酶偶联法测定血清血管紧张素转换酶

目的建立一种测定血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的酶偶联法。方法血清与底物马尿酸双甘肽（ＨｉｐＧｌｙＧｌｙ）混合温育３０分钟，生成马尿酸（Ｈｉｐ）与双甘肽（ＧｌｙＧｌｙ），再加入Ｌγ谷氨酰３羧基４硝基苯胺（ＧＧＣＮ）和γ谷氨酰基转移酶（ＧＧＴ），催化ＧＧＣＮ与ＧｌｙＧｌｙ偶联，产生的３羧基４硝基苯胺于４１０ｎｍ波长测定其吸收度。结果当底物ｐＨ８０，ＧＧＣＮ１０ｍｍｏｌ／Ｌ，ＧＧＴ６７ｋＵ／Ｌ时，ＡＣＥ活性与吸收度值有良好线性。５５份健康人血清ＡＣＥ（ｘ±ｓ）２８９±８３Ｕ／Ｌ，ＣＶ：批内４６％；批间４８％。１０份肉样瘤患者血清ＡＣＥ（ｘ±ｓ）７４８±３４９Ｕ／Ｌ，批内ＣＶ３９％，回收率９６％～１０３％。结论酶偶联法测定ＡＣＥ活性具有操作简便、迅速、重复性好，适用于手工操作或自动化分析，可用于诊断早期肺损伤和人类免疫缺陷病毒感染。     

猪肾“轻型”GGT的提纯及动力学研究

为了制备ＧＧＴ测定的标准品，研究了猪肾“轻型”γ－谷氨酰移换酶（ＧＧＴ）的提取方法及动力学特性。这种“轻型”酶的比活性达３２０ｋＵ／ｇ蛋白，几乎不含其它杂酶类，每１００ＵＧＧＴ中仅含０．２６Ｕ的乳酸脱氢酶。聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳显示一条ＧＧＴ活性区带。其催化特性和人血清ＧＧＴ非常相似，最适ｐＨ为７．８，对供体底物Ｌ－γ－谷氨酰－３－羧基－４－硝基苯胺的米氏常数（ＫＤｍ）为０．９６ｍｍｏｌ／Ｌ，对受体底物甘氨酰甘氨酸的米氏常数（ＫＡｍ）为１２．７ｍｍｏｌ／Ｌ。     

用GCNA作基质终点比色法测定血清LDL－VLDL－GGT

用ＧＣＮＡ作基质终点比色法测定血清ＬＤＬ－ＶＬＤＬ－ＧＧＴ孙明洪（新余钢铁公司第一医院，江西新余３３６５１３）我们参考文献［１，２］，用ＰＥＧ６０００分离ＬＤＬ、ＶＬＤＬ，γ－Ｌ－谷氨酰－３－羧基－４－硝基苯胺（ＧＣＮＡ）作基质，混合有机酸中止反应，...     

尿中半乳糖苷酶活力的连续监测法

本文报道用新色原氯硝基苯基Ｎ－乙酰－β－Ｄ－氨基半乳糖苷（ＣＮＰ－ＧＡＬ）连续监测法测定尿ＧＡＬ。此法不需尿样空白，有很高的精度，批内、批间的ＣＶ≤６．６８％。尿ＧＡＬ的最适ＰＨ４．４－５．０，最佳呈色反应ＰＨ４．６－５．０，在４００秒观察期内吸光度亦化与时间成正比例。     

酶标记孕酮酶联免疫分析

本文将孕酮－３－肟与辣根过氧化酶（ＨＲＰ）偶联，制得酶标记物孕酮－３肟－辣根过氧化酶（Ｐ－３－oxime-ＨＲＰ）。选择１×１０＾－４稀释度抗血清包被４０孔酶标板，１×１０＾－５稀释度抗原作工作浓度进行免疫反应，标准曲线范围０～１２ng，灵敏度为５０pg，结合率与样品孕酮剂量的回归方程式为：Ｙ＝０．６９９４－０．０４４６Ｘ（r＝ －０．９６４７５）     

