阻断p38MAPK信号通路对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的影响

【目的】探讨阻断p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路对大鼠急性肾缺血再灌注损伤（IRI）的影响。【方法】sD大鼠24只,随机分为3组,每组8只。对照组（S组）：仅结扎右侧肾蒂,左肾蒂游离;缺血再灌注组（IR组）：结扎右侧肾蒂,夹闭左侧肾蒂60min后,开放灌注24h;p38MAPK抑制剂组（SB组）：静脉注射p38MAPK特异抑制剂SB203580（10mg／kg）,余同IR组。检测三组血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、肿瘤坏死因子（TNF）-α、白介素（IL）-I水平和p38MAPK蛋白表达、组织病理评分并比较。【结果】与S组比较,IR组血BUN、Cr、TNF—α、IL-1水平、p38MAPK蛋白表达量及组织病理评分均显著增加（P〈0．05）;上述指标SB组较IR组显著下降（P〈0．05）。【结论】SB203580能阻断p38MAPK信号通路,减少p38MAPK表达,抑制炎症细胞因子的释放,减轻肾缺血再灌注损伤。     

糖尿病加重大鼠脑缺血再灌注损伤的研究

目的：建立稳定的慢性实验性糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤模型，明确糖尿病与正常大鼠脑缺血损伤的异同之处。方法：以链脲佐菌素诱导产生实验性糖尿病大鼠，饲养40d左右，经测定血糖(大于13.5mmol／L)确定糖尿病模型的建立。以线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型，测定脑血流和梗死体积、进行神经功能评分，行苏木精--红染色和Luxol坚牢蓝--甲苯紫染色，观察超微结构的变化．用胶质纤维酸性蛋白标记来观察星形胶质细胞的激活情况。结果：糖尿病大鼠比正常大鼠再灌注时，脑血流恢复差[再灌注23h时，缺血中心区血流分别为(40．3&;#177;7．5)％和(48．2&;#177;5．5)％，半暗区血流分别为(55．0&;#177;5．5)％和(64．5&;#177;5．8)％，t分别为2．40，3．25，P&;lt;0.05]，神经功能评分高(分别为2．85&;#177;1．23和1．23&;#177;0.44，t=4．51，P&;lt;0.01)，梗死体积大[分别占各自对侧体积的(28．3&;#177;8．10)％和(14．8&;#177;7．8)％,t=3.39．P&;lt;0.01]，光镜和电镜观察显示脑组织缺血损害和髓鞘脱失时程提早且更为严重，早期胶质细胞激活差。结论：从组织形态学等方面证实本模型的可靠性和可重复性，揭示实验性糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤重于正常大鼠。     

NRG1β/JNK信号通路在大鼠脑缺血再灌注损伤的作用机制研究

目的探究神经调节素1β(NRG1β)/JNK信号通路在大鼠脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法选取40只6周龄SPF级SD大鼠,随机分为4组,空白对照组、模型组、神经调节素1β组、JNK信号通路抑制剂组。空白对照组不建模,其他三组采用改良线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。造模成功后神经调节素1β组按照2μg/kg的注射比例给大鼠注射NRG1β,JNK信号通路抑制剂组将抑制剂用10%DMSO溶解稀释,向大鼠血管内注入5μl浓度为4 mg/kg的JNK信号通路抑制剂-SP600125。模型组和空白组使用等量的生理盐水处理。采用HE将大鼠脑组织细胞染色,观察缺血脑组织病理改变;采用原位末端标记法(TUNEL)检测缺血后神经细胞凋亡情况;采用改良神经功能缺损评分评价大鼠神经行为功能;检测大鼠脑组织含水量;采用Western blot法检测脑组织JNK表达水平。结果 HE染色结果显示,相比空白对照组,模型组大鼠脑细胞列紊乱、细胞固缩且被染色加深,坏死细胞较多;相比模型组,神经调节素1β组和JNK信号通路抑制剂组大鼠脑细胞显著改善。相比空白对照组,模型组大鼠脑细胞凋亡指数、神经功能缺损评分、大鼠脑组织含水量、p-JNK蛋白表达水平显著升高,且差异有统计学意义(P 0. 01);大鼠脑组织JNK蛋白表达水平无显著变化(P 0. 05);相比模型组,神经调节素1β组和NK信号通路抑制剂组大鼠细胞凋亡指数、神经功能缺损评分、大鼠脑组织含水量、p-JNK蛋白表达水平显著降低,且差异有统计学意义(P 0. 01);大鼠脑组织JNK蛋白表达水平无显著变化(P 0. 05)。结论经NRG1β可以通过抑制JNK信号通路,从而缓解大鼠脑缺血再灌注损伤。     

