miR-150促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭的机制研究

目的 探讨miR-150是否通过靶向调控程序性细胞死亡因子4（PDCD4）促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭,进一步揭示miR-150在鼻咽癌中的癌基因作用。方法 2014年3-6月,培养鼻咽癌细胞株CNE-2,取生长良好的CNE-2用于实验。设计合成PDCD4野生型引物序列以及突变型引物序列,连接到含有荧光素酶载体质粒上,检测荧光素酶活性。分别瞬时转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-ctr、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4于CNE-2,48 h后采用Western blotting法检测PDCD4表达水平。分别瞬时转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-150 inhibitors、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4于CNE-2,分别于培养24、48、72、96 h后测定其吸光度（OD）值,反映其增殖能力。分别瞬时转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-150 inhibitors、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4于CNE-2,采用Transwell侵袭实验检测CNE-2侵袭能力。结果 无miR-150转染的PDCD4野生型细胞株荧光素酶活性为（0.975±0.112）,miR-150转染的PDCD4野生型细胞株荧光素酶活性为（0.588±0.042）,差异有统计学意义（t=7.853,P=0.018）。无miR-150转染的PDCD4突变型细胞株荧光素酶活性为（0.992±0.135）,miR-150转染的PDCD4突变型细胞株荧光素酶活性为（0.875±0.095）,差异无统计学意义（t=1.461,P=0.281）。转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-ctr、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2 PDCD4表达水平分别为（0.655±0.058）、（1.147±0.152）、（0.704±0.068）、（0.313±0.036）,差异有统计学意义（F=43.410,P＜0.001）;其中,转染Vector、miR-ctr、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2 PDCD4表达水平均低于转染pcDNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2,差异有统计学意义（P＜0.05）。转染物和时间对CNE-2增殖能力存在交互作用,转染物和时间对CNE-2增殖能力均存在主效应（P＜0.001）。转染Vector、pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-150 inhibitors、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2穿膜细胞数分别为（56.6±7.5）、（26.5±3.7）、（30.5±4.7）、（55.2±6.9）个,差异有统计学意义（F=18.550,P=0.014）;其中,转染pcDNA3.1(+)-PDCD4、miR-150 inhibitors的CNE-2穿膜细胞数少于转染Vector、miR-150 mimics联合pcDNA3.1(+)-PDCD4的CNE-2,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 miR-150通过抑制PDCD4的表达,继而增强鼻咽癌细胞的增殖能力和侵袭能力。     

ZIC5在前列腺癌中的表达及意义

目的研究ZIC5（Zic family member 5）在前列腺癌中的异常表达及其对前列腺癌生物学表型的影响。方法实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time PCR）检测ZIC5在前列腺癌组织标本和对应癌旁正常组织、PC3和LNCaP细胞株及正常前列腺上皮中的表达水平。siRNA干扰ZIC5后,CCK-8法和Transwell试验检测前列腺癌细胞PC3和LNCaP的增殖、迁移和侵袭。生物信息学分析可能调控ZIC5的miRNA并进行验证。结果ZIC5在前列腺癌组织中表达水平上升（t=4.2,P<0.001）,并且与Gleason评分分级具有相关性（P<0.05）,在前列腺癌细胞株中表达水平显著高于正常前列腺癌上皮（P<0.01）。前列腺癌细胞株PC3和LNCaP中siRNA干扰ZIC5 24h后,细胞增殖减慢,迁移和侵袭能力被抑制。生物信息学及双荧光素酶报告显示,ZIC5受miR-449家族调控,ZIC5与miR-449家族在前列腺癌标本中表达水平呈负相关（ZIC5 vs miR-449a： r=-0.64,P<0.05,ZIC5 vs miR-449b,r=-0.52,P<0.05）,双荧光素酶报告基因检测显示miR-449家族结合ZIC5 3’UTR。异常表达的ZIC5可激活EMT通路,干扰ZIC5和过表达miR-449可抑制ZIC5蛋白表达,并逆转前列腺癌细胞中EMT状态。结论ZIC5受miR-449家族调控,促进前列腺癌生长和侵袭。     

