成都市某乳牛场李斯特菌污染状况调查

目的：了解成都市某乳牛场李斯特菌污染状况，以制定原奶中李斯特菌污染防止措施。方法：从该乳牛场中采取环境和原奶样本125份，进行李斯特菌分离鉴定。结果：分离出李斯特菌29株，其中单核细胞增生李斯特菌3株。结论：李斯特菌在该乳牛场环境中广泛存在，原奶存在被单核细胞增生李斯特菌污染的可能性，应加强卫生管理与监测，避免食物中毒发生。     

单核细胞增生李斯特菌PCR鉴定技术的研究

目的建立单核细胞增生李斯特菌PCR鉴定技术.方法选择Hly Inl基因设计扩展片段分别为300～400bp、600～700bp的二对特异性引物,进行PCR扩增.结果单增李斯特菌标准菌株及本实验室分离保存的单增李斯特菌均扩增出两条明显条带,其它食品中常见致病菌及非单核细胞增生李斯特菌均不见扩增条带.52株李斯特菌生化符合菌中,有30株菌同时扩增出两条明显条带,与Mini-VIDSA测定法比较,两者符合率达92.31%.结论本实验建立的PCR鉴定技术为一种简便、快速、敏感、特异的单增李斯特菌鉴定方法.     

3种方法鉴定单核细胞增生李斯特菌比较

[目的]采用分子生物学方法(accuprobe和PCR)对传统方法经ATB鉴定为单核细胞增生李斯特菌和疑为单核细胞增生李斯特菌的菌株进行鉴定比较,建立灵敏,快速,可靠的鉴定方法。[方法]对经传统方法结合ATB鉴定分离的菌株(单核细胞增生李斯特菌)分别采用accuprobe和PCR试剂盒进行鉴定比较。[结果]对10株经传统方法结合ATB鉴定的Lm菌(包括疑似Lm菌)经PCR鉴定,3株为阳性,7株为阴性,与accuprobe法鉴定结果一致。[结论]分子生物学方法检测单核细胞增生李斯特菌是对传统方法的有效补充,可用于大批量样品中致病菌的快速鉴定     

1株非典型李斯特菌的鉴定分析

目的 对生禽肉中分出的1株可疑李斯特菌进行鉴定分析和总结,为不典型单核细胞增生李斯特菌的检测提供参考,避免造成漏检。方法 通过染色镜检,溶血试验,动力试验,李斯特菌显色平板上菌落形态观察对可疑菌进行初步鉴定,然后分别用梅里埃VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定系统、梅里埃基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)系统、16S rRNA序列分析和全基因组测序对可疑菌进行鉴定。结果 VITEK 2 Compact鉴定该菌为英诺克李斯特菌,MALDI-TOF MS、16S rRNA和全基因组测序鉴定该菌为单核细胞增生李斯特菌。结论 该菌为单核细胞增生李斯特菌。鉴定非典型分离株时,可能会被自动化系统误判,建议通过分子生物学方法或MALDI-TOF MS对李斯特菌分离株进行确认。     

应用RCP方法检定单核细胞增多性李斯特菌

目的 建立单核细胞增多性李斯特菌（单增李斯特菌）快速、敏感、特异的ＰＣＲ诊断方法。方法 选取ｈｌｙＡ基因作为靶序列设计一对引物，用该引物对５４株标准李斯特菌和２１株无关菌进行ＰＣＲ扩增，得到进一步验证，采用ＰＣＲ和常鉴定方法同时对从国内食品分离的３３株李斯特菌进行鉴定。结果 可扩增含有保守Ｈｉｎｄ Ⅲ切点的７４３ｂｐ片段。表现出极好的单增李斯特菌种特异性。纯培养的检测极限为５５个菌。发现其中１８株     

焦磷酸测序法检测单增李斯特菌

目的:建立单增李斯特菌的焦磷酸测序检测方法。方法:通过焦磷酸测序法对hly基因的保守片段进行测序来检测单增李斯特菌,从基因序列上对单增李斯特菌进行鉴定。结果:焦磷酸测序法可准确鉴定94株单增李斯特菌。结论:本方法可用于单增李斯特菌的检测鉴定,具有准确、快速和实时等优点,可满足对单增李斯特菌快速、高通量检测的需求。     

单增李斯特菌鉴定方法比较研究

[目的]对单增李斯特菌鉴定方法进行研究。[方法]分别用API检测方法、16SrRNA序列分析法和焦磷酸测序法对17株单核细胞增生李斯特菌进行检测。[结果]3种方法均能准确鉴定单增李斯特菌。[结论]焦磷酸测序方法检测单增李斯特菌特异性强、经济、操作简便、检测快速,为单增李斯特菌的快速、高通量检测提供了一种新的手段。     

