苗药黑骨藤追风活络胶囊研究进展及质量标志物预测分析

苗药黑骨藤追风活络胶囊是苗药复方药,是治疗类风湿性关节炎的代表药物,疗效显著。其作为上市多年的复方药物仍然存在质量控制评价体系不完备等问题。为进一步提升黑骨藤追风活络胶囊的质量标准,对其现有研究进行调研综述,并以中药质量标志物(Q-Maker)的“五原则”对黑骨藤追风活络胶囊进行质量标志物预测。结果提示,绿原酸、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草素、刺槐素、青藤碱、青风藤碱可作为黑骨藤追风活络胶囊的Q-Marker,为黑骨藤追风活络胶囊的质量标准研究提供参考。     

基于质量标志物-有效对照提取物模式的黑骨藤质量评价

目的 明确黑骨藤抗类风湿性关节炎药效物质基础、质量标志物，建立该药材质量评价体系。方法 采用CIA模型药理学实验验证黑骨藤对照提取物的抗类风湿关节炎作用，UPLC法测定黑骨藤有效对照提取物含量，构建其抗类风湿性关节炎功效的质量评价体系，并应用于药材质量控制。结果 黑骨藤对照提取物、对照品可有效缓解足趾肿胀，减小关节炎评分、CIA大鼠血清促炎细胞因子水平，改善组织病理学变化。对照提取物法、单体对照品法含量测定结果基本一致。新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、绿原酸甲酯、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C为质量标志物。结论 该方法具有检测指标多、效率高、成本低等优点，可为构建黑骨藤及其他中药质量评价新模式提供借鉴。     

基于大鼠类风湿性关节炎模型建立黑骨藤的PK-PD模型

目的建立黑骨藤的药动学(PK)-药效学(PD)模型。方法大鼠右后足足垫皮内注射0.1 mL完全弗氏佐剂(CFA),建立大鼠佐剂型关节炎(AA)模型,大鼠ig黑骨藤提取物(87 g/kg),2次/d,连续14 d。于末次给药后5、15、30、45 min,1、1.5、2、3、4、6、8、12、24 h经尾静脉取血,采用液质联用法(HPLC-MS/MS)检测血浆样本中3-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-咖啡酰基奎宁酸、5-O-咖啡酰基奎宁酸的质量浓度,获得药时曲线;采用试剂盒测定血浆样本中白细胞介素-1β(IL-1β)、类风湿因子(RF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,获得时效曲线;采用WinNonLin软件房室模型分析方法拟合黑骨藤的PK参数;固定PK参数,对时效关系进行拟合,得到PD参数;根据PD参数建立黑骨藤的PK-PD模型。结果根据WinNonLin软件拟合黑骨藤的PK-PD模型符合Inhibitory Effect Sigmoid E0模型,在该PK-PD模型下可以通过3-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-咖啡酰基奎宁酸、5-O-咖啡酰基奎宁酸的血药浓度计算相应的药效值,也可以根据药效值计算相应的血药浓度。结论 IL-1β、RF、TNF-α的质量浓度与3-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-咖啡酰基奎宁酸、5-O-咖啡酰基奎宁酸的血药浓度存在一定相关性。黑骨藤中的3-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-咖啡酰基奎宁酸、5-O-咖啡酰基奎宁酸可通过抑制IL-1β、RF、TNF-α分泌从而治疗类风湿性关节炎。     

