应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测细菌耐药性的初步研究

目的研究基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)用于检测鉴定细菌耐药性的可行性。方法对临床分离的耐药谱明确的8属11株细菌及相应的标准菌株,经相同条件培养后,应用MALDI-TOF-MS进行检测,并分析其耐药株和标准株质谱图的差异。另外,对临床分离的30株金黄色葡萄球菌同时进行药物敏感性实验和MALDI-TOF-MS检测。结果应用MALDI-TOF-MS检测细菌耐药性时,对葡萄球菌检测结果较好,尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,而对其它细菌耐药性检测效果较差。结论MALDI-TOF-MS检测细菌耐药性适用于部分细菌。     

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱在沙门菌检测和鉴定分型中的应用研究

目的利用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对从门诊腹泻病人粪便分离的88株沙门菌进行检测分型。方法利用优化的MALDI-TOF-MS实验条件对沙门菌进行检测和鉴定分型,并与血清学分型、耐药分型和PFGE分型结果进行比较。结果在反映亲缘关系的差异水平值为100时,88株沙门菌被分为15个MALDI-TOF-MS型别。MALDI-TOF-MS分型结合耐药表型分型,可以将88株沙门菌分成44个亚型;MALDI-TOF-MS分型结合血清学分型,可以将88株菌分成46个亚型。MALDI-TOF-MS分型结合PFGE分型,可以将88株菌分成64个亚型。说明MALDI-TOF-MS在沙门菌分型中具有很好的分型能力。结论MALDI-TOF-MS方法在检测与鉴定食源性病原菌中具有稳定、重复性好的特点,可成为食源性致病细菌分析鉴定的重要工具。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱在鉴定儿童血流感染少见苍白杆菌的应用及耐药情况分析

目的 快速鉴定和分析儿童血流感染少见苍白杆菌及其耐药情况分析.方法 收集某儿童医院儿童血流感染的临床标本中分离的苍白杆菌26株,运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,...     

基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱在铜绿假单胞菌鉴定中的应用

目的 评价基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱仪（MAL-TOF-MS）鉴定铜绿假单胞菌的效果。 方法 使用MALDI-TOF-MS对15株铜绿假单胞菌和8株干扰菌进行质谱采集,应用BioTyper和FlexAnalysis对图谱进行离子分析和比对鉴定,并将比对结果与全自动微生物生化鉴定仪（VITEK）进行比较。 结果 MALDI-TOF-MS对15株铜绿假单胞菌鉴定结果和VITEK完全一致。 结论 MALDI-TOF-MS可用作铜绿假单胞菌的准确快速的鉴定方法。     

应用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析宫颈鳞癌早期浸润蛋白质

目的探讨基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization ti me of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对宫颈鳞癌(squamous carcinoma of thecervix,SCC)组织切片直接分析,获取宫颈鳞癌早期浸润的分子标志物的有效性。方法利用超微量点样枪将化学基质直接点样到宫颈鳞癌组织切片上,然后利用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱直接扫描宫颈鳞癌组织切片,分析宫颈鳞癌组织蛋白质分子。结果获得的25种蛋白质质谱峰强度比较,差异有显著意义(P<0.05)。其中7种差异蛋白质有分类意义,其质/核(M/Z)分别为:m/z3433,m/z4786,m/z10092,m/z10835,m/z15114,m/z15854和m/z16345。差异蛋白质m/z3433,m/z15114,m/z15854在宫颈鳞癌鳞状上皮组织高度表达,可作为宫颈鳞癌早期诊断的标志蛋白;差异蛋白质m/z16345在宫颈鳞癌的间质组织高度表达,可作为宫颈鳞癌早期间质浸润和扩散诊断的标志蛋白。结论利用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术成功获取一组差异蛋白质。该差异蛋白组可望作为宫颈鳞癌早期诊断的标志蛋白。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的应用价值

目的 评估基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)检测肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的应用价值。方法 选取2018-2021年中山市致病菌识别网分离的111株肠杆菌科细菌。所有菌株采用纸片扩散法(K-B法)、改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)、MALDI-TOF MS进行检测,分析评估MALDI-TOF MS在检测肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的能力。结果 111株菌株采用mCIM和MALDI-TOF MS两种方法进行检测,均检出32株菌产碳青霉烯酶,其余79株菌不产酶。结论 mCIM和MALDI-TOF MS两种方法对肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶检测结果一致,具有相同的灵敏度,且MALDI-TOF MS检测时间大幅减少,可实现批量检测,具有推广应用的价值。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术在快速鉴定真菌中的临床应用研究

