福氏2a志贺氏菌肠毒素基因分型

目的：对福氏２ａ志贺氏菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ２ａ,Ｆ２ａ）的志贺氏肠毒素１（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ１,ＳＥＴ１）和志架氏肠毒素２（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ２,ＳＥＴ２）进行基因分型,提高菌痢暴发流行时同源性分析的水平。方法：对一起暴发Ｆ２ａ菌痢在现场流行病学调查的基础上,用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法,检测４３株Ｆ２ａ菌的志贺氏肠毒素１基因（ｓｅｔ１     

不同地区福氏2a志贺菌质粒DNA多态性分析

目的 对福氏2a志贺菌质粒DNA进行基因分型，提高福氏2a志贺菌痢疾暴发流行时同源克隆的鉴定分析水平。方法 对93株分离自不同地区、不同时间的福氏2a志贺菌用质粒图谱和限制性内切酶图谱法进行基因分型和同源克隆鉴定。结果 质粒DNA分析表明，不同地区、不同时间分离的93株福氏2a志贺菌具有13种不同的质粒DNA图谱特征(PLTl～PLTl3型)和15种限制性内切酶图谱特征(ReTl～ReTl5型)。结论 93株来自不同地区、分离自不同时间的福氏2a志贺菌分属于15个克隆群，PLT型和ReT型分布呈现多态性特征，PLTl／ReTl型是海南、江门、蚌埠、合肥、安庆地区福氏2a志贺菌的优势克隆群组。表型相同的福氏2a志贺菌实际上是遗传结构多态性群体的集合，表型分析结果作为判断传染来源或传播途径的依据具有很大的局限性。     

福氏2c(新菌型)和福氏2a志贺菌生物学关系实验研究

目的：探讨F2c(shigella flexneri 2c,F2c)与F2a志贺菌间的相互关系（异同点），了解新菌型的各种生物学特性。方法：对上述两株志贺菌进行生化、噬菌体裂解、药敏试验及血清学凝集.结果：两株细菌生化反应、噬菌体裂解试验结果均相同。F2c同时含有群抗原3，4和7，它对庆大霉素、妥布霉素、卡那霉素、乙基西梭霉素、氧哌嗪青霉素耐药，而F2a则对以上五种药均敏感。结论：新发生的F2c与F2a在药物敏感性上存在着很大差异。     

天津地区志贺菌志贺肠毒素基因分布与脉冲场凝胶电泳分型研究

目的 了解天津地区志贺菌流行株的志贺肠毒素基因分布和PFGE分子分型情况.方法 采用PCR方法检测天津地区2005-2007年分离的62株志贺菌编码志贺肠毒素的基因(set1A、set1B、sen),并用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对菌株进行分子分型和聚类分析.结果 62株志贺菌中福氏志贺菌占58.06%,其中福氏2b...     

江门市福氏2a菌痢暴发的RAPD分析

首次采用随机PCR（RAPD）技术分析了1994年广东省江门市一起菌痢暴发期间分离的福氏2a暴发株和密切接触者分离株。结果表明：此次菌痢暴发期间分离的12株福氏2a暴发株具有三种不同的RAPD特征（RSⅠ、RSⅣ、RSⅤ）,其中J9406（RSⅠ）和J9420（RSⅣ）分属不同克隆。提示：此次菌痢暴发中少数患者可能并非真正的暴发病例,之所以被归入暴发事件之中,可能是一种空间与时间上的偶合。同期分离的14株密切接触者分离株包含五种不同的RAPD特征（RSⅠ、RSⅡ、RSⅢ、RSⅣ、RSⅤ）,进一步证实部分密切接触者感染的福氏2a并非来自所接触的病例。相对于质粒分析而言,RAPD分析具有更高的分辨率,它提供的遗传学信息更为丰富、直接、精细。     

福氏2a志贺菌菌痢爆发的质粒DNA多态性分析

目的对福氏2a志贺菌质粒DNA进行基因分型,提高福氏2a志贺菌菌痢爆发流行时同源克隆的鉴定水平。方法对8株福氏2a志贺菌进行质粒图谱及质粒限制性酶切图谱分析。结果此次菌痢爆发期间分离的8株福氏2a志贺菌具有两种不同的质粒图谱特征(PPⅠ、PPⅡ型),其中2株病例密切接触者分离株J98101(PPⅡ型)和J9826(PPⅠ型)分属不同克隆。除上述两种质粒图谱特征外,同属PPⅠ型质粒图谱特征的J9871具有独特的质粒限制性酶切图谱特征ReⅢ型。结论本次爆发偶合有部分散发病例。相对于传统表型分型方法(生化反应、血清型)而言,质粒DNA分析具有更高的分辨率,它提供的遗传学信息更为丰富、直接、精细。     

