钙调磷酸酶信号通路参与κ-阿片受体激动对异丙肾上腺素诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的抑制作用

目的研究钙调磷酸酶(CaN)信号通路在κ-阿片受体(κ-OR)激动对异丙肾上腺素(Iso)诱导的乳大鼠心肌细胞肥大中的抑制作用。方法利用体外培养模型,以Iso 10μmol.L-1诱导心肌肥大,观察U50488H1μmo.lL-1的作用,并探讨在环孢素A(CsA)1μmol.L-1、cAMP三乙胺盐(Rp-cAMPS)及百日咳毒素(PTX)5 mg.L-1存在的情况下,κ-OR的激活对心肌肥大的影响。用Lowry等法测定心肌细胞蛋白质含量;用消化分离法及计算机图像分析系统测定细胞体积;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察胞内[Ca2 +]i瞬间变化,用Western印迹法测定CaN的表达。结果与正常对照组相比,Iso 10μmo.lL-1使心肌细胞蛋白质含量增加了42.1%,体积增大了86.7%,[Ca2 +]i瞬变增加了57.5%,CaN表达增加了101.7%;加入κ-OR激动剂U50488H1μmol.L-1后,与Iso模型组相比,心肌细胞总蛋白质含量和细胞体积分别降低了24.7%和46.7%,[Ca2 +]i瞬变降低了43.8%,CaN表达降低了48.8%;CsA和Rp-cAMPS对Iso诱导的上述指标的抑制程度与U50488H相似;PTX预处理的情况下U50488H对Iso诱导的上述指标的抑制作用消失。结论κ-OR激动通过降低胞内[Ca2 +]i瞬变和CaN表达抑制Iso诱导的乳大鼠心肌细胞肥大。     

重组人促红素对高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响

目的研究重组人促红素(EPO)对高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响,以及内质网应激(ERS)在其中的作用。方法分离新生SD大鼠心肌细胞,培养72 h后用高糖诱导心肌细胞凋亡,以甘露醇作为高渗对照,并用不同浓度EPO(5、10、20、40 U·m L-1)预处理心肌细胞48 h,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,选取EPO最佳干预浓度;将实验分成五组即正常糖(NG)组、EPO+NG组、高糖(HG)组、EPO+HG组和ERS抑制剂4-苯基丁酸(PBA)+HG组,流式细胞仪测各组凋亡率,激光共聚焦显微镜检测各组钙离子的平均荧光强度,Real-time PCR和Western blot分别检测各组促红素受体(EPOR)、ERS标志物GRP78、钙内流蛋白Serca2a的m RNA和蛋白表达。结果高糖诱导后心肌细胞凋亡率(41.36±10.49)%,显著高于正常心肌细胞凋亡率(16.08±3.97)%(P<0.05),甘露醇组对正常心肌细胞凋亡无显著影响(P>0.05);20 U·m L-1 EPO预处理高糖诱导的心肌细胞后凋亡率为(20.97±10.55)%,为最佳干预浓度。与NG组比较,EPO+NG组各指标均无显著差异(P>0.05),HG组凋亡率和钙离子荧光强度显著增加,EPOR、Serca2a的m RNA及蛋白表达降低,GRP78 m RNA及蛋白表达升高(均P<0.05);与HG组相比,PBA+HG组和EPO+HG组凋亡率和钙离子荧光强度降低,EPOR、Serca2a的m RNA及蛋白表达升高,GRP78 m RNA及蛋白表达降低(均P<0.05);PBA+HG组和EPO+HG组各指标均无显著差异(P>0.05)。结论高糖可通过介导ERS并引发钙稳态失衡诱导心肌细胞凋亡;EPO能够抑制高糖诱导心肌细胞的凋亡,该作用可能与抑制ERS,增强钙内流蛋白表达、维持细胞内钙离子平衡有关。     

促红细胞生成素抗神经元凋亡的信号传导通路

凋亡是许多神经系统疾病中神经元损伤的主要死亡形式,促红细胞生成素(erythropoietin,Epo)可促进造血前体细胞的增殖和分化,调节红细胞的生成。近来研究发现,Epo及其功能受体(erythropoietinreceptor,Epo-R)在中枢神经系统中也有表达,且对神经元的凋亡有保护作用,该文就Epo抗神经元凋亡的信号传导通路方面略做一综述。     

FUNDC1通过调控线粒体分裂影响高糖损伤H9c2心肌细胞凋亡的机制研究

目的 探讨含FUN14域蛋白1（FUNDC1）在高糖损伤的H9c2心肌细胞中通过调控线粒体分裂影响心肌细胞凋亡的作用机制。方法 体外培养H9c2心肌细胞并建立高糖损伤模型,分别进行细胞转染,使用腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）激活剂5-氨基-4-咪唑羧基酰胺核苷（AICAR）后,分为正常对照组（CTRL组）、高糖组（HG...     