目的总结基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)应用于临床真菌鉴定的特点,为评估其在真菌快速鉴定方面的重要性及临床应用价值。方法采用VITEK MS鉴定仪对2013年1月-2014年9月临床检出真菌进行鉴定,获取真菌全细胞蛋白(主要是核糖体蛋白)质谱,通过与数据库中已知菌质谱进行比较、分析,获得鉴定结果并对数据进行统计分析。结果共鉴定出真菌1 254株,质谱技术鉴定真菌共1 198株,占95.53%,未鉴定出真菌占4.47%;应用质谱技术鉴定的真菌中以假丝酵母菌属为主,共1 125株占93.91%。结论 MALDI-TOF MS技术鉴定真菌种类多,操作流程简单、快速,而且还具有很好的可重复性和准确性,是传统真菌鉴定方法的有力补充,为真菌鉴定提供了新的选择。     

评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱对葡萄球菌属的鉴定能力

目的评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在临床鉴定常见葡萄球菌属的能力。方法采用MALDI-TOF MS对2011-2013年收集的151株葡萄球菌属进行分析比较;对鉴定结果不一致的菌株,用16SrRNA测序方法进行最后鉴定,评价MALDI-TOF MS的鉴定能力。结果 151株葡萄球菌属用MALDI-TOF MS与VITEK-2鉴定结果一致的有135株,符合率为89.4%,两种鉴定方法对39株金黄色葡萄球菌、34株表皮葡萄球菌及1株施氏葡萄球菌的鉴定符合率为100.0%;对16株结果不一致的随即用16SrRNA作进一步分析,其中15株鉴定结果与MALDI-TOF MS结果一致,MALDI-TOF MS与16SrRNA测序法对葡萄球菌属的鉴定能力符合率更高。结论与传统的VITEK-2鉴定方法比较,MALOT-TOF MS具有简便、快速、敏感、准确等优点,可用于葡萄球菌属的鉴定。     

基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱法和表面等离子谐振法在HPV分型检测中的应用比较

目的:评价比较基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)和表面等离子谐振法(SPR)在人乳头瘤病毒(HPV)分型检测中的应用。方法:两种方法对30种不同型别HPV L1基因分型国家参考品和129份经液基薄层细胞检测的样本分别进行检测和评价。结果:MALDI-TOF-MS法和SPR法检测参考品具有100%的一致性。采用测序法确定129份样本中有93份为HPV阳性,36份为HPV阴性。高危型样本的分型准确率MALDITOF-MS法为100%(77/77),SPR为94.8%(73/77);MALDI-TOF-MS法HPV分型检测的敏感率为88.2%(82/93)、特异性为88.9%(32/36),与SPR法的灵敏率和特异性相当。结论:MALDI-TOF-MS在HPV分型检测中具有较好的灵敏性和特异性,与SPR法一致。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的研究基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization-Timeof Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF-MS)用于快速检测鉴定金黄色葡萄球菌及其耐药性的可行性。方法用MALDI-TOF-MS和API Staph系统鉴定了40株临床分离的葡萄球菌,用Kirby-Bauer法检测金黄色葡萄球菌的耐药性。结果 40株临床分离的葡萄球菌中34株细菌用MALDI-TOF-MS鉴定为金黄色葡萄球菌,6株为其他葡萄球菌,与API Staph系统鉴定结果一致。Kirby-Bauer法耐药性检测显示其中11株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA),23株为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(methicillin-susceptible Staphylococcus aureus,MSSA),34株金黄色葡萄球菌用MALDI-TOF-MS鉴定时聚类为2类,结果与耐药性检测结果一致。结论结果提示MALDI-TOF-MS可以用于MRSA的快速鉴定。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速鉴定药敏法在阳性血培养标本中的应用价值

