缺血预适应减轻心肌缺血-再灌注损伤的机制研究

目的:探讨缺血预适应在预防或减轻心肌细胞损伤和心肌细胞凋亡中的作用。方法:采用新西兰兔制备缺血预适应(IP)、缺血-再灌注损伤(RI)、持续缺血(CI)和正常对照组(control)4种模型。模型制备后采集血标本,以及心脏病变部位心肌标本,并常规组织学处理、石蜡包埋后切片。结果:①CI组心肌梗死面积最大,其次为RI组,均明显高于IP组(P<0.01);②RI组和CI组的血清各项心肌酶含量均明显高于control组和IP组(P<0.01),而后两组之间则无显著性差异(P>0.05);③RI组和CI组的血浆SOD活性均明显降低,尤其以RI组最为显著,与IP组和control组相比较(P<0.01);而在control组和IP组之间则无显著性差异(P>0.05);RI组的血清丙二醛含量明显高于其他各组(P<0.01);④缺血预适应组虽然也有一定的心肌细胞凋亡率,但较再灌注损伤组和持续缺血组则明显为低(P<0.001)。⑤从各组心肌梗死面积与细胞凋亡发生率的相关分析中,可见心肌凋亡细胞的数量与心肌梗死面积的大小之间有明显的正相关(RI、IP和CI组的γ值分别为0.92,0.94和0.87,P<0.01)。结论:在心肌缺血缺氧早期,心肌梗死面积的大小与心肌细胞凋亡数量的多少有关;缺血预适应处理能减轻缺血-再灌注和持续缺血引起的心肌损伤,减少心肌梗死面积;同时能明显减少这2种情况所诱导的心肌细胞凋亡的发生率。     

缬沙坦对缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达的影响

目的利用大鼠建立心肌缺血再灌注模型,在检测缺血再灌注细胞凋亡变化的同时,着重观察血管紧张素Ⅱ受体（AngⅡ？R）拮抗剂缬沙坦对缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达的影响,了解AngⅡ？R拮抗剂在心肌缺血再灌注损伤中的作用及其机制,为AngⅡ？R拮抗剂治疗缺血性心脏病提供理论依据。方法 70只Wister大鼠随机分为3组,1组：假手术组（10只）;2组：缺血再灌注组（30只）;3组：缬沙坦组（30只）。取各组不同时间心肌组织切片,分别应用常规HE染色光镜观察心肌细胞的病理形态变化,免疫组化检测诱导细胞凋亡基因Bax、Fas及抑制细胞凋亡基因bcl-2的表达。结果与假手术组相比,心肌缺血再灌注组Bax和Fas基因蛋白表达明显增加（P〈0.01）,bcl-2蛋白表达减低（P〈0.01）。且随着心肌缺血再灌注时间的延长Bax和Fas基因蛋白表达更加明显。3组经缬沙坦干预后Bax和Fas基因蛋白表达显著减低,而bcl-2蛋白表达增加。结论心肌缺血再灌注时促进心肌细胞凋亡,相关基因蛋白表达增加。AngⅡ？R拮抗剂能够抑制缺血再灌注时心肌细胞凋亡,其机制与逆转Bax、Fas及bcl-2基因蛋白的表达有关。     

川芎嗪对缺血再灌注后心肌细胞凋亡的影响

目的观察缺血再灌注后大鼠心肌细胞凋亡的特点及川芎嗪对其的影响。方法结扎冠状动脉左前降支45 min,再灌注180 min复制大鼠心肌缺血再灌注(IR)模型,川芎嗪保护组(IR+TMP)在结扎冠脉前30 min腹腔注射川芎嗪(20 mg/kg)。以TUNEL法检测细胞凋亡率,免疫组化法分析Fas、FasL、Capase-8及Capase-3蛋白表达,荧光分析法测定Capase-3活性。结果缺血再灌注组(IR)心肌细胞凋亡指数23.47±3.88较对照组0.41±0.03有显著性升高(P<0.01),Fas、FasL、Capase-8、Capase-3蛋白及Capase-3活性均显著高于对照组(P均<0.05)。川芎嗪保护组(IR+TMP)心肌细胞凋亡指数1.81±0.25较IR组23.47±3.882有显著性降低(P<0.05),Fas、FasL、Capase-8、Capase-3蛋白及Capase-3活性均显著性低于IR组(P均<0.01)。结论缺血再灌注后心肌细胞凋亡数有明显的增多;川芎嗪对缺血再灌注后心肌细胞凋亡有较好的拮抗作用,其机制可能与降低Fas死亡受体通路的信号转导有关。     

