大鼠肢体缺血/再灌注后心肌细胞凋亡及氧化应激的调节作用

目的观察大鼠肢体缺血/再灌注(I/R)后心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的变化和氧化应激的调节作用。方法健康雄性Wistar大鼠30只,随机分成对照组、肢体I/R 2 h组(I/R 2 h组)和4 h组(I/R 4 h组)。免疫组化法检测心肌组织Bcl-2/Bax蛋白表达;原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记(TUNEL)技术检测心肌凋亡细胞;生化法检测血浆心肌酶含量;比色法测定心肌组织活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量的变化。结果肢体I/R后与对照组比较,血浆心肌酶含量升高;心肌组织ROS和MDA含量增加,SOD活性降低(P0.05);心肌凋亡细胞明显增加(P0.01);心肌组织Bcl-2与Bax表达增强,但Bax表达较Bcl-2明显上调,Bcl-2/Bax比值降低(P0.01);相关分析显示,ROS含量与Bax蛋白表达平均吸光度值和凋亡指数(AI)之间呈显著正相关(P0.01)。结论大鼠肢体I/R后可致心肌细胞凋亡;心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax蛋白表达比值降低和心肌氧化应激增强有关。     

灯盏花素对大鼠心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的影响

目的观察灯盏花素（BRE）对大鼠心肌缺血再灌注（I/R）诱导细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法30只SD大鼠随机分为3组（n=10）:①假手术（Sham）组:前降支穿线不结扎,观察1.5 h;②缺血再灌注（I/R）组:结扎前降支30 m in,再灌注前5 m in生理盐水（4 mg/kg）iv,再灌注1h;③BRE组:再灌注前5 m in应用BRE（4 mg/kg）iv,余同I/R组。常规方法检测丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性,免疫组化法测定Bc l-2、Bax蛋白的表达,通过细胞图像分析系统测量细胞阳性染色面积百分率,应用透射电镜观察心肌超微结构的变化。结果同I/R组相比,BRE组心肌组织MDA含量显著降低[（7.56±1.67）μmol/gvs（16.58±2.59）μmol/g,P<0.05],SOD活性显著升高[（2.37±0.22）mkat/gvs1.38±0.14 mkat/g,P<0.05],Bax蛋白表达显著降低（5.02±1.01vs18.59±5.68,P<0.01）,而Bc l-2蛋白表达显著增高（17.48±4.72vs7.32±2.05,P<0.01）,Bax/Bc l-2显著降低（0.29±0.57vs3.32±0.10,P<0.01）,细胞阳性染色面积百分率显著减少（0.42±0.06vs13.84±1.97,P<0.01）,细胞超微结构损伤明显减轻。结论BRE通过调控Bax/Bc l-2表达抑制心肌I/R诱导的细胞凋亡,对缺血再灌注心肌具有保护作用。     

替米沙坦通过JAK/STAT通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨JAK-STAT通路的主要成员STAT1和STAT3在心肌缺血再灌注(I/R)损伤过程中激活的功能作用及AT1受体拮抗剂替米沙坦抗心肌I/R损伤的受体后机制。方法采用Langendorff离体心肌I/R模型,65只雄性Wistar大鼠分为5组,每组13只:正常对照组、I/R组、AG490组、替米沙坦预处理组、替米沙坦后处理组。动态监测LVDP和dp/dtmax;免疫印迹法检测p-STAT1,p-STAT3的蛋白表达;TTC染色计算心肌梗死面积;TUNNEL法检测心肌细胞凋亡指数(AI),RT-PCR法检测Bcl-2、Bax的mRNA表达。结果与I/R组比,JAK阻断剂AG490、替米沙坦预处理及后处理均能缩小心肌梗死面积(P<0.01),降低心肌细胞AI(P<0.01),改善心功能,使LVDP和dp/dtmax均明显升高(P<0.01),而使p-STAT1和p-STAT3的蛋白表达明显减少(P<0.01和P<0.05),以p-STAT1表达降低更为明显,p-STAT1与p-STAT3比值下调,Bax mRNA表达显著减少(P<0.01),而Bcl-2 mRNA表达增多(P<0.05)。结论替米沙坦具有抗心肌I/R损伤作用,其机制与阻断JAK-STAT通路,下调促凋亡基因Bax,上调抑制凋亡基因Bcl-2有关。     

