新型聚β-羟基丁酯作为血管组织工程支架材料的实验研究

目的：探讨经改性处理后的可降解生物材料聚β-羟基丁酯(PHB)作为血管组织工程支架材料与血管平滑肌细胞的细胞相容性。方法：采用体外培养的免血管平滑肌细胞接种在经胶原包埋处理后的管型PHB支架材料上，用相差显微镜和扫描电镜观察细胞的粘附和生长情况，并行HE染色观察。结果：免血管平滑肌细胞在改性后的管型PHB支架材料上粘附生长良好，扫描电镜下可见细胞生长融合成片状，HE染色示细胞在PHB材料上生长良好。结论：改性后的聚β-羟基丁酯材料与兔血管平滑肌细胞有较好的生物相容性。     

组织工程血管支架材料最适孔径的研究

目的 筛选组织工程血管支架材料的最适孔径.方法 用生物可降解材料聚β羟基丁酯(PHB)作为支架材料,运用盐析方法制成实心和不同孔径的膜片;将培养的第3代血管平滑肌细胞种植于膜片上,于培养的第1、3、7、11、14天,采用倒置显微镜下观察、苏木素-伊红(HE)染色、甲苯胺蓝染色、扫描电镜检查及噻唑蓝(MTT)比色法检测查明材料上细胞附着和生长情况.结果 倒置显微镜下无法观察附着于材料上的细胞;HE和扫描电镜标本制备过程中细胞丢失多,其不能为材料提供准确的信息;甲苯胺蓝染色可快速观察材料上细胞附着情况;MTT比色法可定量测定材料上的细胞数.经比较发现150～200 μm孔径的PHB膜片上血管平滑肌细胞附着和生长最佳.结论 150～200 μm孔径的PHB膜片最适合血管平滑肌细胞的附着和生长.     

鸵鸟钙磷陶瓷支架细胞相容性研究

目的：评价由鸵鸟松质骨制备的钙磷陶瓷支架的细胞相容性。方法：通过物理、化学方法将煅烧的鸵鸟松质骨改性为HAP／β-TCP／NaCaPO4多相钙磷陶瓷，然后分离兔骨髓基质细胞，体外扩增、诱导后接种于鸵鸟钙磷陶瓷支架。骨髓基质细胞与支架复合培养8天，通过相差显微镜、扫描电镜观察细胞在材料上的粘附、伸展及生长情况。通过细胞计数观察细胞增殖情况。结果：骨髓基质细胞在鸵鸟钙磷陶瓷支架表面及孔隙内粘附、伸展、增殖良好。结论：鸵鸟钙磷陶瓷支架具有良好的细胞相容性。     

血管内皮细胞与平滑肌细胞复合构建组织工程人工血管的实验研究

目的：构建既具有活性血管平滑肌细胞（VSMC）中膜层，又有血管内皮细胞（VEC）内皮化的复层结构组织工程血管支架材料。方法（1）将聚羟基乙俊（PGA）纤维无纺网，VSMC和胶原纤维相混合，设计构建VSMC活性的组织工程血支架材料。（2）采用酶消化法从兔主动脉中分离培养兔VEC并传代，纯化，接种于组织工程人工血管支架的内腔，体外培养，并行电镜观察。结果：构建的支架材料具有一定弹性和韧性，VEC在其内表达形成较完整内皮细胞层，且VSMC能够保持活性，生长状况良好。结论：经胶原包埋处理的PGA支架可作为组织工程化人工血管研究较理想支架材料，为组织工程方法构建具有分层结构的组织工程血管奠定实验基础     

生物可降解材料聚β-羟基丁酯对兔骨髓基质细胞生物学特性的影响

目的：检测生物可降解材料聚β-羟基丁酯(PHB)对兔骨髓基质细胞(BMSC)形态、生长、附着及增殖的影响。方法：将家兔BMSC进行体外培养，以诱导剂(β-甘油磷酸钠，地塞米松，L-抗坏血酸)使其向成骨细胞分化，行碱性磷酸酶染色并计算阳性率，将PHB与成骨细胞样细胞进行体外复合培养，用倒置显微镜及扫描电镜观察PHB对BMSC的形态、生长、附着及增殖的影响。结果：在诱导剂的作用下BMSC向成骨细胞分化，碱性磷酸酶染色呈阳性，其阳性率随培养时间延长而增加。PHB与成骨细胞样细胞进行体外复合培养后显示PHB对BMSC的形态、生长、附着及增殖均无不良影响。结论：PHB具有良好的生物相容性，可望与骨髓复合移植修复骨缺损。     

