肺癌中FHIT基因缺失和p53蛋白表达的研究

目的：探讨肺癌组织中FHIT（fragile histidine triadgene）基因缺失和p53蛋白表达及其与临床病理因素的关系。方法：采用逆转录-巢式聚合酶链反应方法及免疫组织化学ABC法分别检测42例肺癌组织中FHIT基因缺失和p53蛋白表达。结果；肺癌组织中FHIT基因缺失和p53蛋白表达阳性率分别为66．7％（28／42）和76．2％（32／42）．FHIT基因缺失肺癌的p53蛋白阳性率明显高于FHIT基因正常表达的肺癌（P〈0．01）。FHIT基因缺失与肺癌的淋巴结转移有关，p53蛋白表达与临床分期、淋巴结转移密切相关。结论：FHIT基因缺失和p53蛋白异常表达与肺癌发生、发展密切相关，二者相互促进．呈明显正相关。     

cyclinD1及p21^WAF1表达与大肠癌关系研究

探讨CyclinD1及p^21WAFI表达与大肠癌发生发展的关系。方法：用免疫组化SP法对40例大癌标本进行cyclinD1和p21^WAFI蛋白表达的检测,并与同期28例大肠腺瘤124例正常大肠粘膜作对比。结果：cyclinD1和p21^WAFI的阳性表达率在大肠腺瘤（92．9％）和大肠癌（67．5％）均显著高于正常大肠粘膜（35．7％）（P＜0．01,P＜0．05）。 DyclinD1的表达与大肠癌的分化程度及淋巴结转移无关。p21^WAFI的阳性表达率在大肠癌（37．5％）。cyclinD1的表达与大肠癌的分化程度及淋巴结转移无关。p21^WAFI的阳性表达率在大肠癌（37．5％）显著低于正常大肠粘膜（92．8％）（P＜0．01）。P21^WAFI表达与大肠癌的分化程度及淋巴转移有关。结论：cyclinD1和p^21WAFI表达异常在大肠癌的发生、发展中是一个普遍事件。     

胃球样异型增生细胞周期素和p21^WAF1、p53蛋白表达的组织芯片观察

目的：使用组织芯片探讨cyclin A、cyclin D1．cyclin E和p21^WAF1、p53蛋白在胃球样异型增生中表达的意义。方法：采用微波修复免疫组织化学S-P法和组织芯片技术，检测cyclinA、cyclinD1、cyclinE和p21^WAF1、p53蛋白在41例正常胃黏膜、86例低级别异型增生胃黏膜、21例高级别异型增生胃黏膜和124例胃癌组织中的表达，并进行比较分析。结果：cyclinA、cyclinD1、cyclinE和p53蛋白的表达由正常胃黏膜、轻度球样异型增生、重度球样异型增生到癌阳性率逐渐增高，cyclinA、cyclinD1和p53在重度球样异型增生与胃癌中的表达无显著差异（X^2=3．08．X^2=2．18．X^2=0．80，P〉0．05），与正常胃黏膜有显著差异（X^2=12．26，X^2=11．29，X^2=19．89，P〈0．01）。重度球样异型增生中p21^WAF1蛋白的表达比正常胃黏膜为低，差异有显著性（X^2=5．32，P〈0．05），与胃癌比较差异无显著性（X^2=1．39，P〉0．05）。cyclinD1与p21^WAF1的表达呈负相关（rs=-0．5326，P〈0．01）。结论：重度胃球样异型增生cyclinA、cyclinDl、cyclinE呈高表达，p21^WAF1蛋白失表达，显示与胃癌的发生关系密切。     

