三氧化二砷联合顺铂诱导人肝癌HepG2细胞株凋亡机制研究

研究发现,三氧化二砷（As2O3）对肿瘤具有明显的选择性,现已将单药As2O3注射液用于临床,在白血病治疗中取得了良好的疗效。顺铂（CDDP）属于细胞周期非特异性抗癌药物,为临床一线抗肝癌化疗药。但其抗肝癌的主要机制仍未明确,为探讨As2O3联合CDDP诱导肝癌凋亡的机制,进行了以下实验研究,现报告如下。     

三氧化二砷与顺铂联用对肝癌HepG2细胞的作用

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)与顺铂(CDDP)联合对肝癌细胞HepG2的作用.方法:应用普通光学显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪分别观察As2O3、CDDP和两者联合应用时对HepG2:细胞株的形态学改变和诱发凋亡率.结果:AO/EB荧光染色法显示在联合应用药物后,可看到较典型的细胞凋亡形态学改变.噻唑蓝(MTT)法检测各个浓度的As2O3与CDDP联合应用时,对HepG2细胞的生长抑制率均较单用相应一种药物时增强,而低浓度联合用药组合的生长抑制率增加尤为明显.结论:在体外Aa2O3和CDDP两种化疗药物联合应用具有明显的协同抗肝癌作用,显著抑制人肝癌细胞HepG2的细胞株的生长,并且具有明显的剂量时效关系.两药联用有显著的协同诱导肝癌细胞凋亡的作用.     

姜黄素增加HepG2细胞对顺铂敏感性的作用及机制研究

目的　探讨姜黄素对肝癌细胞株HepG2 对顺铂敏感性的影响及其作用机制。方法　采用不同浓度姜黄素（0、2.5、5、7.5、10 μM）及顺铂（10、20、40、80 μM）单用或联用处理HepG2 细胞株后,通过MTT 检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Real-time PCR 技术检测Survivin、Cyto-C、Bcl2、Bax 的基因表达情况;western blot 检测Survivin、Cyto-C、cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax 的蛋白表达。结果　姜黄素以浓度依赖性方式抑制HepG2细胞株Survivin 的mRNA 表达和蛋白表达（P<0.05）;姜黄素联合顺铂处理的HepG2 细胞增殖抑制率及细胞凋亡率较单用顺铂处理均明显增加（P<0.05）;姜黄素联合顺铂可显著抑制Survivin 的蛋白表达,降低Bcl-2/Bax 比例,增加Cyto-C、cleaved caspase-3 蛋白表达（P<0.05）。结论　姜黄素可增加HepG2 细胞对顺铂的敏感性,可能与其抑制Survivin 的表达,降低Bcl-2/Bax 比例,增加cleaved caspase-3、Cyto-C 蛋白的表达有关。     

力达霉素增强顺铂诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡作用及机制研究力达霉素增强顺铂诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡作用及机制研究

目的 研究抗肿瘤抗生素力达霉素与顺铂的体外协同抗肿瘤作用及其机制。方法 采用克隆形成法、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳、Hoechst 33342和PI双荧光染色法、Western blot等方法。结果 力达霉素与顺铂联合对人肝癌BEL-7402细胞有很强的协同杀伤作用;可以使BEL-7402细胞的DNA 出现明显的梯状断裂；可以使阻滞于S期的BEL-7402细胞减少而使凋亡细胞比例明显增多；联合用药后BEL-7402细胞核出现明显的凋亡形态变化；使BEL-7402细胞内Bcl-2的表达显著降低。结论 力达霉素可以增强顺铂的抗肿瘤作用，提示力达霉素与顺铂联合有望应用于肿瘤联合化疗。     

p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响研究

目的:利用p15-shRNA表达载体干扰细胞周期相关基因p15,探讨p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响。方法:用梯度浓度的顺铂诱导HepG2细胞耐药并建立动态耐药模型HepG2/顺铂/2.0,以不同浓度(30、60、90nmol·L-1)的干扰质粒p15-shRNAY2和阴性对照质粒(shRNA-F)转染HepG2/顺铂/2.0细胞后48h检测p15荧光阳性细胞,筛选最佳干扰浓度;以筛选结果转染HepG2/顺铂/2.0细胞,与未转染细胞和阴性对照转染细胞比较,检测细胞存活情况、周期分布和p15、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果:最佳干扰浓度为60nmol·L-1;与未转染细胞和阴性对照转染细胞比较,p15-shRNAY2转染细胞的存活率明显增加,G1期细胞明显减少,p15、Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2蛋白表达明显增加(P均<0.01)。结论:p15-shRNA可抑制p15基因表达,干扰细胞周期使G1期的比例减少,增加HepG2/顺铂/2.0对顺铂的耐药性。     

