雷公藤内酯醇对肝癌H22细胞增殖凋亡及COX-2表达的影响

目的 观察雷公藤内酯醇(TPL)对肝癌H22细胞增殖、凋亡及环氧合酶-2(COX-2)表达水平的影响. 方法 以体外培养的鼠源性H22细胞株为研究对象,实验分对照组和不同浓度的TPL处理组.MTT比色法测定TPL对H22细胞株增殖抑制情况;TPL处理48 h后,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况,流式细胞术间接免疫荧光双标记法检测COX-2表达变化情况. 结果 随着药物浓度的增加及时间的延长,TPL能明显抑制H22细胞增殖.TPL诱导细胞凋亡及下调COX-2的表达具有浓度依赖性,不同浓度组比较,差别具有统计学意义(P<0.05). 结论 TPL可能通过诱导肝癌H22细胞凋亡及抑制COX-2表达发挥抗肿瘤作用.     

sPD-1蛋白治疗小鼠H22肝癌的实验研究

目的:观察sPD-1蛋白对小鼠H22肝癌腹水瘤生长的抑制作用。方法:建立H22肝癌小鼠腹水瘤模型,将24只接种H22肝癌细胞BALB/c小鼠随机分成3组,其腹腔分别注射PBS(模型组)、DDP(阳性对照组)以及sPD-1蛋白,用药15 d后,停止用药,取腹水测定腹水细胞Treg细胞的产生情况,并观察小鼠的毒副反应以及生存期。结果:sPD-1蛋白组的H22肝癌生命延长为(25.75±4.30)d,DDP组的H22肝癌生命延长为(25.00±4.41)d,均明显高于对照组的(16.63±2.67)d(P<0.05)。sPD-1蛋白组小鼠腹水中Treg细胞明显少于DDP组和模型组,免疫水平优于DDP和PBS组。结论:原核表达的sPD-1蛋白对小鼠H22肝癌腹水瘤的生长具有明显抑制作用,并能促进机体免疫系统功能,提高生存期。     

天花粉蛋白诱导H22肝癌细胞凋亡的研究

目的观察天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)在体外诱导H22肝癌细胞凋亡的效果.方法以不同剂量的TCS加入到H22肝癌细胞溶液中,在24孔培养板上培养72h后荧光染色并涂片,激光共聚焦显微镜下观察TCS诱导H22肝癌细胞凋亡的作用效果.结果10μg/ml浓度的TCS就可诱导H22肝癌细胞出现典型的凋亡形态学特征.经统计学分析,100μg/mlTCS组与50μg/mlTCS组间差异无统计学意义(P>0.05),其余各组间差异均有统计学意义(P<0.01).TCS的作用浓度与凋亡指数间有正相关关系(r=0.9713,P<0.01).结论TCS在体外可诱导H22肝癌细胞发生凋亡,诱导H22肝癌细胞凋亡是TCS抗肝癌作用的机制之一,具有成为肝癌治疗新药的潜在价值.     