miR-381靶向MAP3K2抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的: 探讨微小RNA-381(miR-381)对前列腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响,并研究miR-381的靶基因及其功能。方法: 采用qRT-PCR检测miR-381在人前列腺癌细胞系中的表达水平。采用基因转染方法过表达或敲减miR-381在前列腺癌细胞中的表达,采用MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕损伤实验、Transwell迁移实验和基质胶侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用生物信息学方法预测miR-381靶点,并采用荧光素酶报告基因分析进行验证。结果： miR-381在前列腺癌细胞中低表达。与空白对照组相比,miR-381 mimics组前列腺癌细胞增殖能力明显降低,克隆数显著减少,凋亡明显增加,迁移和侵袭的细胞数减少;miR-381 inhibitor组结果则相反。荧光素酶报告基因分析证实MAP3K2是miR-381中的靶基因。miR-381 mimics下调而miR-381 inhibitor上调前列腺癌细胞中MAP3K2 基因和蛋白表达。 结论： miR-381通过靶向MAP3K2抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,发挥抑癌基因作用。     

miR-26a靶向HMGA1基因对结肠癌细胞生长、侵袭和迁移的影响

目的：探讨miR-26a靶向高迁移率族蛋白1（HMGA1）基因对结肠癌细胞生长、侵袭和迁移的影响,阐明HMGA1基因是否为miR-26a的靶基因。方法：将miR-NC （对照）、miR-26a mimics （模拟物）和miR-26a inhibitor （抑制物）转染人结肠癌SW480细胞作为miR-NC组、miR-26a mimics组和miR-26a inhibitor组。RT-PCR和Western blotting法分别检测各组SW480细胞中HMGA1 mRNA和蛋白表达水平。采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测各组SW480细胞中双荧光素酶活性,以此确定HMGA1是否为miR-26a的靶基因。采用CCK8实验检测各组细胞增殖活力,Transwell小室法检测各组细胞侵袭数和迁移数。结果：HMGA1基因是miR-26a的靶基因。与miR-NC组比较,转染24、48和72 h时miR-26a mimics组SW480细胞增殖活力明显降低（P<0.01）,而miR-26a inhibitor组细胞增殖活力明显升高（P<0.01）。与miR-NC组比较,各时间点miR-26a mimics组和miR-26a mimics+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均降低（P<0.01）,而miR-NC+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均升高（P<0.01）;与miR-26a mimics组比较,各时间点miR-26a mimics+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均升高（P<0.01）;与miR-NC+pcDNA3.1-HMGA1组比较,各时间点miR-26a+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均降低（P<0.01）。结论：HMGA1是miR-26a的靶基因。上调miR-26a表达可抑制人结肠癌SW480细胞增殖,下调miR-26a表达可促进人结肠癌SW480细胞增殖。     

