c-Jun氨基末端激酶在镉致小鼠脑原代星形胶质细胞凋亡中的作用

目的利用原代培养的小鼠脑星形胶质细胞(astrocytes,AS),探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路是否参与镉致小鼠脑星形胶质细胞凋亡的过程。方法原代培养的小鼠脑星形胶质细胞给予0~20μmol/L镉染毒0~24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态变化;给予0~20μmol/L镉染毒9、12 h,采用MTT法检测细胞存活率;给予0~20μmol/L镉染毒12 h,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;给予0~20μmol/L镉染毒0~12 h,采用蛋白印迹(Western blotting)法检测JNK磷酸化蛋白的表达水平。结果镉浓度为5~20μmol/L时,随染毒剂量的升高及作用时间的延长,细胞形态发生明显改变:细胞间网络连接松散,突起消失,胞体收缩成球形,贴壁能力下降,最终脱落,漂浮于培养液中。与对照组比较,各浓度镉染毒9、12 h后小鼠脑星形胶质细胞的存活率均下降,差异有统计学意义(P0.01);且随着镉染毒浓度的升高和染毒时间的延长,小鼠脑星形胶质细胞的存活率均呈下降趋势。与对照组比较,各浓度镉染毒12 h后小鼠脑星形胶质细胞的凋亡率均升高,差异有统计学意义(P0.01);且随着镉染毒浓度的升高,小鼠脑星形胶质细胞的凋亡率均呈上升趋势。与对照组比较,5~20μmol/L镉染毒3 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,20μmol/L镉染毒6 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量升高,10~20μmol/L镉染毒9、12 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,差异有统计学意义(P0.05);与0 h比较,0~20μmol/L镉染毒3~12 h后小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK表达量均升高,差异有统计学意义(P0.05);且随着镉浓度的升高和染毒时间的延长,小鼠脑星形胶质细胞内p-JNK的表达量均呈上升趋势。结论镉可能通过上调JNK磷酸化蛋白的表达水平来诱导小鼠脑星形胶质细胞的凋亡。     

氯氰菊酯通过JNK/c-Jun信号通路诱导肝脏氧化性DNA损伤

目的 明确氯氰菊酯(cypermethrin, CYP)的肝脏损伤效应，探讨促分裂素丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases, MAPK)信号通路的潜在作用。方法 选取24只青春期雄性SD大鼠，使用不同剂量β-CYP(0、5、10和20 mg/kg)连续灌胃染毒31 d。苏木素-伊红染色和透射电镜分析肝脏组织形态学和超微结构变化；酶联免疫吸附法检测丙二醛(malonaldehyde, MDA)和8-羟脱氧鸟苷(8-hydroxylated deoxyguanosine, 8-OHdG)水平；免疫组织化学分析磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phospho-c-Jun N-terminal kinase, p-JNK)表达；免疫荧光分析磷酸化组蛋白H2A.X(phospho-histone H2A.X,γ-H2A.X)表达；实时荧光定量PCR检测谷胱甘肽过氧化物酶(glutathion peroxidase, GPx)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)以及过氧化氢酶(catalase, CAT)基因水平；蛋白质...     

细胞外信号调节激酶/c-Jun氨基末端激酶在炭黑诱导的人胚肺成纤维细胞毒性中对激活蛋白-1信号通路的作用

目的 探讨细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)/c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases,JNK)在炭黑诱导的人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblasts,HELF)毒性中对激活蛋...     

c-jun氨基末端激酶通路在一氧化氮诱导的软骨细胞凋亡中的作用

目的 利用一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)和c-jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125,研究JNK通路对NO诱导的兔关节软骨细胞凋亡的影响.方法 采用机械-酶消化法分离3周龄新西兰兔关节软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定细胞后,SNP和JNK抑制剂SP600125作用于细胞24h,采用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测软骨细胞凋亡,免疫印迹(Western blot)法测定核因子(NF-κB)p65和p53蛋白的表达水平.结果 SNP作用于软骨细胞后,随着其浓度的增大,细胞早期凋亡率与对照组比较呈浓度依赖性增加,差异有统计学意义(P＜0.05),NF-κB p65和p53的表达分别出现上调,差异有统计学意义(P＜0.05);加入JNK抑制剂SP600125能抑制这种增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 JNK信号转导通路在NO诱导的软骨细胞凋亡起着非常重要的作用,JNK的特异性抑制剂SP600125能以浓度依赖方式减少兔关节软骨细胞中NO诱导的凋亡和NF-κBp65及p53蛋白的表达活性.     