福氏志贺菌食物中毒实验室检验报告

对1起食物中毒进行流行病学调查追踪及实验室检验。方法按照《食品卫生微生物检验方法》GB／T4789-2003进行。结果在剩余食物采样及患者肛拭标本中经实验室检测,检出福氏志贺菌5a。结论该次食物中毒为一起福氏志贺菌5a感染引起的食物中毒。     

志贺菌基因分型的研究进展

随着分子生物学技术的进步,基因分型系统被广泛应用于鉴别菌株间的相关性、确定菌株遗传特征及是否是流行株等。本文就近年来常用的志贺菌基因分型方法的研究进展进行综述。     

多位点酶电泳法在菌痢暴发中的应用

从广州、江门两地分离到７９株Ｆ２ａ，采用多位点酶电泳（ＭＥＥ）技术对该菌的６种代谢酶进行了检测。结果表明，７９株Ｆ２ａ共分为１０个电泳型（ＥＴ），存在一个优势型（ＥＴ１）和一个次优势型（ＥＴ２），以及８个非优势型。该现象说明，ＥＴ１型是引起菌痢暴发和流行的优势克隆。用ＭＥＥ方法检测表型一致的Ｆ２ａ，可发现二者之间具有差异。     

福氏志贺菌ipaC基因的克隆及序列分析

目的：构建福氏志贺菌毒力蛋白基因（ipaC）重组表达质粒。方法：根据ipaC已知序列，设计合成一对引物，用PCR方法从福氏志贺菌毒力质粒上扩增出ipaC基因片段，克隆到原核表达质粒pET32a中，转化大肠埃希菌TG1感受态细胞，经酶切和PCR鉴定，然后进行测序。结果：ipaC基因体外扩增产物大小约为1112bp。重组质粒经双酶切和PCR鉴定表明为正确重组子，测序结果与已知序列基本吻合。结论：在国内首次克隆了福氏志贺菌ipaC基因，为下一步细菌性痢疾发病机制的研究奠定基础。     

一起福氏志贺菌X变种暴发流行的病原学鉴定

目的:对一起暴发流行细菌性痢疾的病原菌进行分离鉴定,为细菌性痢疾临床治疗和预防控制提供依据。方法:按《全国细菌性痢疾监测方案》提供的方法进行病原菌分离鉴定和药敏试验。结果:采集的15份标本中,4份粪便和1张洗碗布标本检出福氏志贺茵X变种。5株福氏志贺茵X变种对氨苄西林、阿莫西林、庆大霉素、四环素、萘啶酸、复方新诺明均耐药,对环丙沙星、诺氟沙星、头孢噻吩、头孢噻肟、利福平均敏感。结论:本次疫情为一起由福氏志贺菌X变种引起的食源性细菌性痢疾暴发流行。     

一起菌痢爆发的分子流行病学分析

目的 探讨江门一起菌痢爆发的特异传染源。方法 对8株福氏2a志贺菌进行质粒图谱及质粒限制性酶切图谱分析。结果 此次菌痢爆发期间分离的8株福氏2a志贺菌具有两种不同的质粒图谱特征(PPⅠ、PPⅡ型)，其中2株病例密切接触分离株J98101(PPⅡ型)和J9826(PPⅠ型)分属不同克隆。除上述两种质粒图谱特征外，同属PPⅠ型质粒图谱特征的J9871具有独特的质粒限制性酶切图谱特征ReTⅡ型。结论 本次爆发偶合有部分散发病例。相对于传统表型分型方法(生化反应、血清型)而言，质粒DNA分析具有更高的分辨率，它提供的遗传学信息更为丰富、直接、精细。     

儿童122株福氏志贺氏菌菌型分布及耐药性分析

目的:了解儿童感染福氏志贺氏菌菌型分布及耐药性.方法:对2007～2011年在唐山市妇幼保健院就诊的≤14岁腹泻患儿粪便分离的福氏志贺氏菌122株,采用纸片扩散检测其抗菌药物的耐药性,最后对药敏结果进行分析.结果:122株福氏志贺氏菌以F2a为主,占65.6％.122株志贺氏菌属对14种抗生素的药敏结果呈不同程度的耐药现象,对氨苄西林耐药率高达100.0％,对复方磺胺、氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸耐药率分别为88.9％、88.6％和82.2％,对头孢曲松、头孢噻肟耐药率分别为74.7％、66.2％,对环丙沙星、氨曲南、左氧氟沙星耐药率分别为22.4％、22.3％和11.6％,对亚胺培南未发现耐药菌株.结论:儿童福氏志贺氏菌属对某些抗生素产生耐药,而耐药率逐渐呈上升趋势,临床医生应引起高度重视.     