目的 运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)联合分离胶快速鉴定血培养阳性标本,进行直接抗菌药物敏感实验,缩短诊断时间,并与常规方法相比较,探讨快速鉴定法的鉴定和药敏符合率。方法 利用MALDI-TOF-MS直接鉴定经过分离胶分离富集的菌体,并利用该鉴定结果直接进行药敏实验。同时将报阳后的培养液接种在哥伦比亚血琼脂平板上,5%CO₂,35℃孵育过夜后进行鉴定,药敏实验。将快速法鉴定与直接药敏结果与常规方法鉴定与药敏结果相比较。结果 以常规药敏实验为标准,革兰阳性菌和革兰阴性菌快速法鉴定结果与常规方法的符合率分别为75.8%和86.7%。革兰阴性菌直接药敏实验一致性为97.9%,微小差异为1.9%,主要差异为0.2%。革兰阳性菌直接药敏实验一致性为97.2%,微小差异为2.0%,重大差异为0.8%。结论 阳性血培养瓶快速鉴定法和直接药敏试验与常规方法符合率高,可极大缩短诊断时间,为临床及时治疗提供可靠的依据。     

致泻性大肠埃希菌基质辅助激光解析飞行质谱研究

目的利用基质辅助激光解析飞行(MALDI-TOF)质谱微生物检测系统对不同血清型的致泻性大肠杆菌进行分析,寻找血清型质谱分析的生物标识峰。方法将血清型可靠的5株致泻性大肠杆菌培养24 h后,进行MALDI-TOF质谱分析和特征峰聚类分析,通过对比各血清型胎指纹图谱的荷质比及相对丰度,分析血清型之间特有峰及缺失峰的差异。结果 5株致泻性大肠杆菌拥有不同的特有峰且个别相对丰度极高。EHEC亲缘关系较其他株远,峰形特异性较大。而ETEC和EAEC、EPEC和EIEC之间峰形相似度较高,亲缘关系较近。结论致泻性大肠杆菌的不同血清型的胎指纹图谱具有显著差异的生物标识峰。这些生物标识可以作为致泻性大肠杆菌血清型的质谱图谱补充,有利于完善血清学诊断相关的质谱数据库。     

基质辅助激光解析离子-飞行时间质谱仪在快速鉴定凝固酶阴性葡萄球菌中的应用

目的 评价基质辅助激光解析离子-飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS,MS)在临床分离凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)快速鉴定中的应用.方法 收集复旦大学附属中山医院2012年7月-2013年1月分离自血液的194株CNS;分别使用MS和全自动细菌鉴定系统(细菌鉴定仪)鉴定到种,当两种方法结果不一致时使用16S rRNA测序方法进行确认,比较两种鉴定方法的符合率及准确性,评价MS使用价值.结果 194株CNS中148株两种方法鉴定结果一致,符合率76.3％,以16S rRNA方法为金标准,MS和细菌鉴定仪与16S rRNA的结果假定符合率分别为98.9％和76.3％,两种方法准确性差异有统计学意义(P＜0.001).结论 MS用于鉴定CNS比传统方法快速、准确和价廉.     

激光解吸快速菌种鉴定与不同前处理方法 对常见食源性致病菌菌种的鉴定分析

【目的】比较研究基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术与不同样品前处理方法对常见食源性致病菌菌种鉴定的影响。【方法】收集51株常见的食源性致病菌,包括沙门氏菌、葡萄球菌、李斯特菌、弧菌、埃希氏菌及志贺氏菌等,分别研究直接涂抹法、原位甲酸提取法、甲酸乙腈提取法对菌种鉴定结果的影响。【结果】不同样品前处理方法对沙门氏菌、志贺氏菌和大肠杆菌的鉴定结果无明显差异;头状葡萄球菌、科氏葡萄球菌、副溶血弧菌和创伤弧菌,采用直接涂抹法无法获得有效鉴定结果,而原位甲酸提取法和甲酸乙腈提取法则均能获得准确的鉴定结果;采用直接涂抹法和原位甲酸提取法,李斯特菌属中的非单增李斯特菌常被错误鉴定为单增李斯特菌,采用甲酸乙腈提取法能够有效改善李斯特菌属不同种的鉴定准确性。【结论】不同样品前处理方法对常见食源性致病菌菌种的MALDI-TOF MS鉴定结果具有一定影响,对于不同菌种选择合适的样品前处理方法才能获得可靠准确的鉴定结果。     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速检测产KPC型肺炎克雷伯菌

目的 采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)筛选产KPC型肺炎克雷伯菌(KPC-Kp)的特征峰,建立快速检测KPC-Kp的方法。方法 收集耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)共37株,PCR方法检测常见碳青霉烯酶耐药基因(bla_KPC、bla_NDM、bla_VIM、bla_IMP和bla_OXA-48-like);全基因组测序分析CRKP菌株的相关遗传特性,包括多位点序列分型(MLST)和bla_KPC-2基因周围环境;用布鲁克ClinproTools 3.0软件以及Flexanalysis 3.0图谱分析软件筛选出KPC-Kp的特征峰,分析特征峰与KPC-Kp的MLST分型和bla_KPC-2基因周围环境的关系。结果 PCR结果显示,35株CRKP携带bla_KPC-2基因,2株CRKP携带bla_NDM-1基因。MLST分析结果显示,37株CRKP共有5个ST型,其中35株KP...     