ERK/JNK信号通路在炭黑诱导细胞因子IL-6、IL-8表达改变中的作用

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在炭黑诱导人胚肺成纤维细胞(HELF)白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)表达改变中的作用.方法 分别在含0、15、30、60、120或240 j/mL炭黑的RPMI...     

镉对原代培养小鼠大脑皮层神经元磷酸化c-Jun氨基末端激酶的影响

目的探讨原代培养的小鼠大脑皮层神经元经不同浓度镉(cadmium,Cd)处理不同时间后磷酸化c-JNK氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)表达的变化。方法原代培养的小鼠大脑皮层神经元经0、5、10、20μmol/L氯化镉染毒0、6、12、24 h后,采用MTT法检测细胞活性;用蛋白免疫印迹法检测p-JNK蛋白的表达水平。结果Cd浓度为5、10、20μmol/L时,随着Cd浓度的升高及染毒时间的延长,神经元突起变细,甚至断裂,胞体变为球形后脱落,漂浮于培养液中。与对照组比较,随着Cd浓度的升高和处理时间的延长,原代培养的小鼠大脑皮层神经元的存活率明显下降(P0.05),且大脑皮层神经元中p-JNK的表达量升高(P0.05)。结论 Cd可能通过上调p-JNK的表达引起原代培养小鼠大脑皮层神经元的死亡。     

HSF1/HSP70通路抑制c-Jun氨基末端激酶的活化保护UVA诱导的HaCaT细胞凋亡

目的观察热休克转录因子1(HSF1)与热休克蛋白70(HSP70)对紫外线A(UVA)诱导HaCaT细胞凋亡的保护作用及其机制。方法建立8mJ/cm2UVA辐射损伤HaCaT细胞的病理模型。将细胞随机分为对照组、8mJ/cm2UVA照射组、HSP70转录抑制剂组(50μmol/L槲皮素)。Honechst 33258荧光染色观察细胞凋亡;蛋白质印迹法检测UVA辐射HaCaT细胞后p-HSF1和HSP70蛋白的经时变化及UVA辐射后孵育6h JNK(c-Jun氨基末端激酶)、p-JNK的蛋白表达;Real-Time PCR检测HSP70 mRNA的表达。结果 UVA辐射后HaCaT细胞内p-HSF1、HSP70蛋白表达量均出现先增加后减少的时间依赖性趋势,其中p-HSF1于1h开始增加,3h达高峰,HSP70于6h达高峰,24h基本恢复原始水平;UVA辐射前预先加入HSP70转录抑制剂槲皮素能显著抑制HSP70 mRNA的表达,增加p-JNK的表达量,同时Honechst 33258荧光染色观察其与UVA辐射组比较凋亡率明显升高。结论 8mJ/cm2UVA辐射HaCaT细胞在一定时间内可使HSF1活化致HSP70表达增加。HSF1/HSP70通路对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡具有保护作用,其机制与HSP70大量表达后抑制JNK的活化有关。     

氯化镉引起线粒体分裂诱导小鼠精母细胞GC-2 spd凋亡

目的探讨镉诱导小鼠精母细胞(GC-2 spd)凋亡的作用机制。方法于2021年3月, 分别用5和10 μmol/L氯化镉(CdCl2)染毒GC-2 spd细胞24 h, 分别为CdCl2 5 μmol/L染毒组(CdCl2低剂量组)和CdCl2 10 μmol/L染毒组(CdCl2高剂量组), 以未染毒的GC-2 spd细胞作为对照组。采用Mito-Track Red CMXRos线粒体荧光探针染色细胞检测线粒体形态, 流式细胞术结合JC-1荧光探针检测线粒体膜电位的变化;使用细胞线粒体分离试剂盒和RIPA裂解液分别提取GC-2 spd细胞的线粒体蛋白、细胞浆蛋白和细胞总蛋白, Western blot检测线粒体稳态调节蛋白[分裂蛋白(FIS1)和融合蛋白(OPA1)]及细胞凋亡相关蛋白(Cytochrome c和cleaved Caspase-3)的表达。结果与对照组细胞比较, CdCl2低剂量组和高剂量组细胞中JC-1红色/绿色荧光信号相对比值均明显降低(0.740±0.071、0.570±0.028), 差异有统计学意义(P=0.017、0.004);线粒体形态由长管状变为点状,...     