新型生物降解材料PHB细胞相容性研究

目的 本文对新研制的聚－β羟基丁酯（ＰＨＢ）这一生物可降解材料进行细胞相容性研究。方法 采用Ｌ９２９小鼠成纤维细胞，经材料高温浸提液、常温浸出液与Ｌ９２９细胞接触及直接在ＰＨＢ膜片上种植该细胞，运用四唑盐比色法（ＭＴＴａｓ－ｓａｙ）测定其１，３，５天Ｌ９２９细胞的相对增殖率及其毒性程度。结果 ＰＨＢ材料在高温及常温下物理、化学性质稳定。结论 ＰＨＢ细胞相容性好，细胞毒性程度０级。     

尿道种子细胞与生物可降解材料的生物相容性研究

目的 观察生物可降解材料聚β-羟基丁酸酯(PHB)与种子细胞即兔膀胱移行上皮细胞及平滑肌细胞间的生物相容性,探讨其作为种子细胞载体构建组织工程化尿道的可行性.方法 经过传代培养,分别在PHB与上皮细胞共同培养2、7 d,与平滑肌细胞共同培养1、5 d,每组各取6个样本,用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖情况,并利用扫描电镜检测细胞在材料上的空间生长情况,评估移行上皮细胞和平滑肌细胞与聚β-羟基丁酸酯的生物相容性.结果 平滑肌细胞能够在该材料上正常生长,各组间A值差异无统计学意义(P>0.05);而移行上皮细胞在该材料上只有少量生长,且实验组与对照组间A值差异有统计学意义(P<0.05),而A、B两实验组间A值差异无统计学意义(P>0.05).结论 聚β-羟基丁酸酯与平滑肌细胞具有良好的生物相容性,但其对移行上皮细胞的生长具有一定的抑制作用,生物相容性不甚理想.     

新型多孔PLGA/HA复合支架体外细胞相容性的实验研究

目的研究新型多孔聚乳酸乙醇酸／羟基磷灰石（PLGA/HA）支架材料的体外细胞相容性。方法采用贴壁法对兔骨髓基质细胞（BMSCs）进行体外矿化诱导培养，扩增后与实验A组（含5％HA的PLGA／HA），实验B组（含10％HA的PLGA／HA）及对照C组（仅含PLGA）分别进行体外复合培养；并通过定性及定量法检测BMSCs在材料表面的粘附能力、增殖活力，验证细胞材料复合体的成骨活性。比较分析各组之间的差异。结果兔BMSCs在每组材料的表面均能生长，经体外诱导后在支架材料的表面形成钙结节，A、B组细胞的粘附及增殖能力均强于C组（P〈0．05），A、B组之间无差异。结论兔BMSCs与新型多孔PLGA／HA支架材料有良好的相容性。     

天然羟基磷灰石/壳聚糖复合材料细胞相容性研究

目的：评价天然羟基磷灰石／壳聚糖复合材料（nature hydroxyaptite／chitosan composite，NHC）的细胞相容性。方法：人骨髓间充质干细胞诱导法培养成骨细胞，并鉴定。将材料与细胞体外进行复合培养，应用细胞增殖度，碱性磷酸酶和扫描电镜等对其细胞相容性进行评定。结果：骨髓间充质干细胞诱导的成骨细胞在复合材料表面粘附，生长良好，细胞增殖度无显著性差异（P〉0．05），材料组与对照组之间碱性磷酸酶无显著性差异（P〉0．105），扫描电镜观察发现24h后细胞生长良好，细胞连接紧密，有细胞外基质生成。说明本复合材料具有良好的细胞相容性。结论：NHC具有较良好的体外细胞相容性。     

血管细胞外基质和膀胱平滑肌细胞的生物相容性研究

目的探讨血管细胞外基质(VECM)和膀胱平滑肌细胞的细胞相容性和组织相容性,为临床应用提供依据。方法制备兔VECM,分离培养兔膀胱平滑肌细胞,并以1×10~6个细胞/ml种植于VECM上,相差显微镜和扫描电镜观察细胞的黏附及生长。制备VECM和乳胶的提取液,分别作为实验组和阳性对照组,以培养基为阴性对照组,以无细胞的单纯培养基作为空白对照组。取2～4代对数生长期的膀胱平滑肌细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定VECM浸提液对培养平滑肌细胞的细胞毒性；将VECM植入异体兔皮下,观察其组织相容性。结果兔膀胱平滑肌细胞能在体外培养扩增；接种1h后已有部分细胞黏附于VECM上,随时间推移,细胞逐渐增多,并伸展成梭形；培养第1、3、5天,实验组细胞增殖率分别为95．61%、98．34%、102．91%；阴性对照组为100．00%；阳性对照组分别为35．14%、38,95%、32．66%；实验组细胞增殖率明显高于阳性对照组,差异有统计学意义(P＜0．01),与阴性对照组比较差异无统计学意义(P＞0．05)。动物皮下埋植实验无排斥反应发生。结论VECM具有良好的生物相容性,是一种较好的泌尿道修复支架材料。     

