT信号通路对SGC7901胃癌细胞的作用.方法:体外培养SGC7901细胞,以1、5、10μmol/L的木犀草素作用24 h,空白对照组不做任何处理,溶剂对照组加入0.5％DMSO,MTT法检测木犀草素对SGC7901细胞增殖的影响,流式细胞技术检测木犀草素对SGC7901细胞凋亡的...     

Fascin1基因表达对胃癌细胞系MKN45增殖与凋亡的影响

目的：探讨fascin1基因表达对胃癌细胞系MKN45增殖与凋亡的影响及其意义。方法：利用RNA interference(RNAi)技术稳定沉默fascin1基因的表达,Western blotting及RT-PCR检测干扰效率,用MTT比色法和平板克隆形成实验检测转染前后细胞体外增殖能力,用流式细胞术（FCM）及Hochest33258荧光染色法检测细胞凋亡的变化。结果：在稳定转染fascin1干扰质粒后,胃癌细胞系MKN45的fascin1表达明显下降;与未转染组和空白质粒转染组相比,fascin1干扰质粒转染组的增殖能力明显降低,但细胞凋亡变化不明显。结论：fascin1的表达与胃癌细胞系MKN45的增殖有关,而与凋亡无明显相关。     

乙肝病毒X基因对肝癌细胞表达RhoC的影响

目的：探讨X基因对肝癌细胞表达RhoC基因的影响。方法：用定向克隆的方法构建X基因的真核表达载体pcDNA3.1-X，脂质体转染HEPG2细胞;潮霉素选择培养稳定表达X基因的HEPG2-X细胞;免疫组化鉴定HEPG2-X细胞RhoC蛋白表达。结果：构建的真核表达载体pcDNA3.1-X在HEPG2细胞中有稳定表达，HEPG2-X细胞表达RhoC蛋白增强。结论：体外条件下，X基因可促进肝癌HEPG2细胞RhoC表达增强。这可能与肝癌的侵袭、转移有关。     

腺病毒介导野生型PTEN基因对乳腺癌MDA MB 468细胞周期的影响

摘要：目的 探讨腺病毒介导野生型PTEN基因对乳腺癌MDA MB 468细胞周期时相的影响。方法 构建含PTEN目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdTrack CMV PTEN与骨架质粒pAdEasy 1，将重组腺病毒pAd PTEN制备成纯化高效的含绿色荧光蛋白（GFP）的PTEN腺病毒，体外转染人乳腺癌MDA MB 468后，检测PTEN表达后对乳腺癌MDA MB 468细胞周期的影响。结果 携带PTEN基因重组腺病毒载体成功构建，检测病毒滴度为2.5×1010pfu/mL。表明重组腺病毒已含有PTEN蛋白。流式细胞术显示对照组处于G1期的细胞占41.18%，PTEN蛋白表达后处于G1期的细胞占56.47%。结论 利用腺病毒载体系统AdEasy 1可快速构建表达PTEN基因的腺病毒载体，可高效制备均一的高滴度重组病毒；野生型PTEN基因转染使乳腺癌细胞周期停滞于G1期。     

新辅助化疗对结直肠癌的作用

目的探讨短程5-FU/CF方案新辅助化疗对结直肠癌细胞凋亡、增殖和p53表达以及术后并发症和预后的影响。方法分别采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）和免疫组化SP法检测68例患者结直肠癌组织的细胞凋亡指数（AI）和ki-67增殖指数（PI）及凋亡相关基因p53的表达,并比较新辅助化疗组和对照组患者术后并发症的发生情况和预后情况。结果新辅助化疗组肿瘤细胞的AI均数为3.56%,明高于对照组的2.29%（P〈0.01）,PI均数为22.60%明显低于对照组的33.60%（P〈0.01）,p53阳性表达率为28.9%（11/38）明显低于对照组的56.7%（17/30）（P〈0.05）。两组中大肠癌细胞的AI与PI均呈负相关（r=-0.790,r=-0.663）（P〈0.01）。两组术后并发症的发生差异无显著性（P〈0.05）。两组的复发转移率和复发转移平均时间差异有显著性（P〈0.05）。结论短程5-FU/CF方案新辅助化疗可以显著诱导结直肠癌细胞凋亡,并抑制其增殖;降低结直肠癌组织p53的阳性表达率,而不增加术后并发症的发生,能延缓和减少结直肠癌术后的复发转移。     