RhoA/ROCK-NF-κB信号传导通路介导内脂素诱导的心肌细胞炎性反应机制研究

目的研究内脂素引起心肌细胞炎性反应相关机制。方法提取2～3 d SD乳鼠原代心肌细胞,培养后按照实验设计分组为(1)正常对照组,10、50、100 ng/ml浓度的重组内脂素,干预24 h;(2)正常对照组,100 ng/ml重组内脂素分别干预12、24、48、72 h;(3)正常对照组、重组内脂素100 ng/ml、SN50(20μmol/L)、SN50(20μmol/L)+重组内脂素100 ng/ml,干预48 h;(4)正常对照组、重组内脂素100 ng/ml、Y27632(10μmol/L)、Y27632(10μmol/L)+重组内脂素100 ng/ml、辛伐他汀(1μmol/L)、辛伐他汀(1μmol/L)+重组内脂素100 ng/ml,干预48 h。(5)正常对照组、重组内脂素100 ng/ml、sirtinol (200μmol/L)、sirtinol (200μmol/L)+重组内脂素100 ng/ml,干预24 h。,并予相应的干预。应用Real time-PCR检测心肌细胞TNF-αmRNA表达,应用MTT法检测心肌细胞活力,Western blot法检测心肌细胞S...     

钩藤碱对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大的抑制作用

目的研究钩藤碱(Rhy)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大的抑制作用及其可能的作用机制。方法应用胰酶消化法制备新生大鼠原代心肌细胞,培养3d后,随机分为正常对照组、模型组(AngⅡ0.1μmol·L-1)、Rhy1,3和10μmol·L-1组。心肌细胞加入Rhy0,1,3和10μmol·L-1,30min后再加入AngⅡ0.1μmol·L-1作用48h。采用LeicaQwinV3图像分析系统测量心肌细胞的表面积,BCA法测定总蛋白质含量,激光共聚焦显微镜检测心肌细胞[Ca2+]i,比色法测定细胞培养上清液一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性,实时荧光定量PCR检测心房利钠因子(ANF)、心肌细胞钙调神经磷酸酶(CaN)、细胞外信号调节激酶2(ERK2)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因的表达。结果与正常对照组比较,AngⅡ0.1μmol·L-1明显诱导心肌细胞肥大,心肌细胞表面积由每个细胞(167±28)μm2增加至(462±42)μm2(n=6,P<0.01),总蛋白质含量由平均每个细胞(211±10)pg增加至(299±12)pg(n=6,P<0.01),ANFmRNA表达亦增加,由48±4增加至227±9(n=6,P<0.01);心肌细胞[Ca2+]i荧光强度由93±18增加至149±9(n=6,P<0.01),NOS活性和NO含量分别由(0.76±0.03)kU·L-1和(1.36±0.10)μmol·L-1降低至(0.45±0.09)kU·L-1和(0.73±0.04)μmol·L-1(n=6,P<0.01);另外,NOSmRNA表达降低,CaNmRNA和ERK2mRNA表达增加(P<0.01)。与模型组比较,Rhy1,3和10μmol·L-1可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,对表面积的抑制率分别为50%,57%和61%(P<0.05,P<0.01),对蛋白质含量的抑制率分别为7%,10%和23%(P<0.05,P<0.01),对ANFmRNA表达的抑制率为42%,56%和66%(P<0.01);明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞[Ca2+]i增加,抑制率分别为15%,20%和28%(P<0.01);另外,可增加NOS活性,促进NO释放,并显著增加eNOSmRNA表达,降低CaNmRNA和ERK2mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论 Rhy可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其作用机制可能与促进NO释放、抑制CaNmRNA和ERK2mRNA表达有关。     

