纳他霉素产生菌基因组重排育种

Streptomyces gilvosporeus SG-1原生质体经紫外线诱变并筛选链霉素抗性菌株，获得纳他霉素高产菌株。在上述高产突变株中选择4株作为亲本进行基因组重排育种，筛选得到了高产重排菌株，其中一株重排菌株S．gilvosporeus GS-74的纳他霉素产量为3574mg／L。为产量最高的亲本菌株的153％，比原始出发菌株SG-1提高1.17倍。     

高产纳他霉素的褐黄孢链霉菌选育

目的　以褐黄孢链霉菌 (Streptomyces gilvosporeus) S- 71为出发菌株 ,筛选纳他霉素的高产菌株。方法　紫外线对孢子悬浮液照射 4 0 s后 ,分别用链霉素抗性和琼脂块法进行筛选纳他霉素高产菌株 ,之后对高产菌株进行生产稳定性实验。结果　通过链霉素抗性法筛选获得了约 10 %的正选率突变株 ,其中突变株SG- 5 6摇瓶效价单位为 2 4 10μg/ ml,为出发菌株的 14 6 % ;通过琼脂块筛选法获得了约 1%的正选率突变株 ,其中突变株 SG- 2 0 0 2摇瓶效价单位为 2 6 5 0μg/ ml,为出发菌株的 16 1% ,该菌株无链霉素抗性标记。结论　链霉素抗性筛选和琼脂块筛选均可以获得纳他霉素的高产菌株 ,其中链霉素抗性筛选法效率高 ,琼脂块法筛选全面。     

前体对多拉菌素生物合成的影响

目的 通过研究前体对多拉菌素生物合成的影响,寻找提高多拉菌素发酵产量的有效方法.方法 本文主要考察了不同前体对多拉菌素生物合成的作用,以及有效前体的最佳添加浓度和添加时间.结果 丙酸钠是多拉菌素合成的最佳前体,在发酵96h时添加0.1％的丙酸钠,多拉菌素产量达139.89μg/mL,比对照组提高了38.2％.结论 前体的供给能显著影响多拉菌素的生物合成,补加丙酸钠能有效提高多拉菌素的发酵产量.     

纳他霉素产生菌的诱变育种及其发酵条件的优化

目的 以纳塔尔链霉菌(Streptomyces natalensis)SIPI-NHF-09为出发菌株进行诱变选育和培养条件优化,以提高其纳他霉素的产量.方法 采用紫外和微波结合对纳塔尔链霉菌SIPI-NHF-09进行诱变选育,并对获得的高产突变株SIPI-UW-10-22的发酵条件进行了初步优化.结果 经过连续3轮的紫外和微波诱变,获得高产突变株SIPI-UW-10-22,其纳他霉素(Natamycin)产量达到3.15g/L,是出发菌株的3.5倍,且该菌株经多次传代,遗传性能稳定.对SIPI-UW-10-22发酵条件优化后获得其发酵条件为:以5.5％玉米淀粉加0.5％葡萄糖为碳源,2％黄豆饼粉加1％酵母粉为氮源,种龄46h,初始pH7.0,接种量8％,摇床转速220r/min,28℃培养126h.此条件下,纳他霉素的产量达到4.07g/L,较优化前提高了1.29倍.结论 紫外与微波诱变相结合的方法简便有效,所获得高产菌株遗传性状稳定.     

间歇补料分批发酵提高纳他霉素产量

对间歇补料分批发酵提高纳他霉素产量的工艺进行了研究，结果表明，在5L自动发酵罐条件下，初始葡萄糖浓度40g/L，以发酵液中的还原糖为控制指标，当还原糖降至2％以下时开始间歇补糖使葡萄糖浓度维持在2％，葡萄糖流加总量为20－25g/L，在最佳的间歇补料分批发酵工艺下，使纳他霉素的产量从1.5g/L提高到2．3g/L，提高率为35％。     

侧链前体3,3-二甲基丙烯酸对梅岭霉素生物合成的影响

研究梅岭霉素发酵过程中添加其主要组分MB1所拥有的侧链前体-3，3-二甲基丙烯酸，使MB1效价及其在总组分中的比例得到大幅度提高，达到提高产量并控制组分的目的。本文还对侧链前体的添加方式、添加时间以及添加浓度进行了优化。结果显示，0h时添加6mmol／L的侧链前体其产量最高，MB1效价比对照高出43％，其在总组分中的比例达到了52.7％。     

纳他霉素药理学研究进展及其应用

纳他霉素(natamycin)是一种广谱的多烯大环内酯类抗真菌抗生素.由于它高效的抑菌效果而被广泛应用于食品防腐和真菌引起的疾病治疗.本文对纳他霉素理化特性、抗菌活性、作用机制、药代动力学实验、毒性以及应用的历史和现状进行综述.     

