AFP mRNA检测外周血游离癌细胞预测肝癌微转移的初步评价

目的　探讨原发性肝癌患者外周血单个核细胞AFPmRNA表达与其微转移的相关性。方法　应用巢式逆转录聚合酶链反应 (NestedRT -PCR)技术检测 10 2例原发性肝癌、2 2例非原发性肝癌及其他恶性肿瘤 ,6 4例慢性乙型肝炎、35例肝硬化和 4 0例健康献血员外周血单个核细胞AFPmRNA表达水平。结果　AFPmRNA在健康献血员、非原发性肝癌及其他恶性肿瘤、慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中均为阴性 ;在原发性肝癌组外周血单个核细胞中AFPmRNA的检出率 (5 6 86 % ,5 8/ 10 2 )明显高于肝硬化组 (8 5 7% ,3/ 35 ,P <0 0 5 )。外周血单个核细胞AFPmRNA的表达与临床分期、门静脉癌栓、肝内转移、远处转移明显相关 (P <0 0 5 ) ,而与肿瘤直径、数目及血清AFP浓度无明显相关 (P >0 0 5 )。结论　巢式RT -PCR检测原发性肝癌患者外周血单个核细胞AFPmRNA是一种早期发现肝细胞癌血道播散的可靠而又敏感的实验方法。     

巢式RT—PCR检测肝癌患者外周血微量转移癌细胞

目的建立肝癌患者外周血微转移癌细胞的分子检测方法.方法从肝癌患者外周血中分离有核细胞,用TRzol提取RNA,特异引物扩增AFPmRNA,凝胶电泳观察结果.分析AFPmRNA扩增结果与患者临床指标的关系.结果肝癌患者外周血有核细胞RNA提取成功率为100%,33例肝癌患者AFPmRNA阳性率为69%(23/33),临床肝内门静脉癌栓、肝外转移患者AFP'mRNA扩增阳性率为100%,临床无转移患者AFPmRNA阳性率为56%(15/27),P＜0.05,AFPmRNA阳性患者的肿块最大径平均为10.67,AFP＞400μg/L者占40%(8/20),AFP'mRNA阴性患者肿块最大径平均为7.13cm,AFP＞400μg/L者占10%(1/10).结论巢式RT-PCR是检测肝癌患者外周血微转移癌细胞的稳定方法.     

原发性肝癌患者外周血甲胎蛋白mRNA表达水平与临床参数的关系

目的　了解肝细胞癌患者外周血甲胎蛋白 (AFP)mRNA的表达水平与不同临床参数的关系。方法　采用realtimeRT -PCR技术 ,定量检测 5 6例肝细胞癌、17例慢性活动性肝炎、2 1例肝硬化和 2 0名健康志愿者外周血AFPmRNA的表达水平。结果　 5 6例肝癌患者外周血AFPmRNA的平均表达水平为 34 6 44 .6± 9490 5 .4copies/μgRNA ,其中 2 9例为阳性 ;17例慢性活动性肝炎、2 1例肝硬化患者和 2 0名健康志愿者外周血均未检测到AFPmRNA的表达。结论　肝癌患者外周血AFPmRNA表达水平与肝癌分期、门静脉癌栓及肝外转移密切相关 ,与肿瘤直径、数目及血清AFP水平无明显相关 ,可作为预测肝癌发生远处转移的一个可靠指标     

甲胎蛋白信使核糖核酸(AFPmRNA)的检测方法及其临床意义

目的　探讨AFPmRNA对诊断原发性肝癌的意义 ,并评估原发性肝癌的临床分期 ,预测转移倾向、预后和复发以及治疗。方法　建立并改进巢式逆转录多聚酶链反应 (nestedRT -PCR)检测外周静脉血肝癌细胞。结果　nestedRT -PCR在 1ml血中含有≥ 5个肝癌细胞时即可检测到AFPmRNA。 2 2例原发性肝癌中 18例血液标本检测到AFPmRNA ,而对照组中均未检测到AFPmRNA。AFPmRNA的检出率与肝癌分期 (TNM )、血清AFP浓度、肝内转移、门静脉癌栓、肿瘤大小及远处转移有明显联系 (P <0 .0 1)。结论　nestedRT -PCR是一个稳定而又敏感的检测方法 ,AFPmRNA可作为定性诊断原发性肝癌的血液学指标 ,也可作为肝癌细胞转移的标志 ,并可判断肝癌临床分期、转移倾向、预后和复发     