顺铂诱导肝癌细胞凋亡与多药耐药性关系

目的探讨顺铂(CDDP)在人体内诱导原发性肝癌(PHC)细胞凋亡(APO)的情况及其与多药耐药性(MDR)之间的关系。方法将30例PHC患者分成两组:CDDP治疗组16例,患者在术前行CDDP诱导治疗(30mg/d,静脉滴注,连续4d);对照组14例,术前未给予任何治疗药物。流式细胞仪(FCM)检测两组患者手术标本的APO和MDR表达情况,并作相关分析。结果CDDP组APO为(7·72±6·66)%较对照组明显增高(P<0·01),CDDP治疗组S期细胞比率(SP)及增殖指数(PI)分别为(3·01±2·98)%和(7·35±4·92)%,对照组为(8·30±5·49)%和(20·96±13·59)%,较对照组显著降低(P<0·01),两组MDR的表达无明显差异;CDDP组APO与MDR的表达呈负相关(r=-0·6,P<0·05)。结论CDDP在人体内能够诱导PHC细胞凋亡而起治疗作用;MDR的表达(P170)是CDDP诱导PHC凋亡的影响因素之一。PHC细胞的APO与MDR的表达存在负相关(P<0·05)。     

复方木鸡颗粒联合顺铂对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的机制研究

目的探讨复方木鸡颗粒联合顺铂对人肝癌Hep G2细胞增殖、凋亡的影响及其潜在的作用机制。方法体外培养人肝癌Hep G2细胞,取对数生长期细胞,将其消化后随机分为对照组,复方木鸡颗粒高、低(10、5mg/m L)剂量组,顺铂组(1mg/m L)和复方木鸡颗粒(5mg/m L)联合顺铂(1mg/m L)组,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,采用Hoehcst染色法检测细胞凋亡情况,采用免疫荧光联合激光共聚焦分别检测各组细胞中凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、蛋白天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)、细胞色素C氧化酶(Cyt-C)表达水平。结果与对照组比较,复方木鸡颗粒10、5 mg/mL组及顺铂组、联合组的细胞活力显著降低(P0.01),细胞凋亡显著增加,细胞内Bcl-2蛋白表达显著下调(P0.05、0.01),而Bax、Caspase-9、Cyt-C蛋白显著上调(P0.05、0.01),且联合组在抑制人肝癌Hep G2细胞增殖、促进其凋亡、调控凋亡相关蛋白表达的作用效果最佳。结论复方木鸡颗粒可显著抑制Hep G2细胞增殖并促进其凋亡,其与顺铂联合起到协同增效的效果,其作用机制可能与下调人肝癌Hep G2细胞内抑凋亡蛋白Bcl-2,上调促凋亡蛋白Bax、Caspase-9、Cyt-C表达水平有关。     

盐酸表柔比星联合奥沙利铂对肝癌HepG2细胞凋亡的抑制作用

目的:探讨盐酸表柔比星联合奥沙利铂对肝癌细胞HepG2的抑制作用.方法:盐酸表柔比星和奥沙利铂单独及联合给药用MTT法测定HepG2细胞的增殖,用Hoechst 33258染色法检测细胞核凋亡情况,用DNA ladder检测DNA的裂解情况.结果:人肝癌HepG2细胞经奥沙利铂、盐酸表柔比星以及两者联合作用后,在不同时间、不同浓度均能出现细胞抑制作用,并且均呈现剂量-时间依赖效应,与单药组相比,联合用药组抑制率明显增高,q值大部分为0.85～1.15,呈现明显的相加作用,在(35+5)μg/mL组作用24 h,(20+2) μg/mL组作用48、72 h时两组实验组q值＜0.85,出现拮抗作用.(25+3) μg/mL组作用24 h为最佳作用时间和作用浓度.结论:奥沙利铂及盐酸表柔比星对肝癌HepG2细胞有增殖抑制及促凋亡作用,两药联合作用表现为相加作用,其机制需进一步研究.     