补加葡萄糖对玫瑰孢链霉菌发酵产达托霉素的影响

以玫瑰孢链霉菌H11生产达托霉素(1)。考察了在摇瓶及2.5 L发酵罐中补加葡萄糖对其产量的影响。摇瓶试验结果表明,初始葡萄糖浓度为40 g/L时最佳,在对数生长期后期补加20 g/L的葡萄糖,1产量约提高40%,并显著促进菌体生长。在对数生长期和稳定期分4次共补加20 g/L的葡萄糖,1产量提高62%。2.5 L发酵罐补料分批发酵结果表明,从发酵12 h开始共流加30 g/L葡萄糖,不仅有效延长抗生素的合成期,而且提高了菌体合成抗生素的能力,1产量较分批发酵工艺提高约1.4倍。     

纳他霉素HPLC检测波长的优化

目的确定纳他霉素HPLC检测的最佳波长,探讨分光光度扫描与HPLC测定之间的关系。方法将含量为1~2000μg/ml的纳他霉素甲醇溶液进行全波长扫描,分析各波长下不同浓度范围的线性关系,确定线性关系最佳的波长作为HPLC的检测波长,并测定该波长条件下的理论塔板数、线性范围、精密度、稳定性和回收率。结果USP26版规定的纳他霉素HPLC检测波长是303nm,但不同浓度下纳他霉素的全波长扫描发现,800μg/ml以下浓度的纳他霉素在303nm处R2为0.383,250nm处为0.993。将纳他霉素HPLC检测波长调整为250nm后,5~2000μg/ml范围内的R2为0.99995;同样条件下303nm处R2达到0.99以上的浓度范围仅为5~200μg/ml。结论250nm是纳他霉素HPLC检测更合适的波长;全波长扫描时线性关系分析比简单地采用最大吸收波长对HPLC检测波长的选择具有更好的指导性和实用价值。     

纳他霉素高产菌株的链霉素抗性选育及其发酵工艺的优化

用紫外线对纳他霉素(Natamycin)产生菌褐黄孢链霉菌(Streptomyces gilvosporeus)ATCC13326菌株孢子进行诱变处理后，利用链霉素抗性突变选育得122株链霉素抗性突变株。其中纳他霉素产量高于出发菌株的有13株。突变株SG-56的生产能力达到出发菌株的146％，研究了其发酵性能，优化了培养基组成和发酵工艺条件，纳他霉素产量为2．81g／L，较出发菌株产量提高了170％。     

RP-HPLC法测定发酵液中纳他霉素含量

目的建立测定发酵液中纳他霉素含量的反相高效液相色谱法。方法发酵样品用甲醇萃取后进样。用HypersilBDSC18(5μm,4.6mm×200mm)色谱柱分离,流动相为甲醇-水-冰乙酸(60∶40∶5,体积比),流速为1.00ml/min,紫外检测波长302nm。结果该方法的日内RSD为0.15%(n=6),日间RSD为0.90%(n=6);对照品浓度为92、184、368μg/ml时,加样回收率分别为99.84%,101.18%,101.41%。结论本法具有操作简单、快速测定、灵敏度高、专属性好和准确性好等优点,可有效地控制纳他霉素的质量。     

那他霉素粗粉精制工艺优化

目的 优化那他霉素粗粉精制工艺,提高其精粉质量。方法 采用正交对比试验方法,对那他霉素粗粉溶解剂、粗粉溶液浓度、结晶溶液pH、淋洗挖洗影响、挖洗剂种类等精制工艺条件进行优化。结果 成功开发了那他霉素粗粉的精制优化工艺,即：粗粉溶解剂为75%甲醇-水溶液、粗粉溶液浓度为(25000±1000)u/mL、结晶溶液pH为6.0~7.0、结晶后沉淀需要用75%丙酮-水溶液淋洗后再挖洗,该工艺制备的那他霉素精粉纯度高达99.84%、收率可达94.05%,杂质含量为0.2%。结论     