p38 MAPK抑制物对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及凋亡信号通路的影响

目的探讨p38 MAPK抑制物SB20358(SB)对心肌缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用及凋亡信号通路的影响。方法选择45只250~300 g雄性SD大鼠,通过阻断其左冠状动脉前降支(LAD)30 min再灌注180 min制备I/R损伤模型。随机分3组(n=15):溶剂对照组(Vehicle组)、低剂量SB预处理组(SB-L组)和高剂量SB预处理组(SB-H组);同时选取15只同周龄SD大鼠仅穿线但不结扎(Sham组)。SB-L组和SB-H组分别于LAD结扎前30 min注射50μg/kg、100μg/kg SB,其余两组注射等体积的生理盐水。分别在术前(T0)、缺血30 min后(T1)、再灌注60 min(T2)、120 min(T3)及180 min后(T4)检测各组血浆肿瘤坏死因子(TNF-α)水平及I/R后的心功能情况[舒张末期压力(LVEDP)、左室收缩期平均压(LVSP)、短轴缩短率(FS)和射血分数(EF)],处死大鼠并通过TTC染色分析缺血程度和梗死程度,将心脏组织包埋并采用HE染色观察各组的心肌形态学变化,同时采用Western blot检测心肌梗死区p38及其磷酸化形式的p-p38的蛋白水平。结果与Sham组相比,Vehicle组除T0外的I/R其余时间点的TNF-α水平均升高,LVSP、FS和EF均降低,LVEDP、心肌p-p38/p38值及缺血和梗死程度均升高(P0.05),心肌肌纤维出现断裂溶解及坏死,心肌间质出现水肿且间隙增大,出现坏死灶;给予SB处理后可减轻以上异常指标及心肌病理改变,与Vehicle组的差异均有统计学意义,但仍与Sham组有差异(P0.05)。SB-H组的改善效果优于SB-L组(P0.05)。结论 SB对大鼠心肌I/R损伤有改善作用,可降低心肌缺血及梗死程度,改善心功能和炎症反应并抑制p38 MAPK信号通路活化。     

脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织nNOS的表达

【目的】通过对缺血再灌注早期脑组织神经型一氧化氮合酶（nNOS）表达情况的观察,探讨一氧化氮在脑缺血再灌注损伤早期发挥神经毒性作用时nNOS亚型的变化。【方法】采用线栓法制作大鼠脑缺血／再灌注（CI／R）模型,分别应用免疫组化及westernblot方法检测缺血脑组织nNOS蛋白表达情况。【结果】免疫组化及westernblot研究结果显示缺血区脑组织nNOS的表达在缺血到再灌注2h内始终呈上升趋势。【结论】CI／R大鼠模型缺血区脑组织的nNOS的表达在缺血再灌注早期持续升高,表明缺血脑组织nNOS的表达变化参与了缺血性脑损伤早期的病理过程。     