miR-152通过靶向FGF2抑制肺癌A549细胞系的增殖侵袭

目的:探讨miR-152通过靶向成纤维细胞生长因子2（FGF2）对肺癌A549细胞系的增殖和侵袭的作用机制。方法:通过实时荧光定量PCR（qPCR）检测正常上皮细胞BEAS-2B和肺癌A549细胞中miR-152和FGF2的表达情况;采用转染技术,分别特异性表达肺癌A549细胞系中miR-152和FGF2基因的表达。将肺癌A549细胞系分为6组:miRNA 空转组（miR-NC组）、miR-152 过表达组（miR-152 mimics组）、miR-152 抑制组（miR-152 inhibitor组）、FGF2过表达空转组（pcDNA3.1-NC组）、FGF2过表达组（pcDNA3.1-FGF2组）和miR-152过表达+FGF2过表达组（miR-152+ pcDNA3.1-FGF2组）。通过qPCR检测A549细胞系中miR-152和FGF2的表达水平;细胞克隆和Transwell小室实验分别检测A549细胞系的增殖和侵袭能力;采用双荧光报告基因法验证miR-152与FGF2结合情况;Western印迹法检测A549细胞系中FGF2、自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）Ⅱ/Ⅰ、beclin1和p62的表达量。结果:qPCR结果显示,与正常上皮细胞BEAS-2B比较,肺癌A549细胞中miR-152的表达量显著降低（P＜0.01）,而FGF2的表达量显著增加（P＜0.01）。TargetScan生物信息学软件预测显示miR-152与FGF2的3′UTR结合,双荧光报告基因检测结果显示,miR-152与FGF2直接结合。细胞克隆和Transwell小室实验结果显示,与miR-NC组比较,miR-152 mimics组中的A549细胞系的增殖和侵袭能力显著减低（P＜0.05）,miR-152 inhibitor组的增殖和侵袭能力显著增加（P＜0.05）。与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-FGF2组中的A549细胞系的增殖和侵袭能力显著增加（P＜0.05）。与miR-152 mimics组比较,miR-152+ pcDNA3.1-FGF2组中A549细胞系的增殖和侵袭能力显著增加（P＜0.05）。Western印迹结果显示,与miR-NC组比较,miR-152 mimic组FGF2和p62蛋白表达显著降低（P＜0.05）,但LC3B Ⅱ/Ⅰ和beclin1的表达量显著增加（P＜0.05）,而miR-152 inhibitor组结果与之相反。与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-FGF2组FGF2和p62蛋白表达显著增加（P＜0.05）,而LC3B Ⅱ/Ⅰ和beclin1的表达量显著降低（P＜0.05）。与miR-152 mimics组比较,miR-152+ pcDNA3.1-FGF2组FGF2和p62蛋白表达显著增加（P＜0.05）,LC3B Ⅱ/Ⅰ和beclin1蛋白表达量显著降低（P＜0.05）。结论:miR-152靶向FGF2抑制肺癌A549细胞系自噬,从而降低增殖侵袭能力,可成为肺癌临床治疗的新靶点。     

地西他滨通过甲基化调控DU145细胞中miR-3064-5p的表达

目的 探讨miR-3064-5p在前列腺癌（PCa）细胞中的表达调控机制。方法 利用脂质体转染法将阴性对照（NC）组及miR-3064-5p模拟物（miR-3064-5p mimics）转染入PCa细胞DU145中,细胞平板克隆实验、划痕实验、Western blot法分别检测DU145细胞增殖和迁移侵袭能力;qRT-PCR检测前列腺正常上皮细胞及PCa细胞中miR-3064-5p的表达;生物信息学软件分析,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测miR-3064-5p启动子区的甲基化水平;使用地西他滨（decitabine,DAC）处理DU145细胞,MSP和qRTPCR分别检测DAC对miR-3064-5p启动子甲基化状态和表达的影响;Western blot检测相关蛋白水平。结果 过表达miR-3064-5p可抑制DU145细胞的增殖和转移（P均<0.05）;与正常前列腺上皮细胞RWPE-1相比,miR-3064-5p在前列腺癌细胞中表达均下调（P均<0.05）;miR-3064-5p的启动子区存在甲基化岛,miR-3064-...     

miR-148a对食管癌细胞迁移及侵袭的影响及潜在分子机制研究

目的探究微小核糖核酸148a（miR-148a）在食管鳞状细胞癌（ESCC）中的表达及对食管癌TE-1 细胞迁移和侵袭能力的影响。方法收集48例食管癌患者肿瘤及癌旁组织的RNA标本，逆转录PCR合成互补脱氧核糖核酸（cDNA），实时荧光定量聚合酶链反应PCR检测miR-148a 在肿瘤及癌旁组织中的表达情况，分析肿瘤组织中miR-148a 表达差异的临床意义。将人工合成的miR-148a模拟物（miR-148a mimics）转染入食管癌细胞TE-1中，划痕愈合实验检测过表达miR-148a对TE-1细胞迁移的影响，Transwell小室模型检测miR-148a 对TE-1 侵袭的影响。Western blot检测miR-148a 过表达对TE-1 细胞中原癌基因（c-myc）及基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白表达的影响。结果MiR-148a在食管癌组织中表达水平下调（P =0.031）；过表达miR-148a能够抑制TE-1细胞迁移（P =0.021）及侵袭（P =0.018）并下调细胞内c-myc（P =0.037）及MMP-9（ P=0.026）的表达水平。结论miR-148a 在食管癌中低表达，miR-148a可能通过抑制c-myc/MMP-9 通路的表达来发挥抑制食管癌细胞迁移及侵袭。     