纳塔尔链霉菌产纳他霉素发酵条件的优化

采用Plackett-Burman设计、最陡爬坡试验与响应面设计相结合的方法对纳塔尔链霉菌(Streptomyces natalensis)SIPI-120620产纳他霉素的发酵条件进行了优化.结果表明,培养基中的玉米淀粉、葡萄糖和NaC1是影响纳他霉素产量的关键因子.优化后的培养条件为:玉米淀粉70g/L、葡萄糖10.7g/L、黄豆饼粉15g/L、酵母粉20g/L、NaCll.3g/L、碳酸钙2g/L及初始pH6.5.此试验条件下,纳他霉素产量达到4.09g/L,比原培养条件提高了1.86g/L倍.     

那他霉素粗粉精制工艺优化

目的 优化那他霉素粗粉精制工艺,提高其精粉质量。方法 采用正交对比试验方法,对那他霉素粗粉溶解剂、粗粉溶液浓度、结晶溶液pH、淋洗挖洗影响、挖洗剂种类等精制工艺条件进行优化。结果 成功开发了那他霉素粗粉的精制优化工艺,即：粗粉溶解剂为75%甲醇-水溶液、粗粉溶液浓度为(25000±1000)u/mL、结晶溶液pH为6.0~7.0、结晶后沉淀需要用75%丙酮-水溶液淋洗后再挖洗,该工艺制备的那他霉素精粉纯度高达99.84%、收率可达94.05%,杂质含量为0.2%。结论 那他霉素粗粉精制工艺经优化后,大幅提高了精粉质量,且工艺稳定可行,可用于放大生产。     

Effect of natamycin on cytochrome P450 enzymes in rats

Natamycin is a polyene macrolide antibiotic widely used in the food industry as a feed additive to prevent mold contamination of foods. There are many contradictory results on the genotoxic effects of macrolides which could suggest a potential risk for humans. In the present study, the effects of natamycin on the activities of some drug metabolizing enzymes in rat liver microsomes were determined in vivo. Rats were treated orally with natamycin at doses of 0.3, 1, 3 and 10 mg/kg body weight (bw)/day for 6 days. Determinations of cytochrome P450 (CYP) enzyme activities were carried out in hepatic microsomes isolated from rats treated. The activities of CYP2E1, CYP1A1/2 CYP2B1/2 and CYP4A1/2 enzymes significantly decreased after treatment with 1, 3 and 10 mg/kg bw/day, in a dose-dependent manner as compared to control. This effect was not observed after natamycin treatment at dose of 0.3 mg/kg bw/day. Our results suggest that natamycin may not potentiate the toxicity of many xenobiotics via metabolic activation and/or accumulation of reactive metabolites but also might affect the clearance of other xenobiotics detoxified by the studied CYP enzymes.     

大孔树脂法分离纯化那他霉素的工艺研究

目的 研究大孔吸附树脂分离纯化那他霉素发酵液的工艺,提高那他霉素成品质量,得到高纯度药用级那他霉素.方法 用HPLC检测方法,以那他霉素的洗脱率为指标,考察大孔树脂分离纯化那他霉素的吸附性能和洗脱参数.结果 那他霉素从发酵液中的最佳溶出pH值为11;分离纯化那他霉素的有效吸附剂为大孔吸附树脂HZ816,其动态吸附量为150mg/mL,解吸收率在90%以上,成品纯度大于98%.结论 该高纯度药用级那他霉素的规模化分离纯化方法为国内首次应用,工艺简单可靠,分离效果好,适于工业化生产.     

豆油对螺旋霉素发酵的影响

以螺旋霉素链霉菌SPM1 1 0 8为出发菌株 ,经波长为 2 54nm、功率 30W的紫外诱变处理 50s,筛选豆油耐性突变株 ,得到一株螺旋霉素高产菌株SPM2 89,其发酵效价较出发菌株提高了 2 2 5 %。以此为试验菌株 ,采用含豆油培养基进行发酵试验 ,结果表明 ,豆油的最佳加入量为 2 0 % ,加入时间以 0～ 1 2h为宜。采用上述含豆油培养基并补加前体正丙醇 ,发酵效价比不添加前体提高 2 1 %。此工艺应用于 50m3发酵罐工业生产 ,月平均发酵水平较原工艺提高 30 %～ 50 % ,产品质量稍有提高