纳米羟基磷灰石-壳聚糖骨组织工程支架的研究

目的以一种简单、有效的方法制备多孔的纳米羟基磷灰石(nano hydroxyapatite,nano-HA)-壳聚糖(chitosan,CS)复合支架,并评价其理化性能及与细胞相容性。方法采用原位复合-冷冻干燥方法,制备多孔nano-HA-CS支架。通过扫描电镜、透射电镜、X线衍射和傅立叶红外光谱分析支架的微观形貌及材料的组成。分离初生Wistar大鼠的成骨细胞,取传代培养第3代细胞分别与nano-HA-CS支架和纯CS支架共培养2、4、6、8h,各时间点各取4个样品,测定细胞在支架上的黏附率,并通过组织化学染色、扫描电镜观察细胞形态。结果nano-HA-CS复合支架具有多孔结构,孔径为100~500μm,大多数孔径为400~500μm。具有很高的孔隙率,随CS和HA含量的增加,孔隙率明显降低,密度升高。扫描电镜和透射电镜观察显示合成的HA晶体,晶粒大小为纳米级,在支架孔壁上均匀、连续分布如“铺路石”样。X线衍射和红外光谱分析表明合成的HA是含CO32-弱结晶纳米晶体。细胞相容性实验显示,成骨细胞在支架上黏附、增殖,并分泌纤维状细胞外基质;在复合支架上的黏附率明显高于纯CS支架。结论采用原位复合与冷冻干燥法结合制备的nano-HA-CS复合支架具有良好的理化性质和细胞相容性,有望应用于组织工程骨的构建。     

改性聚β-羟基丁酸脂与人肾上腺细胞的生物相容性研究

目的　探讨聚 β 羟基丁酸脂 (PHB)的生物相容性和PHB改性方法。 方法　以明胶作为改性材料对PHB进行改性 ,并与人肾上腺细胞共同培养 ,通过形态学、细胞增殖和细胞分泌三方面来评价改性PHB的生物相容性。结果　PHB对肾上腺细胞无毒性 ,对细胞增殖和分泌功能无影响 (P均 >0 .0 5 )。结论　PHB是一种较为理想的细胞载体材料 ,可应用于肾上腺细胞移植。     

组织工程人工血管支架的预构

目的：探讨具有血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）活性的组织工程人工血管支架的构建方法。方法：①将聚羟基乙酸（polyglycolic acid,PGA）纤维无纺网支架材料、血管平滑肌细胞和胶原纤维相混合，构建组织工程血管。②将VSMCs置入胶原凝胶中，观察VSMCs的生长状况。③观察VSMCs胶原悬液滴入该支架材料中的生长。结果：①VSMCs在胶原凝胶中的位置固定，分布于不同层次，约3－4h逐渐形成多个胞质突起。随时间推移，胞质突起继续伸展，部分细胞呈梭形、纺锤形。②VSMCs胶原悬液滴入胶原包埋处理的PGA支架中后，大部分细胞随胶原凝胶状态的形成，滞留于支架材料网孔中，细胞可沿PGA纤维表面生长。结论：胶原包埋处理的PGA纤维无纺网是良好的携带VSMCs的多孔生物降解材料。     

复合可降解基质膜片制备及血管内皮细胞在其吸附生长的实验研究

目的　制备几种复合可降解基质膜片 ,观察血管内皮细胞在其上的生长情况。方法　用胶原酶消化法分离牛主动脉血管内皮细胞 (VEC) ,另采用两步盐析法提取牛骨 型胶原。将交联胶原包埋处理聚羟基乙酸 (PGA)、聚乳酸 (PL A)及聚β羟基丁酸 (PHB)形成可降解基质材料膜片 ,并接种牛 VEC,采用 MTT法比较 VEC在几种可降解基质材料膜片的生长情况。结果　胶原、PGA/胶原、PL A/胶原膜质地均匀柔韧 ,固定成形 ,具有一定弹性和吸水性 ;MTT比色实验表明 VEC在胶原、PGA/胶原、PL A/胶原上均生长良好 ,优于 PHB/胶原组。尤以 PGA/胶原所形成的基质材料固定成形 ,弹性和韧性好 ,VEC在其上贴附生长良好。结论　通过生物材料与人工可降解材料有机结合 ,PGA/胶原物理性能互补 ,是组织工程再造血管较理想的基质材料之一。     