基质辅助激光解析离子-飞行时间质谱仪在快速鉴定革兰阳性球菌中的应用

目的了解基质辅助激光解析离子-飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS,MS)在临床分离革兰阳性球菌鉴定中的应用,为临床医师正确诊断提供科学依据。方法回顾性分析2013年1月-2014年9月临床标本经MS鉴定为革兰阳性球菌,将所得菌质谱峰图与数据库中峰图进行比较,分析得出鉴定结果。结果 MS共鉴定出革兰阳性球菌3 812株,葡萄球菌属2 094株共18种,占54.93%,居前3位分别为表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、人葡萄球菌,分别占20.2%、14.7%、9.9%;肠球菌属1 254株共10种,占32.90%;其中屎肠球菌占19.9%、粪肠球菌占11.8%;链球菌属374株共19种,占9.81%,以无乳链球菌检出最多占3.1%;其他革兰阳性球菌90株包括9个属占2.36%,使用MS后除了能鉴定出临床常见革兰阳性球菌,还增加了少见菌的鉴定种类。结论 MS鉴定革兰阳性球菌数量多、种类多,为临床治疗、鉴别感染病原菌提供了快速的筛选方法。     

在食品微生物检测和鉴定中应用的一种质谱新技术

基质辅助激光解析电离（MALDI）是近年来发展的一种新的软电离技术，常与飞行时间质谱（TOF-MS）联用，称为基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）。它具有快速、灵敏和高通量等特点，被广泛应用于生命科学及其他领域。全细胞或细胞裂解产物经MALDI-TOF-MS分析得到的指纹图谱可完成对细菌、真菌及病毒的检测及鉴定。     

MALDI-TOF MS在新生儿血流感染恶臭假单胞菌同源性分析中的应用

目的 探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)技术在新生儿血流感染恶臭假单胞菌同源性分析中的应用。方法 收集湖南省儿童医院新生儿病区7株新生儿血流感染恶臭假单胞菌株,利用VITEK-Compact 2检测药敏结果;运用MALDI-TOF MS及SARAMIS软件检测及分析该批恶臭假单胞菌的同源性;同时运用全基因测序(whole genome sequencing, WGS)的方法来验证MALDI-TOF MS分析结果。结果 7株恶臭假单胞菌对头孢三代以上抗生素及碳青酶烯类抗生素均不敏感,对阿米卡星及左氧氟沙星都敏感。通过运用MALDI-TOF MS及SARAMIS软件发现该7株恶臭假单胞菌为同一型的相对相似度在80%～90%之间。WGS分析发现：该7株恶臭假单胞菌多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)均为128型,平均核苷酸相似度(average nucleotid...     

飞行时间质谱技术在HIV诊断应用性研究

[目的]用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI TOF MS）技术分析HIV感染者和健康人血清标本的多肽指纹图谱，建立HIV血清多肽指纹图谱诊断模型并探究其临床价值。[方法]选取的血清样本经Zip Tip C18层析预分离，运用MALDI TOF MS分析检测，获得HIV感染者和健康人血清标本的多肽指纹图谱，用SPSS13．0软件对数据进行分析，建立诊断模型。[结果]在分子量为800—4000Da范围内，共发现500个多肽峰，其中11个多肽峰在HIV感染组、正常对照组中表达均有显著差异（P〈0．05），5个在HIV感染组中表达上调（m／z1418．67，1465．67，1777．82，1864．82和2080．23），6个在HIV感染组中表达下调（m／z904．71，920．73，1076．73，1521．79，1552．75和2080．78）；（m／z2080．78＋2080．23＋1777．82＋1465．67）组合的P〈0．05，回归系数、相对危险度都比较理想，其ROC曲线下面积是1．0，以此建立了HIV血清多肽指纹图谱诊断模型。[结论]本研究建立的诊断模型可以有效区分HIV感染者和健康人，为HIV的诊断与筛查提供了一条崭新途径。