miR-126在大鼠心肌缺血再灌注早期的表达及抗凋亡作用

目的 探讨miR-126在大鼠心肌缺血再灌注（I/R）早期的表达及抗凋亡作用。方法 48只SD大鼠随机分为假手术（Sham）、I/R 2 h、I/R 4 h、I/R 6 h组,每组12只大鼠,比较各组缺血区心肌细胞凋亡蛋白水平及miR-126表达水平。构建重组腺病毒rAAV9-ZsGreen-pre-miR-126载体,24只SD大鼠随机分为：⑤I/R组：大鼠转染空白病毒后I/R 2 h;⑥I/R miR-126组：大鼠转染 rAAV9-ZsGreen-premiR-126 后 I/R 2 h,再次比较各组缺血区心肌细胞凋亡蛋白水平。结果 与Sham组相比,I/R 2 h、4 h、6 h组大鼠心肌缺血区miR-126表达进行性降低（P<0.05）,非缺血区miR-126表达进行性升高（P<0.05）;心肌凋亡蛋白BAX及CASPASE-3表达水平升高（P<0.05）,抗凋亡蛋白BCL-2表达水平降低（P<0.05）;与I/R组相比,I/R miR-126干预组可明显减少心肌凋亡蛋白BAX及CASPASE-3表达水平并增加抗凋亡蛋白BCL-2表达水平（P<0.05）。结论 在I/R早期大鼠心肌缺血区miR-126表达随再灌注时间延长进行性下降,并伴随心肌细胞凋亡进展;过表达miR-126可减少I/R导致的心肌细胞凋亡,发挥保护心功能的作用。     

过表达Bax抑制剂1通过抑制线粒体通透性转换孔开放及细胞凋亡减轻心肌缺血再灌注损伤

目的探讨过表达Bax抑制剂1(BI-1)基因对缺血再灌注损伤的影响及其相关机制。方法 30只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组(I/R组)、对照的腺病毒载体组(Ad-EGFP组)、过表达BI-1的腺病毒载体组(Ad-BI-1组)、环孢素A(CsA组)。建立大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型后,TTC染色观察各组大鼠心肌梗死面积,TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况,电镜下观察心肌细胞超微结构变化,qRT-PCR检测各组大鼠心肌组织中BI-1 mRNA表达。分离培养乳鼠心肌细胞并按细胞处理方式的不同将其分为对照组、缺氧复氧组(H/R组)、对照的腺病毒载体组(Ad-EGFP组)、过表达BI-1的腺病毒载体组(Ad-BI-1组)、环孢素A(CsA组),免疫荧光法检测BI-1的亚细胞定位,Western blot检测各组细胞中BI-1蛋白表达,Calcein-AM法检测各组心肌细胞线粒体通透性转换孔(MPTP)开放水平;应用Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、细胞色素C(CytC)及Caspase-3、Caspase-9的表达。结果缺血再灌注后,与假手术组相比,I/R组、Ad-EGFP组、Ad-BI-1组、CsA组大鼠心肌梗死面积显著增加,心肌细胞凋亡数明显增多,心肌线粒体结构受损显著加重(P0.05);而与I/R组或Ad-EGFP组相比,Ad-BI-1组、CsA组大鼠的上述指标明显改善(P0.05)。qRT-PCR结果显示,与假手术组相比,I/R组、Ad-EGFP组、CsA组中BI-1 mRNA表达均显著降低,而Ad-BI-1组BI-1 mRNA表达明显增加(P0.05)。成功分离乳鼠心肌细胞,免疫细胞结果显示BI-1主要定位于心肌细胞内质网;与对照组相比,H/R组、Ad-EGFP组、Ad-BI-1组及CsA组的Calcein-AM荧光强度显著降低(P0.05),而Ad-BI-1组及CsA组较H/R组细胞明显增加(P0.05);Western blot结果显示,H/R组、Ad-EGFP组、CsA组中BI-1蛋白表达较对照组显著降低(P0.05),而Ad-BI-1组BI-1蛋白表达明显增加(P0.05)。此外,在大鼠心肌组织中,与假手术组相比,I/R组、Ad-EGFP组、Ad-BI-1组与CsA组大鼠的Bcl-2/Bax比值均显著降低(P0.05),凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9表达均显著增加(P0.05),而Ad-BI-1组及CsA组大鼠的Bcl-2/Bax比值明显高于I/R组(P0.05),Caspase-3和Caspase-9蛋白表达亦较I/R组明显降低(P0.05)。CytC表达结果显示,在心肌组织总蛋白中,与假手术组相比,I/R组、Ad-EGFP组、Ad-BI-1组及CsA组大鼠中CytC表达均显著升高(P0.05),且后四组之间差异无统计学意义(P0.05);但在心肌细胞线粒体中,I/R组、Ad-EGFP组、Ad-BI-1组及CsA组大鼠的CytC表达均显著降低(P0.05),且Ad-BI-1组及CsA组大鼠较I/R组明显增加(P0.05)。结论过表达BI-1基因能够缩小MIRI大鼠的心肌梗死面积,减轻心肌细胞的凋亡并改善线粒体结构及功能损伤,其作用机制可能是过表达BI-1通过改变Bcl-2/Bax比值,抑制MPTP的开放,减少细胞CytC的释放,降低凋亡蛋白Caspase-3及Caspase-9的活化而发挥上述作用。     