血清NAG活性测定及其在病毒性肝炎诊断中的初步探讨

应用新色原２－氯－４－硝基酚－Ｎ－乙酰－β－Ｄ－氨基葡萄糖苷（ＣＮＰ－ＮＡＣ）为底物建立了血清ＮＡＧ的速炫法测定，并应用于肝病的临床诊断，收到良好的效果，此反应的最适ＰＨ为５．０；底物浓度为２．０ｍｍｏｌ／Ｌ，ＣＮＰ当ＰＨ为５．０时的最大吸收峰在４０５ｎｍ；在底物溶液中加入适当的ＴｒｉｔｏｎＸ－１００（０．１％）可以提高反应的灵敏度，批纳ＣＶ〈３．６０％，批间ＣＶ〈６．９７％。当地正常参考值范围是     

血清血管紧张肽-转换酶简易的酶法测定

本文作者介绍了一种简单的动力学酶法测定血管紧张肽-转换酶(ACE)活性的方法。首先,ACE与底物质马尿酰-甘氨酰-甘氨酸(Hip-Gly-Gly)反应释出Gly-Gly,接着在γ-谷胺酰转移酶(GGT)催化反应中,Gly-Gly作为受体底物从供体底物L-γ-谷胺酰-3-羧基-4-硝基替苯胺(GGCN)转移γ-谷胺酰基团。反应中释放的3-羧基-4-硝基替苯胺可于410nm测定。反应式如下:     

酶循环法测定血清总胆汁酸

采用氧化型β－硫烟酰胺腺苷二核苷酸（Ｔｈｉｏ－ＮＡＤ）底物酶循环法测定血清总胆汁酸（ＴＢＡ）,对其方法学进行初步研究。该法灵敏度：试剂空白△Ａ４０５ｎｍ（１ｃｍ）０．００４／ｍｉｎ;５０μｍｏｌ／Ｌ△Ａ４０５ｎｍ（１ｃｍ）０．０５０／ｍｉｎ;平均回收率９９．２％;线性０￣１５０μｍｏｌ／Ｌ;精密度：批内ＣＶ〈１．０％;批间ＣＶ〈４．５％;该法（Ｙ）和偶联黄递酶比色法（Ｘ）比较：Ｙ＝０．８８Ｘ－１．     

用亚乙基封闭的G7—pNP作底物偶联多功能的α—葡萄糖苷酶测定淀粉酶

建立了用亚乙基封闭的Ｇ７－ｐＮＰ（ＥＰＳ）作底物并偶联多功能α－葡萄糖苷酶测定α－淀粉酶（Ａｍｙ）的方法学。ＥＰＳ的稳定性好，工作试剂贮２～８℃可稳定２１天；室温（３０℃）稳定７天。由于多功能的α－葡萄糖苷酶对所有的ＥＰＳ残基（Ｇ１～Ｇ５）有相同的水解力，使色团ｐＮＰ１００％回收，通过计算ｐＮＰ的摩尔消光系数容易做到标准化。本法的延滞相较短（＜９０秒），零级反应时间＞１０分钟，线性范围达２０００Ｕ／Ｌ，分析总ＣＶ＜３．０％，本法（Ｙ）与ＢＭ公司的试剂（Ｘ）比较：ｒ＝０．９９８８，Ｙ＝１．０５４Ｘ－６．６。     

酶偶联法测定红细胞谷胱甘肽过氧化物酶

根据酶偶联催化反应机理，通过二次作图法测定了过氧化物酶（Ｓ＿１）和Ｈ＿２Ｏ＿２（Ｓ＿２））的米氏常数（Ｋｍ），分别为０．０６９ｍｍｏｌ／Ｌ和０．１５ｍｍｏｌ／Ｌ。通过理论计算和实验分析确定Ｓ＿１的最适底物浓度为１．５ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｓ－２最适底物浓度为２．２５ｍｍｏｌ／Ｌ。实验证明指示酶（Ｇ·Ｒ）用量应＞０．２５Ｕ／ｍｌ反应液，本法采用０．３９Ｕ／ｍｌ反应液并就ｐＨ、温度、Ｈｂ干扰等因素对实验影响进行了系统研究，优选了最佳条件。本法批内变异系数为３．８％，批间变异系数为５．２％。     