TRAIL联合顺铂和IFN-α对人肝癌细胞凋亡的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合顺铂和IFN-α应用对人肝癌细胞生长抑制和诱导凋亡的作用.方法 用SRB染色法测定TRAIL、顺铂、IFN-α单独或联合应用对人肝癌细胞SMMC7721的体外增殖抑制作用,并检测各组细胞凋亡率.结果 TRAIL、顺铂、IFN-α三者联合作用于SMMC7721细胞后,顺铂与IFN-α联用的体外生存率从70.91%±3.43%降至34.81%±3.10%,细胞凋亡率从12.47%±0.91%升至45.50%±6.25%.结论 TRAIL、顺铂、IFN-α三者联用能显著提高肝癌细胞SMMC7721生长抑制和诱导凋亡作用.     

顺铂联合异甘草酸镁对原发性肝癌小鼠疾病进展影响及相关机制研究

目的 了解顺铂联合异甘草酸镁调控ERK1/2信号通路干预原发性肝癌小鼠疾病进展及对PGE2及γδT细胞表达水平的影响。方法 建立45只原发性肝癌小鼠模型,随机分为对照组、顺铂组、联合用药组,各15只,分别腹腔注射给予生理盐水、顺铂、顺铂联合异甘草酸镁。比较其治疗效果,血清肝功能指标,前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）水平,肝脏核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）p65和炎症因子表达,细胞外调节蛋白激酶1/2（extracellular regulated protein kinases,ERK1/2）及p-ERK1/2蛋白相对表达量,γδT细胞百分比。结果 联合用药组肿瘤质量最低,顺铂组肿瘤质量较联合用药组高,对照组最高（P<0.05）;联合用药组抑瘤率大于顺铂组（P<0.05）;联合用药组血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）、PGE2水平、肝脏肿瘤坏死因子、血管内皮生长因子、NF-κB p65蛋白量最低,顺铂组较联合用药组高,对照组最高（P<0.05）;3组肝脏ERK1/2蛋白相对表达量无差异;联合用药组肝脏p-ERK1/2蛋白相对表达量、γδT细胞百分比最低,顺铂组较联合用药组高,对照组最高（P<0.05）。结论 顺铂联合异甘草酸镁可调控ERK1/2及NF-κB信号通路从而干预原发性肝癌小鼠疾病进展,并且可降低γδT细胞百分比,调节免疫机能。     

血管内皮抑素与顺铂对Calu-6肺癌细胞联合作用的观察

目的:研究血管内皮抑素对人肺癌细胞的增殖抑制作用及机制,并观察其与顺铂(DDP)的联合作用。方法:经血管内皮抑素及DDP干预后,以MTT法检测其对肺癌细胞Calu-6的抑制、流式细胞术检测细胞凋亡、ELISA测定Bcl-2/Bax、sFas/sFasL的表达。结果:(1)血管内皮抑素具有抑制Calu-6细胞增殖的作用(P<0.05)并呈现时间依赖性、诱导Calu-6细胞凋亡,下调Bcl-2表达,但对Bax的表达无明显影响(P>0.05),未检测到sFas/sFasL的表达。(2)血管内皮抑素与DDP联合用药方案中,同时给药较单药DDP诱导凋亡及下调Bcl-2表达明显,序贯给药与DDP间无明显差异(P>0.05)。(3)2种血管内皮抑素(恩度、内皮抑素)的效应差异无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)血管内皮抑素可抑制Calu-6细胞生长、诱导其凋亡,其机制与下调Bcl-2表达有关。(2)血管内皮抑素与DDP间有增效作用,联合用药方案中以同时给药效果最著。(3)各血管内皮抑素的作用机制相似。     