蛋白酶激活受体-2对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、I／R组和SLIGRL—NH2组,结扎左冠状动脉前降支30min,再灌注120min制作心肌缺血再灌注模型;以缺口末端标记法和免疫组织化学法分别检测心肌细胞凋亡指数（AI）及Bcl-2、Bax蛋白表达水平。发现与假手术组相比,I／R组的AI和Bcl-2、Bax蛋白表达水平均明显增加;与I／R组比较,SLIGRL—NH2组的AI、Bax蛋白表达水平下降,而Bcl-2蛋白表达水平显著增高。提示蛋白酶激活受体-2（PAR-2）对心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与上调Bcl-2、下调Bax蛋白表达水平,抑制心肌细胞凋亡有关。     

胺碘酮对兔心肌缺血/再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:探讨胺碘酮(AM)对兔心肌缺血/再灌注损伤(I/RI)心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响。方法:将60只新西兰大白兔随机分为假手术（Sham）组、缺血/再灌注（I/R）组和AM组,每组20只。Sham组开胸只穿线不结扎血管,而其余两组开胸并结扎兔左冠状动脉回旋支制备I/R无复流模型。应用硫磺素 S染色评估心肌无复流面积。经膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（annexin V-FITC）和碘化丙啶(PI)双标记后,应用流式细胞术检测心肌细胞并计算凋亡率。采用免疫组化染色法检测心肌细胞中Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:①在缺血范围差异无统计学意义的条件下,AM组无复流范围显著小于I/R组(t=4.483,P<0.01)。②与Sham组相比,I/R组和AM组细胞的凋亡率明显增加(F=315.25,P<0.01)。与I/R组相比,AM组细胞的凋亡率明显降低(F=315.25,P<0.01)。③与Sham组相比,I/R组和AM组Bcl-2、Bax蛋白的表达明显增加分别为(F=29.01,P<0.01和F=214.45,P<0.01)。与I/R组相比,AM组Bcl-2蛋白的表达明显增加(F=29.01,P<0.01);Bax蛋白的表达明显减少(F=214.45,P<0.01)。与I/R组相比,AM组Bcl-2/Bax比值明显增加(F=97.61,P<0.01)。结论:AM可能通过具有抗I/R心肌细胞凋亡从而减轻无复流范围,至于抗凋亡和减轻无复流的具体机制有待进一步明确。     

色甘酸钠对大鼠心肌梗死后心肌凋亡及凋亡蛋白的影响

目的 研究肥大细胞脱颗粒程度对心肌梗死后的心肌凋亡及心肌纤维化的影响,探讨细胞凋亡机制在心肌梗死后心室重构中的作用.方法 建立雄性SD大鼠心肌梗死模型,分成假手术组(n=6)、模型组(n=8)、色甘酸钠组(n=7).术后4周,留取心肌标本行TUNEL染色观察心肌细胞凋亡指数(AI),Masson染色检测心肌胶原容积分数(CVF),Western blot法检测Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达.结果 与假手术组相比,模型组、色甘酸钠组在AI、CVF、Caspase-3及Bax蛋白表达量等方面均显著升高(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达明显下降;色甘酸钠组与模型组相比,AI、CVF、Caspase-3及Bax蛋白表达量均有所下降(P＜0.05),Bcl-2蛋白有所升高,但两者差异无统计学意义(P=0.127).AI与CVF呈正相关(r=0.769,P＜0.01).结论 心肌梗死后心肌凋亡显著增加,抑制肥大细胞脱颗粒可明显减少心肌凋亡,减轻左心室心肌纤维化程度.     

