Runt相关转录因子3在人结肠癌HCT-116/5-FU耐药细胞株中的表达及其与耐药的相关性

目的 建立耐5-氟尿嘧啶(5-FU)的人结肠癌细胞株HCT-116/5-FU,初步探讨Runt相关转录因子3(RUNX3)与结直肠癌耐药的关系。方法 采用低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击法建立人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,CCK-8法检测5-FU对亲本株HCT-116及耐药株HCT-116/5-FU的半数抑制浓度(IC₅₀值),绘制细胞生长曲线,计算细胞群体倍增时间(TD);qRT-PCR和Western blot法检测亲本株HCT-116细胞及耐药株HCT-116/5-FU细胞中RUNX3、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和肺耐药蛋白(LRP)的mRNA和蛋白表达。采用siRNA技术敲低HCT-116细胞中RUNX3的表达,分为RUNX3敲低组(si-RUNX3-1组、si-RUNX3-2组)和阴性对照组(si-NC组),qRT-PCR和Western blot法分别在mRNA水平和蛋白水平验证RUNX3的敲低效率;CCK-8法测定si-RUNX3组和si-NC组的IC₅₀值,Western blot法测定两组中P-gp、MRP1和LRP的表达情况。结果 成功构建稳定的人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,耐药倍数为7.7倍;HCT-116/5-FU耐药细胞株群体TD较HCT-116亲本株明显延长(P<0.001),耐药细胞群体TD是亲本细胞的1.38倍(P=0.002),耐药株细胞形态发生变化。耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3 mRNA表达水平较亲本细胞株HCT-116明显降低(P=0.048),P-gp(P=0.008)、MRP1(P=0.001)和LRP mRNA(P=0.001)表达水平较亲本细胞株HCT-116明显升高;耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3蛋白质相对表达量较亲本细胞株HCT-116明显降低(P<0.001),P-gp、MRP1、LRP蛋白的相对表达量较亲本细胞株明显升高(P均<0.001)。成功构建了RUNX3低表达的HCT-116细胞模型,si-RUNX3-1组RUNX3 mRNA的表达与si-NC组相比差异无统计学意义(P=0.064),si-RUNX3-2组明显低于si-NC组(P=0.034);si-RUNX3-1组和si-RUNX3-2组RUNX3蛋白的表达量均明显低于si-NC组(P均<0.001),si-RUNX3-2组的敲低效率更高。选用si-RUNX3-2组完成后续实验,si-RUNX3组的IC₅₀值较si-NC组明显升高,下调RUNX3的表达能明显降低HCT-116细胞对5-FU的敏感性(P<0.001);si-RUNX3组的P-gp、MRP1和LRP蛋白相对表达量均明显高于si-NC组(P均<0.001)。结论 RUNX3表达下调能降低人结肠癌HCT-116细胞对5-FU的敏感性,可能与RUNX3表达的降低上调P-gp、MRP1和LRP等耐药蛋白表达,从而增加细胞的耐药性有关。     

奥沙利铂体外干预结直肠癌细胞株HT-29的耐药基因及相关蛋白的表达

目的:检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)耐药细胞株HT-29/L-OHP中多药耐药基因(multidrug resistance gene 1,MDR-1)、多药耐药相关蛋白的基因及他们编码的蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein,MRP)的表达,探讨其在L-OHP耐药中的作用。方法:利用MTT法检测L-OHP对原代细胞HT-29和耐药细胞HT-29/L-OHP的半数抑制率(IC50);利用RT-PCR及蛋白质印迹法检测HT-29/L-OHP中耐药基因及蛋白的表达情况。结果:L-OHP对HT-29和HT-29/L-OHP细胞的IC50分别为(4.15±0.17)μg.ml-1和(32.01±1.87)μg.ml-1,耐药指数为7.71;与原代细胞相比,HT29/L-OHP中耐药基因及蛋白表达均有所增加。结论:结直肠癌耐药细胞株中MDR-1、MRP基因及其编码的蛋白P-gp、MRP的表达高于原代细胞,这为预测CRC的多药耐药提供了新的依据。     

RNAi沉默SDF-1基因对新诱导建立的人胃癌耐药细胞系SGC7901/L-OHP的影响

目的 诱导构建人胃癌奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)耐药细胞系SGC7901/L-OHP,探讨RNAi沉默基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)表达对SGC7901/L-OHP增殖、凋亡、耐药的影响。方法 L-OHP高浓度间歇冲击法诱导构建耐药细胞系SGC7901/L-OHP,观察其生物学行为变化,RT-PCR及Western blot法检测SDF-1 mRNA和蛋白表达情况;RNAi沉默SGC7901/L-OHP细胞SDF-1基因,从mRNA和蛋白水平验证沉默效果,MTT法及流式细胞术检测SGC7901/L-OHP细胞增殖、凋亡及细胞周期变化。结果 成功建立耐药细胞系SGC7901/L-OHP,L-OHP对其增殖抑制率明显低于SGC7901细胞,其G₀/G₁期细胞增多、S期细胞减少,且SDF-1 mRNA和蛋白表达量明显高于SGC7901细胞(P均<0.05)。成功沉默SDF-1基因表达后,与空白及阴性对照组比较,SDF-1-RNAi组细胞增殖抑制率明显升高,对L-OHP药物敏感度明显升高,且其细胞凋亡也明显升高,G₀/G₁期细胞明显减少,S期细胞明显增多(P均<0.05)。结论 本实验成功建立人胃癌L-OHP耐药细胞系SGC7901/L-OHP,并发现SDF-1参与胃癌细胞SGC7901对L-OHP获得性耐药过程;RNAi沉默SDF-1基因表达后抑制SGC7901/L-OHP细胞增殖、促进凋亡并部分逆转其对L-OHP的耐药性。     