miR-1826在前列腺癌中的表达及其对PC-3、DU145细胞侵袭和迁移能力的影响

目的 观察miR-1826在前列腺癌(PC)及其细胞株中的表达,并探讨其对PC-3、DU145细胞侵袭和迁移能力的影响。方法 实时定量PCR(qRT-PCR)研究miR-1826在前列腺癌组织、癌旁正常组织及PC-3、DU145细胞的表达。采用Kaplan-Meier曲线分析miR-1826的表达与PC患者生存率的关系。采用Cox回归分析研究影响PC患者预后的危险因素。用miR-1826模拟物、模拟物阴性对照(NC)、miR-1826抑制剂或抑制剂NC转染PC细胞。通过CCK-8法和集落形成试验研究miR-1826对PC细胞增殖的影响,通过Transwell实验检测miR-1826对PC细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 miR-1826在PC组织中的表达低于邻近正常组织,两种PC细胞系中miR-1826的表达水平均低于正常人前列腺上皮细胞系。与高表达患者相比,miR-1826低表达患者的总生存期较短。miR-1826的下调可以促进PC细胞的迁移和侵袭。结论 miR-1826的低表达可能促进了PC的进展,上调miR-1826能抑制PC细胞的侵袭、迁移能力。     

miR-138-5p靶向调控程序性死亡配体-1对肺腺癌细胞的增殖、迁移和上皮间质转化的影响

目的：探讨微小RNA-138-5p(miR-138-5p)靶向调控程序性死亡配体-1(PD-L1)对肺腺癌细胞（H1299）增殖、迁移及上皮间质转化（EMT）的影响。方法：选择2019年3月至2021年5月在本院手术治疗的肺腺癌患者42例,术中取肺腺癌组织与癌旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测肺腺癌组织、癌旁组织与肺腺癌细胞H1299、HCC827、A549、H1975及支气管上皮细胞BEAS-2B中miR-138-5p表达水平;将H1299细胞分为Control组、miR-138-5p过表达（miR-138-5p mimics）组及阴性对照（miR-NC）组、抑制PD-L1表达（si-PD-L1）组及阴性对照（si-NC）组、miR-138-5p mimics+空载质粒（pcDNA）组和miR-138-5p mimics+PD-L1过表达（PD-L1）组。双荧光素酶报告基因检测miR-138-5p与PD-L1的靶向关系,CCK-8法与细胞划痕实验检测H1299细胞增殖与迁移,Western blotting法检测H1299细胞PD-L1、增殖细胞核抗原（PCNA）、基...     

过表达miR-4328抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和上皮间质转化

目的 研究miR-4328在前列腺癌中的作用及分子机制.方法 采用CCK-8方法检测过表达miR-4328对前列腺癌细胞增殖能力的影响, 采用Transwell方法检测对迁移能力的影响, 采用Real-time PCR和Western blotting方法检测上皮间质转化标志物E-cadherin、N-cadherin和Vimentin以及上皮间质转化相关转录因子ZEB1的表达水平.结果 miR-4328在前列腺癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织 (P<0.001) .在前列腺癌细胞中, 转染miR-4328 mimics后, 肿瘤细胞的增殖能力显著降低 (P<0.001) .同时过表达miR-4328可以显著降低前列腺癌细胞的迁移能力 (P<0.001) .在前列腺癌细胞中, 过表达miR-4328后, 上皮细胞标志物E-cadherin的表达水平显著上升 (P<0.001) , 而间质细胞标志物N-cadherin和Vimentin的含量显著降低 (P<0.001) .进一步研究发现过表达miR-4328可以下调上皮间质转化相关转录因子ZEB1的表达水平 (P<0.001) .结论 过表达miR-4328显著抑制前列腺癌细胞的增殖能力、迁移能力和上皮间质转化过程.     