酶偶联比色法测定血清门冬氨酸氨基转移酶

目的　建立一种酶偶联比色法测定血清门冬氨酸氨基转移酶（ＡＳＴ）的方法。方法　谷氨酸在ＮＡＤ＋存在下，通过谷氨酸脱氢酶脱氢反应生成ａ－酮戊二酸和ＮＡＤＨ，ＮＡＤＨ在心肌黄酶（ＦＡＤ）的作用下，与硝基四氮唑兰（ＮＢＴ）发生氧化还原反应，使ＮＢＴ生成甲　，其颜色的深浅与血清门冬氨酸氨基转移酶活性成正比。结果　该方法的批内精密度为（ＣＶ）３．６％，批间精密度（ＣＶ）为　４．９％，与酶速率法相关良好，ｒ＝　０．９９８，线性范围　０～８５０Ｕ／Ｌ。结论　酶偶联比色法是一种准确简便快速的测定血清ＡＳＴ的方法，适合临床应用。     

稳定单一重氮试剂显色法测定GGT

γ－L-谷氨酰转肽酶（GGT）测定主要有γ-谷氨酰-α-萘胺法与γ－L-谷氨酰对硝基苯胺法两大类。前者应用比较普遍、历史悠久，但是，反应产物α萘胺的显色剂需临用新鲜配制，本文介绍一种改进的稳定单一重氮显色试剂，不必每次配制；简便实用。并调查了参考值及初步临床价值，将GGT列为肝功常规提供条件。1材料和方法1．1试剂1.1.1基质准：取0．15mol／L（1．829／dl）三羟甲基氨基甲烷及0．06mol／L（0．792g／dl）双甘肽溶液90ml。称取γ－L-谷氨酰-α-萘胺（无水，Mr272．3）217mg，加1mol／L盐酸4ml，使溶解后，与Tris-双甘肽溶液…     

尿酶对碘造影剂肾毒性的早期评估

前瞻性观察１６例肾功能正常患者造影前、造影后２４，４８ｈ肾功能动态变化。造影后２４ｈ血尿素氮（ＢＵＮ）、血清肌酐（ＳＣｒ）无显著变化（Ｐ＞０．０５）、尿谷氨酰转肽酶（γ－ＧＴ）、Ｎ－乙酰基－β－Ｄ氨基葡萄糖苷酶（ＮＡＧ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）较造影前显著增高（Ｐ＜０．０１）。造影后４８ｈＢＵＮ，ＳＣｒ显著增高（Ｐ＜０．０ｌ），尿γ－ＧＴ，ＮＡＧ，ＬＤＨ显著恢复（Ｐ＜０．０５）；但仍明显高于造影前，差异有显著性（分别Ｐ＜０．０１，０．０１，０．０５）。提示在肾功能正常患者泛影葡胺对肾小管损害呈一过性，尿γ－ＧＴ是评估碘造影剂肾毒性亚临床期敏感指标     

尿液丙氨酸氨基肽酶连续监测法

建立了用丙氨酸对硝基苯胺（Ａｌａ－ｐＮＡ）为底物测定尿液丙氨酸氢基肽酶（ＡＡＰ）的连续监测法。此酶的最适ｐＨ８．０～８．３（２５℃），Ｋｍ值０．６０ｍｍｏｌ／Ｌ，Ａｌａ－ｐＮＡ的最终浓度６．０ｍｍｏｌ／Ｌ，批内，批间ＣＶ分别为４．２％，线性范围高达４００Ｕ／Ｌ。健康成人（ｎ＝７４）尿ＡＡＰ活性内１．９１～１４．４Ｕ／ｇ．ｃｒ。同时还对其重复性、尿中共存物质的干扰、尿ＡＡＰ的稳定性进行了初步观察。此     