福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法的建立及应用

目的 建立基于O抗修饰基因的福氏志贺菌血清型PCR鉴定方法.方法 根据福氏志贺菌O抗原合成及修饰特异基因设计引物,以常见的14种福氏志贺菌血清型(包括1a、1b、1c、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、Y、X、Xv和F6)为标准菌株,建立福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法;并以痢疾志贺菌、宋内志贺菌、鲍氏志贺菌和腹泻相关的其他菌属菌株验证特异性;应用该方法对106株福氏志贺菌临床分离株进行PCR血清分型.结果 建立一种福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法,通过8个PCR反应,能够鉴定目前已知的15种血清型中的14种(Xv除外).检测灵敏度在10 pg至1 ng DNA(20μl反应体系).对106株福氏志贺菌临床分离株的检测结果提示,PCR分型方法与玻片凝集法具有很高的一致性.结论 本研究建立的福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法具有特异性、灵敏性,可用于临床检测.     

福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法的建立及应用

目的 建立基于O抗修饰基因的福氏志贺菌血清型PCR鉴定方法.方法 根据福氏志贺菌O抗原合成及修饰特异基因设计引物,以常见的14种福氏志贺菌血清型(包括1a、1b、1c、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、Y、X、Xv和F6)为标准菌株,建立福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法;并以痢疾志贺菌、宋内志贺菌、鲍氏志贺菌和腹泻相关的其他菌属菌株验证特异性;应用该方法对106株福氏志贺菌临床分离株进行PCR血清分型.结果 建立一种福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法,通过8个PCR反应,能够鉴定目前已知的15种血清型中的14种(Xv除外).检测灵敏度在10 pg至1 ng DNA(20μl反应体系).对106株福氏志贺菌临床分离株的检测结果提示,PCR分型方法与玻片凝集法具有很高的一致性.结论 本研究建立的福氏志贺菌血清型单重PCR鉴定方法具有特异性、灵敏性,可用于临床检测.     

乌鲁木齐市儿童志贺菌感染及耐药性分析

目的了解新疆乌鲁木齐市2003-2009年儿童志贺菌属感染情况及耐药性,掌握细菌性痢疾的流行与分布。方法收集2003-2009年3所医院收治的腹泻儿童的粪便标本,采用全自动细菌鉴定仪鉴定分离菌株,血清凝集法进行分型,采用抗生素纸片扩散法(K-B)检测菌株对抗生素的耐药性,采用世界耐药监测网软件(WHONET5.4)进行统计分析。结果乌鲁木齐市儿童中志贺菌属主要分布在0～3岁,占54.06%;时间以5-10月居多,占85%;志贺菌属的菌型分布以B群福氏志贺菌为主,其次为D群宋内志贺菌,分别为276,27株;4群志贺菌对青霉素类抗生素耐药率为50%～100%,对三代头孢菌素和喹诺酮类耐药率为0～62.6%,对亚胺培南100%敏感。结论乌鲁木齐市儿童菌痢流行型为福氏志贺菌;菌群耐药性存在明显地区差别。     

北京市2004年-2010年志贺菌菌型分布及毒力基因分析

目的:了解近年来北京市志贺菌菌型变化及毒力基因分布特征。方法:对2004年-2010年监测到的1413株志贺菌进行血清分型;应用荧光PCR方法进行ipaHs、et1和sen基因的检测。结果:宋内志贺菌741株(52.4%),福氏志贺菌664株(47.0%),痢疾和鲍氏志贺菌各4株(1.2%)。福氏志贺菌共分为19种血清型,以F4c、F2a、F1a为主。宋内志贺菌自2007年首次超过福氏成为优势菌型后,所占比例逐渐加大,2010年已达到79.3%。福氏志贺菌也逐步由F4c转向以F2a为主,并伴有其它血清型交替出现。ipaH s,et1和sen三种基因的携带率分别为95.4%,82.3%和57.5%。set1和sen在福氏志贺菌的携带率明显高于宋内志贺菌。结论:近8年北京市志贺菌菌型发生了显著变化,宋内志贺菌正逐步成为主导菌型。毒力相关基因在不同菌型的分布存在差异。