前列腺癌中HMBOX1的表达水平及其对细胞上皮间质化的影响*

目的 探究HMBOX1在前列腺癌中的表达水平及其对前列腺癌上皮间质化的影响。方法 选取2015年10月—2017年10月在浙江省立同德医院确诊并行根治性前列腺切除术的68例前列腺癌患者作为研究对象（PC组），选取同期收治的70例良性前列腺增生患者作为对照（BPH组），采用免疫组织化学法检测HMBOX1在两组的表达；构建HMBOX1过表达（实验组）和对照组稳定细胞系，采用Western blotting检测HMBOX1、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）的表达；采用划痕实验检测HMBOX1过表达对细胞迁移的影响；采用Transwell检测HMBOX1过表达对细胞迁移能力的影响。结果 PC组HMBOX1蛋白的阳性表达率（19.12%）比BPH组（55.71%）下降（P?<0.05）；实验组细胞中E-cadherin的表达水平高于对照组细胞（P?<0.05），Vimentin的表达水平较对照组细胞下降（P?<0.05）；与对照组细胞比较，实验组细胞24?h后的划痕创口愈合面积较小，迁移速度降低（P?<0.05）。与对照组侵袭细胞数（421.88±45.70）个比较，实验组侵袭细胞数（172.06±19.25）降低（P?<0.05）。结论 HMBOX1在前列腺癌组织中表达降低，过表达HMBOX1可抑制前列腺癌的上皮间质化及肿瘤侵袭迁移能力。     

miR-506对结肠癌细胞增殖和转移活性的影响

目的：观察miR-506对结肠癌细胞活性、增殖、转移等恶性表型的影响。方法：以结肠癌细胞系HCT116为模型，以处理方式不同分为pcDNA3空载体对照组、过表达miR-506组、pSIH1空载体对照组及抑制miR-506组。荧光实时定量PCR检测各组中miR-506的表达水平，CCK8实验检测细胞的活性，集落形成实验检测细胞的集落形成能力，Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果：与pcDNA3空载体对照组比较，过表达miR-506后HCT116细胞内miR-506表达水平升高，差异有统计学意义（t=28.97,P<0.05），而细胞活性、集落形成能力、迁移和侵袭的能力减弱，差异有统计学意义（t=6.14、8.63、5.32、3.24,P<0.05）；抑制miR-506组与pSIH1组比较，miR-506的相对表达量、细胞活性、集落形成能力、迁移和侵袭能力比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：miR-506抑制结肠癌细胞HCT116活性、集落形成能力、侵袭和迁移能力，在结肠癌细胞中发挥抑癌基因的作用。     

HP1α（CBX5）对前列腺癌细胞迁移、侵袭和增殖影响的研究

目的:探讨HP1α在前列腺癌细胞LNCaP和PC3中的表达情况,并研究HP1α的表达对LNCaP和PC3的影响。方法:采用qPCR及Western 印迹检测HP1α的表达情况,通过Transwell检测细胞的迁移和 侵袭能力,CCK-8和集落形成检测细胞的增殖能力。结果:HP1α在前列腺癌细胞C4-2和LNCaP中表达水平最高,PC3和DU145次之,良性前列腺增生的最低（P <0.05）;Transwell显示,与si-NC组相比, si-HP1α组前列腺癌细胞LNCaP和PC3的迁移和侵袭能力均降低（P <0.05）;CCK-8和集落形成实验显示敲低HP1α后,前列腺癌细胞LNCaP和PC3的增殖能力下降（P <0.05）;Western 印迹发现EMT分子标 志物E-cadherin的表达增加,而N-cadherin、Vimentin等的表达均降低（均P <0.05）。结论:HP1α在前列腺癌细胞LNCaP、C4-2、PC3和DU145中高表达,而降低其表达可以抑制前列腺癌细胞LNCaP和PC3 的迁移、侵袭、增殖以及上皮-间充质转化（EMT）能力。     