肌苷对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞巢蛋白表达的影响

背景：肌苷参与机体多方面的代谢过程并对缺血性脑损伤有一定的保护作用，但其机制尚需做进一步研究。目的：研究大鼠缺血性脑损伤后巢蛋白(Nestin)基因表达的变化规律，探讨肌苷治疗中枢神经缺血性损伤的作用机制。设计：随机对照的基础研究。地点和材料：实验地点：青岛大学医学院脑血管病研究所和山东省脑血管病防治重点实验室完成。实验材料：成年健康雌性SD大鼠68只，以线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型。随机分为治疗组和对照组，每组再随机分为缺血1．5h再灌注2，6，12，24h，2，3，7，14d组(n=4)，另外4只作假手术组。干预：所有治疗均由作亲自操作。治疗组大鼠于缺血1．5h再灌注前给予空腹注射肌苷注射液100mg／kg，2次／d。对照组大鼠同步注射相同剂量的生理盐水。所有大鼠置于同样的空间笼养。主要观察指标：应用原位杂交技术检测脑缺血再灌注后脑组织Nestin mRNA的表达。结果：对照组缺血侧Nestin mRNA表达皮质除2h以外、纹状体除2，6h以外、室旁区除2，6h．14d以外各时间点均明显高于假手术组。治疗组Nestin mRNA表达较对照组于2，6h，7，14d在皮质，14d在纹状体有所降低，3d在皮质、纹状体及室旁区均显升高，7d仅在纹状体、室旁区显升高。结论：肌苷可以促进大鼠脑缺血再灌注后Nestin mRNA的表达，从而达到神经组织结构和功能恢复的目的。     

西比灵对大鼠急性及缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的 进一步探讨西比灵对急性脑缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法 采用Ｐｕｌｓｉｎｅｌｌｉ四血管闭塞法制备大鼠急性脑缺血再灌注模型,利用Ｔｓｕｃｈｉｄａ的ＷＳＰＳ法测定ＬＰＯ,利用化学发光法测定ＳＯＤ活性,同时观察了脑组织水含量及病理变化,并观察西比灵对上述指标影响。结果 ①脑缺血后脑组织水含量升高,再灌注后升高更明显,西比灵能明显降低脑缺血再灌注期间脑水含量。②西比灵降低ＬＰＯ含量,稳定ＳＯＤ活     

大鼠全脑缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡研究

目的：探讨在大鼠全脑缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡的作用与意义。方法：采用四血管闭塞法复制大鼠全脑缺血再灌注模型,在光镜,电镜水平观察损伤病灶形态学改变,利用原位末端标记（TUNEL）法定量检测细胞凋亡指数。结果;大鼠全脑缺血30min后再灌注,细胞凋亡的发生随着缺血再灌注损伤时间变化,呈动态性改变,凋亡指数在再灌注24h达高峰,形态学观察预见细胞凋亡与坏死并存,结论：急性全脑缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡与坏死同时存在,表明细胞凋亡参与急生全脑缺血再灌注的损伤过程。     

SIRT1/FOXO1信号通路对小鼠脑缺血再灌注损伤的调控作用

目的 探讨沉默信号调节器1(SIRT1)/叉头转录因子(FOXO1)信号通路对小鼠脑缺血再灌注损伤的调控作用。方法 24只清洁级C57雄性小鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组(I/R组)、SIRT1FOXO1信号通路抑制组(实验组),每组8只小鼠。I/R组与实验组采用夹闭、开放双侧颈总动脉法建立脑缺血再灌注损伤小鼠模型,同时实验组给予EX527(SIRT1抑制剂)腹腔注射,I/R组和假手术组腹腔注射等剂量的生理盐水。比较三组的神经功能缺损评分、脑组织含水量、感觉功能和行走协调能力评分,血浆中白介素-6(IL-6)、白细胞介素1(IL-1β)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,SIRT1、FOXO1、NF-E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达量,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、BCL-2关联蛋白X(Bax)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9) mRNA表达,超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量。结果与假手术组相比,I/R组经功能缺损评分、行走协调能力评分和感觉功能、脑组织含水量、炎症因子水平、FOXO1蛋白表达、BAX、Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达以及氧化应激指标NO和MDA含量均显著增加(P <0. 05),Nrf2、SIRT1和HO-1蛋白表达、Bcl-2 mRNA表达以及SOD和GSH含量均显著降低(P <0. 05);与I/R组相比,实验组所有指标变化更显著。结论 抑制SIRT1/FOXO1信号通路后,脑缺血/灌注小鼠神经功能降低,脑损伤程度均加重,由此推测SIRT1/FOXO1信号通路的激活与抑制脑缺血/灌注后的炎症反应、减轻氧化应激作用以及减缓细胞凋亡进程相关。     