应用PCR方法检定单核细胞增多性李斯特菌

目的建立单核细胞增多性李斯特菌（单增李斯特菌）快速、敏感、特异的ＰＣＲ诊断方法。方法选取ｈｌｙＡ基因作为靶序列设计一对引物，用该引物对５４株标准李斯特菌和２１株无关菌进行ＰＣＲ扩增，得到进一步验证。采用ＰＣＲ和常规鉴定方法同时对从国内食品分离的３３株李斯特菌进行鉴定。结果可扩增含有保守ＨｉｎｄⅢ切点的７４３ｂｐ片段。表现出极好的单增李斯特菌种特异性。纯培养的检测极限为５５个菌。发现其中１８株用两种方法都鉴定为单增李斯特菌，两种方法的结果完全符合。当用于食物标本检测时，ＰＣＲ反应遭强烈抑制。经过２５小时的增菌培养，对培养物进行化学抽提、纯化的菌体经加热裂解后直接用作ＰＣＲ反应模板，可使抑制作用大大降低。每毫升牛奶人工接种４个菌可用该法特异检出。结论建立了ＰＣＲ方法，可初步用于单增李斯特菌的快速、特异、敏感诊断。     

部分市售农副产品李斯特菌污染情况调查及耐药性分析

[目的]了解上海市闵行区农贸市场食品中李斯特菌的污染情况及其耐药情况。[方法]按国标方法,采用科玛嘉显色培养基,对食品进行李斯特菌的分离、生化鉴定,改良K-B法进行药物敏感性试验。[结果]320份样品中共检出李斯特菌36株,其中单核细胞增生李斯特菌10株;英诺克李斯特菌株23株,其余3株。10株单核细胞增生李斯特菌,对多粘菌素B和萘啶酸100%耐药,对氨苄西林、头胞噻肟、先锋V号、庆大霉素、丁胺卡那霉素、环丙沙星、氯霉素100%敏感。[结论]本地区农贸市场食品存在着李斯特菌的污染,生肉禽类食品中李斯特菌污染比较严重,应加强监督管理;LM存在一定的耐药性,并出现了多重耐药性。     

近3年来吉林省食品中沙门菌和单增李斯特菌主动监测及结果分析

目的：了解吉林省高危食品中沙门菌、单核细胞增生李斯特菌的污染状况，为国家食品安全监测网提供数据。方法：增菌后，用科玛嘉显色培养基分离，AIP生化板和泰国产血清鉴定。结果：检测生畜肉、生禽肉、非定型包装熟肉制品、生牛奶、淡水鱼、蔬菜共1021件，检出沙门菌102株，检出率10.0％；检测单核细胞增生李斯特菌样品共1181件，检出单核细胞增生李斯特菌169株，检出率14．3％。结论：3年来沙门菌监测结果05年最高，阳性率每年有连续增长趋势。阳性率以生猪肉最高，生鸡肉次之。3年中李斯特菌连续监测阳性率变化，以05年最高，03年次之。生鸡肉阳性率最高，生猪肉次之，生蔬菜少见。     

Taq Man-MGB探针Real-timePCR快速检测单增李斯特菌的研究

目的：建立TaqMan—MGB探针Real—time荧光PCR快速检测单增李斯特菌技术。方法：在对单增李斯特菌invA序列进行分析、比较基础上，设计一对特异性TaqMan—MGB探针法引物及探针，通过Real—timePCR反应条件和反应体系的优化，实现对单增李斯特菌的快速检测；用克隆到pMD18-T载体上的李斯特菌invA基因阳参片段及不同菌株、食品标本验证方法的特异性和敏感性。结果：方法的灵敏性高，其循环阈值与模板浓度的对数值具有很好的对应关系，最低可检测57个拷贝数，经18h增菌，可检测低至4．5cfu／ml的细菌；特异性强，检测6株单增李斯特菌标准株和100株单增李斯特菌样品分离株的PCR循环域值（cT值）均小于25，而90株威氏李斯特菌、英诺克李斯特菌、绵羊李斯特菌以及非李斯特菌PCR循环域值（CT值）大于35；快速，最快1h可出结果，实际样品20h可出结果，而常规细菌培养法需要一周以上；对103份速冻米面食品进行检测，13份阳性，与常规方法无显著性差异（P〉0．05）。结论：TaqMan—MGB探针的单增李斯特菌Real—time荧光PCR检测方法具有特异性强，敏感性高，易操作等优点，可推广应用。     

