心肌黄酶的提纯工艺及其部分性质的研究

通过热变性处理、硫酸铵分级沉淀、DE-AE-Toyopear1650M柱层析及K_2BP-Agarose染料配基层析等方法从猪心肌组织匀浆提取液中分离与纯化了心肌黄酶。应用此工艺,酶活力的总回收率为16.9％,纯化倍数为26.4。用Sephadex G-100凝胶过滤法测得心肌黄酶的分子量为85,000道尔顿;以NADH为底物时其米氏常数为1.0×10~(-3)M;最适作用PH为10.6,在pH5-10时稳定;最适作用温度为65℃,有较好的热稳定性,在75℃保温3小时仍可保留80％的酶活性,提纯的酶溶液在4℃保存六个月未见活性明显损失。     

尿激酶在眼科临床的应用

尿激酶(urokinase)是一种无色水溶性含有54000道尔顿的单链多肽,是一种纤维蛋白溶解酶,分低分子量(31300)和高分子量(54700)两种,其在高 pH 及相当范围之温度中性质稳定,它能激活纤维蛋白溶解酶原变成纤维蛋白溶解酶,使纤维蛋白溶解。1951年 Wielams 发现尿中有纤溶酶活性物质,故命名为尿激酶,1957年 Ploug 等     

烧伤患者应用甘油止痒液止痒效果的临床研究

目的评价甘油止痒液对烧伤患者的止痒效果。方法160例康复期烧伤患者应用甘油止痒液,分析其止痒效果、起效时间、缓解时间及不良反应。结果完全缓解(CR)率为30.8%,部分缓解(PR)率为60.0%,总有效率为90.8%。平均起效时间为(4.09±0.39)min,最佳缓解时间为(12.70±0.27)min,缓解时间为(14.3±1.3)h。连续用药10次以上的患者与连续用药10次以下者相比CR、PR以及缓解时间差异无统计学意义。副作用为用药时轻微的刺痛及用药后轻微的皮肤烧灼感,但均可耐受。结论甘油止痒液对烧伤患者的止痒效果确切,安全性大,持续时间长,可作为烧伤患者较理想的外用止痒药物。     

α—磷酸甘油脱氢酶的提纯及性质的研究

应用液-液双水相提取、DEAE-纤维素层析及SIPI-I红色染料配基层析等方法提纯兔肌匀浆粗提取液中的α-磷酸甘油脱氢酶,其比活15u/mg蛋白,为原酶的50倍,总收率约50％。并对其分子量、米氏常数、酶作用的最适pH、最适温度,对pH和热的稳定性等性质作了测定。     

慢性阻塞性肺疾患(COPD)病人血清α_1-抗胰蛋白酶含量测定

α_1-抗胰蛋白酶(α_1-antjtrypsin,简称α_1-AT)是由肝脏合成的一种分子量约为51000道尔顿的糖蛋白。分泌入血后,成为血浆α_1-球蛋白的主要部分。它是人血浆中最重要的蛋白酶抑制剂之一,能抑制弹性酶     

重组葡萄糖脱氢酶基因表达条件的优化及其稳定性

目的 优化重组葡萄糖脱氢酶(GDH)基因表达条件,研究其稳定性.方法 在摸索培养基性质、抗生素浓度、培养温度、表达时间等条件的的基础上确定最佳表达条件;同时在表达酶液中添加甘油、咪唑等以期提高其稳定性.结果 当氨卞青霉素浓度为100 mg/ml,LB培养基中,37℃培养条件下,细菌生长接近饱和后更换等体积新鲜LB培养基诱导过夜,可获得较高的蛋白表达量;同时在表达酶液中添加20%甘油或20%甘油 0.05 M咪唑可使酶蛋白基本稳定.结论 载体的拷贝数、稳定性和宿主菌的生长状态是影响GDH表达的因素;一定浓度的甘油可提高葡萄糖脱氢酶的稳定性.     

干扰素在血液系统疾病中的临床应用

干扰素(1nterferon,IFN)是一种天然存在的高活性糖蛋白.由机体生物细胞在诱导剂的诱导下产生的,对热和pH值相对稳定,分子量在12000-10000道尔顿之间.IFN最初发现于病毒感染细胞的上清液中,因其能干扰其他病毒对细胞的重复感染,因此得名.1977年,美国学者用DNA重组技术于大肠杆菌生产IFN获得成功,称为基因重组IFN.     