针刺对缺血性脑卒中大鼠MBP基因表达的影响

目的：从MBP基因表达水平来观察针刺对缺血性脑卒中大鼠受损髓鞘的神经保护作用。方法：选用48只成年雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、早期针刺组、晚期针刺组。用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型。分别于缺血后不同时间点进行针刺。应用半定量RT-PCR法、实时荧光定量PCR法对各组在实验开始后不同时间点缺血灶MBP基因转录水平进行动态观察。结果：①模型组缺血灶MBP mRNA的含量随着观察时间的延长逐渐升高,在第7天时明显升高（P<0.05）;②与模型组相比,针刺组在各个时间点的脑MBP mRNA含量随着时间的推移迅速增高（P<0.05）;③与晚期针刺组比较,早期针刺组脑MBP mRNA含量增高的幅度更高、速度更快（P<0.05）。结论：脑缺血后,针刺可能是通过明显刺激MBP基因转录,使MBP合成增多,从而促进髓鞘再生。早期针刺更有利于刺激MBP基因的转录。     

高渗盐水对脑缺血大鼠Notch信号通路的影响

目的：探讨高渗盐水（ hypertonic saline, HS）对大鼠脑缺血后小胶质细胞Notch信号通路的影响。方法 SPF级-雄性SD大鼠随机（随机数字法）分为假手术组,脑缺血组,生理盐水（ NS）组,10％高渗盐水（10％HS）组。除假手术组外,其他各组采用线栓法复制右侧大脑中动脉栓塞脑缺血模型,缺血2 h后实施再灌注24 h, NS组和10％HS组按0.3 mL／h经尾静脉分别匀速泵入NS和10％HS治疗24 h。然后采用免疫荧光法、 RT-PCR、 Western blot检测各组大鼠脑缺血灶周围Notch1及Notch受体的胞内片段NICD的表达。数据采用单因素方差分析,用LSD法进行组间两两比较,以P＜0.05为差异具有统计学意义。结果免疫荧光表明与假手术组比较,脑缺组和NS组缺血灶周围小胶质细胞Notch1与NICD的表达明显增加;10％HS组与脑缺血组及NS组比较,缺血灶周围小胶质细胞Notch1与NICD的表达明显减少。 RT-PCR表明脑缺血组及NS组与对照组比较, Notch1 mRNA的表达明显增加（对照组：1.000±0.076;脑缺血组：2.203±0.283; NS组：1.616±0.185; P＜0.01）;10％HS组与脑缺血组及NS组比较, Notch1 mRNA的表达均明显减少（脑缺血组：2.203±0.283; NS 组：1.616±0.185; HS 组：1.202±0.177; P ＜0.05）。 Western blot表明脑缺血组和 NS 组与对照组相比,脑缺血灶周围 Notch1蛋白表达明显增加（对照组：0.290±0.079;脑缺血组：0.750±0.029; NS 组：0.765±0.182; P ＜0.01）;10％HS 治疗后, Notch1蛋白表达较脑缺血组和NS组明显减少（脑缺血组：0.750±0.029; NS组：0.765±0.182;HS组：0.390±0.195; P＜0.05）。脑缺血组和NS组与对照组比较,大鼠脑缺血灶周围NICD蛋白表达明显增加（对照组：0.401±0.196;脑缺血组：0.906±0.359; NS组：0.847±0.153; P＜0.01）;10％HS治疗后, NICD蛋白表达较脑缺血组和NS组明显减少（脑缺血组：0.906±0.359;NS组：0.847±0.153; HS组：0.561±0.165; P＜0.05）。结论 HS可抑制大鼠脑缺血后小胶质细胞上Notch信号通路的激活。     

DNA damage induces a novel p53-survivin signaling pathway regulating cell cycle and apoptosis in acute lymphoblastic leukemia cells