银杏内酯B对大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨银杏内酯B对大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡及相关蛋白表达的影响。方法将100只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及银杏内酯B低剂量组(15mg/kg)、中剂量组(30mg/kg)、高剂量组(60mg/kg),每组20只。通过夹闭左冠状动脉前降支制作心肌缺血再灌注大鼠模型。监测各组大鼠心电图波动变化;红四氮唑(TTC)染色法测量心肌梗死体积;苏木精-伊红(HE)染色法观察心肌组织病理变化;末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡状况;免疫蛋白印记法测定凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、激活型Caspase-3)表达。结果与模型组比较,银杏内酯B各剂量组心电图明显改善,其中银杏内酯B高剂量组基本恢复正常;银杏内酯B中剂量组、高剂量组心肌梗死体积显著降低(P<0.05或P<0.01),心肌组织病变明显改善,心肌细胞凋亡指数(AI)显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01),Bax和激活型Caspase-3蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01),Bcl-2/Bax比值显著升高(P<0.01)。结论银杏内酯B通过调节凋亡相关蛋白表达从而抑制再灌注性损伤后心肌细胞凋亡。     

缬沙坦对大鼠缺血-再灌注心肌caspase-3活性及凋亡相关基因表达的影响

目的:观察缬沙坦对大鼠心肌缺血-再灌注(I/R)时心肌细胞天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法:以SD大鼠建立I/R模型,设立I/R组、缬沙坦组和假手术组.用分光光度法检测caspase-3活性,免疫组化法检测心肌组织Bcl-2和Bax蛋白表达,透射电镜观察心肌超微结构的变化.结果:同I/R组相比,缬沙坦组心肌组织caspase-3活性明显降低(P＜0.05),Bax蛋白表达显著降低(P＜0.01),而Bcl-2蛋白表达显著增高(P＜0.01),Bax/Bcl-2显著降低(P＜0.01),心肌细胞超微结构损伤明显减轻.结论:缬沙坦通过抑制caspase-3活性、调控Bax/Bcl-2表达而抑制心肌I/R所致细胞凋亡.     

神经型一氧化氮合酶在小鼠心肌缺血预处理中的作用

目的 应用神经型一氧化氮合酶(nNOS)基因敲除小鼠和nNOS抑制剂,探讨nNOS对心肌缺血预处理后心肌细胞凋亡的影响.方法 实验分为野生型缺血再灌注组(WT IR)、野生型缺血预处理组(WT IP)、野生型缺血预处理L-VNIO处理组(WT IP+ L-VNIO)、基因敲除鼠缺血再灌注组(KO IR)和基因敲除鼠缺血预处理组(KO IP).采用冠状动脉左前降支结扎法建立小鼠缺血再灌注损伤模型,缺血再灌注组缺血30 min再灌注3h,缺血预处理组分别经缺血5 min再灌注5 min连续三个循环后,再缺血30 min再灌注3h,观察TUNEL染色和Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3的活性变化,并用Western Blot法观察Bax、Bcl-2和Fas蛋白的表达情况.结果 与WT IR组相比,WT IP组小鼠TUNEL阳性细胞数目减少,Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3活性降低,Bax和Fas蛋白表达显著降低,Bcl-2表达显著增加(P＜0.05).而在KO IP组,与KO IR组相比,TUNEL阳性细胞数目和Caspase活性显著增加,Bax和Fas表达显著增高,Bcl-2表达显著降低(P＜0.05).结论 nNOS在心肌缺血预处理时发挥抑制心肌细胞凋亡的作用.     