CD44s和CD44v6在大肠病变中表达及其预后的意义

目的：明确CD44s和CD44v6在大肠病变中表达的临床意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测85例大肠癌和28例大肠腺瘤及36例癌旁正常肠黏膜中CD44s和CD44v6蛋白表达与分布和临床意义。结果：CD44s和CD44v6在大肠腺癌中表达率分别为67．1％和92．9％，在伴有不典型增生的大肠腺瘤组织中分别为66．7％和88．9％，两者与癌旁正常肠黏膜组织相比，有显著差异（P〈0．01）。CD44s和CD44v6蛋白阳性过度表达与大肠癌的临床Duke’s分期密切相关（P〈0．01），5a生存期不足5a组CD44v6阳性率明显增高（P〈0．05）但CD44s和CD44v6蛋白阳性表达均与大肠腺癌分化程度、有无淋巴转移及远处转移不相关（P〈0．01）。结论：CD44s和CD44v6蛋白阳性表达对大肠癌早期诊断有一定意义，尤以CD44v6意义更大。而且，CD44v6对大肠癌癌患者估计预后有一定意义。     

Runx3基因甲基化与大肠癌发生和转移的关系

目的 探讨Runx3基因启动子甲基化与大肠癌发生发展过程的关系。方法 采用蛋白印迹技术（Western-Blot）检测30例大肠癌组织及肿瘤周围正常黏膜组织中Runx3mRNA的表达，同时用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测Runx3基因启动子甲基化情况。结果 30例大肠癌组织标本中Runx3基因的表达（6409．1042±298．2028）较肿瘤周围正常组织中表达明显下调（34565．3921±1108．2163），差异有统计学意义（P〈0．01）。正常黏膜组织中未发现有Runx3基因启动子的甲基化，30例大肠癌组织中有16例检测到Runx3基因启动子的甲基化，大肠癌组织Runx3基因启动子甲基化率显著增高（P〈0．05）。大肠癌标本中Runx3蛋白的表达与其病理临床特征密切相关，在低分化和有淋巴结转移大肠癌组织标本中Runx3蛋白的表达显著下调（P〈0．05）。结论 Runx3基因启动子甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一，并且与大肠癌的发生发展密切相关。     

抑癌基因PTEN和血管内皮生长因子在大肠癌中的表达及相关性研究

目的探讨抑癌基因PTEN和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白在大肠癌中表达的意义。方法采用免疫组化sP法检测48例大肠癌中PTEN和VEGF蛋白的表达，并分析其与临床和病理特点的关系。结果大肠癌中PTEN蛋白表达阳性率为45．8％（22／48），显著低于正常大肠黏膜组织的阳性率（P〈0．01）；VEGF蛋白表达阳性率为72．9％（35／48），显著高于正常大肠黏膜组织的阳性率（P〈0．01）；PTEN和VEGF蛋白表达呈负相关（P〈0．01）；PTEN蛋白低表达和VEGF蛋白高表达与大肠癌Dukes分期、浆膜浸润、淋巴结转移有关（均P〈0．01），而与年龄和组织学类型无关（P〉0．05）。结论PTEN和VEGF蛋白表达与大肠癌临床病理特征和生物学行为有密切关系，联合检测PTEN和VEGF蛋白的表达，对大肠癌的恶性程度及预后判断具有重要的临床意义。     

p16和bcl-2基因蛋白在大肠癌的表达及临床意义

目的探讨p16、bcl-2基因在大肠癌发生、发展中的作用以及临床中的意义。方法运用免疫组化技术检测大肠癌及腺瘤中p16、bcl-2基因蛋白的表达。结果p16基因蛋白阳性表达率在大肠癌及腺瘤中分别为35．90％、77．27％（P〈0．01）；bcl-2基因蛋白阳性表达率在大肠癌及腺瘤中分别为61．53％、72．72％（P〉0．05）。p16与bcl-2基因蛋白表达在大肠癌中有相关关系，并与肿瘤分化程度、浆膜侵润、淋巴结转移有明显相关性，与年龄、性别、Dukes分期无相关性。结论p16基因的失活与bcl-2基因的过表达在大肠癌的发生、发展中起重要作用；大肠腺瘤是一种重要的癌前病变；对大肠癌及腺瘤进行p16、bcl-2基因检测有助于大肠癌的早期诊断及预后评估。     