选择性内皮素A型受体拮抗剂GF063对内皮素-1诱导的心肌细胞肥大的影响

目的探讨选择性内皮素A型(ETA)受体拮抗剂GF063对内皮素-1(ET-1)诱导的心肌细胞肥大的影响。方法利用差速贴壁法分离得到原代SD乳大鼠心肌细胞,心肌细胞用ET-1或ET-1+GF063处理24h,以BQ123为阳性对照,分别采用MTT比色法检测细胞存活、显微镜观察心肌细胞形态并计算细胞表面积、[3H]亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率、RT-PCR法检测心肌细胞心钠素(ANP)mRNA表达。结果与正常对照组比较,ET-1 10 nmo.lL-1作用24 h后,心肌细胞表面积明显增大80.6%,[3H]亮氨酸掺入明显增多73%,ANP mRNA表达量明显增加80%(P<0.05)。单独给予GF063 1 nmo.lL-1~10μmo.lL-1对心肌细胞存活率,细胞表面积,心肌细胞蛋白合成和ANPmRNA表达均无明显影响。但GF063 1μmo.lL-1可以显著抑制ET-1诱导的心肌细胞表面积增大(P<0.05),GF063 0.1和1μmol.L-1可显著降低心肌细胞蛋白合成(P<0.05),GF063 10μmol.L-1抑制ANP mRNA表达升高(P<0.05),作用强度与阳性对照药BQ123相当。结论 GF063能够抑制ET-1诱导的心肌细胞肥大作用。     

肿瘤微环境的免疫细胞、信号传导通路及相关治疗展望

肿瘤微环境（Tumor microenvironment,TME）是一个高度结构化的生态系统,包括多种免疫细胞、肿瘤相关的成纤维细胞（CAFs）、内皮细胞和细胞外基质（ECM）等。研究TME内部的免疫细胞及信号传导通路对于探索肿瘤治疗靶点、提高治疗效果具有重要意义。拟通过对TME中的免疫细胞及相关信号传导通路的研究进展综述,以期为肿瘤免疫、靶向治疗提供新的思路和方法。     

九龙藤黄酮对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用

目的研究九龙藤黄酮(BCF)对H_2O_2诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法原代培养乳鼠心肌细胞,采用100 p,mol-L^(-1)H_2O_2孵育16 h建立心肌细胞凋亡模型,随机建立正常组、模型组、维生素C(终浓度100 mg·L(-1)H_2O_2孵育16 h建立心肌细胞凋亡模型,随机建立正常组、模型组、维生素C(终浓度100 mg·L^(-1))预处理组及不同浓度BCF(终浓度分别50、100、200 mg·L(-1))预处理组及不同浓度BCF(终浓度分别50、100、200 mg·L^(-1))预处理组。各给药组均于造模前给药孵育2h。MTT法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染法测定心肌细胞凋亡率。ELISA法测定细胞培养上清液肿瘤坏死因子(TNF)-α,分光光度法测定总抗氧化活力(T-AOC),免疫组化方法观察Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与模型组相比,不同浓度BCF预处理组的心肌细胞存活率、T-AOC和Bcl-2蛋白表达均显著增高(P<0.01或P<0.05);而INF-α、Bax蛋白表达、心肌细胞凋亡率均显著下降(P<0.01或P<0.05)。与维生素C组相比,BCF各浓度组无显著差异(P>0.05)。结论 BCF可抑制H_2O_2引起的乳鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与抗脂质过氧化、降低TNF-α、上调Bcl-2及下调Bax蛋白表达有关。     

柚皮素通过抑制VEGF信号通路改善哮喘大鼠气道损伤和炎症反应

摘要：目的:观察柚皮素对哮喘大鼠气道损伤和炎症反应的影响,并从血管内皮生长因子(VEGF)信号通路的角度探讨其可能的作用机制。方法:建立卵清蛋白(OVA)诱导大鼠哮喘模型,设置正常对照组、哮喘模型组、柚皮素低(50 mg·kg-1)、中(100 mg·kg-1)、高(200 mg·kg-1)剂量组。柚皮素给药结束后依次麻醉并处死大鼠,取肺组织、支气管肺泡灌洗液(BALF)和血液标本;HE染色观察肺组织病理学变化;Giemsa染色检测BALF中炎性细胞的数量及分类;酶联免疫吸附测定试验(ELISA)检测BALF中辅助性T细胞2(Th2)细胞因子白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素13(IL-13)的含量和血清中血清免疫球蛋白E(IgE)的含量;免疫印迹(WB)检测肺组织中IL-4、IL-13、血管内皮生长因子A(VEGFA)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)的表达水平。免疫荧光(IF)定位哮喘大鼠肺部VEGFA蛋白的表达分布。单独用VEGFA或VEGFA和柚皮素同时处理BEAS-2B支气管上皮细胞株后,WB检测IL-4和IL-13表达水平的变化。结果:柚皮素以剂量依赖的模式改善哮喘大鼠肺组织的病理改变,与模型组相比,柚皮素治疗组肺间质增厚和水肿缓解、肺泡结构部分恢复;巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞的浸润减少;Th2细胞因子(IL-4、IL-13和IgE)和VEGF信号通路中VEGFA、VEGFR2蛋白的表达抑制,其中高剂量柚皮素改善效果最为显著。另外,VEGFA单独处理BEAS-2B细胞株后IL-4和IL-13表达上调,而同时用柚皮素处理细胞后,VEGFA的促炎作用明显减弱。结论:柚皮素以剂量依赖的模式改善哮喘大鼠肺组织的病理改变,其潜在机制可能是通过下调VEGF信号通路来抑制Th2型炎症反应介导的。     