lncRNA LINC00173通过调节miR-130a-5p抑制骨肉瘤发生发展的机制研究

目的探讨长链非编码RNA（lncRNA）LINC00173通过调控miR-130a-5p抑制骨肉瘤发生发展的分子机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞系MG-63,分别将LINC00173过表达载体质粒或空载质粒转染至MG-63细胞,实时荧光定量PCR（qPCR）检测转染效率,采用细胞计数法（CCK-8）和Transwell实验分析MG-63细胞增殖、侵袭和迁移能力,双荧光素酶报告基因实验和qPCR检测LINC00173和miR-130a-5p的靶向调控关系。同时过表达LINC00173和miR-130a-5p,并检测MG-63细胞增殖、侵袭和迁移能力。结果qPCR检测结果显示,与Mock组比较,pc-LINC00173组LINC00173在MG-63细胞中的表达量明显升高（P < 0.01）。转染48 h和72 h后,pc-LINC00173组细胞增殖活力均低于Mock组和pcDNA组（P < 0.01）。Transwell检测结果显示,pc-LINC00173组与Mock组比较侵袭和迁移细胞数明显减少（P < 0.05）。LINC00173与miR-130a-5p之间存在特异性结合位点,与miR-NC组比较,转染miR-130a-5p mimics能够抑制LINC00173-Wt细胞的相对荧光素酶活性（P < 0.01）,与Mock组和pcDNA组比较,pc-LINC00173组MG-63细胞中miR-130a-5p的表达量均降低（P < 0.01）。与pc-LINC00173组和pc-LINC00173+miR-NC组比较,pc-LINC00173+miR-130a-5p组MG-63细胞中miR-130a-5p的表达明显升高,吸光度值明显升高,侵袭和迁移细胞数明显增多（P < 0.01）。结论LINC00173能够抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与靶向抑制miR-130a-5p的表达有关。     

MiR-125b-5p 抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭：基于靶向下调CD147的表达

目的 探讨miR-125b-5p靶向调控细胞外基质金属蛋白诱导因子（CD147）表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法 应用荧光实时定量PCR技术（RT-qPCR）检测卵巢癌组织和癌细胞株中miR-125b-5p和CD147 mRNA的表达;构建过表达miR-125b-5p的SKOV3细胞或低表达miR-125b-5p的HO8910细胞。CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验检测过表达或低表达miR-125b-5p对卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响;使用Starbase（http://starbase. sysu.edu.cn/）生信软件预测miR-125b-5p与CD147之间的潜在互补结合位点并使用双荧光素酶报告基因实验进行验证其靶向关系;体外培养SKOV3细胞,分别转染mimic NC、miR-125b-5p mimic、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1-CD147,转染后分为mimic NC组、miR-125b-5p mimic组、miR-125b-5p mimic组+pcDNA3.1组、miR-125b-5p mimic+pcDNA3.1-CD147组,应用RT-qPCR和Westem blot实验检测各组中miR-125b-5p水平,CD147蛋白和mRNA水平;应用CCK-8实验、Transwell实验检测各组卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果 RT-qPCR技术证实miR-125b-5p在癌组织和卵巢癌细胞株中均低表达,而CD147在癌组织和卵巢癌细胞株中均高表达（P<0.05）;选择SKOV3和HO8910细胞进行转染,过表达miR-125b-5p后的卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭的能力均被抑制（P<0.05）;Starbase生信软件预测及双荧光素酶报告基因实验证实miR-125b-5p 和CD147存在一个靶向调控关系;在SKOV3细胞中转染过表达质粒和对照质粒,转染成功后,过表达miR-125b-5p组中miR-125b-5p的表达升高,而CD147的mRNA和蛋白表达明显下降（P<0.05）。过表达miR-125b-5p后再转染pcDNA3.1-CD147,CD147的mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）。Transwell实验显示过表达miR-125b-5p后卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移受到明显抑制,而过表达miR-125b-5p后再过表达CD147,卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移的能力得到增强。结论 miR-125b-5p通过负向调控CD147的表达,从而抑制卵巢癌细胞的迁移与侵袭。     