氯沙坦对血管紧张素II所致血管平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因的影响

目的:探讨氯沙坦(LT)对血管紧张素II(AngII)对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡和凋亡调控基因的影响。方法:采用流式细胞技术测定在AngII不同浓度和不同作用时间下VSMC凋亡率及凋亡调控基因Fas、bcl-2表达的变化和氯沙坦对其的影响。结果:①随着AngII作用浓度的增加,VSMC凋亡率及Fas,bcl-2基因的表达量均增加(2.35±0.56vs19.71±3.03;Fas:1.36±0.32vs14.67±1.39;bcl-2:2.35±0.51vs16.65±1.42,P<0.01);②LT可促进VSMC的凋亡,促进Fas基因的表达,但可抑制bcl-2基因的表达(19.71±3.03vs27.65±2.11,Fas:14.67±1.39vs20.14±1.41;bcl-2:16.65±1.42vs7.17±1.38,P<0.05);③随着AngII作用时间的增加,VSMC凋亡率及Fas、bcl-2基因的表达均增加(1.43±0.21vs18.56±3.68,Fas:1.21±0.32vs8.62±1.54,bcl-2:2.53±0.71vs15.41±1.63,P<0.01);④随着LT作用时间的增加,VSMC凋亡率及Fas基因的表达均增加,对bcl-2基因的表达则有抑制作用(18.56±3.68vs31.25±2.89,Fas:8.62±1.54vs17.46±1.47;bcl-2:15.41±1.63vs8.45±1.51,P<0.05)。结论:AngII具有促进VSMC凋亡和凋亡调控基因表达作用;氯沙坦可调节AngII对血管平滑肌细胞的作用。     

心先安对缺血预处理心肌保护作用的影响

目的探讨缺血预处理对缺血-再灌注心肌的保护作用及心先安干预的影响。方法32只雄性新西兰大耳白兔,在冠状动脉左室支的上3/4~4/5处穿以丝线,造成心肌缺血再灌注(MIR),随机分为四组:MIR组、心先安+MIR组(MCA+MIR)、缺血预处理IP+MIR组(IP+MIR)、心先安+IP+MIR组(MCA+IP+MIR)。实验结束后测定血浆中内皮素(ET)、心钠素(ANP)和血清肌酸肌酶(CK)的含量,分析心肌梗死范围。结果(1)血浆ET浓度,MIR组和MCA+MIR组分别为67.15±5.10 pg.ml-1和58.44±3.47pg.ml-1(P<0.01);IP+MIR组和MCA+IP+MIR组分别为58.94±3.16 pg.ml-1和53.14±3.24 pg.ml-1(P<0.01)。(2)血浆ANP浓度,MIR组和MCA+MIR组分别为910.09±112.29pg.ml-1和955.33±106.06 pg.ml-1(P>0.05);IP+MIR组和MCA+IP+MIR组分别为1356.18±93.41 pg.ml-1和1402.43±138.78 pg.ml-1(P>0.05),但较MIR组和MCA+MIR组明显增加(P<0.01)。(3)血清CK浓度,MCA+MIR组和IP+MIR的分别为177.25±31.04 mmol.L-1和169.25±31.37 mmol.L-1(P>0.05),明显低于MIR组(554.00±148.62 mmol.L-1)(P<0.01);MCA+IP+MIR组为105.00±13.18 mmol.L-1,明显低于其他组(P<0.01);(4)心肌梗塞范围,MCA+MIR组和IP+MIR组分别为21.13±1.78%和21.58±2.22%,(P<0.05),明显低MIR组32.85±3.18%(P<0.01);MCA+IP+MIR组为13.69±1.01%,较其他组明显减少(P<0.01)。结论(1)IP可使MIR过程中ET、CK浓度和ANP浓度增高,并减少MIR所致的心肌坏死。(2)MCA可降低MIR血浆中ET和CK浓度,并减少MIR所致的心肌坏死。(3)MCA能加强IP降低MIR对血清CK浓度的作用。     