2005～2006年秦皇岛市食源性疾病病原菌污染状况调查

目的：了解秦皇岛市食品中沙门菌、EHEC O157：H7、单增李斯特菌、副溶血性弧菌、空场弯曲菌、金黄色葡萄球菌的污染状况,确定可能污染上述菌的高危食品,为食源性疾病的预防提供科学依据。方法：依据国标方法,采用进口显色培养基和生化鉴定试纸,对样品分别进行沙门菌、EHEC O157：H7、单增李斯特菌、副溶血性弧菌、空场弯曲菌、金黄色葡萄球菌的分离、生化及血清学鉴定。结果：检测生肉、动物性水产品、散装熟肉制品、生食蔬菜、速冻米面食品、非发酵豆制品6类共240份样品,共检出病原菌37株,总检出率15.8%,副溶血性弧菌检出12株,检出率最高,为30%,沙门菌检出11株,EHEC O157：H7检出8株,单增李斯特菌检出6株,6类食品中动物性水产品病原菌阳性率最高,为30%,其次为生肉类,病原菌阳性率为28.8%。结论：秦皇岛市居民消费食品中存在食源性疾病病原菌污染,其中水产品和生肉是主要污染食品品种,副溶血性弧菌和沙门菌是污染食品的主要病原菌。     

2006年杭州市江干区食源性致病菌污染状况分析

目的：了解江干区食品中食源性致病菌污染状况，为食源性疾病的预防提供科学依据。方法：参考国标方法，采用进口显色培养基，对4类食品进行沙门菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、EHEC O157：H7和空肠弯曲菌的分离、生化及血清型鉴定。结果：109份样品共检出各类致病菌32株，总检出率为29.4%。其中副溶血性弧菌检出7株，检出率为38.9%；金黄色葡萄球菌检出8株，检出率为15.1%；单增李斯特菌检出15株，检出率为13.8%；沙门菌检出2株，检出率为1.8%；未检出EHEC O157：H7和空肠弯曲菌。结论：江干区食品中存在食源性致病菌的污染，其中生肉类、生食果蔬类和水产品受到的污染严重，副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌是污染食品的主要致病菌。     

从市售进口冰淇淋中检出单核细胞增生性李斯特氏菌

近年来，李斯特氏菌（Listeria）引起的食源性疾病不断发生，成为世界各国食品卫生工作者的主要关注对象。作者于1996年5月从由美国进口的市售冰淇淋中检出两株李斯特氏菌，经鉴定为单核细胞增生性李斯特氏菌（L。o。o’’ytogene。，以下简称L．m）和英诺克李斯特氏菌（L。nnocua）。福建省以往未见关于市售进口冷饮中检出李斯特氏菌的报道。一、材料与方法1．材料：（1）样品：在福州市某连锁店中采取市售桶装美国进口冰淇淋10个品种，分别盛放于无菌罐。编号BI～民。，分别为奶酪草萄冰淇淋、樱桃冰淇淋、甜饼冰淇淋、花生冰淇淋、巧…     

40株肠球菌应用两种仪器鉴定结果的比较研究

目的比较VITEK-32与VITEK2compact两种仪器对肠球菌鉴定的准确性。方法分别应用VITEK-32与VITEK2 compact对40株临床标本分离的肠球菌同时鉴定,用多重PCR技术对鉴定结果有差异的菌株进行种的检测并对产物测序。结果40株肠球菌中,32株用两种仪器鉴定结果完全相同,8株鉴定结果不一致。8株菌的PCR产物测序结果与GenBank中的屎肠球菌比较有97%～98%同源性,与VITEK2 compact鉴定结果完全相同。结论VITEK2 compact鉴定屎肠球菌的准确性优于VITEK-32。     

2009年顺义区食品中单增李斯特菌污染及耐药状况调查

目的:了解北京市顺义区食品中单增李斯特菌的污染状况和耐药情况。方法:菌株分离鉴定应用国标法和VITEK细菌鉴定仪,药敏试验采用K-B法。结果:单核细胞增生性李斯特菌总检出率为4.88%,其中生禽畜肉类为18.75%,其次为熟肉制品,为10.00%,生食蔬菜、水产品和乳制品中均未检出该菌。8株菌株对氨苄西林、青霉素、万古霉素、阿莫西林、头孢噻吩、庆大霉素、氯霉素、磺胺嘧啶和利福平全部敏感,仅有一株菌株对红霉素和四环素耐药。结论:顺义地区部分食品不同程度受到单增李斯特菌的污染,尤以生禽畜肉和熟肉制品污染严重。单增李斯特菌对多种抗生素敏感。     