5-氟尿嘧啶腹腔内缓释化疗对H22腹水瘤小鼠的抑瘤疗效观察

目的:观察5-氟尿嘧啶(5-FU)腹腔内缓释化疗对H22腹水瘤小鼠的抑瘤作用.方法:昆明种实验小鼠腹腔内注射0.2 ml H22腹水瘤细胞悬液(含癌细胞4×106)制备腹水瘤小鼠模型.成模小鼠分为生理盐水对照组、腹腔化疗组、缓释化疗组和缓释对照组4组,分别给予腹腔注射生理盐水、普通5-FU、5-FU缓释剂以及缓释对照品.观察各组小鼠的生存期;流式细胞仪测定腹腔注射后第9、12天各组小鼠腹水瘤细胞的凋亡率,计算增殖指数;腹腔注射后第12天电镜观察各组腹水瘤细胞涂片.结果:腹腔化疗组小鼠平均生存期低于缓释化疗组[(13.7±1.7) d vs (15.3±2.0) d, P＜0.05],但均明显高于生理盐水对照组和缓释对照组(P＜0.05),而后两者无显著差异.实验第9天,腹腔化疗组小鼠腹水瘤细胞的凋亡率(%)明显高于缓释化疗组(16.5±1.7 vs 8.1±0.9,P＜0.05),而第12天缓释化疗组明显高于腹腔化疗组(10.1±1.3 vs 7.6±0.8,P＜0.05).实验第9、12天,腹腔化疗组和缓释化疗组瘤细胞凋亡率均明显高于生理盐水对照组和缓释对照组(P＜0.05),后两者无显著差异.电镜观察结果显示腹腔化疗组和缓释化疗组腹水瘤细胞呈典型的凋亡形态学变化,而对照组瘤细胞形态无明显变化.结论:5-FU腹腔缓释化疗较腹腔化疗延长了荷瘤小鼠的生存期,对腹腔内肿瘤细胞的抑制作用较持久.     

苦参碱对小鼠H22细胞抗肿瘤作用的实验研究

目的:观察苦参碱在体内和体外的抗肿瘤作用.方法:MTT法检测苦参碱对小鼠腹水瘤细胞H22的体外杀伤作用;Annexin V-FITC/PI双标记法检测苦参碱对体外培养的H22细胞的诱导凋亡作用;在BALB/C小鼠H22移植瘤模型上观察苦参碱的体内抑瘤活性,透射电镜观察苦参碱治疗后荷瘤小鼠肝癌细胞的超微结构改变;免疫组化法检测荷瘤小鼠肝癌组织中Bcl-2、Bax蛋白表达.结果:苦参碱在体外能够明显抑制H22细胞的生长和增殖,并可诱导细胞凋亡;对小鼠肿瘤生长也有明显抑制作用,高、低浓度组抑瘤率分别为60.71%和62.53%;用药组小鼠肿瘤组织中,电镜下可见较为典型的细胞凋亡的形态学改变;肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达增强,与荷瘤对照组相比有显著性差异(P＜0.01).结论:苦参碱在体内外对H22肿瘤细胞生长均有抑制作用,同时可促进肿瘤细胞表达Bax蛋白,抑制Bcl-2表达,诱导肿瘤细胞凋亡.     

雷公藤内酯醇对红白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响

目的探讨雷公藤内酯醇对人类红白血病K562细胞株增殖和凋亡的影响。方法运用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术(FCM)等检测雷公藤内酯醇对K562细胞株增殖和凋亡的影响。结果雷公藤内酯醇能明显抑制K562细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性,作用24h时其半数抑制浓度IC50为25nmol/L。且经雷公藤内酯醇处理后K562细胞G1/S期所占的百分比较对照组上升(P<0.05)。雷公藤内酯醇作用48h,其浓度的变化与K562细胞凋亡率具有相关性(r=0.97,P<0.05),而作用24h时,则无明显诱导凋亡的作用。结论雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力,干扰K562细胞周期,上调细胞G/S期检测点,并具有促进细胞凋亡的作用。     

重组腺病毒HBx体内抑制恶性肿瘤细胞的实验研究

目的 探讨人乙肝病毒x蛋白(HBx)在体内对肿瘤细胞增殖能力的影响.方法 利用连接有增强型绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-eGFP),在体外感染H22肿瘤细胞,观察腺病毒对H22细胞的感染效率;在小鼠腹腔内接种小鼠肝癌H22细胞,建立恶性腹水模型,腹腔注射重组腺病毒HBx(Ad-HBx)、空载腺病毒(Ad-null)或生理盐水(对照组),检测腹水肿瘤细胞内的HBx蛋白表达并观察其对肿瘤细胞增殖能力、腹水形成及腹膜渗透性、红细胞等腹水性状的影响.结果 腺病毒体外对H22细胞有高的感染效率.HBx蛋白能在腹水肿瘤细胞中表达,在体内环境中Ad-HBx能改善腹膜的渗透性(P<0.05),抑制小鼠腹水生成(P<0.05),使腹水中的红细胞、癌细胞水平明显减少(P<0.05),流式细胞术分析提示Ad-HBx使腹水中的肿瘤细胞周期有明显G2/M阻滞.结论 体内环境中Ad-HBx能在肿瘤细胞内表达HBx蛋白,通过细胞周期阻滞明显抑制肿瘤细胞的增殖能力,有望成为治疗癌性腹水的一种新方法.     