caspase-3活性对老年大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的　探讨特异的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3 (caspase 3 )活性水平对老年大鼠心肌缺血再灌注损伤 (MIRI)的影响。　 方法　大鼠在体心肌缺血再灌注模型 ,设青年组和老年组 ;各组分设缺血 3 0min再灌注 1、3、6、12h和 2 4h时相点 ,用荧光分析法检测caspase 3活性 ,缺口末端标记法 (TUNEL)标记凋亡细胞 ,用酶法测定中性粒细胞 (PMNs)浸润数 ,红四唑 (TTC)染色法测梗死范围。　 结果　MIRI时 ,青年组和老年组caspase 3活性、心肌细胞凋亡指数 (AI)、PMNs浸润数、心肌梗死范围均随再灌注时间延长而逐渐增加。青年组caspase 3活性和心肌细胞AI于再灌注 12h达到高峰 ,其后维持在较高水平 ;而老年组在再灌注 2 4h仍未下降。所有指标除再灌注 1h外 ,其余各时相点老年组明显较高 ,P <0 0 5～ 0 0 1。　 结论　caspase 3参与介导了MIRI时心肌细胞凋亡和PMNs对心肌组织的浸润 ;caspase 3活性水平的增高可能是导致老年大鼠MIRI较青年组严重的重要因素之一。     

盐酸羟考酮通过JNK/p38MAPK信号通路调控异丙肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡的机制

目的探究盐酸羟考酮对异丙肾上腺素(ISO)诱导的心肌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养心肌细胞H9c2,设置对照组、ISO组、盐酸羟考酮1μmol/L组、盐酸羟考酮5μmol/L组、盐酸羟考酮10μmol/L组、ISO+SB203580〔c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(JNK/p38MAPK)信号通路阻断剂〕组。噻唑蓝(MTT)法检测心肌细胞存活率;流式细胞学法检测各组心肌细胞的凋亡率;Western印迹检测心肌细胞的B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)及JNK/p38MAPK信号通路相关蛋白的表达;测定培养细胞上清液乳脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)含量。结果与对照组比较,ISO组心肌细胞存活率降低,各给药组心肌细胞存活率明显升高(P<0.05);与对照组比较,ISO组心肌细胞的凋亡率明显升高(P<0.05),而盐酸羟考酮可显著降低细胞凋亡率(P<0.05);与ISO组比较,盐酸羟考酮10μmol/L组LDH、CK水平及Bax、磷酸化(p)-JNK、p-p38MAPK表达水平显著降低(P<0.05),Bcl-2表达水平显著升高(P<0.05);阻断JNK/p38MAPK信号通路可显著增加细胞存活率(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05),促进Bcl-2表达(P<0.05),而抑制Bax表达(P<0.05)。结论盐酸羟考酮对ISO诱导的心肌细胞损伤具有抗凋亡作用,其作用机制可能与抑制JNK/p38MAPK信号通路的活化有关。     

Syk对高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨脾酪氨酸激酶(Syk)对高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的H9c2心肌细胞分为5组:对照组(5.5 mmol/L葡萄糖,NG组)、高糖组(33 mmol/L葡萄糖,HG组)、Syk抑制剂对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+1μmol/L BAY,NG+ BAY组)、Syk抑制剂高糖组(33 mmol/L葡萄糖+1μmol/L BAY,HG+ BAY组)、甘露醇高渗透压对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+27.5 mmol/L甘露醇,OC组).采用Western印迹方法检测磷酸化Syk(p-Syk)、cleaved-caspase-1及Bax、Bcl-2的蛋白水平;逆转录PCR检测caspase-1、Bax、Bcl-2 mRNA的表达;流式细胞仪检测H9c2心肌细胞凋亡率;MTT比色法检测细胞活力.结果 与NG组相比,HG组H9c2心肌细胞活力下降(F=37.3,P<0.05)、凋亡率增加(F=46.5,P<0.05),OC组、NG+ BAY组细胞凋亡率与细胞活力差异均无统计学意义(P均>0.05);且HG组p-Syk、cleaved-caspase-1及Bax表达增加,Bcl-2表达降低(F=8.4、80.5、7.6、37.4,P均<0.05),caspase-1及Bax mRNA表达升高,Bcl-2 mRNA表达降低(F=130.7、17.8、7.18,P均<0.05);与HG组相比,HG+ BAY组细胞活力升高(F=37.3,P <0.05)、细胞凋亡率降低(F=46.5,P<0.05),且cleaved-caspase-1及Bax表达降低,Bcl-2表达水平升高(F =80.5、7.6、37.4,P均<0.05),caspase-1及Bax mRNA表达降低,Bcl-2 mRNA表达升高(F=130.7、17.8、7.18,P均<0.05).结论 在高糖条件下,Syk可诱导心肌细胞凋亡,其作用是通过调控Bax、Bcl-2的表达.     