缺血预处理对抑郁大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及Fas、Fas-L表达的影响

目的:探讨缺血预处理(IPC)对抑郁大鼠缺血/再灌注(I/R)心肌细胞凋亡及凋亡基因Fas、Fas-L表达的影响。方法:SD大鼠48只,随机分为非抑郁假手术组(Hsham),抑郁假手术组(Dsham),抑郁缺血/再灌注组(DI/R)和抑郁缺血预处理组(IPC+DI/R);采用原位末端标记法检测心肌细胞凋亡,免疫组化方法和逆转录-聚合酶链反应检测凋亡基因Fas、Fas-L的表达。结果:(1)与Hsham组、Dsham组比较,DI/R组、IPC+DI/R组的心肌细胞凋亡指数显著增加(P<0.001),Hsham与Dsham两组间比较无显著差异;与DI/R组比较,IPC+DI/R组的心肌细胞凋亡指数显著减少(P<0.001);(2)与Hsham组、Dsham组比较,DI/R组、IPC+DI/R组的Fas、Fas-L的mR-NA和蛋白表达均显著增加(P<0.001),Hsham与Dsham两组间比较无显著差异;与DI/R组比较,IPC+DI/R组Fas、Fas-L的mRNA和蛋白表达均显著减少(P<0.001)。结论:IPC能显著减少抑郁大鼠的I/R心肌细胞凋亡,其机制可能与下调Fas、Fas-L基因的表达有关。     

参附注射液对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨参附注射液对大鼠缺血再灌注心肌细胞Bax、Bcl2及Fas蛋白表达的影响及它们与心肌细胞凋亡的内在联系。方法:健康SD大鼠36只随机分为3组,空白对照组(S组)、缺血再灌注+生理盐水组(I/R组)、缺血再灌注+参附注射液组(SF组),每组12只。采用钳闭左冠状动脉前降支制备心肌缺血再灌注模型。免疫组化检测Bax、Bcl2及Fas蛋白的表达,每组选24个视野分别测量光密度值(OD值)。TUNEL法检测凋亡心肌细胞并计算凋亡指数。结果:I/R组BaxOD值明显高于S组(P<0.01),SF组BaxOD值明显低于I/R组(P<0.01),且低于S组(P<0.05)。I/R组Bcl2OD值高于S组(P<0.05),且SF组Bcl2OD值高于S组(P<0.01),但I/R组与SF组比较差异无显著性。I/R组FasOD值明显高于S组(P<0.01),且明显高于SF组(P<0.01)。I/R组细胞凋亡指数明显高于S组和SF组(P<0.01),而SF组高于S组(P<0.05)。结论:参附注射液增加心肌Bcl2蛋白的表达,降低Bax及Fas蛋白的表达,抑制心肌细胞凋亡,保护缺血再灌注心肌。     

缺血后处理对缺血再灌注大鼠心肌梗死和心肌细胞凋亡的作用

目的观察在体情况下缺血后处理(IPC)对兔心肌梗死范围及缺血心肌细胞凋亡的影响,并与缺血预处理(IP)心脏保护作用比较. 方法采用兔心肌缺血/再灌注模型,在缺血后、再灌注前多次短暂再灌/停灌处理. 以Even's blue-TTC法检测心肌梗死范围,TUNEL方法检测缺血心肌细胞凋亡. 结果与对照组相比,缺血后处理明显减小心肌梗死范围(12.5±5.4% vs对照组26.7±6.7%, P<0.01),缺血区心肌凋亡指数明显下降(14.6±7.4 vs对照组30.4±12.3, P<0.05). 结论对于已缺血心肌,再灌前予多次短暂复灌、停灌处理具有与IP类似缩小心梗范围作用,IPC对缺血心肌的保护效应可能与其抑制缺血心肌细胞凋亡有关.     