清热解毒和补益中药对小鼠腹水肝癌H22细胞的作用及免疫学机制比较

【目的】比较清热解毒中药和补益类中药对小鼠腹水肝癌H22细胞的作用及免疫学机制。【方法】选择冬凌草、半枝莲为清热解毒中药代表药,并与补益代表药黄芪进行比较;将50只KM小鼠随机分为模型组、冬凌草组、半枝莲组、黄芪组和热休克处理对照组(热休克组)。在活体肝癌H22腹水细胞腹腔接种后当天,冬凌草组、半枝莲组和黄芪组分别以30、 15、15 g·kg-1·d-1的剂量灌胃给药,连续12 d;热休克组小鼠以43℃热处理20 min,每4天1次,共3次;模型组不予任何处理。12 d后处死小鼠,分别抽取腹水制片,光镜下观察细胞形态,并采用免疫组化法检测腹水CD4 、CD8 T细胞表达。【结果】冬凌草组、半枝莲组和热休克组见腹水肝癌H22细胞大量坏死和凋亡,黄芪组对肿瘤细胞形态无明显影响;冬凌草组和半枝莲组腹水中CD4 、CD8 表达均升高,而热休克组则主要是CD8 表达升高,黄芪组以CD4 表达升高为主。【结论】清热解毒中药可致小鼠腹水肝癌H22细胞坏死和凋亡,机制可能与其提高细胞免疫功能,从而增强机体对肿瘤细胞的免疫杀伤能力有关。黄芪未见有直接杀伤肿瘤细胞的作用,其抗肿瘤作用可能主要是通过提高CD4 的表达而实现的。     

雷公藤内酯醇对肺癌荷瘤小鼠髓系抑制性细胞的影响及机制研究

目的探讨雷公藤内酯醇对肺癌髓系抑制性细胞（myeloidderivedsuppressorcells,MDSC）的影响及其分子机制。方法将6~8周龄C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、雷公藤内酯醇组、内质网应激抑制剂（4-PBA）组和4-PBA+雷公藤能内酯醇组4组,每组8只。取5×106个/mlA549细胞接种于小鼠腋下皮下,建立肺癌移植瘤模型;雷公藤内酯醇组每日腹腔注射0.2ml（浓度为1滋g/ml）雷公藤内酯醇+0.4ml0.9%氯化钠注射液,4-PBA组每日腹腔注射0.4ml（浓度为100滋g/ml）4-PBA+0.2ml0.9%氯化钠注射液,4-PBA+雷公藤内酯醇组每日注射0.2ml雷公藤内酯醇和0.4ml4-PBA,对照组给予腹腔注射等量的0.9%氯化钠注射液。每周监测小鼠的肿瘤体积变化,第21天处死小鼠剥离皮下肿瘤,并测量肿瘤的重量;分离提取脾脏组织细胞,采用流式细胞术分析各组MDSC细胞数量;用流式细胞术分选MDSC,膜联蛋白V/碘化丙啶双染法分析MDSC细胞凋亡,RT-qPCR法分析MDSC中重组人精氨酸酶1（ARG1）、一氧化氮合酶（iNOS）;Westernblot法分析MDSC中Bcl-2、Bax、CHOP、GRP78和PERK的表达水平。结果与对照组相比,雷公藤内酯醇组肿瘤体积、肿瘤质量均明显降低,MDSC比例、ARG1、iNOSmRNA表达均明显下降,MDSC细胞凋亡率、CHOP、GRP78和PERK表达均明显增加（均P＜0.05）;与雷公藤内酯醇组相比,4-PBA+雷公藤内酯醇组肿瘤体积、肿瘤质量均增加,MDSC比例、ARG1、iNOSmRNA均明显增加,细胞凋亡率和CHOP、GRP78和PERK表达均明显降低（均P＜0.05）;与4-PBA组相比,4-PBA+雷公藤能内酯醇组肿瘤体积、肿瘤质量均明显降低（均P＜0.05）。结论雷公藤内酯醇对肺癌A549细胞移植瘤具有抑制作用,其机制与雷公藤内酯醇诱发内质网应激抑制MDSC有关。     