电离辐射激活细胞膜受体凋亡信号通路

目的 探讨细胞膜死亡受体信号通路激活在电离辐射诱导细胞凋亡中的作用。方法 BET-2细胞经0、1、3、5、7、10 Gy不同剂量照射后分为对照组与caspase-8特异性抑制剂IETD-fmk-处理组,应用Annexin-V法观测照射后不同时间caspase-8、caspase-3的改变与细胞凋亡的变化。结果 电离辐射可引起BET-2细胞caspase-8、caspase-3增高,并诱导细胞凋亡,上述变化具有较好的照射剂量效应和时间效应;照射后加入caspase-8特异性抑制剂IETD-fmk,可在一定程度上减少电离辐射诱导的细胞凋亡。结论 电离辐射可直接激活细胞膜上死亡受体介导的细胞凋亡信号通路,诱导细胞凋亡。     

镉诱导小鼠胸腺细胞凋亡的研究

目的 探索镉的免疫毒性机制,系统性地研究镉体外诱导小鼠胸腺细胞凋亡的发生,解释其细胞毒性机制。方法 通过以下方法检测凋亡;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）,DNA含量/细胞周期分析,DNA琼脂糖凝胶电泳。结果 镉能引起原代培养的胸腺细胞发生凋亡,并呈时间-反应和剂量-效应关系。结论 本研究为阐述镉免疫毒性机制提供了依据,尤其对解释镉引起的胸腺萎缩和导致的T细胞介导的免疫力损伤有重要意义。     

JNK信号通路介导大鼠局灶性脑缺血再灌后海马神经元凋亡

[目的]研究局灶性脑缺血再灌(I/R)后c-Jun氨基端激酶(JNK)蛋白表达及其依赖的caspase途径激活情况,探讨此通路在海马神经元凋亡中可能的作用及机制.[方法]建立大鼠可逆性大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,采用免疫印迹法检测不同实验组中海马区p-c-jun及凋亡Caspase-3表达,TUNEL法原位检测CA1区凋亡锥体细胞.[结果]与假手术组比较.模型组p-e-jun蛋白平均灰度值显著增强,以3h、6h、12h差异有统计学意义(P＜0.05).模型组Caspase-3于再灌注后6h开始表达(P＜0.05),12h其条带密度达高峰(P＜0.05).I/R3h至24h海马区p-c-jun表达与caspase-3呈正相关(r=0.696,P＜0.01);caspasse-3与TUNEL星正相关(r=0.310,P＜0.001).[结论]大鼠I/R后JNK部分激活了Caspase依赖的促凋亡通路.     

水飞蓟宾对P15INK4B和P21WAF1/CIP1激活作用及JNK诱导人胰腺癌细胞G1期阻滞与细胞凋亡观察

目的 分析水飞蓟宾对P15INK4B和P21WAF1/CIP1激活作用及c-Jun氨基末端激酶(JNK)诱导人胰腺癌细胞G1期阻滞、细胞凋亡情况。方法 以人胰腺癌细胞株Bxpc-3为例，测定0、30、60、120、240μg/L水飞蓟宾对人胰腺癌细胞存活率、细胞周期的影响。结果 与对照组(0浓度)相比，水飞蓟宾组人胰腺癌细胞存活率明显下降，细胞G1期DAN含量明显增加，S期、G₂期含量降低，磷酸化JKN表达量明显增加，且与水飞蓟宾的浓度密切相关，组间差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比，水飞蓟宾组细胞侵袭数量减少，细胞生长率降低，差异有统计学意义(P<0.05)；与对照组相比，120μg/L浓度的水飞蓟宾组的血管内皮生长因子(VEGF)、金属基质蛋白酶9(MMP-9)、金属基质蛋白酶2(MMP-2)表达明显下降，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 水飞蓟宾可抑制人胰腺癌细胞存活率，阻滞细胞周期增加，通过激活JNK活化，降低VEGF、MMP-9、MMP-2表达，促使细胞凋亡。     