方格星虫多肽的结构分析及体外抗氧化活性

目的 以方格星虫为原料,酶解制备水溶性多肽并考察其抗氧化活性,探究其结构-活性关系。方法 利用5种蛋白酶酶解新鲜方格星虫,并结合超滤方法得到高分子量(>50kDa)、中分子量(5～50 kDa)和低分子量(＜5kDa)的酶解肽段;利用氨基酸自动分析仪测定方格星虫酶解肽的氨基酸组成。综合考察多肽对1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH.)自由基、羟基自由(.OH)、超氧阴离子自由基( O-2.)的清除能力以及还原力效果,评价方格星虫多肽抗氧化活性;利用高效液相色谱-串联质谱方法鉴定小分子肽的氨基酸组成和序列结构。结果 胰蛋白酶水解方格星虫4h得到的酶解液蛋白含量最高,并在酶解液中检测确定了17种氨基酸,其中精氨酸含量最高13.65%。高中低三组肽段中,低分子量肽段的抗氧化活性优于其他：对DPPH 自由基和羟自由基清除能力大小顺序为低分子量>高分子量>中分子量、对超氧阴离子清除能力大小顺序为低分子量>高分子量≈ 中分子量、还原能力强弱顺序为高分子量>低分子量 > 中分子量。经高效液相色谱-串联质谱联鉴定了GFAGDDAPR、GLGGLSPEK 、LDLAGR和VTKEIPR 4个肽段。结论 低分子量的方格星虫酶解多肽具有较好的抗氧化活性,有潜力用作生物医药或化妆品工业的原料。     

含有效B细胞和巨噬细胞活化剂的合成的低分子量新口蹄疫疫苗

本文报告一种完全合成的低分子量肽无载体口蹄疫病毒(FMDV)疫苗.该疫苗由合成的B细胞和巨噬细胞活化剂构成,其与两性分子α螺旋状T细胞抗原决定簇共价联接.3.4千道尔顿(KDa)低分子量FMDV疫苗是由相应于FMDV蛋白序列的合成的VP1(135～154)和三棕榈酰-S-甘油基-半胱氨酰丝氨酰丝氨酸(P_3CSS)佐剂构成.P_3CSS是合成的革兰阴性菌脂蛋白氨基末端部分的类似物.抗原决定簇VP1(135～154)通过圆二色性证明是一种α螺旋.这种新型的     

酶法制备牡蛎抗氧化肽研究

目的优化牡蛎酶解制备抗氧化肽的工艺。方法通过正交试验法确定胃蛋白酶、胰蛋白酶及这两种蛋白酶的酶解液抗氧化(Fenton体系)的最佳工艺条件;采用Sephadex G-25葡聚糖凝胶柱层析法对酶解液中抗氧化肽进行分离纯化。结果胃蛋白酶最佳酶解条件:温度35℃、加酶量2.5%、时间6h、pH 2.0,在此条件下清除率达到50%时的酶解液浓度(EC50)为1.929mg.mL-1;胰蛋白酶最佳酶解条件:温度45℃、加酶量2%、时间8h、pH 7.5,EC50为1.165mg.mL-1;胰蛋白酶、胃蛋白酶分步酶解法的酶解液EC50为0.869mg.mL-1。双酶酶解液经纯化后,得相对分子质量为751的抗氧化活性肽组分(BPO-Ⅱ),其EC50为0.529mg.mL-1。结论双酶酶解法优于单酶酶解法,从双酶酶解液中分离纯化得抗氧化肽BPO-Ⅱ。     

层析法提纯人绒毛膜促性腺激素(HCG)的研究

本文比较了离子交换、羟基磷灰石吸附、凝胶过滤及亲和层析等四种层析方法各自对HCG粗品的一次纯化效果。其中亲和层析所获得的纯化倍数相当于其它方法的几十倍,而且具有操作简单、时间短的优点。通过选择合适的洗脱条件,可以将吸附的HCG全部洗脱下来。     

液相制备色谱的研究进展

介绍国内外制备色谱方面的概况，综述了模拟移动床色谱、高速逆流色谱和超临界流体色谱等3种典型的液相制备色谱的研究进展。     

高效液相色谱法在合成多肽分离与纯化中的应用

近年来，多肽药物化学形成并迅速发展成为药物化学的重要分支。而随着分离纯化技术的进展，又大大加快了新活性多肽的发现和合成速度。在多肽合成中．许多杂质显示与产物类似的性质，随着肽链的增长，分离的难度也增大，因此纯化的方法和工艺显得异常重要。本文综述了凝胶过滤色谱、离子交换色谱和反相色谱等高效液相色谱技术在合成多肽分离与纯化中的设计和应用。     