Survivin和p53蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

【目的】探讨Survivin、p53蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及与临床分期、病理类型、组织学类型的关系。【方法】应用免疫组织化学染色SABC法及半定量分析的方法，检测30例正常卵巢组织标本和62例恶性卵巢肿瘤中Survivin和p53蛋白的表达，分析与卵巢癌组织学分类、临床分期、病理类型的关系。【结果】在卵巢癌组织中p53蛋白阳性表达率为54．84％（34／62），与正常对照组比较有显著差异（P〈O．01）；在卵巢癌组织Survivin蛋白阳性表达率为43．55％（27／62），与正常对照组比较有显著差异（P〈0．05）；p53和Survivin蛋白的表达与上皮性卵巢癌组织学分型无关（P〉0．05），与分化程度、临床分期有关（P〈0．05）；上皮性卵巢癌组织中Survivin蛋白的表达与p53蛋白表达呈正相关（P〈O．05）。【结论】①卵巢癌Survivin和p53蛋白表达与卵巢癌临床分期、病理分级存在一定内在联系；②Survivin和p53蛋白是卵巢癌临床重要生物学指标，参与卵巢癌的发生和发展，检测p53和Survivin蛋白表达对判断卵巢癌的恶性程度及预测预后有重要参考价值。     

胃间质瘤相关基因蛋白及细胞增殖与预后的关系

目的 探讨胃间质瘤（GST）中p16、p53、c-myc基因蛋白及增殖细胞核抗原（PCNA）与预后的关系。方法 应用免疫组S－P方法对71例（GST组织进行p16、p53、c-myc基因蛋白和PCNA检测，并将PCNA的不同表达进行细胞增殖指数（PI）分级。结果 71例GST中p16、p53、c-myc基因蛋白阳性表达率分别为：恶性34.8%、95．7％、100％；交界性45．5％、77．3％、90．9％；良性65．4％、73．1％、65．4％。p16蛋白表达PI分级I、Ⅱ级明显高于Ⅲ、Ⅳ级（P＜0．01），存活期＜3年的明显低于＞3年的（P＜0．01）。p16蛋白随肿瘤分化程度和生存率降低，阳性表达率也逐渐下降；而p53、c-myc蛋白及PI分级则相反。p16与p53、c-myc蛋白及PCNA的PI分级有显著负相关性（P＜0．05）。结论 p16、p53、c-myc基因蛋白和PCNA的PI分级有助于判断GST的恶性程度和预测预后。     

PTEN、VEGF和MVD在大肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨第10染色体缺失与张力蛋白同源的磷酸酶基因（PTEN）、微血管密度（MVD）与血管内皮生长因子（VEGF）表达在大肠癌中的变化，以及与大肠癌临床病理的关系。方法采用免疫组织化学SP方法检测76例大肠癌组织中PTEN、VEGF表达，用CD34染色标记血管内皮细胞，对癌组织中MVD进行计数，分析各指标与大肠癌临床病理．学特征的关系。结果大肠癌组织中PTEN蛋白表达阳性率为44．74％（34／76），显著低于正常大肠黏膜组织的阳性率（P〈0．01）；VEGF阳性表达率为75．00％（57／76），MVD为34±7．8，显著高于正常大肠黏膜组织的阳性率（P〈0．01）；在肿瘤坏死区周围或肿瘤浸润边缘VEGF表达较强，MVD较密集。PTEN蛋白低表达和VEGF蛋白高表达及MVD与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、浆膜浸润、远处转移及TNM分期密切相关（均P〈0．01），而与肿瘤大小、组织病理学类型无关（均P〉0．05）。VEGF阳性表达组MVD显著高于阴性表达组（P〈0．01）。相关分析表明，PTEN和VEGF蛋白表达呈负相关（P〈0．05），MVD与VEGF呈正相关（P〈0．05）。结论PTEN和VEGF蛋白表达与大肠癌临床病理特征和生物学行为有密切关系，PTEN、VEGF表达和MVD与结直肠癌侵袭转移和预后有关，联合检测PTEN和VEGF蛋白的表达，可用于评估大肠癌侵袭转移能力，对大肠癌的预后判断具有一定的临床意义。     