黑骨藤化学成分与生态因子和土壤因子的相关性

目的 研究不同产地苗族药黑骨藤中8个化学成分含量与生态因子和土壤因子的相关性。方法 采用超高液相色谱法（UPLC）同时测定新绿原酸,绿原酸,隐绿原酸,异绿原酸B,异绿原酸A,异绿原酸C,原花青素A₂和杠柳毒苷的含量。收集各产地样品根系土壤,并进行多种土壤因子检测。利用ArcGIS软件提取气候数据,GPS记录地形数据。利用SPSS 24.0统计软件对不同产地药材中的8个化学成分含量与生态因子和土壤因子进行双变量分析和逐步回归分析。结果 建立了8个化学成分含量与生态因子和土壤因子的逐步回归方程,分析其结果,新绿原酸与最冷季度降水量呈负相关;绿原酸与最干月降水呈负相关;隐绿原酸与最冷季度降水量和最暖季节平均温度呈负相关,与硒呈正相关;异绿原酸B主要受到土壤因子的影响,与有效铁和钼呈正相关,与全磷和有效磷呈负相关;异绿原酸A与钼呈正相关,与降水变异系数呈负相关;异绿原酸C与交换性镁呈正相关;原花青素A₂与钼呈正相关,与速效钾呈负相关;杠柳毒苷与降水变异系数负相关。结论 明确了黑骨藤中8个化学成分与生态因子和土壤因子之间的相关性,为黑骨藤引种栽培、规范化种植提供参考,以及进一步研究生态因子和土壤因子与黑骨藤品质形成机制提供理论基础。     

近红外光谱法快速测定杭白菊中3种成分的含量

目的: 建立杭白菊中绿原酸、木犀草苷及3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量快速测定的近红外光谱模型。 方法: 以HPLC分析值作为参照,采用傅里叶变换近红外漫反射光谱技术采集杭白菊的近红外光谱,结合偏最小二乘法(PLS)建立绿原酸、木犀草苷及3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸含量的快速测定方法。 结果: 杭白菊中绿原酸、木犀草苷及3-5-O-双咖啡酰基奎宁酸近红外光谱校正模型的相关系数(R)、校正均方差(RMSEC)、内部验证均方差(RMSEP)分别为0.954 93,0.015 7,0.012 7, 0.984 50,0.013 1,0.017 6和0.998 28,0.009 17,0.005 11。经外部验证,3种成分的预测值和真实值相关系数分别达到0.940 4,0.941 2,0.944 6。 结论: 该方法准确、快速、简便,可实现杭白菊大批量样品的快速分析。     

HPLC法测定金银花中新绿原酸等8种成分的量

目的 建立测定金银花药材中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、断氧化马钱子苷8种成分的HPLC方法。方法 采用RP-HPLC法,色谱柱为Luna 5 μm C₁₈柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相为甲醇（A）-0.1%磷酸水（B）溶液,梯度洗脱：0～20 min,12%～30% A;20～60 min,30%～50% A,体积流量1.0 mL/min;检测波长237、324 nm,柱温30 ℃。结果 8种成分均达到基线分离,各成分均有较宽的线性范围和良好的线性关系（r＞0.999 9）;回收率在98.72%～102.50%。结论 建立的测定方法准确灵敏、重复性好,能较全面地评价金银花药材的质量。     

HPLC测定灯盏花不同部位绿原酸、灯盏乙素、3,5-二咖啡酰奎宁酸和4,5-二咖啡酰奎宁酸含量

目的: 建立同时测定灯盏花不同部位中绿原酸、灯盏乙素、3,5-二咖啡酰奎宁酸及4,5-二咖啡酰奎宁酸4种有效成分含量的高效液相色谱方法。 方法: 采用Agilent Zorbax SB-C₁₈ (4.6 mm×250 mm, 5 μm) 色谱柱,流动相为乙腈(A)-0.3% 磷酸水溶液(B),梯度洗脱(0~10 min,12%~15% A,10~32 min,15% ~15% A,32~33 min,15%~20% A,33~ 50 min,20%~22% A),流速1 mL·min^-1,检测波长335 nm与327 nm,柱温30℃。 结果: 绿原酸(1)、灯盏乙素(2)、3,5-二咖啡酰奎宁酸(3)及4,5-二咖啡酰奎宁酸(4)分别在0.050 1~1.002,0.165 9~3.318,0.049 7~ 0.994,0.048 7~0.974 μg呈良好线性关系(r>0.999 6);灯盏花药材中4种有效成分的平均回收率(n=6)分别为98.53%,99.68%,98.78%,99.06%,RSD 分别为0.94%,0.49%,1.1%,0.81%。 结论: 该方法简便、准确,分离效果好,可用于灯盏花药材的质量评价。     