层析法去除基因重组 125Ser-IL-2产品中细菌内毒素

针对细菌内青素的化学性质，比较了用亲和层析法，离子交换层析法和疏水相互作用层析法等3种层析法去除基因重组^125Ser-IL-2产品中细菌内毒素的效果。结果表明，亲和层析法的效果最好，但综合各方面的因素，离子交换层析法更实用。     

基于三种原理分离技术的多肽类药物比伐芦定杂质分析

摘要：目的 建立不同分离原理的高效液相色谱法,对7家企业的比伐芦定原料药中相关杂质进行分析,为全面控制比伐芦定有关物质提供依据。方法 采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）对11个杂质进行分离分析;采用亲水色谱法（HILIC-HPLC）对4个工艺杂质进行控制;采用分子排阻色谱法（SEC-HPLC）对聚合物进行测定。结果 建立的RP-HPLC方法可将主成分及11个杂质有效分离,11个杂质的校正因子均在0.8～1.2之间,比伐芦定检出浓度为0.1μg·ml-1,检测限为0.004%;建立的HILIC-HPLC方法可对主成分及4个工艺杂质有效分离,比伐芦定检出浓度为0.3μg·mL-1,检测限为0.01%;在SEC-HPLC条件下聚合物和比伐芦定依次出峰,两者分离度为2.9,比伐芦定检出浓度为6ng·mL-1,检测限为0.0006%。采用主成分自身对照法计算7家企业15批样品中15种已知杂质及聚合物,不同企业的产品杂质含量与其生产工艺存在一定的相关性。结论 三种不同原理的方法均专属性良好,灵敏度高,耐用性好,结果可靠,可用于比伐芦定有关物质的质量控制。     

The determination of D-penicillamine and its disulphide in plasma by reversed-phase ion-pair high-performance liquid chromatography

Reversed-phase ion-pair conditions are used for the determination of D-penicillamine and penicillamine disulphide. Two chromatographic systems were employed, one for penicillamine and the other for penicillamine disulphide. The procedures permit the determination of total penicillamine (protein-bound, free and as disulphides) in whole plasma, and total penicillamine (free and as disulphides) in plasma ultrafiltrate, using an incubation step in the presence of dithiothreitol. Free penicillamine and penicillamine disulphide may be determined independently by direct injection of plasma ultrafiltrate. Both solutes may be measured at an on-column sensitivity of 10 ng, utilizing an electrochemical detector based on a glassy carbon electrode.     

藻糖蛋白单糖组成两种分析方法的初步探讨

目的探讨藻糖蛋白单糖组成的测定方法。方法采用气相色谱法和离子色谱法测定单糖组成。结果气相色谱法1不适于藻糖蛋白单糖分析,气相色谱法2较适合藻糖蛋白单糖分析;离子色谱法测得藻糖蛋白含7种单糖。结论两种方法均可用于单糖的定性定量分析,灵敏度高,重现性好。     

新技术拟相生物色谱法研究进展

综述了近几年新技术拟相生物色谱(pseudophase biochromatography)法的发展和现状，对各种拟相生物色谱技术的测定原理进行了阐述；对拟相生物色谱的种类以及它的应用进行了总结；并且针对拟相生物色谱在生命科学领域的应用前景进行了讨论。     

柱层析法提取门冬酰胺酶

目的　改良门冬酰胺酶提取工艺。方法　菌体经破壁处理后 ,经离子交换层析和亲和层析 ,将目的蛋白层析出来。结果　其效率远远高于传统的有机溶剂沉淀法。结论　操作方法简便 ,易于放大 ,是生产厂家提高效率、降低生产成本、提高竞争力的有效途径     

Influence of the stationary phase on the stability of thalidomide and comparison of different methods for the quantification of thalidomide in tablets using high-temperature liquid chromatography

In this paper, three different HPLC methods for the quantification of thalidomide in tablets were developed and compared. The comparison of a conventional method at 30 degrees C with two high-temperature methods at 180 degrees C showed equal results. Using high-temperature HPLC (HT-HPLC), faster analysis times could be achieved. We have also focused on analyte stability and could show that the stationary phase has a pronounced effect on the on-column degradation of thalidomide at high temperatures. Virtually no degradation occurs if a polystyrene divinylbenzene column is used, whereas thalidomide is completely degraded at 180 degrees C when a carbon clad zirconium dioxide column is used.