原发性肝癌患者外周血中肝细胞特异性AFP mRNA检测及意义

【目的】寻找一种敏感的方法以检测原发性肝癌患者外周血中肝细胞特异性AFPmRNA。【方法】巢式RT PCR检测外周血有核细胞成分中AFPmRNA。【结果】 49例肝癌中 17例检出AFPmRNA ,阳性率 35 % ,其中 9例证实有转移的 6例阳性 (6 7% )。 19例肝硬化、6例急性肝炎、8例慢性肝炎、5例肝良性肿瘤、6例肝内胆管癌、11例肝转移癌、13例健康对照组均为阴性。外周血细胞AFPmRNA的存在与肝内肿癌灶的数目、是否有门静脉癌栓形成、远处器官转移与肿瘤的TMN分期密切相关 ,与血清AFP浓度无关。【结论】检测肝癌患者外周血AFPmRNA ,可帮助早期发现肝癌细胞的血行播散。     

肝癌患者术前外周血甲胎蛋白mRNA检测与术后复发的关系

【目的】探讨肝细胞癌患者的外周血中甲胎蛋白（AFP）mRNA的检测在肝癌术后预后中的应用价值。【方法】应用巢式PCR和TaqManMGB探针法定量PCR技术，检测105例肝细胞癌患者和30例健康志愿者外周血AFPmRNA的表达情况。【结果】肝细胞癌患者术前外周血AFPmRNA的阳性率43.8％（46／105）高于健康对照10．0％（3／30），有显著性差异（P〈0．001）。术前血中AFPmRNA的表达与各项肿瘤侵袭性指标显著相关，包括肿瘤数目、大小、有无肉眼及镜下血管侵犯。AFPmRNA阴性患者1、2、3年生存率以及1、2、3年无瘤生存率均显著比AFPmRNA阳性患者术后高（两者均P=0．004）。多因素分析也指出术前外周血中是否表达AFPmRNA是预测术后复发的独立因素。【结论】肝癌患者术前外周血中是否表达AFPmRNA与肿瘤侵袭性相关，对于预测术后复发具有重要价值。     

肝癌患者外周血AFP mRNA和TSGF的检测及意义

目的：检测原发性肝细胞癌(PHC)患者外周血单个核细胞表达AFP mRNA情况和血清肿瘤特异性生长因子(TSGF)的含量及探讨其临床意义。方法：采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测86例PHC患者外周血AFP mRNA，同时采用TS-GF试剂盒检测患者血清TSGF含量。结果：PHC患者外周血AFP mRNA阳性率为53．5％(46／86)，血清TSGF阳性率为80．2％(69／86)，AFP mRNA阳性率与TSGF含量呈显著正相关(r＝0．6415，P＜0．05)。外周血AFP mRNA阳性率、血清TSGF含量及阳性率均与肿瘤分期、癌灶大小及肝癌肝外转移显著正相关(均为P＜0．05)。结论：PHC患者外周血AFP mR—NA阳性率与血清TSGF水平呈显著正相关，两者均与肿瘤分期、癌灶大小及癌转移呈显著正相关。检测外周血AFP mRNA和血清TSGF含量对判断肝癌细胞发生肝内外转移的风险可能有较重要的参考价值。     

ACTH受体在糖尿病及高血压病患者外周血单个核细胞上的表达

采用放射配体测定法，检测了糖尿病及高血压患者外周血单个核细胞表面ACTH受体表达。结果显示：糖尿病患者外周血单个核细胞ACTH受体表达明显高于健康对照组（P＜0．05），但其外周血中ACTH水平与健康对照组比较并无明显变化（P＞0.05）；高血压患者外周血单个核细胞ACTH受体表达与健康对照组比较无明显增加，外周血中ACTH含量则明显高于健康对照组（P＜0.05）。提示：ACTH受体与ACTH含量在疾病中的变化并非完全一致，在糖尿病中ACTH受体表达的上升，可能更具有病理学意义。     