海芋石油醚部位对肝癌H22荷瘤小鼠的抑制及诱导凋亡作用研究

[目的]探讨海芋石油醚部位对肝癌H22荷瘤小鼠的抑制及诱导凋亡作用。[方法]建立小鼠肝癌H22移植瘤模型,随机分为模型组,顺铂组和海芋石油醚部位0.8 g·kg~(-1)、0.4 g·kg~(-1)、0.2 g·kg~(-1)剂量组。观察小鼠肿瘤生长情况,测定抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数,HE染色法观察肿瘤病理形态,流式细胞术检测H22肿瘤细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡蛋白pro-caspase-8、pro-caspase-3、Bcl-2和Bax表达情况。[结果]海芋石油醚部位0.8 g·kg~(-1)剂量组抑瘤率达31.41%;HE染色法结果表明,海芋石油醚部位能使H22肿瘤细胞出现明显的凋亡形态改变;流式细胞术实验结果表明,随海芋石油醚部位给药剂量的增加,H22肿瘤细胞凋亡率也增加;Western blot结果显示,海芋石油醚部位能下调pro-caspase-8和procaspase-3,增加Bax/Bcl-2的比例。[结论]海芋石油醚部位能抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的生长,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

超声辐射微泡治疗小鼠皮下H22肝癌移植瘤的疗效

目的：研究超声辐射微泡对小鼠皮下H22肝癌移植瘤的治疗作用。方法：建立小鼠H22肝癌腹水瘤皮下移植瘤模型，随机分对照组、单纯超声治疗组和超声微泡组。观察肿瘤生长情况，计算瘤重，对治疗后肿瘤组织进行病理学检查，了解肿瘤细胞坏死和凋亡情况，并进行定量分析。结果：相对于对照组，超声微泡组肿瘤生长延缓，肿瘤坏死面积显著增加，凋亡肿瘤细胞数明显增多（P〈0．05）。结论：超声辐射微泡可显著抑制H22肝癌移植瘤的生长，除杀灭肿瘤细胞外，还可诱导瘤细胞凋亡。     

重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽协同5-氟尿嘧啶对小鼠H22肝癌抑制作用的研究*

【】 目的：探讨重组东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽(rAGAP)增强5-氟尿嘧啶(5-FU)对肝癌H22细胞的抑制作用及机制。方法：采用接种H22肝癌小鼠腹水方法建立模型,随机分为4组。rAGAP组予rAGAP 0.03mg/kg ip,5-FU组予5-FU 10mg/kg ip,联合组予rAGAP 0.03mg/kg, 5-FU 10mg/kg ip,模型组予等体积生理盐水ip。用药持续3周。用药结束后取出肿瘤组织标本,检测各组肿瘤质量和抑瘤率,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率,Westernblot方法检测PI3K、AKT、PTEN蛋白表达。结果：与模型组相比,其他各组小鼠肿瘤质量均明显降低(P＜0.5);联合组抑瘤率明显高于rAGAP组和5-FU组(P＜0.5)。与模型组相比,其他各组PI3K、P-Akt表达均明显减弱,PTEN表达明显增强(P＜0.5);与5-FU组、rAGAP组相比,联合组PI3K、P-Akt表达均明显减弱,PTEN表达明显增强(P＜0.5)。结论：rAGAP能增强5-FU对肝癌组织的抑制作用,其机制可能与影响PI3K/ AKT/PTEN信号通路,进而抑制肝癌细胞的增殖有关。     