小檗胺对肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移的影响

目的 研究小檗胺对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移作用的影响及其可能的机制。方法 在体外用不同浓度小檗胺处理肝癌SMMC-7721细胞,采用MTT法检测细胞活力的变化;采用细胞划痕试验、Transwell迁移和侵袭试验检测肿瘤细胞侵袭转移能力;采用Western blot法检测细胞上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达。结果 MTT结果显示浓度<20 μmol·L^-1的小檗胺对SMMC-7721细胞存活率无显著影响。划痕试验和Transwell结果显示,小檗胺呈浓度依赖性抑制肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭过程。Western blot结果表明,小檗胺显著增强SMMC-7721细胞中E-cadherin表达,而减弱Vimentin表达。结论 人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力可被小檗胺抑制,其机制可能与其调控上皮间质转化相关蛋白的表达有关。     

白屈菜红碱对人结直肠癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的：研究白屈菜红碱（Chelerythrine, CHE）对体外结直肠癌细胞的生长抑制作用,并探讨其作用机制。方法：MTT测定结肠癌细胞存活率,应用流式细胞仪检测CHE处理后ROS的积累和细胞凋亡情况,JC-1(5,5'',6,6''-四氯-1,1'',3,3''-四乙基苯并咪唑羰花青碘化物)荧光染料法检测细胞线粒体膜电位改变,应用荧光显微镜和Western blot法验证ROS积累诱导的线粒体功能障碍。结果：CHE对HCT-116和RKO细胞发挥剂量依赖性细胞毒作用,该作用与ROS介导的凋亡蛋白的表达有关。此外,CHE能够降低伴随线粒体功能障碍的线粒体膜电位。结论：CHE通过ROS介导的线粒体功能障碍和JNKs途径抑制CRC细胞生长并诱导细胞凋亡,提示CHE可能成为潜在的治疗CRC的候选药物。     

香菇多糖联合顺铂治疗肺癌胸腔积液疗效观察

目的观察香菇多糖联合顺铂胸腔灌注治疗肺癌胸腔积液的疗效及其副作用。方法将肺癌合并恶性胸腔积液53例患者随机分为2组,实验组27例,对照组26例。实验组胸腔注入香菇多糖4 mg+顺铂40 mg,对照组胸腔注入顺铂60 mg。2组均每周给药1次,4周为1疗程,治疗1疗程后比较2组疗效。结果实验组总有效率高于对照组,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。实验组不良反应发生率较对照组低(P<0.05)。结论香菇多糖联合顺铂腔内注入能有效控制晚期肺癌所致恶性胸腔积液,不良反应小。     

顺铂联合8-硝基白杨素对人卵巢癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的 研究顺铂联合8-硝基白杨素对人卵巢癌COC1细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法 建立人卵巢癌COC1细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成4组,每组5只：生理盐水组、8-硝基白杨素组、顺铂组、8-硝基白杨素+顺铂组。观察各组裸鼠移植瘤体积、重量及裸鼠体质量的变化;裸鼠血清乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、肌酐值和外周血白细胞计数的变化;FCM测定瘤组织细胞凋亡率;Western blot分析瘤组织细胞凋亡的可能分子生物学机制。结果 与顺铂组和8-硝基白杨素组相比,顺铂联合8-硝基白杨素联合作用COC1细胞裸鼠移植瘤后,移植瘤的体积、移植瘤的重量均明显降低(P<0.05);与顺铂组相比,顺铂联合8-硝基白杨素联合组裸鼠体质量无明显差异(P>0.05),裸鼠血清乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、肌酐值和外周血白细胞计数无明显差异(P>0.05);顺铂和8-硝基白杨素联合作用COC1细胞16 d后,COC1细胞发生凋亡,同时bcl-2蛋白表达降低,caspase-3蛋白表达增高。结论 顺铂联合8-硝基白杨素通过降低bcl-2蛋白表达,活化caspase-3蛋白表达来抑制人卵巢癌COC1细胞裸鼠移植瘤生长。     