肝癌患者血清中调节性T细胞表达变化及对预后的影响分析

目的:观察肝癌患者血清中调节性T细胞(Treg)的表达变化,分析其对肝癌患者预后的影响.方法:选取原发性肝癌患者50例作为研究组,选择同期50例健康献血者为对照组,采用流式细胞仪检测肝癌患者及健康者外周血调节性T细胞的表达水平,根据检测结果分析外周血中调节性T细胞的水平变化.结果:与对照组比较,研究组外周血中Treg表达水平明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).与早期肝癌患者比较,晚期肝癌患者外周血中Treg表达水平明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).与术前比较,肝癌患者术后2天外周血Treg表达水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与术后2天比较,术后2周和6周外周血Treg表达水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).采用Cox回归模型分析显示,外周血Treg/CD4+比值(P=0.041)、Treg水平(P=0.023)及癌细胞分化程度(P=0.012)是影响肝癌患者5年生存率的独立因素.结论:Treg表达与肿瘤免疫密切相关,可以作为评估肝癌患者机体免疫状态的重要指标,实时监测肝癌患者Treg表达水平有助于病情的判断和预后的评估,为临床治疗提供免疫学依据.     

精索静脉曲张患者血清NO的临床意义

目的：探讨精索静脉曲张（VC）患者血清一氧化碳（NO）水平。方法：采用硝酸还原法测定精索静脉曲张患者的外周血和左精索静脉血的NO3和NO2。结果：VC组左精索静脉血与自身外周血、对照组外周血中NO水平比较有高度显著性差异（P＜0．01），VC组与对照组外周血比较无显著差异（P＞0．05），VC组I、Ⅱ、Ⅲ度精索静脉血中NO水平分别比较，差异有显著性（P＜0．05）。结论：VC患者随着曲张程度的加重，NO水平升高越明显，对精子质量的影响越严重，宜早期手术治疗。     

肝细胞癌患者血液AFP mRNA检测的临床意义

目的：探讨肝细胞癌患者血液甲胎蛋白（ＡＦＰ）ｍｒＲＮＡ检测的临床意义。方法：取９３例肝癌患者,１５例肝炎后肝硬化患者,１２例慢性肝炎患者及１０例健康人静脉血各５ｍｌ,应用巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测其周围静脉血中ＡＦＰｍＦＮＡ。结果：在５０个肝癌血标本中检测到ＡＦＰｍＲＮＡ（５３．８％）,而对照组中未检测到１例。ＡＦＰｍＲＮＡ检出率与肝癌分期、血清ＡＦＰ浓度、肝内转移、门静脉癌栓、肿瘤大小及远处转移有明显     

血液AFP mRNA在复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌中的诊断意义

目的：探讨血液AFP mRNA在复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌中的表达及意义。方法：应用巢式RT-PCR检测40例复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌血液AFP mRNA。结果：21例伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌血液AFP mRNA均表达阳性（100％）,19例复发性肝癌患者中有7例血液AFP mRNA表达阳性（36.8％),两组比较差异有显著性意义(P<0.01）。结论：血液AFP mRNA有希望成为判断肝癌复发或预测肝癌远处器官转移的客观性指标之一。     

血液AFP mRNA在复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性 …

目的：探讨血液ＡＦＰｍＲＮＡ在复发性肝癌及伴有肝外远处器官转移的原发性肝癌中的表达及意义。方法：应用巢式ＲＴ－ＰＣＲ检测４０例复发性肝癌及伴有远外器官转移的原发性肝癌血液ＡＦＰｍＲＮＡ。     

应用荧光定量PCR检测肝细胞癌微小转移

目的：探讨甲胎蛋白（AFP）-mRNA在肝细胞癌（HCC）患者外周血中的表达和临床意义。方法：采用荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-PCR）方法,检测25例HCC患者外周血中AFP-mRNA的表达。结果：HCC患者外周血中AFP-mRNA表达率显著高于肝炎和肝硬化患者（P〈0.01）。HCC患者外周血中AFP-mRNA表达与患者的肝外转移可能相关,与患者的临床分期、肿瘤直径、数目、血清AFP水平无明显相关（P〉0.05）。结论：AFP-mRNA可作为血液循环中肝癌细胞的标志物。     