Survivin is a novel member of the inhibitor of apoptosis protein (IAP) family. Here we report that the chemotherapeutic drug doxorubicin, a DNA-damaging agent, activates a p53-survivin signaling pathway inducing cell cycle arrest and apoptosis in childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL). Treatment of wild-type (wt) p53 ALL cells (EU-3 cell line) with doxorubicin caused accumulation of p53, resulting in dramatic down-regulation of survivin, depletion of cells in G(2)/M, and apoptosis (increased sub-G(1) compartment). In contrast, doxorubicin treatment of mutant (mut) p53 cells (EU-6/ALL line) up-regulated survivin and induced G(2)/M arrest without inducing apoptosis. However, treating EU-6 with anti-survivin antisense resensitized these cells to doxorubicin, resulting in apoptosis. With a p53-null cell line (EU-4), although doxorubicin treatment arrested cells in G(2)/M, survivin expression was unchanged, and cells underwent only limited apoptosis. However, re-expression of wt-p53 in EU-4 cells could restore the doxorubicin-p53-survivin pathway, resulting in significantly decreased survivin expression and increased apoptosis in these cells after doxorubicin treatment. Following cotransfection of p53-null EU-4 cells with survivin promoter-luciferase constructs and either wt-p53 or different mut-p53 expression vectors, wt-p53 inhibited survivin promoter activity; p53-mediated inhibition could be abrogated by overexpression of murine double minute2 (MDM2) protein. Together, these studies define a novel p53-survivin signaling pathway activated by DNA damage that results in down-regulation of survivin, cell cycle arrest, and apoptosis. Furthermore, our data indicate that loss of wt-p53 function in tumor cells may contribute to up-regulation of survivin and resistance to DNA-damaging agents.     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA在淋巴滞留性脑病大鼠脑皮质及海马的表达

目的：探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA在淋巴滞留性脑病大鼠脑皮质及海马中的表达情况及其与神经元凋亡之间的关系。方法：选取成年雄性Wistar大鼠88只，随机分为脑淋巴引流阻断组40只、假手术组40只及正常对照组8只。脑淋巴引流阻断组和假手术组分为术后1，3，5，7，14d5个时间点，每个时间点8只。脑淋巴引流阻断组建立淋巴滞留性脑病动物模型，在损伤后各时间点取颞顶皮质、海马区脑组织。假手术组只分离和暴露淋巴结，但不结扎淋巴管，亦不摘除淋巴结。用半定量反转录-聚合酶链反应方法观察淋巴滞留性脑病大鼠损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA的表达情况。结果 88只大鼠均进入结果分析。①在颞顶皮质，Caspase3mRNA在淋巴阻塞后3d内表达上调，以第1天表达最高，淋巴阻塞后3d内Caspase 3mRNA表达比假手术组及对照组高，且有统计学意义（F=29．892，P=0．001〈0．01）。淋巴阻塞3d后表达接近正常对照及假手术组。对照组与假手术组之间差异无统计学意义。②在海马，Caspase 3mRNA较颞顶皮质表达上调更明显，以第1天表达最高，淋巴阻塞后5d内Caspase-3mRNA表达比假手术组及对照组高，差异有统计学意义（P〈0．05），5d后表达接近正常对照及假手术组。结论：在淋巴滞留性脑病大鼠模型中神经元凋亡的发生可能与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3mRNA的激活有关。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 mRNA在淋巴滞留性脑病大鼠脑皮质及海马的表达

目的:探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA在淋巴滞留性脑病大鼠脑皮质及海马中的表达情况及其与神经元凋亡之间的关系。方法:选取成年雄性Wistar大鼠88只,随机分为脑淋巴引流阻断组40只、假手术组40只及正常对照组8只。脑淋巴引流阻断组和假手术组分为术后1,3,5,7,14d5个时间点,每个时间点8只。脑淋巴引流阻断组建立淋巴滞留性脑病动物模型,在损伤后各时间点取颞顶皮质、海马区脑组织。假手术组只分离和暴露淋巴结,但不结扎淋巴管,亦不摘除淋巴结。用半定量反转录-聚合酶链反应方法观察淋巴滞留性脑病大鼠损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA的表达情况。结果:88只大鼠均进入结果分析。①在颞顶皮质,Caspase3mRNA在淋巴阻塞后3d内表达上调,以第1天表达最高,淋巴阻塞后3d内Caspase3mRNA表达比假手术组及对照组高,且有统计学意义(F=29.892,P=0.001<0.01)。淋巴阻塞3d后表达接近正常对照及假手术组。对照组与假手术组之间差异无统计学意义。②在海马,Caspase3mRNA较颞顶皮质表达上调更明显,以第1天表达最高,淋巴阻塞后5d内Caspase-3mRNA表达比假手术组及对照组高,差异有统计学意义(P<0.05),5d后表达接近正常对照及假手术组。结论:在淋巴滞留性脑病大鼠模型中神经元凋亡的发生可能与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3mRNA的激活有关。     