2004～2005年湖州市食源性致病菌污染状况调查

目的：了解湖州市食品中单增李斯特菌、肠出血性大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、空肠弯曲菌的污染状况，为食物中毒监测提供科学依据。方法：按国标方法，对6类食品进行单增李斯特菌、肠出血性大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌和空肠弯曲菌分离、生化及血清型鉴定。结果：192份样品中共检出致病菌28株，总检出率为14．6％。其中单增李斯特菌检出10株，检出率为5．2％；沙门菌检出12株，检出率为6．3％；副溶血性弧菌检出6株，检出率为3．1％；未检出金黄色葡萄球菌、肠出血性大肠埃希菌、空肠弯曲菌。结论：湖州市食品中存在食源性致病菌的污染，其中生肉制品和水产品受到的污染最为严重，卫生监督部门应加强对生肉制品和水产品的监督管理，防止食源性疾病的发生。     

2000～2004年浙江省食品中产单核李斯特菌污染状况调查

目的：掌握浙江省食品中产单核李斯特菌污染状况。以及内化素基因（Inl）和李氏溶血素O（Hly）两种致病基因携带情况。方法：按GB4789．30方法分离单增生李斯特菌，采用PCR技术检测李斯特菌的两种致病基因。结果：2000～2004年从2282份食品中共分离产单核李斯特菌163株，总污染率为7．14％（163／2282）。生肉类、熟肉及水产品的污染率分别为12．80％、7．67％和2．24％；114份生食蔬菜中1份标本分离到产单核李斯特菌；285份乳及乳制品、59份冰激凌均未分离到产单核李斯特菌；163株产单核李斯特菌有155株同时检测到内化素基因和李氏溶血素O基因。结论：我省存在发生李斯特菌食物中毒的潜在危险。     

微球菌科细菌V—P试验培养基的选择

我们在细菌鉴定工作中遇到，用肠杆菌科V-P试验的葡萄糖磷酸盐胨水检查葡萄球菌的V-P反应，所得结果与文献记述不符、据此进行了微球菌科细菌V－P试验培养基的选择。结果报道如下：1实验部分1．1菌种和培养基1·1·1菌种：肠杆菌科和假单胞菌科细菌共39株。其中肺炎克雷伯氏菌3株，产气肠杆菌2株，蜂房哈夫尼菌2株，小肠结肠炎耶尔森氏菌3株。由中国科学院微生物研究所及卫生部药品生物制品检定所提供。大肠埃希氏菌14株，普通变形菌6株，铜绿假单胞菌9株。由临床感染标本分离，采用革兰氏阴性杆菌新编码鉴定法鉴定[1]做球菌科细菌共20株…     

血培养阳性标本直接细菌鉴定和药敏的探讨

目的探讨血培养阳性标本直接细菌鉴定和药敏可行性. 方法采用全自动血液培养系统Bact/Alert3D和自动细菌鉴定系统VITEK-32前瞻性研究的方法,对359例血培养阳性标本经染色,根据形态、数量多少,选择出290例Bact/Alert3D血培养阳性标本,经多次离心处理后,菌悬液直接用VITEK-32细菌鉴定和药敏,同时用VITEK-32细菌鉴定和药敏的标准法进行,二者阳性球菌均用GPI、GPS-106,阴性杆菌用GNI＋、GNS-506. 结果290例细菌包括223株甲型副伤寒沙门菌、8株大肠埃希菌、30株金黄色葡萄球菌、12株表皮葡萄球菌、9株溶血葡萄球菌、8株腐生葡萄球菌;直接法和标准法符合率：细菌鉴定总符合率93.1%,其中杆菌95.7%,球菌83.1%;药敏：重要误差：杆菌1.3%,球菌5.1%;主要误差：杆菌2.2%,球菌3.4%;次要误差：杆菌3.1%,球菌3.4%;总误差率7.6%. 结论 Bact/Alert血培养阳性标本直接VITEK-32细菌鉴定和药敏对肠杆菌和葡萄球菌是可行的,可大幅度缩短时间,为临床及时修正用药提供依据,结合革兰染色和临床表现,Bact/Alert血培养阳性标本直接VITEK-32细菌鉴定和药敏具有较高应用价值.