氯沙坦对血管紧张素Ⅱ所致血管平滑肌细胞凋亡及凋亡调控基因的影响

目的探讨氯沙坦(LT)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡和凋亡调控基因的影响.方法采用流式细胞技术测定在AngⅡ不同浓度和不同作用时间下VSMC凋亡率及凋亡调控基因Fas、bcl-2表达的变化和氯沙坦对其的影响.结果①随着AngⅡ作用浓度的增加,VSMC凋亡率及Fas,bcl-2基因的表达量均增加(2.35±0.56 vs 19.71±3.03;Fas1.36±0.32 vs 14.67±1.39;bcl-22.35±0.51vs 16.65±1.42,P<0.01);②LT可促进VSMC的凋亡,促进Fas基因的表达,但可抑制bcl-2基因的表达(19.71±3.03 vs 27.65±2.11,Fas14.67±1.39 vs 20.14±1.41;bcl-216.65±1.42 vs 7.17±1.38,P<0.05);③随着AngⅡ作用时间的增加,VSMC凋亡率及Fas、bcl-2基因的表达均增加(1.43±0.21 vs 18.56±3.68,Fas1.21±0.32 vs 8.62±1.54,bcl-22.53±0.71 vs 15.41±1.63,P<0.01);④随着LT作用时间的增加,VSMC凋亡率及Fas基因的表达均增加,对bcl-2基因的表达则有抑制作用(18.56±3.68 vs 31.25±2.89,Fas8.62±1.54vs 17.46±1.47;bcl-215.41±1.63 vs 8.45±1.51,P<0.05).结论AngⅡ具有促进VSMC凋亡和凋亡调控基因表达作用;氯沙坦可调节AngⅡ对血管平滑肌细胞的作用.     

bcl—2和Fas／Apo—1基因在急性白血病细胞中的表达及其意义的探讨

目的研究bcl-2和Fas/Apo-1基因在急性白血病(AL)细胞中表达及其与AL的分型、临床特征、疗效及预后因素的关系.方法采用免疫组化SP法检测54例初治AL骨髓细胞的bcl-2和Fas/Apo-1基因蛋白的表达情况.结果AL骨髓细胞中bcl-2基因的表达显著高于正常对照组(P＜0.05),而Fas/Apo-1基因的表达低于正常对照组(P＜0.05).bcl-2和Fas/Apo-1基因表达在急性髓系白血病(AML)与急性淋巴细胞白血病(ALL)无显著差异;在AML的亚型中,bcl-2在M4及M5中的表达高于M1、M2和M3(P＜0.05);而Fas/Apo-1的表达在各亚型中无显著性差异.bcl-2的表达与初诊时的白细胞数呈正相关(r=0.44,P＜0.05),与疗效呈负相关(r=-0.40,P＜0.05);急性淋巴细胞白血病中Fas/Apo-1的表达与疗效呈正相关(r=0.34,P＜0.05),与骨髓原始细胞数呈负相关(r=-0.71 P＜0.05).结论bcl-2和Fas/Apo-1基因的紊乱是AL形成与发展的原因之一,且与AL的某些临床特征、疗效及预后因素密切相关.     