大鼠背根神经节持续压迫后miRNA差异表达谱的分析及功能研究

摘要 目的：对大鼠背根神经节（dorsal root ganglion, DRG）持续压迫后所致神经病理性疼痛（neuropathic pain, NP）模型的DRG组织进行miRNA测序,应用生物信息学技术分析差异表达的miRNA及其靶基因在疾病中的定位与功能。 方法：采用随机分组法将大鼠分为2组,每组12只,分别为假手术组、CCD背根神经节持续压迫（chronic compression of the dorsal root ganglion, CCD）模型组,术后进行行为学检测。确定痛觉敏感的天数后重复造模,取材后进行miRNA转录组测序。利用生物信息学手段筛选具有显著性差异的miRNA,预测相关靶基因并对其GO功能及KEGG富集情况进行分析,使用在线数据库对miRNA与靶基因之间的属性关系建立miRNA-靶基因的调控网络。最后,通过qPCR验证差异最为显著的4条miRNA在CCD模型DRG组织中的表达情况。 结果：CCD造模7天后,大鼠痛觉最为敏感。重复造模,在第7天取材并进行miRNA转录组测序。将差异表达的miRNA以|log2（fold change）|>1且P<0.05为阈值,筛选符合要求的miRNA,与假手术组相比,有57种miRNA在CCD模型组表达上调,有17种miRNA在CCD模型组表达下调。差异表达的miRNA对应的靶基因主要富集在外泌体、细胞质、细胞膜、线粒体、内质网等结构,在细胞固有免疫、炎症信号传导、氧化应激等生物学过程中发挥重要作用,在PI3K-AKT、MAPK、JAK-STAT、钙信号等通路上均存在富集。经实验验证,miR-21-3p、miR-675-5p、miR-487b-5p、miR-3585-3p的表达与测序结果一致。 结论：在大鼠背根神经节慢性压迫所致NP模型的DRG组织中,异常表达的miRNA及其富集的相关信号通路可为NP诊断和治疗的新靶点提供新的思路。     

氙气后处理对脊髓缺血再灌注损伤的效果：Akt信号通路和自噬机制

目的 探讨氙气后处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)后自噬的影响及其与苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路的关系。方法 30只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脊髓缺血再灌注组(I/R组)和氙气后处理组(Xe组),每组10只。后两组通过夹闭腹主动脉85 min,再灌注4 h建立大鼠SCIRI模型。于再灌注1 h时,Xe组经呼吸机吸入50%氙气+50%氧气混合气1 h。其余两组吸入50%氮气+50%氧气混合气1 h。再灌注4 h时,对大鼠行BBB评分和斜板试验后,收集L_3-5脊髓,Nissl染色计数正常神经元数量,Western blotting检测脊髓组织中Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、自噬蛋白[p62、Beclin 1、微管相关蛋白1轻链3 (LC3)Ⅰ和LC3Ⅱ]的表达,逆转录实时定量聚合酶链反应检测脊髓组织中p62、Beclin 1和LC3Ⅱ mRNA的表达。结果 与Sham组相比,I/R组后肢BBB评分明显降低(P <0.01),斜板试验最大倾斜度明显减小(P <0.01),正常神经元数量明显减少(...     