丙酮酸乙酯对大鼠缺血再灌注心肌Bcl-2、Bax和caspase-3表达的影响

目的 探讨丙酮酸乙酯（EP）对缺血再灌注（I／R）心肌细胞凋亡的可能机制。方法 将24只雄性SD大鼠随机分为对照组、I／R组和EP组各8只，均建立Langendorff离体心脏模型，对照组K-H液持续灌流180min；I／R组平衡灌流30min，全心停灌30min，再灌120min；EP组试验程序与I／R组相同，平衡15min后和再灌注期间使用含2mmol／L EP的K-H液。分别以缺口末端标记法及免疫组化法检测各组心肌细胞凋亡指数（AI）及Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达。结果 I／R组AI和Bcl-2、Bax、caspase-3表达水平均明显高于对照组；与I／R组相比，EP组AI和Bax、caspase-3表达水平明显降低，而Bcl-2表达水平明显升高。结论 EP可抑制离体大鼠I／R损伤过程中的心肌细胞凋亡，其机制可能为下调Bax、caspase-3表达，上调Bcl-2表达。     

亚精胺对心肌梗死大鼠心肌线粒体功能及细胞凋亡的影响

目的:探讨亚精胺对心肌梗死大鼠心肌线粒体功能及细胞凋亡的影响。方法:选取健康SD大鼠32只,随机分为假手术组、模型组、模型+阿司匹林组、模型+亚精胺组,每组8只,利用在体结扎冠状动脉前降支法建立急性心肌梗死模型。造模成功后假手术组和模型组给予无菌生理盐水(2 mL)灌胃,模型+阿司匹林组以等体积阿司匹林(20 mg/kg)灌胃,模型+亚精胺组以等体积亚精胺(5 mmol/L)灌胃,连续4周。TTC染色、HE染色观察心肌组织梗死面积和病理学改变;透射电镜观察心肌线粒体形态;原位缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌组织细胞凋亡水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Bax、Bcl-2、胱天蛋白酶-3(caspase-3)的mRNA表达水平;Western blot检测Bcl-2、Bax、caspase-3、细胞色素C(cytochrome C)的蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织梗死区面积增加,心肌组织细胞凋亡明显增加,心肌组织Bax、caspase-3、cytochrome C表达水平明显升高,Bcl-2表达水平明显降低(P均<0.01);与模型组比较,模型+亚精胺组大鼠心肌组织梗死区面积减少,心肌组织细胞凋亡及Bax、caspase-3、cytochrome C表达水平均明显减少(P<均0.05);与模型+阿司匹林组比较,模型+亚精胺组心肌组织细胞凋亡明显降低(P<0.01),两组心肌组织Bax、caspase-3、Bcl-2、cytochrome C表达水平的差异无统计学意义。结论:亚精胺可改善心肌线粒体功能,抑制细胞凋亡,改善心肌梗死。     

PEP-1超氧化物歧化酶融合蛋白对大鼠心肌缺血再灌注细胞凋亡的影响

目的探讨PEP-1超氧化物歧化酶(SOD1)融合蛋白对大鼠心肌缺血再灌注细胞凋亡指数、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法 SD大鼠40只,制作心肌缺血再灌注模型,分为假手术组、缺血再灌注组、PEP-1-SOD1 100、300和500 μg组,每组8只。TUNEL法及免疫组织化学法检测心肌细胞凋亡指数(AI)及Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果假手术组AI、Bax及Bcl-2蛋白表达水平均较低。PEP-1-SOD1各组AI和Bax蛋白的表达较缺血再灌注组明显降低,Bcl-2蛋白的表达明显增加,Bax/Rcl-2比值明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论 PEP-1-SOD1可抑制缺血再灌注心肌细胞凋亡,原因可能为其减轻氧化应激、下调Bax和上调Bcl-2蛋白表达水平。     