血管紧张素转换酶基因与中国人群冠心病、高血压病及糖尿病的关系

目的：研究血管紧张素转换酶(ACE)基因与中国人群冠心病(CHD)、高血压病(EH)及2型糖尿病(T2DM)的关系。方法：250例呈不同组合的EH、T2DM以及CHD患者及90例正常对照用改良的聚合酶链反应(PCR)方法检测ACE基因型，比较基因型及等位基因频率分布。结果：①无合并CHD的T2DM及EH组ACE基因型及等位基因频率与正常对照无显著差异；②CHD组无论是否合并EH及／或T2DM，Ⅲ基因型及Ⅰ等位基因频率均显著低于正常对照，而DD基因型及D等位基因频率均显著高于正常对照；③T2DM合并CHD组及EH合并CHD组中Ⅱ基因型及Ⅰ等位基因频率均显著低于正常对照，而DD基因型及D等位基因频率均显著高于正常对照。结论：ACE基因多态性与中国人群CHD相关。这种关联亦见于EH或T2DM合并CHD中，但ACE基因仅是CHD发病的遗传学基础，而与是否合并EH及／或T2DM无关。     

冠心病及脑梗塞患者载脂蛋白E基因多态性研究

目的 :探讨载脂蛋白 E(Apo E)基因多态性与冠心病 (CHD)及脑梗塞 (ACI)的关系。方法 :以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术 (PCR- RFL P)结合银染色方法检测了 6 3例 CHD、4 0例 ACI患者和 90例无血缘关系的健康汉族人群 Apo E基因型。结果 :CHD组和 ACI组的 ε4 等位基因频率均明显高于对照组 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1) ,而 ε3等位基因频率均明显低于对照组 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1) ,ε4 和 ε3等位基因频率在 CHD组和 ACI组间无差别 (P>0 .0 5 )。结论 :ε4 等位基因是冠心病和脑梗塞的遗传易患因子之一 ,ε3等位基因是冠心病和脑梗塞的保护因子。     

潮州地区乙肝病毒分型和耐药突变基因检测的应用

目的 探讨潮州地区乙型肝炎病毒(HBV)基因分型和耐药基因突变检测的临床意义.方法 采用PCR-反向点杂交(RDB)法对慢性乙肝(Chronic hepatitis B,CHB)患者血清进行基因分型和耐药突变检测,拉米夫定(Lamivudine)耐药患者改用阿德福韦酯(Adefovir)治疗,1 a后测定其HBV DNA和谷丙转氨酶(ALT)含量.结果 HBV B亚型占92.31％(120/130),HBV C亚型占5.38％(7/130),B+D基因型占3.21％(3/130).检测出24例均为HBV B亚型的耐药突变基因,耐药突变率18.46％(24/130).HBV B亚型与HBVC亚型的HBV DNA和ALT含量比较差异有统计学意义(P＜0.05),阿德福韦酯治疗1 a前后的HBV DNA和ALT含量差异有统计学意义(P＜0.05).结论 潮州地区HBV基因型以B亚型为主,耐药突变基因型是影响疾病进程的重要因素.     

郑州地区不同人群HCV感染及HCV基因型研究

目的 :了解郑州地区不同人群 HCV感染情况及基因分型。方法 :应用酶联免疫检测技术 (EL ISA)检测郑州地区 2 6 6 5例不同人群血清的抗 - HCV情况 ,再对 6 4例抗 - HCV阳性血清用逆转录 -套式多聚酶链反应检测 HCV-RNA。然后对其中 5 3例 HCV- RNA阳性者用限制性片段长度多态性分析法进行基因分型。结果 :抗 - HCV阳性在郑州地区总人口中的发生率是 0 .5 6 %～ 0 .78% ,原发性肝癌患者抗 - HCV的发生率明显高于其他各组。HCV基因型分布HCV- ,HCV- 和 HCV- / ,分别为 90 .5 6 % ,5 .6 6 %和 1.89%。结论 :原发性肝癌患者其 HCV的感染危险较高 ;HCV- 型是本地区的优势株 ;HCV各基因型在不同人口中的分布没有明显差异。(P>0 .0 5 ) HCV基因型可能与丙型肝炎病情轻重有关。     