Study on apoptosis and expression of P53, Bcl-2, bax in cardiac myocytys of congestive heart failure induced by ventricular pacing

A characteristic feature of heart failure is theprogressive worsening of ventricular function overmonths or years despite the absence of clinically ap-parent intercurrent advance events.The mechanismresponsible for this hemodynamic deterioration arenot known.Recently,study of electrograph showsloss of myocytes exist in failure heart of human anddogs[1] .Another study revealed thatlossof myocyteswas thoughtto be apoptotic[2— 5] .In this study,we used Td T- mediatedbi-otinylated- d UTP nick e…     

缺血预处理对猪肺缺血再灌注性损伤的保护机制

目的：探讨缺血预处理（IP）对猪肺缺血再灌注性损伤的保护机制。方法：将12只猪随机均分为对照组（C组）和实验组（IP组）,测定肺静脉血中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的量以反映IP对肺脂质过氧化的影响,并在光镜下检测肺泡内白细胞数目;用免疫组织化学法和RT-PCR法检测ICAM-1的表达,以探讨缺血预处理对肺缺血再灌注性损伤的保护机制。结果：IP组灌注后MDA明显低于C组,SOD明显高于C组（均P＜0.01）。镜下观察发现IP组肺损伤程度较轻。与C组相比,IP组ICAM-1无论在蛋白质水平还是mRNA水平上表达均明显下调（P＜0.01）。结论：IP对缺血再灌注性肺损伤具有保护作用。IP对肺损伤的保护作用机制可能与IP激活内源性抗氧化作用,灭活或减少氧自由基和下调ICAM-1表达有关。     

缺血预处理对兔缺血再灌注心肌bcl-2,bax,p53基因表达的影响

目的 :探讨缺血预处理对兔在体心脏局部缺血再灌注过程中心肌细胞bcl 2 ,bax ,p5 3基因表达的影响。方法 :2 4只新西兰白兔随机分成 3组 (n =8) :假手术对照组 (P组 )、缺血再灌注对照组 (IR组 )、缺血预处理组(IP组 )。除P组外 ,其余两组均接受左冠脉前降支 3h阻断和 3h再灌注。IP组在 3h缺血前接受连续 3次每次缺血 5min ,再灌注 5min的预处理。取心肌缺血区边缘组织用流式细胞仪测凋亡指数 (AI)和bcl 2 ,bax ,p5 3基因的蛋白表达量。结果 :凋亡指数 ,IP组 ( 5 .85± 1.5 9) %较IR组 ( 13.83± 3.98) %显著减少 (P <0 .0 1)。bcl 2基因的蛋白表达量IP组高于IR组 ;bax ,p5 3基因的蛋白表达量IP组低于IR组。结论 :缺血预处理抑制缺血再灌注所致心肌细胞凋亡与上调bcl 2基因的蛋白表达 ,下调p5 3和bax基因的蛋白表达有关。     

缺血预处理第二保护窗对缺血再灌注心肌细胞凋亡和bcl-2的影响

目的 :探讨缺血预处理 (ischemicpreconditioning ,IP)第二保护窗对大鼠缺血再灌注 (ischemia/reperfu sion ,I/R)心肌细胞死亡和凋亡抑制基因bcl 2蛋白和mRNA表达的影响。方法 :采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的带萤光的dUTP缺口末端标记 (TUNEL)法以及免疫组织化学和原位杂交方法。结果 :(1)IP组TUNEL法阳性心肌细胞核数量及阳性心肌细胞核占总心肌细胞核数的百分比均明显少于I/R组 (P <0 0 5 ) ;(2 )IP组表达bcl 2蛋白 (mRNA)阳性的心肌细胞数及阳性心肌细胞占心肌细胞总数的百分比均明显高于I/R组 (P <0 0 1)。结论 :(1)IP第二窗能够显著减少大鼠I/R心肌细胞死亡 ;(2 )IP通过上调凋亡抑制基因bcl 2的基因表达可能是其减少大鼠I/R心肌细胞死亡的机制之一     

川芎嗪对原代神经细胞缺血再灌注后核因子-κB表达的影响及其意义

目的观察川芎嗪对神经细胞缺血再灌注后核因子κB(NF-κB)表达的影响及其意义。方法制备大鼠原代神经细胞,而后随机分为3组:未缺血组、缺血再灌注组(经类缺血处理后再复氧30min)和治疗组(类缺血处理后加入川芎嗪预治疗10min)。用流式细胞仪检测NF-κB的表达并进行比较。结果缺血再灌注组和川芎嗪治疗组NF-κB的表达分别为(58.07±11.83)%和(30.29±7.58)%。2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。但均高于未缺血组(1.4±0.6)%,差异有统计学意义(P均<0.01)。结论川芎嗪对原代神经细胞缺血再灌注后NF-κB具有显著的抑制作用。     