竹叶总黄酮抗大鼠心肌细胞凋亡作用的研究

目的研究竹叶总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡的影响。方法用在体左冠状动脉前降支穿线结扎法制备心肌缺血再灌注模型。将60只SD大鼠分为6组：假手术组，缺血再灌注组，竹叶总黄酮高、中、低剂量组，阳性对照组每组10只。缺血30min，再灌注240min。采用缺口末端标记法（TUNEL）以及免疫组化法，检测心肌细胞凋亡千分率、Bcl-2、Bax、Cyt-c和caspase-3基因蛋白表达。结果TUNEL实验表明竹叶总黄酮能明显降低心肌组织凋亡的发生；与假手术组比较，缺血再灌注组Bax、Cyt-c、Bcl-2和caspase-3阳性表达增强（P〈0．01）；与缺血再灌注组比较，竹叶总黄酮明显抑制了Bax、Cyt-c和caspase-3表达但没有抑制Bcl-2表达。结论竹叶总黄酮对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。     

二十碳五烯酸在糖尿病心肌病损伤中的作用及机制

目的 探讨二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)对糖尿病心肌病损伤的作用及其机制。 方法 小鼠随机分为正常 (Con) 组、EPA处理 (Con+EPA) 组、糖尿病模型 (DM) 组、糖尿病模型EPA处理 (DM+EPA) 组。腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin, STZ）构建糖尿病小鼠模型,超声检测各组小鼠心脏功能,麦胚凝集素 (wheat germ agglutinin, WGA)检测心肌细胞横截面积,TUNEL化学染色检测细胞凋亡率,Western blot检测小鼠心脏组织cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、动力相关蛋白(dynamin-related protein, Drp)1和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（phospho-AMP-activated protein kinase, P-AMPK）的表达水平。 结果 与Con组相比,DM组小鼠左心室收缩末内径（left ventricular end-systolic diameter, LVESD）和左心室舒张末内径（left ventricular end diastolic diameter, LVEDD）值上调,左室射血分数（left ventricular ejection fraction,LVEF）和左室短轴缩短率（left Ventricular Fraction shortening, LVFS）下降,细胞横截面积增大,凋亡率显著增加,凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bax表达增加、Bcl-2表达降低,同时p-AMPK/AMPK比值升高,Drp1表达增多（P < 0.05）。但是EPA处理DM小鼠可使LVESD、LVEDD值下调,LVEF、LVFS值上升,心肌横截面积减小,凋亡率降低,并使cleaved caspase-3、Bax表达降低、Bcl-2表达增加（P < 0.05）。而且EPA处理DM小鼠后AMPK磷酸化进一步增加,Drp1表达减少。 结论 EPA通过抑制心肌肥大及凋亡改善糖尿病诱导的心功能损伤,其机制可能与AMPK/Drp1信号相关。     

右美托咪定联合远隔缺血预处理对心肌缺血/再灌注损伤的影响

目的 研究右美托咪定联合远隔缺血预处理对心肌缺血/再灌注损伤（MI/RI）的影响以及探讨其对细胞凋亡的影响 方法 选取80例择期体外循环下行心脏瓣膜术病患，随机分成4组(n = 20)；对照组（C组）, 远隔缺血预处理组（R组），右美托咪定组（D组），右美托咪定联合远隔缺血预处理组(DR组)；R组于麻醉诱导后行上肢缺血预处理，D组将盐酸右美托咪定以1 μg/kg负荷剂量泵注10 min后以0.41 μg/ (kg·h)注入至手术结束，DR组联合应用D组和R组两种方法；测主动脉阻断前（T₀）、体外循环结束时（T₁）和结束手术后（T₂）血浆肌钙蛋白I(cTnI)浓度。检测T₀和T₁ 时Bcl-2和Bax蛋白含量及计数心肌细胞凋亡指数（AI）。 结果 T₁和T₂时，与对照组比较，各组血浆cTnI均降低(P<0.05)。与阻断主动脉前相比，体外循环结束后4组心肌组织Bcl-2、Bax蛋白值含量和AI均升高，Bcl-2/Bax下降（P<0.05）；与C组比较，D组、R组和DR组Bcl-2、Bcl-2/Bax均增高，Bax和AI降低（P<0.05）；与R组、D组比较，DR组Bcl-2、Bcl-2/Bax升高，Bax和AI降低（P<0.05）。 结论 右美托咪定与远隔缺血预处理均能减轻MI/RI，二者联合作用优于单独使用，其机制可能与抑制细胞凋亡有关。