5一FU静脉、腹腔化疗诱导小鼠腹水瘤细胞凋亡研究

为探讨5－Fu静脉和腹腔给药途径诱导小鼠腹水瘤细胞凋亡的规律及其抗肿瘤作用机制，将45只腹腔内接种H22细胞的小鼠随机分为对照、静脉和腹腔内化疗3组。各组于注药后第3、5、7d分别收集腹水细胞行细胞形态观察、DNA电泳分析和流式细胞仪检测。结果显示，化疗组腹水细胞均呈现典型细胞凋亡形态学特征，同时可见细胞坏死。细胞凋亡率呈时间依赖性（P＜0．01），且腹腔内化疗组细胞凋亡率各时间点均明显高于静脉组（P＜0．01），提示5－Fu抗肿瘤作用机制是引起肿瘤细胞死亡和诱导和诱导肿瘤细胞凋亡共同作用的结果：腹腔内化疗效果明显优于静脉化疗。     

水流动力学注射介导的IL-12基因对小鼠恶性腹水的治疗作用

目的：应用水流动力学注射基因转移法转移白细胞介素12（IL-12）基因，观察其对小鼠恶性腹水的治疗效果。方法：通过小鼠腹腔注射H₂₂肿瘤细胞建立恶性腹水模型。将小鼠分为3组，接种后第3天通过水流动力学注射方法分别注射质粒pCMV-mIL-12、pCMVβ和生理盐水(NaCl)进行治疗。治疗后一定时间点取血检测血清中IL-12、干扰素-γ（IFN-γ）和一氧化氮（NO）的含量。注射后第14天各组分别处死3只小鼠，测量腹水体积，腹水细胞进行HE和AO/EB染色。其余小鼠用于观察生存期。结果：与只注射pCMVβ或生理盐水的小鼠相比，接受pCMV-mIL-12治疗的小鼠的生存时间明显延长（P<0.01），而且小鼠血清中IL-12、IFN-γ和NO水平明显升高（P<0.01或P<0.05），小鼠腹水中有活力的肿瘤细胞明显减少（P<0.01），凋亡的细胞增多（P<0.01）。结论：水流动力学注射介导的IL-12基因表达减少了恶性腹水小鼠的血性腹水生成并诱导肿瘤细胞凋亡，从而延长了小鼠生存期。     

海藻色素糖蛋白制备及其对小鼠肝癌生长抑制作用

目的 研究麒麟菜海藻色素糖蛋白(SPG)制备及其对小鼠H22肝癌生长的作用.方法 在应用溶剂浸提法从麒麟菜中提取SPG,并对样品进行红外线和紫外线光谱扫描、糖肽键分析及多糖和蛋白质的含量测定的基础上,将接种H22肝癌细胞的小鼠分别每天经口灌胃给予高、中、低剂量(100、50、10 mg/kg)的SPG,连续10 d.模...     

倍他司汀对荷瘤肝癌小鼠生存时间及肉瘤瘤重的影响

目的 研究倍他司汀对荷瘤肝癌小鼠生存时间及肉瘤瘤重的影响。方法 采用小鼠移植性肿瘤肝癌H22、肉瘤S180的体内试验方法,以环磷酰胺为阳性对照药,观察倍他司汀不同剂量组对荷瘤肝癌H22小鼠生存天数、生命延长率及荷瘤S180小鼠瘤重、抑瘤率、胸腺和脾脏系数的影响。结果 6．67mg／kg、13．33mg／kg、26．67mg／kg倍他司汀组的肝癌H22小鼠生命延长率分别为5.48％、8.22％、16.44％,与剂量呈一定的正相关,26.67mg／kg倍他司汀组的生存天数显著延长（与生理盐水组比较,P〈0．05）;6．67mg／kg、13．33mg／kg、26．67mg／kg倍他司汀组的S180小鼠抑瘤率分别为6．83％、9．13％、18．05％,与剂量呈一定的正相关,26．67mg／kg倍他司汀组的S180小鼠瘤重显著减少（与生理盐水组比较,P〈0．05）。结论 倍他司汀对荷瘤肝癌H22小鼠有延长生存时间的作用,对S180肉瘤有抑制作用。     