胃泌素促进大肠癌细胞增殖信号转导通路的研究进展

近年来研究证实，大肠癌组织或细胞株中有胃泌素及其受体的表达，胃泌素通过其受体介导细胞内一系列信号转导通路促进大肠癌细胞的增殖，抑制癌细胞的凋亡，从而促进大肠癌细胞的浸润和转移。抑制胃泌素活性异常增高的信号转导通路可能为大肠癌的预防和治疗提供一个新的有效的切入途径。但其具体的信号转导通路尚不十分清楚，有待进一步研究。     

针刺对脑出血大鼠C-Jun氯基末端激酶通路的影响

目的探讨针刺百会透曲鬓穴对实验性脑出血大鼠C-Jun氯基末端激酶（JNK）信号转导通路的影响。方法选取健康雄性Wistar大鼠192只,随机分为模型组、模型十针刺组（简称针刺组）、模型＋抑制剂组（简称抑制剂组）三组,每组60只,制备脑出血模型。另设空白组12只大鼠。针刺组针刺患侧百会透曲鬓穴,运用Western blot的检测方法,观察不同时相点针刺百会透曲鬓穴对脑出血大鼠血肿周围脑组织中P-JNK蛋白表达的影响。结果各造模组大鼠血肿周围脑组织的p-JNK阳性表达至2d时达高峰,7d时有所下降。在相同时相点,针刺组大鼠p-JNK表达均明显低于模型组（q=12．06,P〈0．01）;抑制剂组p-JNK表达也均明显低于模型组（q=10．85,P〈0．01）;针刺组与抑制剂组比较差异无统计学意义（q=1．21 P〉0．05）。结论针刺百会透曲鬓穴能够阻断JNK通路,抑制p-JNK蛋白的表达,从而抑制细胞凋亡、保护神经元细胞。     

血小板活化信号转导机制研究进展

血小板是哺乳动物血液中固有成分之一,在止血、炎性反应、血栓形成以及器官移植排斥等生理与病理反 应中具有重要作用。血小板活化信号是激活、诱导血小板发挥生理作用的主要生理传导机制,一直是近年来生理学 领域研究的重点。本文将就黏附受体介导的钙离子水平调节新机制、模式识别受体诱导的血小板活化新观点以及 血小板环鸟苷酸信号通路新概念等方面作一综述。     

Adenovirus-mediated FKBP12.6 overexpression induces hypertrophy and apoptosis in cultured neonatal cardiomyocytes

1. Cardiac ryanodine RyR2 receptors regulate Ca(2+) release from the sarcoplasmic reticulum (SR). FK506 binding protein (FKBP) 12.6 prevents aberrant SR Ca(2+) leakage during diastole, thereby maintaining the integrity of RyR2 function. Previous studies have focused mainly on FKBP12.6 deficiency and so the pathophysiological consequences of FKBP12.6 overexpression remain unclear. Herein, we investigate the effect of FKBP12.6 overexpression on cardiac hypertrophic and apoptotic signalling. 2. Human FKBP12.6 cDNA was cloned into pAdTrack-CMV and the resulting plasmid, along with a control empty plasmid, were transfected into bacteria. The resulting virus, namely Ad-FKBP12.6 containing green fluorescent protein, was propagated and purified. Neonatal rat cardiomyocytes were infected with this virus. Protein and DNA synthesis were measured by [(3)H]-leucine and [(3)H]-thymidine incorporation, respectively. Expression of p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK), phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1 or 2 (p-ERK1/2) and Bax were examined by western blotting. 3. Compared with control cells, cardiomyocytes that overexpressed FKBP12.6 became hypertrophic and hyperplastic, with increased levels of both p38 MAPK and p-ERK1/2. At the same time, overexpression of FKBP12.6 induced apoptosis of cardiomyocytes, as determined by both Bax protein expression and DNA fragmentation. Rapamycin treatment downregulated the expression of p-ERK1/2, p38 MAPK and Bax in stimulated cardiomyocytes, with or without FKBP12.6 overexpression, and enhanced protein synthesis, but had no effect on DNA synthesis in cardiomyocytes. 4. In conclusion, FKBP12.6 overexpression may participate in pathophysiological processes through both hypertrophic and apoptotic signalling pathways, leading to cardiomyocyte damage and death.     