用国产底物GCNA研究血清GGT的动力学

报道用国产P-L谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺（GCNA）作为供体底物，双甘肽作为受体废物研究人血清GGT的动力学特性。用国外文献推荐的常规法分析GGT的最适测定条件。不同温度时的大适pH不同，37℃，30℃，25℃的最适pH分别为7．72，7．90，8．01。GCNA（A）双甘肽（B）的浓度分别为4mmol／L，140mmol／L时GGT活性最高。两底物在不同浓度范围，Km值不同，K在0．61～1．32，K在9．84～15．86。金属离子，螯合剂及表面活性剂在实验所用的浓度下对血清GGT活性无影响。高浓度的甘氨酸、叠氮钠对血清GGT有抑制作用。     

α—淀粉酶直接测定法

该文介绍一种使用２－氯－４－硝基苯－α－麦芽三糖革（ＣＮＰ－Ｇ３）作为底物的直接比色测定α－淀粉酶的和为连续监测法，本法无延迟时间，反应时间仅需１分钟，线性范围可达２０００Ｕ／Ｌ以上，与麦芽七法相比，ｒ＝０．９９９，Ｙ＝１．０５Ｘ－１６．１９（ｎ＝３７），批内变异为０．９１－１．１７％，本文还提出了相应的固定时间法，用于手工操作。     

地高辛间接酶标方法的研究

由于辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）上可用于键合的氨基数量极少，因而用ＨＲＰ直接标记小分子地高辛（ＤＩＧ），标记率很低，但当其用人血清白蛋白（ＨＳＡ）修饰后，再间接标记ＤＩＧ，可使酶结合物的产率和免疫反就生分别上８．７％和９．３％提高至８４．２％和９２．０％。酶结合物中的ＤＩＧ与ＨＲＰ的摩尔比率也由约０．５提高至约３．６。这种由间接标记得到的酶结合物可很好地用于ＤＩＧ的ＥＬＩＳＡ测定。     

血清谷胱甘肽过氧化物酶偶联连续监测法

应用偶联连续监测法测定血清谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ），特异性强，灵敏度高，快速、准确。本法批内ＣＶ为３．９％，批间ＣＶ４．９％。在最适条件下，反应的吸光度差（ΔＡ）４ｍｉｍ之内呈线性。胆红质高于正常１０倍不影响结果，避免溶血。测定２３９例年龄５８～８２岁健康中老年人，参考值为７．５５±１．４３μｋａｔａｌ／Ｌ。     

γ-GTⅡ单克隆抗体在肝癌诊断中的应用

目的 探讨γ－谷氨酰转换酶同工酶Ⅱ（γ－ＧＴⅡ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）对肝癌的诊断。方法 采用ＥＬＩＳＡ法、ＡＦＰ放射免疫法对１５４例患者血清检测。结果 ＥＬＩＳＡ法检测患者血清γ－ＧＴⅡ含量,原发性肝癌、转移性肝癌阳性率分别为９３％、８９％,其他肿瘤均为阴性;ＡＦＰ放射免疫法检测,原发性肝癌、转移性肝癌阳性率分别为８０．４％、５７．０％,其他肿瘤阳性率为０％～１０％,病毒性肝炎、肝硬化阳性率为８     

2-氯-4-硝基苯-α-半乳糖-麦芽糖苷作底物直接测定α-淀粉酶

用新底物２－氯－４－硝基苯α－半乳糖－麦芽糖苷直接测定α－淀粉酶，不需辅助酶，延滞时间延短，线性范围宽，试剂稳定性好，不使用ＫＳＣＮ，ＮａＮ３等激活剂，不受内源性葡萄糖苷酶的干扰，与ＥＰＳ法对比相关良好：Ｙ＝１．２７Ｘ＋０．５０，ｒ＝０．９９９０。