miR-182在胆囊癌中的表达及其对胆囊癌细胞增殖、侵袭能力的影响

目的:检测miR-182在胆囊癌中的表达,探讨其影响胆囊癌细胞增殖、侵袭的可能机制。方法:实时荧光定量PCR检测miR-182、p38在10例胆囊癌组织、癌旁组织中的表达情况;应用miR-182mimics转染胆囊癌细胞GBC-SD,应用p38 MAPK信号通路特异性阻滞剂SB203580处理转染miR-182mimics的GBC-SD细胞,通过MTT实验、细胞周期检测、Transwell小室检测miR-182对GBC-SD细胞增殖、侵袭能力的影响。结果:胆囊癌组织中miR-182、p38的表达高于癌旁组织;miR-182mimics转染GBC-SD细胞后,p38的表达水平随之升高(P<0.05),细胞增殖能力增强,细胞迁移数增多(75±8),S期细胞比例增多[(68.81±7.57)%];应用SB203580处理转染miR-182的GBC-SD细胞,细胞增殖能力降低,细胞迁移数减少(23±5),S期细胞比例减少[(34.49±7.05)%]。结论:miR-182在胆囊癌组织中高表达,通过上调p38 MAPK信号通路增强胆囊癌细胞的增殖、侵袭能力,参与了胆囊癌的发生发展过程。     

miR-145对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究miR-145对人宫颈癌细胞系SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法体外培养子宫颈癌细胞和正常宫颈上皮细胞,检测细胞中miR-145表达水平;将SiHa细胞分为miR-145过表达(mimics)组和阴性对照(NC)组,转染48 h后,CKK-8法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;应用TargetScan数据库预测miR-145的靶基因并用荧光素酶报告基因实验验证,蛋白免疫印记(WB)检测miR-145过表达对肌球蛋白Ⅵ(MY06)蛋白表达的影响。结果 SiHa、Hela、MS751人子宫颈癌细胞中miR-145表达水平均显著低于正常子宫颈上皮细胞,差异有统计学意义(P0.05)。转染miR-145 mimics后,SiHa细胞中miR-145表达水平显著上调(P0.05);与NC组比较,mimics组SiHa细胞的增殖、迁移、侵袭能力均显著下降(P0.05)。TargetScan数据库预测显示MY06是miR-145潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实二者存在靶向关系。WB结果显示miR-145过表达后,MY06蛋白表达水平显著下调。结论 miR-145能通过下调MY06表达抑制人宫颈癌细胞系SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭。     

MicroRNA-34a对尿路上皮癌细胞株5637细胞迁移、侵袭和增殖的影响

目的 研究microRNA-34a （miR-34a）对膀胱肿瘤细胞株5637细胞迁移、侵袭和增殖的影响.方法 在5637细胞株中过表达miR-34a,运用小室迁移实验和小室侵袭实验检测细胞迁移力和侵袭力;运用血球计数板法和新型四唑氮盐（MTS）法检测细胞增殖力.结果 过表达miR-34a后,5637细胞迁移力和侵袭力均下降（P＜0.01）,细胞增殖受抑（P＜0.01）.结论 过表达miR-34能抑制膀胱肿瘤细胞株5637的迁移、侵袭和增殖.     