胶原膜与膀胱移行上皮细胞相容性的体外研究

目的检测制备的胶原膜与膀胱移行上皮细胞的细胞相容性,探讨胶原膜作为泌尿系腔道组织工程支架的可能性.方法①选用8～12周新西兰白兔中分离培养的原代膀胱移行上皮细胞,以1×105/cm2种植到制备胶原膜上,于种植后2、12和24小时通过倒置显微镜及扫描电镜观察细胞与胶原膜的黏附.②分别设立空白组(无细胞)、阴性对照组(培养基)、阳性对照组聚氯乙烯管(Polyvinyl chloride,PVC)浸提液和实验组(胶原膜浸提液).取2～4代对数生长期的膀胱移行上皮细胞,接种于96孔板中,每组各5孔,1×104个/孔,于接种后24、72和120小时,通过MTT法显色,并于酶标仪490 nm波长下检测吸光度值,计算相对增殖率,对胶原膜与膀胱移行上皮细胞的相容性进行评估.结果移行上皮细胞2小时后开始在胶原膜上黏附,随时间推移,黏附细胞数量增加;第24、72和120小时实验组吸光度值分别为0.590±0.024、1.065±0.040和1.129±0.074,阴性对照吸光度值分别为0.639±0.068、1.022±0.044和1.087±0.111,阳性对照组吸光度值分别为0.302±0.029、0.653±0.083和0.694±0.031,实验组吸光度值明显高于阳性对照组,有统计学意义(P＜0.01),与阴性对照组比较无明显差异(P>0.05).结论制备的胶原膜与膀胱移行上皮细胞相容性良好,具有作为泌尿系腔道组织工程支架的潜在运用价值.     

骨髓基质细胞与可降解明胶-聚羟基丁酸酯膜复合培养的生物合成功能分析

目的:从生物合成功能角度,探讨骨髓基质细胞(BMSCs)与可降解明胶-聚羟基丁酸酯(G-PHB)膜复合培养的生物相容性。方法:以BMSCs分别与G-PHB、聚羟基丁酸酯(PHB)、明胶(G)膜材料复合培养,并设立空白对照组,各组通过3H-TdR法检测DNA合成;考马斯亮蓝法检测蛋白质合成;对硝基苯磷酸盐法(PNP)测定碱性磷酸酶(ALP)水平;放免法测定骨钙素(OCN)表达;流式细胞术测定纤维连接蛋白(FN)表达。结果:G-PHB组DNA合成优于PHB组和空白对照组(P<0.05)。总蛋白合成与各对照组无显著性差异(P>0.05),但成骨特异性标志ALP、OCN以及细胞黏附指标FN均明显优于其他各组(P<0.05)。结论:G-PHB材料对于种子细胞BMSCs黏附、增殖与成骨定向分化有明显的促进作用,是一种有效上调细胞生物合成功能的新型可降解材料。     

let-7a对血管平滑肌细胞迁移、增殖功能调控作用的体外研究

目的:观察let-7a对体外培养血管平滑肌细胞(VSMC)迁移和增殖能力的影响。方法:分离大鼠胸腹主动脉VSMC,并传代培养。将培养的VSMC通过慢病毒表达载体分别转染let-7a模拟物(实验组)及其阴性对照物(阴性对照组),或不做转染处理(空白对照组)。通过绿色荧光蛋白的表达估计转染效率;用real-time PCR检测各组细胞let-7a的表达水平;用细胞划痕试验和CCK-8法分别检测各组细胞的迁移能力及增殖情况。结果:荧光显微镜观察显示,96 h后细胞的转染效率达85%以上;real-time PCR结果显示,实验组VSMC的let-7a表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组(均P<0.01);细胞划痕试验与增殖检测结果显示,实验组的细胞迁移数及增殖率明显低于阴性对照组和空白对照组(均P<0.01)。阴性对照组与空白对照组间上述项目无明显差异(均P>0.05)。结论:let-7a对体外培养的VSMC迁移与增殖有抑制作用。