炒制对牵牛子中酚酸类成分含量的影响

目的 建立牵牛子中6个酚酸类成分（新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸、异绿原酸A和异绿原酸C）的HPLC含量测定方法,研究炒制前后牵牛子中这些成分的含量变化规律。方法 采用HPLC法同时测定新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸、异绿原酸A和异绿原酸C的含量,运用化学计量学方法对含量测定结果进行分析,并通过模拟炮制的方法对此类成分在不同温度下的转化进行初步研究。色谱条件为Kromasil C₁₈（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱,流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱（0～20min,10%甲醇;20～25min,10%～15%甲醇;25～45min,15%甲醇;45～50min,15%～30%甲醇;50～75min,30%甲醇;75～80min,30%～40%甲醇;80～110min,40%甲醇）,检测波长330nm,体积流量 1 mL/min,进样量10μL,柱温30℃。结果 与生品比较,炒制后牵牛子中绿原酸的含量无明显变化,新绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸 C 在炒制后含量显著上升;咖啡酸和异绿原酸A在炒制后含量显著下降。层次聚类分析（hierarchical clusteranalysis,HCA）将30批样品分为生品与炮制品2类,主成分分析（principal component analysis,PCA）和正交偏最小二乘-判别分析（partial least squares-discriminant analysis,PLS-DA）均标记了4个差异性成分。各单体化合物在模拟炮制过程中发生了相互转化,转化程度与加热温度相关。结论 牵牛子与炒牵牛子的化学成分含量发生了一定程度改变,其中新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A和异绿原酸C可作为牵牛子炒制前后质量评价的关键性指标,可为牵牛子与炒牵牛子质量标准的建立和深入研究提供科学依据。     

HPLC同时测定杞菊地黄丸中7个成分含量

目的 建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定杞菊地黄丸中莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚、绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量。方法 采用Inertsil ODS-3 C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;以乙腈-甲醇-0.2%冰醋酸为流动相进行梯度洗脱;检测波长：240 nm（莫诺苷、马钱苷、芍药苷）、348 nm（绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸）、274 nm（丹皮酚）;柱温为30 ℃;流速为0.9 mL·min^–1;进样量为10 μL。结果 莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚、绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸分别在4.83~482.66（r=1.000 0）、5.02~501.95（r=1.000 0）、4.89~489.33（r=1.000 0）、10.38~207.63（r=1.000 0）、1.26~125.83（r=0.999 6）、0.63~62.98（r=0.999 7）、2.34~233.99 μg·mL^–1（r=0.999 8）线性关系良好,平均加样回收率分别为99.73%、101.00%、98.67%、99.19%、102.56%、101.66%、100.98%,RSD分别为1.29%、0.51%、1.21%、1.01%、0.97%、1.07%、0.47%。结论 该方法简便、快速、准确,可用于杞菊地黄丸的质量控制。     

旋覆花-赭石药对酚酸类成分UPLC指纹图谱及多指标成分含量测定

目的 建立旋覆花-赭石药对超高效液相色谱法（UPLC）指纹图谱及多指标成分含量同时测定的方法。方法 采用Agilent ZORBAX RRHD StableBond C₁₈色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.8 μm）,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^–1,检测波长为327 nm,柱温为35 ℃,进样量为1 μL,建立旋覆花-赭石药对UPLC指纹图谱及同时测定新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异槲皮苷、异绿原酸B、1,5-二咖啡酰奎宁酸、异绿原酸C共8个指标成分含量的方法,并结合相似度评价、聚类分析（CA）及主成分分析（PCA）等化学模式识别方法对UPLC指纹图谱进行多元统计分析。结果 建立了旋覆花-赭石药对的UPLC指纹图谱,确定了16个共有峰,指认了其中8个成分。相似度评价结果表明,10批样品的相似度均大于0.990,CA及PCA均可将10批样品聚为3类。建立的含量测定方法稳定可靠,精密度、重复性、稳定性及加样回收率试验结果均良好。结论 建立的UPLC指纹图谱及同时测定8个指标成分含量的方法可用于旋覆花-赭石药对的质量控制。