下调LncRNA KCNQ1OT1对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的影响

【摘要】 目的 探讨lncRNA KCNQ1OT1（KCNQ1OT1）对喉癌细胞增殖、侵袭和上皮间质转化（EMT）的影响和作用机制。 方法 细胞按转染质粒不同分组为：siRNA NC组、KCNQ1OT1 siRNA组;mimics NC组、miR-138 mimics组;KCNQ1OT1 wt+mimics NC组、KCNQ1OT1 wt+miR-138 mimics组、KCNQ1OT1 mut+mimics NC组、KCNQ1OT1 mut+miR-138 mimics组;pcDNA-3-1(+)+mimics NC组、pcDNA-KCNQ1OT1+mimics NC组、miR-138 mimics+pcDNA-3.1(+)组、pcDNA-KCNQ1OT1+miR-138 mimics组;FAK wt+mimics NC组、FAK wt+miR-138 mimics组、FAK mut+mimics NC组、FAK mut+miR-138 mimics组;Control组、Y15组、inhibitor NC组、miR-138 inhibitor组、miR-138 inhibitor+Y15组。分别采用CCK-8实验、细胞侵袭实验和Western blot检测细胞增殖、侵袭和EMT能力。RT-qPCR检测KCNQ1OT1在Hep-2和HLEC细胞中的表达;采用miRanda和双荧光素酶报告基因实验分析KCNQ1OT1和miR-138之间的关系;TargetScan和双荧光素酶报告基因实验分析miR-138和FAK的关系;采用Western blot检测过表达及下调miR-138后Hep-2细胞中FAK、Src、MAPK蛋白磷酸化水平;检测下调miR-138激活FAK/Src/MAPK信号通路对Hep-2细胞增殖、侵袭与EMT的影响。 结果 Hep-2细胞中KCNQ1OT1表达量明显上升（P＜0.01),miR-138表达量下降（P＜0.05);敲低KCNQ1OT1抑制了Hep-2细胞增殖、侵袭和EMT。KCNQ1OT1 3′UTR靶向miR-138。敲低miR-138促进了Hep-2细胞增殖、侵袭与EMT,过表达miR-138则起到抑制作用。与过表达miR-138相比,同时过表达KCNQ1OT1和miR-138能部分逆转miR-138上调对细胞增殖、侵袭和EMT的影响。miR-138靶向FAK,敲低miR-138使FAK、Src、MAPK蛋白磷酸化水平升高,过表达miR-138则降低FAK、Src、MAPK蛋白磷酸化水平。沉默miR-138能够激活FAK/Src/MAPK通路促进细胞增殖、侵袭和EMT。 结论 下调LncRNA KCNQ1OT1通过miR-138/FAk/Src/MAPK轴抑制喉癌的增殖、侵袭和EMT。     

MicroRNA-129-2靶向调控SOX4抑制食管癌细胞增殖与侵袭转移的研究

目的探讨 MicroRNA-129-2（miR-129-2）在体内外抑制食管癌细胞增殖和侵袭转移的作用及可能机制,为食管癌的预后评估及靶向治疗提供新的思路。方法将 miR-129-2 mimics 及 miR-129-2 mimics NC 基因序列分别转染到食管癌 NMC109细胞中,并设为 miR-129-2 mimics 高表达组和 miR-129-2 mimics 阴性对照组（miR-129-2 mimics NC 组）,将非转染的 NMC109细胞设为空白对照组。体外实验：运用 MTT 法检测3组细胞的增殖能力、Transwell 法检测细胞侵袭能力、蛋白印迹法检测 SOX4蛋白表达。采用裸鼠体内移植瘤形成实验检测3组细胞在体内环境下的增殖能力。结果 miR-129-2 mimics 组的食管癌细胞增殖活性及侵袭能力较 miR-129-2 mimics NC 组及空白对照组明显减弱（P ＜0.001）,而空白对照组与 miR-129-2 mimics NC 组食管癌细胞增殖性及侵袭性无明显差异（P ＞0.05）;miR-129-2 mimics 组的食管癌细胞中,SOX4的表达下调（P ＜0.001）;miR-129-2 mimics 组裸鼠移植瘤体积及重量明显减小（P ＜0.001）,而 miR-129-2mimics NC 组及空白对照组无明显差异（P ＞0.05）。结论 miR-129-2具有抑制食管癌细胞 NMC109增殖和侵袭转移的作用,其作用机制可能与靶向下调 SOX4基因表达有关。