神经节苷脂对脑缺血再灌注大鼠突触素p38表达的影响

目的:观察神经节苷脂对大鼠脑缺血再灌注后突触素p-38表达的影响。方法:成年健康雌性Wistar大鼠54只,随机分为神经节苷脂治疗组、对照组和假手术组,每组18只。采用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注动物模型,假手术组不插入尼龙线。神经节苷脂治疗组大鼠在大脑中动脉缺血再灌注手术前2h和术后每天脑室注神经节苷脂10g/L,对照组同步脑室注射等量10μL生理盐水,两组分别于治疗后6h,1,3,7,14,21d各取3只,40g/L多聚甲醛心脏灌注固定,取脑备用。假手术组不作处理,于相应时间点心脏灌注固定,取脑备用。应用免疫组织化学方法观察神经节苷脂对p-38表达的影响。结果:54只大鼠均进入结果分析。①大体观察:在大脑中动脉缺血再灌注24h后左侧大脑中动脉供血区脑组织肿胀、苍白,第7天可见顶叶颗粒状局部脑组织萎缩,第14天有坏死囊腔形成。②p38表达:假手术组在皮质、纹状体和海马区p38表达很弱,左右对称,其校正吸光度值在不同时间点比较,差异无显著性意义。对照组纹状体背外侧梗塞周围区,p38的免疫活性于再灌注6h和1d未出现明显变化,第3天可见升高,第7天达到高峰,第14天明显下降,第21天下降至假手术组水平。在缺血侧顶叶皮质亦可见到p38的免疫活性在3d后明显升高,在21d已接近假手术组水平。脑缺血再灌注3～7d,p38免疫活性最高,免疫产物的颗粒较大,其校正吸光度值显著高于假手术组(P<0.05)。脑室注射外源性神经节苷脂组,各脑区p38的表达较对照组略有增强,各个时间点的校正吸光度值与对照组比较差异无显著性意义。结论:脑室注射外源性神经节苷脂后,各脑区P38免疫反应活性有所增加,但差异不显著,不能得出神经节苷脂与P38的直接因果关系,亦不能断然否定两者间的内在联系。     

神经节苷脂对脑缺血再灌注大鼠突触素p38表达的影响

目的：观察神经节苷脂对大鼠脑缺血再灌注后突触素p-38表达的影响.方法：成年健康雌性Wistar大鼠54只,随机分为神经节苷脂治疗组、对照组和假手术组,每组18只.采用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注动物模型,假手术组不插入尼龙线.神经节苷脂治疗组大鼠在大脑中动脉缺血再灌注手术前2 h和术后每天脑室注神经节苷脂10g/L,对照组同步脑室注射等量10 μL生理盐水,两组分别于治疗后6 h,1,3,7,14,21 d各取3只,40g/L多聚甲醛心脏灌注固定,取脑备用.假手术组不作处理,于相应时间点心脏灌注固定,取脑备用.应用免疫组织化学方法观察神经节苷脂对p-38表达的影响.结果：54只大鼠均进入结果分析.①大体观察：在大脑中动脉缺血再灌注24 h后左侧大脑中动脉供血区脑组织肿胀、苍白,第7天可见顶叶颗粒状局部脑组织萎缩,第14天有坏死囊腔形成.②p38表达：假手术组在皮质、纹状体和海马区p38表达很弱,左右对称,其校正吸光度值在不同时间点比较,差异无显著性意义.对照组纹状体背外侧梗塞周围区,p38的免疫活性于再灌注6 h和1 d未出现明显变化,第3天可见升高,第7天达到高峰,第14天明显下降,第21天下降至假手术组水平.在缺血侧顶叶皮质亦可见到p38的免疫活性在3 d后明显升高,在21 d已接近假手术组水平.脑缺血再灌注3～7 d,p38免疫活性最高,免疫产物的颗粒较大,其校正吸光度值显著高于假手术组（P＜0.05）.脑室注射外源性神经节苷脂组,各脑区p38的表达较对照组略有增强,各个时间点的校正吸光度值与对照组比较差异无显著性意义.结论：脑室注射外源性神经节苷脂后,各脑区P38免疫反应活性有所增加,但差异不显著,不能得出神经节苷脂与P38的直接因果关系,亦不能断然否定两者间的内在联系.