雌激素及其受体信号转导途径的研究进展

雌激素因具有广泛的生物学效应，日益成为研究的热点。雌激素的作用是由雌激素受体（ER）介导的，ER具有广泛的组织分布，包括生殖系统、骨骼、心血管系统等，为雌激素发挥生物学效应提供了保证。本文就雌激素及其受体信号转导途径的相关国内外研究进展作一综述。     

类风湿关节炎滑膜细胞信号转导机制研究进展

滑膜细胞因子IL 1、TNF α、EGF、TGF β、PDGF、IGF 1在RA发病过程中可活化细胞内两条重要的信号通路 :受体蛋白酪氨酸蛋白激酶 Ras MAPK途径和非受体蛋白酪氨酸蛋白激酶 JAK STAT途径 ,其中受体蛋白酪氨酸蛋白激酶 Ras MAPKs信号转导路径异常是RA慢性滑膜炎的典型特征。研究G蛋白 AC cAMP信号转导通路及该通路与酶偶联受体 Ras MAPKs信号转导通路间的交互联系将具有十分重要的意义。     

一氧化氮诱导心肌细胞预适应早期保护作用的信号转导途径

目的：探讨一氧化氮(NO)诱导心肌细胞预适应早期保护作用及可能的信号转导途径。方法：体外培养新生大鼠心肌细胞，分别以NO合成前体L-精氨酸(L-Arg)和NO供体SNAP处理细胞，观察心肌细胞在随后6h的缺氧损伤程度，以明确NO是否诱导心肌细胞预适应早期保护作用；分别以cGMP阻断剂亚甲基蓝、蛋白激酶C(PKC)抑制剂D-鞘氨醇、钙拮抗剂拉西地平和ATP敏感的钾通道[K(ATP)通道]阻断剂格列苯脲作用心肌细胞30min后加入SNAP作用60min，观察心肌细胞缺氧损伤程度，检测指标为心肌细胞存活率及乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果：SNAP和L-Arg均可诱导心肌细胞预适应早期保护作用，一氧化氮合酶抑制剂L-NAME可阻断L-Arg的保护作用，亚甲基蓝可完全取消SNAP对缺氧心肌细胞的保护作用，D-鞘氨醇、拉西地平和格列苯脲均可减弱SNAP的作用。结论：NO可能通过cGMP依赖途径诱导心肌细胞预适应早期保护作用，而PKC的活化和钙通道、K(ATP)通道的开放是其下游重要的环节。     

Toll样受体信号转导通路介导的脑缺血耐受

许多预处理措施均可诱导脑缺血耐受,如短暂的全身或局部脑缺血、缺氧、内毒素、促炎细胞因子、麻醉剂等。耐受可在数分钟内快速形成(快速耐受),亦可在数小时至数天内迅速建立起神经保护状态(延迟耐受)。缺血造成组织细胞损伤,损伤的组织细胞释放一些内源性的激活物激活Toll样受体(Toll-like receptors,TLR s)炎症信号传导通路,诱发炎症反应,加重缺血损伤。在延迟缺血耐受的形成过程中,预处理激活TLR s信号通路,诱发轻微炎症,同时生成一些反馈抑制物(如抗炎细胞因子、诱饵受体和TLR s信号通路抑制剂)抑制随后严重缺血所造成的炎症反应,从而形成延迟耐受;快速耐受的形成可能是由于预处理因素影响了膜的流动性,改变了脂质筏的结构从而抑制了TLRs炎症信号通路。对脑缺血耐受发生机制的理解有助于预防和治疗脑缺血损伤。     

PDGF及TGF信号转导通路与肝星状细胞活化增殖的研究进展

肝纤维化(HF)是多种致病因素作用于肝细胞引起肝细胞变性坏死后的共同病理基础,肝纤维化是肝硬化形成的早期阶段和必经阶段,是一可逆过程,但若病因持续存在发展为肝硬化则为不可逆的.其本质是细胞外基质(ECM)在肝脏过度沉积,而肝星状细胞(HSC)是大多数ECM的细胞来源,因此该文对与HSC活化增殖密切相关的TGF及PDGF...     

胃泌素在胃肠道肿瘤中的作用及其信号转导途径的研究进展

胃泌素对于胃肠道肿瘤的促进作用已经被很多研究所证实。胃泌素与细胞表面受体结合后,通过一定的信号转导途径来调节某些基因转录与表达,从而促进肿瘤发生与发展。通过对胃泌素在胃肠道肿瘤中作用机制及其信号转导途径研究,有望找到更有效的胃肠道肿瘤治疗方法。