L-NAME对大肠癌细胞侵袭和转移的影响

目的 探讨N-硝基精氨酸甲酯（L-NAME）对人大肠癌细胞（LS-174T）侵袭、运动能力的影响及其可能的机制。方法 用不同浓度的L—NAME干预LS-174T细胞，用硝酸还原酶法测定L-NAME对细胞分泌NO的影响；用重组基底膜侵袭实验观察药物对癌细胞侵袭、运动能力的影响；用RT-PCR法检测MMP2和TIMP2的表达。结果（1）L-NAME降低了sL-174T细胞NO的分泌，呈浓度依赖性。（2）0．2mmol／L，0．4mmol／L，0．8mmol／L和1．0mmol／LL-NAME处理sL-174T细胞72h，对细胞侵袭重建基底膜的抑制率分别为10．29％，19．62％，34．08％和42．23％（P〈0．05或P〈0．01）；（3）对细胞趋化运动抑制率分别为20．76％，24．95％，39．43％和46．85％（P〈0．01），同时可降低细胞MMP2mRNA的表达，而提高TIMP2 mRNA的表达。（4）NO浓度与MMP2mRNA表达呈正相关（r=0．8124，P〈0．01），而与TIMP2mRNA呈负相关（r=-0．7106，P〈0．01）。结论L-NAME具有抑制sL-174T细胞侵袭和转移的作用；L—NAME的抗侵袭活性与肿瘤细胞MMP2mRNA和TIMP2mRNA的表达有关。     

C-Fe@CN-CN对人肝癌细胞增殖的抑制作用

目的: 制备卡铂碳包铁纳米笼壳聚糖微球( C-Fe@CN-CN )，观察其对人肝癌细胞体外增殖的抑制作用。方法:采用反相微乳法制备C-Fe@CN-CN，测定其表征，观察其体外释药行为。采用MTT法检测C-Fe@CN-CN对人肝癌细胞体外增殖的抑制效应；计算IC50，绘制生长曲线。结果:C-Fe@CN-CN球形圆整，平均粒径（207±21）nm，载药量为(11.40±1.31)%。C-Fe@CN-CN的体外释药行为包括快速相和平稳相两阶段，可持续5d。C-Fe@CN-CN对人肝癌细胞增殖有明显抑制作用，并呈剂量和时间依赖性，作用24h时抑制效应低于原药，作用48h和72h时抑制效应等同于原药。C-Fe@CN-CN的24，48，72h IC50分别为135，18.84，6.09μg/mL。空白微球对肝癌细胞增殖无影响。结论:C-Fe@CN-CN具有长循环和肿瘤组织滞留潜能，磁靶向性强，可缓释药物。体外能有效地抑制肝癌细胞增殖，空白微球表现出良好的生物相容性。     

HGF下调Skp2表达抑制人肝癌细胞增殖的实验研究

目的：探讨肝细胞生长因子(HGF)对人肝癌细胞增殖的作用及其机制。方法：人肝癌细胞株HepG2用于实验。通过BrdU细胞增殖酶联免疫实验观察HGF对细胞增殖的作用,采用Western印迹和RT-PCR法检测HGF对S期激酶结合蛋白2(Skp2)表达的影响。将Skp2真核细胞重组表达质粒转染HepG2细胞并获得稳定转染的过表达Skp2的HepG2细胞,观察HGF对该转染细胞增殖的影响。结果： HGF对HepG2细胞的增殖具有浓度依赖性和时间依赖性的抑制作用;HGF明显抑制HepG2细胞表达Skp2蛋白和mRNA。但HGF对过表达Skp2的HepG2细胞无增殖抑制作用。结论：HGF对HepG2细胞具有明显的增殖抑制作用,其作用机制与下调Skp2表达密切相关。     

联合应用华蟾素与氟尿嘧啶对胃癌细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用

目的 探讨单一华蟾素体外对人胃癌细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用以及与5-氟尿嘧啶（5-FU）联合应用对胃癌细胞的影响.方法 实验分为对照组;华蟾素（cino）组;5-FU组和cino＋5-FU组.利用体外细胞培养、倒置显微镜和荧光显微镜、MTT比色技术及流式细胞仪等方法,观察细胞形态,检测cino和5-FU对人胃癌细胞株BGC823细胞抑制率、细胞凋亡和细胞周期.结果 cino对人胃癌细胞有显著的增殖抑制作用,呈时间剂量依赖性.cino＋5-FU对BGC-823细胞的增殖抑制率显著高于单独使用组（P＜0.05）.定量分析显示cino＋5-FU组的凋亡细胞发生率显著高于cino组和5-FU组（P＜0.05）.cino＋5-FU可使G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例升高,且大多数被阻滞于S期.结论 cino对胃癌BGC-823细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用,与5-FU联用可显著提高后者的化疗效果,且呈时间剂量依赖关系.