造血干细胞移植对肝癌术后复发转移的影响及其与外周血AFP mRNA和VEGF-C mRNA关系的初步研究

目的 探讨异基因造血干细胞移植对SCID鼠肝癌切除术后复发转移的影响,以及SCID鼠外周血甲胎蛋白(AFP) mRNA和血管内皮生长因子(VEGF-C) mRNA水平与肝癌复发转移的关系.方法 SCID小鼠随机分为程序移植(A)组、单次移植(B)组及对照(C)组,行人脐带血造血干细胞移植后6周,将肝癌细胞株(HCCLM6)肿瘤组织块原位接种于受鼠肝脏,10 d后切除荷瘤肝叶,4周后处死小鼠,摘眼球取血,实时荧光定量PCR 检测各组外周血AFP mRNA和VEGF-C mRNA的表达,观察肝内复发和肝外转移的情况.结果 移植瘤切除后A、B、C各组肝内复发率均为100%,但复发瘤体积大小[(367.18±31.86) mm~3、 (648.26±155.22) mm~3、 (811.38±127.36) mm~3,P<0.01]、肺转移率(14.3%、66.7%、 100%,P<0.01)差异有统计学意义,A、B两组的抑瘤率分别为54.7%和20.1%.AFP mRNA (1.95±0.92、 5.23±1.96、 6.36±3.38,P=0.02)及VEGF-C mRNA(2.48±2.25、3.45±2.81、6.60±5.81,P=0.27)在各组的相对表达量亦不相同,提示外周血AFP mRNA和VEGF-C mRNA的水平与术后复发转移有相关关系.结论 造血干细胞移植对肝癌根治性切除术后的复发和转移显示出一定的抑制作用,并且随着人源细胞嵌合率的增加,抗肿瘤效应也相应得到提高.     

外周血GPC3与PEG10mRNA检测对肝细胞癌转移的诊断价值

目的研究外周血磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC-3）与遗传印迹基因（PEG10）mRNA检测对肝细胞癌（HCC）转移的诊断价值。方法30例HCC患者分为HCC转移组（n=18）和HCC未转移组（n=12）,另选取11例肝硬化患者作为对照。以SYBR Green I作为荧光信号,采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQRT—PCR）检测三组患者外周血GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA表达,应用ROC曲线和诊断性能专用指标评价两者预测诊断及排除诊断的价值。结果HCC转移组GPC-3mRNA和PEG10 mRNA表达显著高于HCC未转移组和肝硬化组（P〈0．05）;HCC未转移组与肝硬化组GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA的表达比较差异无统计学意义。单项检测GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA的诊断灵敏度分别为66．7％和72．2％,特异度均为91．7％,ROC曲线下面积（AUC）为0．748和0．812;两基因检测平行试验的灵敏度为90．7％,特异度为84．0％,阴性似然比为0．11,诊断准确率为83．3％;系列试验的灵敏度为60．5％,特异度为98．7％,阳性似然比为45．5,诊断准确率为73．3％。结论检测外周血GPC-3 mRNA和PEG10 mRNA对估计肝癌有无血行播散和肝外转移有一定的价值,且PEG10 mRNA优于GPC-3 mRNA。两者联合系列试验有助于HCC外周血转移的预测诊断。     

肝细胞癌血管内皮生长因子表达与SCT侵袭和转移的关系

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)表达与螺旋CT(SCT)表现中肝细胞癌侵袭及转移的关系。方法　对行SCT动、静脉双期扫描后经手术病理证实的 39例共 4 1个HCC病灶 ,观察其SCT表现特征。用免疫组化SP法检测肝癌组织中VEGF的表达 ,并与SCT增强特征对照。结果　VEGF蛋白阳性率为 6 1.0 % ;在转移高危组、包膜欠完整和 或无包膜组、小肝癌组中VEGF蛋白的表达均高于转移低危组、包膜完整组和大肝癌组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　VEGF蛋白的表达与肝细胞癌的侵袭和转移密切相关 ,且可通过SCT增强表现在一定程度上推测VEGF蛋白的表达情况