血小板无力症1例报告并文献复习

目的：提高对血小板无力症的认识。方法：对1例血小板无力症进行分析，并复习国内外相关文献。结果：该病好发于青少年，临床表现主要为自幼反复出血，明确诊断主要依靠实验室检查，治疗以输血和（或）输血小板对症支持治疗为主。结论：血小板无力症是GPⅡb／Ⅲa表达量减少或结构异常引起的一种罕见的遗传性出血性疾病。     

LCN2基因启动子区荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定

目的 为进一步研究LCN2(Lipocalin 2)基因在急性肾损伤中的作用,克隆LCN2的编码序列,构建含LCN2基因的荧光素酶报告基因载体,并在肾小管上皮细胞系HK-2 中表达.方法 以HK-2细胞系提取的RNA为模板进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增产物用HindⅢ和SmaI双酶切后克隆到双荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic中,用非脂质体法将构建质粒PGL3-Basic /LCN2导入HK-2 中,氨苄青霉素选择培养,经双荧光素酶鉴定其表达.结果 PCR和测序结果表明扩增的LCN2启动子序列正确,酶切检测证实重组荧光素酶报告基因载体构建成功.转染PGL3-Basic/LCN2 质粒的HK-2细胞荧光素酶活性比转染空载体的明显增加(P<0.000 1).结论 成功克隆了LCN2的编码序列,构建了其荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic/LCN2,有助于进一步研究LCN2基因在急性肾损伤中的作用机制.     

46,XX男性综合征细胞和分子遗传学分析

目的 分析46,XX男性综合征患者的细胞及分子遗传学特征,探讨性分化异常的机制.方法 采用G显带、多重PCR技术对1例男性表型的46,XX男性综合征患者进行染色体核型分析、SRY基因检测、Y染色体AZF基因检测.结果 患者染色体核型为46,XX,SRY基因存在,Y染色体AZF基因检测示AZFa、AZFb、AZFc、AZFd四个区域全部缺失.结论 SRY基因是决定性别和分化的重要基因,通过染色体核型分析和SRY基因检测有利于明确性反转综合征的临床诊断.     

乙型肝炎病毒基因型和亚型与病毒感染相关性研究

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）基因型和亚型与慢性乙型肝炎（CHB）发病的关系。方法对454例CHB患者,定量PCR方法检测HBV DNA为阳性,再以型特异性引物PCR法检测HBV基因型及其亚型。结果 （1）454例HBV DNA阳性的CHB患者其中HBV B基因型68例（14.9%）;其中Ba亚型35例,Bj亚型3例,未分B亚型30例,C基因型338例（74.5%）,C基因型中C1亚型3例,C2亚型285例,未分型50例。B＋C混合基因型48例（10.6%）,均为Ba＋C2基因型;（2）B与C基因型比较,B基因型中HBeAg阴性的患者多于HBeAg阳性的患者（χ^2=17.69,P〈0.001）。CHB患者中C基因型的HBeAg阳性率明显高于B基因型（χ^2=17.025,P=0.000）。（3）定量PCR检测B基因型HBV水平低于其他基因型;C基因型HBV复制高于其他基因型。结论我国CHB患者中HBV基因型以C基因型为主;HBV基因亚型中Ba与C2亚型是主要的亚型,不同的HBV亚型间病毒载量差异有统计学意义;HBeAg阳性或HBeAg阴性的CHB患者中HBV基因型分布不同;HBV基因型和亚型的临床意义值得动态观察。     

系统性红斑狼疮患者B淋巴细胞刺激因子及其受体表达水平的研究

目的：研究系统性红斑狼疮（SLE）患者B淋巴细胞刺激因子（BLyS）及其受体的表达水平，并探讨其与系统性红斑狼疮疾病活动指数（SLEDAI）的关系。方法：检测缓解组（14例）和活动组SLE患者组（23例）血清BLyS及其受体的表达水平，以健康志愿者（30例）作为对照。结果：SLE患者BLyS、穿膜蛋白活化物（TACI）和B细胞活化因子受体（BAFF—R）mRNA的表达明显高于正常人（P〈0．01），活动期患者的表达高于缓解期（P〈0．01）。结论：SLE患者BLyS、TACI和BAFF—R mRNA表达含量升高，提示BLyS、TACI和BAFF—R可能与SLE的发病有关。