竹节参皂苷对顺铂耐药肺癌细胞敏感性的影响及机制研究

目的 研究竹节参皂苷对顺铂耐药肺癌细胞敏感性的影响及其潜在作用机制。方法 通过递增顺铂浓度诱导肺癌A549细胞耐药,测定细胞存活率,SRB显色法测定药物敏感性,Annexin V-FITC/PI双染测定细胞凋亡,ELISA测定Caspase 3和Caspase 8水平,Western blotting测定细胞中相关蛋白表达情况。结果 经长期诱导后,A549细胞对顺铂的耐受性增加14.79倍,且较稳定。与顺铂组比较,联合应用竹节参皂苷和顺铂可显著增加A549细胞对顺铂的敏感性,增加细胞内Caspase 3和Caspase 8水平,促进细胞凋亡,同时抑制MDR1、P-gp、Bcl-2和p-Akt等蛋白表达,促进Bax蛋白表达。结论 竹节参皂苷可增加顺铂耐药细胞株对顺铂的敏感性,增强顺铂的作用效果,其作用机制可能与抑制耐药相关蛋白MDR1、P-gp和Akt活性相关。     

灯盏花素对肝癌细胞HepG2和正常肝细胞LO-2的体外增殖抑制作用

目的 观察灯盏花素对人肝癌细胞HepG2及人正常肝细胞LO-2体外增殖的影响.方法 以不同浓度(0、3.125、6.25、12.5、25、50 mg·L-1)的灯盏花素分别处理HepG2和LO-2细胞,24 h后采用MTT法检测各组细胞生长情况;Hoechst 33258荧光法和流式细胞术观察HepG2和LO-2的凋亡情况.结果 灯盏花素在3.1~50.0 mg·L-1范围内呈浓度依赖性地抑制HepG2细胞的增殖,24 h的IC50为8.4 mg·L-1,并能诱导HepG2细胞凋亡;但对LO-2的增殖影响较小,且几乎无诱导凋亡作用.结论 灯盏花素体外可选择性地抑制肝癌细胞的增殖,可能与其诱导肝癌细胞凋亡有关.     

欧前胡素对顺铂的骨肉瘤细胞抗肿瘤作用的增效作用

目的 研究欧前胡素是否能提高人骨肉瘤细胞(human osteosarcoma cells,HOS细胞)对顺铂的敏感性。方法 HOS细胞用欧前胡素和顺铂处理,MTT法检测体外细胞活力,Western blot检测Bcl-2 蛋白家族成员(Mcl-1、Bcl-2、Bcl-xl、Bad和Bax)的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平和线粒体膜电位的变化情况。构建Mcl-1真核表达载体,MTT法检测Mcl-1表达载体转染对欧前胡素联合顺铂治疗骨肉瘤疗效的影响。结果 欧前胡素在体外可显著提高顺铂对骨肉瘤细胞系HOS的杀伤活性。欧前胡素可显著降低HOS细胞Mcl-1的表达,而顺铂对Mcl-1的表达水平无影响。相比于欧前胡素或顺铂单治疗组,两者联合可显著诱导HOS细胞发生凋亡并降低其线粒体膜电位。体外转染Mcl-1真核表达载体显著降低顺铂联合欧前胡素对HOS细胞的杀伤活性。结论 欧前胡素通过靶向于Mcl-1增强顺铂对骨肉瘤细胞的杀伤活性。     

内源性大麻素联用顺铂对人肺腺癌A549细胞的诱导凋亡作用

目的观察内源性大麻素（AEA）、顺铂（DDP）单用或联用对人肺癌A549细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测AEA和DDP对肺癌A549细胞的增殖抑制作用,以流式细胞仪（FCM）PI单染检测AEA联用DDP对细胞周期的影响,以Annexinv／PI双染法检测AEA联用DDP对细胞凋亡的影响。结果AEA对肺癌细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量、时间依赖性。10,20μmol／L的AEA和1,2mg／L的DDP联合作用24,48,72h后,细胞增殖抑制率显著高于单用组;两药联用后诱导细胞凋亡的作用显著增强,AEA可使A549细胞阻滞于G2／M期。结论AEA及DDP对肺癌A549细胞的增殖具有显著的抑制作用,并可诱导细胞凋亡,在一定范围内呈量效关系,且两者联合应用具有相加或协同作用。