胰高糖素样肽-1受体激动剂通过JNK信号通路促进肝星形细胞凋亡的机制研究

目的 探讨胰高糖素样肽-1受体激动剂(GLP-1RA)通过JNK信号通路促进肝星形细胞(HSC)凋亡的机制.方法 体外培养人HSC并进行形态学鉴定,将HSC样本随机分成对照组(20份)、GLP-1RA组(20份)和JNK阻断组(20份).对照组HSC在常规培养基础上加入高糖(终浓度25 mmol/L),GLP-1RA组在对照组基础上加入GLP-1RA利拉鲁肽(终浓度10 mmol/L),JNK阻断组在GLP-1RA组基础上加入JNK信号通路阻断剂SP600125(终浓度20 μmol/L)进行培养;培养120 h后用流式细胞术检测各组的HSC凋亡情况.同时采用Western印迹法检测各组的p-JNK蛋白表达水平.结果 三组的平均凋亡率和平均p-JNK的表达水平差异均有统计学意义(F=19.412和66.451,P均＜0.01).GLP-1RA组的凋亡率和p-JNK蛋白表达水平分别为(30.61±4.07)％和(22.79±3.80)％,均高于对照组,差异均具有统计学意义(t=0.530和9.854,P均＜0.01);JNK阻断组的细胞凋亡率和p-JNK蛋白表达水平分别为(23.48±4.41)％和(10.66±4.15)％,均低于GLP-1RA组,差异有统计学意义(t=-5.428和-8.757,P均＜0.01).结论 JNK信号通路在GLP-1RA介导的HSC凋亡中起着关键作用,GLP-1RA可以通过JNK信号通路促成经高糖诱导活化的HSC发生凋亡.     

N-乙酰半胱氨酸激活蛋白激酶B通路减轻镉诱导的睾丸间质细胞凋亡

目的 探究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)基于蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)通路对镉诱导小鼠睾丸间质细胞凋亡的调控机制。方法 将小鼠睾丸间质细胞(TM3)分为对照组、镉染毒组(Cd, 5、10、20、30、40和50μmol/L)、NAC组(NAC,500μmol/L)及NAC+镉染毒组(500μmol/L NAC+20μmol/L Cd),其中NAC+Cd染毒组先用NAC预处理30 min,再联合镉染毒24 h。CCK8测定细胞存活率,Hoechst染色检测细胞形态,流式细胞仪分析细胞凋亡率,同时测定丙二醛(malondialdehyde, MDA)、谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量,Western blot免疫印迹法分别检测AKT蛋白、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)的表达水平。结果 镉可抑制TM3细胞增殖且存在剂量-效应关系。细胞形态观察发现,随着镉染毒浓度的增加,细胞缩...     

c-Jun N-末端激酶在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

c-Jun N-末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)属于丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPK)家族成员，多种细胞外应激信号可使其磷酸化而活化，在细胞应激反应中起重要作用。我们通过研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate，VES)对人胃癌SGC-7901细胞中JNKMAPK表达的影响，探讨该途径在VES诱导SGC-7901细胞凋亡中的作用。     

mTOR信号通路在细胞自噬和凋亡调节中的作用

自噬及凋亡广泛存在于细胞中,是细胞内生物大分子的降解再循环过程,在细胞生长代谢中发挥着重要作用.两者相互作用,共同推动和影响细胞的程序性死亡,维持机体自身稳态及外界环境刺激下的应激反应.mTOR信号通路是一条经典的调控自噬凋亡信号通路,在细胞代谢中发挥重要作用.结合mTOR信号通路探讨自噬及凋亡在细胞代谢及生物体生长发...     

JNK信号通路在NaAsO2诱导L-02肝细胞 凋亡过程中的作用

摘要:目的　研究JNK在NaAsO2诱导L-02肝细胞凋亡中的作用。方法　用不同浓度NaAsO2染毒L-02肝细胞,采用流式细胞术检测L-02肝细胞凋亡率;Western-blot检测L-02肝细胞中Jnk、p-Jnk、Caspase-3蛋白的相对表达量。结果　0、50、100 和 150 μmol/L组细胞凋亡率分别为3.33%±0.30%、7.49%±0.23%、9.48%±0.49%和 14.87%±2.17%,染毒组的细胞凋亡率随NaAsO2浓度的增加而升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;染毒组细胞内Jnk、p-Jnk、Caspase-3蛋白相对表达量均增高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论　NaAsO2能诱导L-02肝细胞凋亡的发生,这可能与激活JNK,增加JNK磷酸化水平,继而激活凋亡调控基因Caspase-3有关。     