沙利度胺抑制小鼠T淋巴瘤的实验研究

目的观察沙利度胺对小鼠T淋巴瘤的抑制作用。方法 32只BALB/C小鼠皮下接种鼠T淋巴瘤白血病细胞（EL-4细胞）建立模型,第2天随机分成4组,每组8只：①阴性对照组：小鼠8只,生理盐水灌胃25 mL/（kg.d）;②低剂量组：小鼠8只,沙利度胺灌胃50 mg/（kg.d）共14 d;③中剂量组：小鼠8只,沙利度胺灌胃200 mg/（kg.d）共14 d;④高剂量组：小鼠8只,沙利度胺灌胃400 mg/（kg.d）共14 d。每2日测肿瘤直径,计算体积,用药后15 d处死小鼠,分离肿瘤,计算抑瘤率。第2批小鼠同样方法处理,记录平均生存期。用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数。RT-PCR法测TNF-αmRNA表达。结果各组瘤重较阴性对照组减小,抑瘤率分别为17.75%,36.73%,42.04%,差异有统计学意义（P〈0.05）。各组生存期与阴性对照组相比延长,差异有统计学意义（P〈0.05）。沙利度胺各组肿瘤坏死因子表达下调,凋亡细胞增多,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论沙利度胺能抑制小鼠T淋巴瘤生长,延长荷瘤小鼠平均生存期,而抑制TNF-α的表达,诱导凋亡可能是其机制之一。     

姜黄素对人肝癌SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制

目的:探究姜黄素对人肝癌SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其潜在机制。方法:采用人肝癌SMMC-7721细胞建立肝癌移植瘤模型,将20只荷瘤裸鼠均分为对照组和10、50、100 mg/kg姜黄素组,每组5只,均采用腹腔注射给药,分别给予生理盐水及对应剂量姜黄素,每日1次,每次200μL,连续16 d。自给药当天起,隔天观察和记录各组裸鼠体重和瘤体体积;16 d后麻醉裸鼠,分离瘤组织,记录瘤重并计算抑瘤率;采用蛋白免疫印迹法测定瘤组织中内质网应激通路相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平;采用免疫组织化学法检测瘤体组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和需肌醇酶(IRE1)阳性表达水平。结果:不同剂量姜黄素组裸鼠体重增长无显著差异(P>0.05),但50和100 mg/kg姜黄素组裸鼠移植瘤体积生长较对照组和10 mg/kg姜黄素组明显减小(P均<0.05)。10、50和100 mg/kg姜黄素组抑瘤率分别为35.3%、45.7%、54.7%。蛋白印迹结果显示,与对照组相比,50、100 mg/kg姜黄素组GRP78、IRE1、C/EBP同源蛋白(CHOP)以及Cle...     

Investigation on the Effects of Soluble Programmed Death-1 （sPD-1）Enhancing Anti-tumor Immune Response

Summary: By using semi-quantitative RT-PCR method, it was found that PD-L1 mRNA but not PD-L2 mRNA was expressed in H22 hepatoma cells and both PD-L1 and PD-L2 mRNAs were expressed in tumor tissues of tumor bearing mice and upregulated as compared with muscle tissues in normal mice and H22 hcpatoma cells. PD-L1 and PD-L2 were also expressed on the surface of the activated T cells. The soluble recombinant sPD-1 expressed from the constructed eukaryotic expression vector could enhance the lysis of tumor cells by lymphocytes stimulated specifically with antigen. The expresssion of sPD-1 by local gcne therapy on the inoculation site of H22 hepatoma cells could inhibit the growth of tumor. The results of this study indicate tbat expression of soluble receptor of negative costimulatory molecules could reduce the inhibitory effect on T cells in tumor microenvironment and enhance the eytotoxicity of T cells on tumor cells. This possibly provides a new method of improving efficacy of tumor gene therapy.