缺血预处理对L-6TG大鼠肌母细胞缺血再灌注中细胞凋亡的影响

目的:探讨缺血预处理对L-6TG大鼠肌母细胞缺血再灌注中细胞凋亡的影响。方法:将培养的L-6TG大鼠肌母细胞随机分为3组:①正常对照组(C组),②缺血再灌注组(IR组),③缺血预处理组(IP组),观测了培养上清中LDH、细胞内SOD、XOD、Ca2+含量的变化;采用MTT法检测线粒体的功能;利用流式细胞仪和细胞DNA电泳结果检测细胞凋亡情况;采用免疫组织化学的方法检测bcl-2及Caspase-3的蛋白表达情况,结合自动图像分析系统对其结果进行定量分析;在光镜下观察细胞的形态学改变。结果:缺血预处理可显著降低L 6TG大鼠肌母细胞IR 4h后培养上清中LDH、细胞内XOD、Ca2+含量及凋亡细胞百分率,增加细胞内SOD活性及线粒体呼吸功能,DNA电泳无梯状条带出现,bcl-2及Caspase-3的表达明显下调,细胞损伤明显减轻。结论:缺血预处理可明显减轻L-6TG大鼠肌母细胞缺血再灌注后的细胞损伤和细胞凋亡,其机制可能与减轻氧化损伤、调节细胞内钙稳态、减轻线粒体损伤、减少Caspase-3表达有关。     

PKC和HSP70表达在缺血预处理大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨蛋白激酶C(PKC)和热休克蛋白70(HSP70)在缺血预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的保护作用.方法 将大鼠随机分为对照组(CON)、缺血再灌注组(IR)和缺血预处理后缺血再灌注组(IPC).除病理组织学变化外,用免疫组化检测各组中不同灌注时间的PKC和HSP70的变化.结果 病理组织学肾小管评分IPC组均低于IR组(P＜0.05),而IPC组和CON组之间无显著性差异(P＞0.05);PKC的表达IPC组明显高于IR组(P＜0.01),并且在再灌注2 h和6 h时,IPC组中的表达明显高于CON组(P＜0.05);HSP70的表达IPC组明显高于IR组(P＜0.01),并且在再灌注2 h和6 h时,在IPC组中的表达明显高于CON组(P＜0.01).结论 缺血预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤有保护作用,其保护机制可能与PKC的激活以及与HSP70的诱导合成增多有关.     

缺血预处理对兔缺血再灌注心肌bcl—2，bax，p53基因表达的影响

OBJECTIVE: To investigate the effects of ischemic preconditioning on myocardial bcl-2, bax, p53 gene expression during ischemia/reperfusion period in rabbits. METHODS: Twenty four rabbits were randomly allocated to three groups (n = 8), pseudo-operation group(Group P), ischemia/reperfusion group (Group IR) and ischemic preconditioning group(Group IP). Group IR and Group IP were subjected to three hours of left anterior descending coronary artery occlusion followed for three hours of reperfusion. Ischemic preconditioning was achieved by three 5-minute cycles of ischemia, each followed by 5 minutes of reperfusion. Apoptosis index(AI) and protein expression of Bcl-2, Bax, and p53 in the border zone of myocardium of ischemic area at risk were obtained with a flow cytometry. RESULTS: Compared with Group IR, AI was significantly reduced in Group IP(P < 0.01). Bcl-2 expressions was higher in Group IP than in Group IR, while bax and p53 expressions were lower in Group IP than in Group IR. CONCLUSION: The rabbit myocardial apoptosis induced by ischemic preconditioning inhibited ischemia-reperfusion in vivo partly related to the modulating of bcl-2, bax and p53 expression.