JNK信号通路在二甲基肿酸所致人胚肺成纤维细胞DNA损伤与凋亡中的作用

[目的]探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路在二甲基胂酸（DMA）所致人胚肺成纤维（HELF）细胞DNA损伤与凋亡中的作用。[方法]以0、2．5、5、10和20μmol／LDMA处理HELF细胞48h后，检测HELF细胞生长、DNA损伤、细胞凋亡、JNK磷酸化水平；并用20μmol／LJNK抑制剂SP600125预处理30min后，再用DMA处理HELF细胞48h，观察上述指标变化情况。[结果]10和20μmol／LDMA对HELF细胞生长产生明显抑制作用（P〈0．05）；2．5、5、10和20μmol／LDMA引起HELF细胞γ-H2AX表达水平明显增强（P〈0．05），并具有一定剂量-效应关系（经直线相关分析，r=-0．982，P〈0．05）；5、10和20μmol／LDMA引起HELF细胞断裂，caspase3表达水平明显增强（P〈0．05），呈一定剂量-效应关系（经直线相关分析，r=0．945，P〈0．05）；5、10和20μmol／LDMA处理HELF细胞48h后，JNK磷酸化的表达水平明显增加（P〈0．05），呈现一定剂量-效应关系（经直线相关分析，r=0．988，P〈0．05）；JNK抑制剂SP600125能明显降低10、20μmol／LDMA的生长抑制作用（P〈0．05）；JNK抑制剂SP600125可明显阻滞DMA所致HELF细胞对DNA损伤和诱导的凋亡作用（P〈0．05）。[结论]DMA可引起HELF细胞DNA损伤和凋亡；在此过程中JNK信号通路激活起到正调控作用。     

自噬在氯化镉诱导小鼠初级精母细胞凋亡中的作用

目的 探究自噬在氯化镉(cadmium chloride, CdCl₂)诱导小鼠初级精母细胞(GC-2 spd)凋亡中的作用及其潜在作用机制。方法 以不同浓度CdCl₂(0、5和10μmol/L)染毒GC-2 spd细胞24 h。Hoechst33342染色法和单丹磺酰戊二胺法分别检测凋亡小体和自噬体;TUNEL荧光染色检测细胞凋亡情况;在不含/含CdCl₂(10μmol/L)的细胞培养液中分别加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(60μmol/L)、凋亡抑制剂胱天蛋白酶家族抑制剂(50 nmol/L)、自噬激动剂雷帕霉素(50 nmol/L)和溶酶体抑制剂氯喹(10μmol/L)处理GC-2 spd细胞24 h, Western blot检测细胞内自噬相关蛋白LC3、P62以及促凋亡蛋白cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9的表达水平。结果 CdCl₂染毒细胞24 h后,自噬体聚集且凋亡细胞增多。Western blot结果显示,5和10μmol/L CdCl_2<...     

PERK信号通路在热诱导睾丸生殖细胞凋亡中的作用

目的探讨内质网应激PERK信号通路在急性热应激诱导睾丸生殖细胞凋亡中的作用。方法将18只健康6~8周龄清洁级ICR雄性小鼠随机分为3组,每组6只。将热处理组小鼠身体的下1/3部分(包括阴囊、后腿、尾巴)浸于43℃恒温水浴15 min,于热应激后2、6 h处死小鼠;将对照组小鼠下腹部浸入22℃水浴15 min,6 h后处死小鼠。采用TUNEL法检测睾丸组织生殖细胞的凋亡率。采用Western blot法检测睾丸总蛋白p-e IF2α和CHOP蛋白的表达水平。结果与对照组比较,热处理后不同时间小鼠睾丸组织生精小管内核浓缩小管、含空泡小管和MSCs的发生率及阳性小管发生率和每管凋亡细胞数以及p-e IF2α与CHOP蛋白的表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);且随着热处理后时间的延长,小鼠睾丸组织生精小管内核浓缩小管、含空泡小管和MSCs的发生率及阳性小管发生率和每管凋亡细胞数均呈上升趋势,而p-e IF2α与CHOP蛋白的表达水平均呈先上升后下降的趋势。结论单次热处理能明显上调睾丸组织e IF2α蛋白磷酸化和CHOP蛋白的表达水平,提示内质网应激PERK信号通路可能参与了热处理诱导的睾丸生殖细胞凋亡。