RNA干扰MRP2表达逆转结肠癌细胞对长春新碱的耐药性

目的 构建MRP2基因的真核表达载体pGenSil-1-MRP2-siRNA,并观察其转染人结肠癌耐长春新碱细胞株HCT-8/V前后MRP2基因和ABCC2蛋白表达变化以及对化疗药物敏感性变化.方法 设计MRP2特异性siRNA的序列,克隆至pGenSil-1质粒中,测序鉴定后,用脂质体将重组质粒转染至HCT-8/V细胞中,用定量RT-PCR和Western blot检测MRP2的表达,MTT实验测定pGenSil-1-MRP2-siRNA和长春新碱对HCT-8/V细胞增殖抑制作用.结果 在结肠癌耐药细胞HCT-8/V中,RNAi明显抑制了MRP2 mRNA及蛋白的表达,在相同浓度化疗药物的作用下,RNA干扰组细胞凋亡比例显著高于对照组(P<0 01),表明细胞耐药性显著下降,对药物敏感性显著增高.结论 成功构建了MRP2的siRNA真核表达载体,并且对结肠癌耐药细胞MRP2的表达有明显抑制作用,取得良好的逆转耐药效果.     

结直肠癌LoVo细胞株EMT逆转前后耐药相关ABC转运蛋白基因的变化

目的：观察结直肠癌LoVo细胞株发生上皮细胞间质转型（EMT）逆转前后3种耐药相关ABC转运蛋白基因的表达.方法：运用荧光定量PCR的方法,比较发生EMT的细胞株LoVo GnT-V/NC和EMT逆转之后的细胞株LoVo GnT-V/1564中 ABCB1、ABCC3、ABCB6基因表达量.结果：LoVo GnT-V/NC细胞中ABCB1基因表达量是LoVo GnT-V/1564的7.67倍;LoVo GnT-V/NC和LoVo GnT-V/1564细胞中ABCC3、ABCB6基因表达量差异均无统计学意义（P〉0.05）.结论：LoVo细胞株EMT发生后肿瘤细胞的耐药相关基因ABCB1的表达量也发生了改变,EMT可能与肿瘤的多药耐药相关.     

苦参素逆转结肠癌细胞多药耐药作用及机制研究

目的探讨苦参素对人结肠癌耐长春新碱细胞(HCT-8/VCR)对多种化疗药敏感性的影响及其可能的作用机制。方法使用MTT法检测苦参素对结肠癌细胞增殖抑制作用,鉴定HCT-8/VCR细胞的多药耐药性及苦参素作用前后细胞耐药性的变化,倒置显微镜下观察苦参素作用前后细胞的形态改变,real-time PCR法检测ABCB1mRNA的表达变化,Western blot法检测苦参素作用前后P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达变化,流式细胞术检测细胞内罗丹明123(Rho123)的荧光强度。结果 HCT-8/VCR细胞对长春新碱、顺铂及5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-Fu)均呈现出不同程度的耐药,耐药倍数分别为12.52、3.73、6.34,即为多药耐药细胞。苦参素可抑制HCT-8/VCR及其亲本细胞HCT-8的增殖,呈浓度依赖性。经1 mg/ml苦参素作用于HCT-8/VCR细胞后,各化疗药IC50均降低,逆转倍数分别为3.44、2.15、2.04,ABCB1mRNA及P-gp蛋白表达均较用药前降低(P<0.05或P<0.001),细胞内Rho123外排减少,荧光强度增加(P<0.05)。结论苦参素可逆转结肠癌细胞的多药耐药性,其机制可能与抑制P-gp的表达,提高细胞内药物浓度有关。     

Pokemon基因表达与胃癌耐药性的关系

目的 探讨okemon基因表达与胃癌细胞药敏性及耐药基因的关系.方法 取60例胃癌组织和癌旁组织石蜡标本,采用免疫组化技术检测组织中pokemon蛋白及耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、肺耐药蛋白(LRP)、生存素(survivin)的表达,并分析pokemon蛋白与其他4种蛋白的关系.采用磺酰罗丹明B(SRB)蛋白染色法检测5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)、奥沙利铂(L-OHP)对胃癌细胞株SGC7901、胃癌耐药细胞株SGC7901/ADR、胃上皮细胞株GES-1的抑制作用;qPCR及蛋白质印迹法检测上述3种细胞株中pokemon和耐药基因的表达.合成针对pokemon的siRNA并转染SGC7901/ADR细胞,检测转染前后SGC7901/ADR细胞的化疗药敏性及耐药基因的变化.结果 胃癌组织中pokemon、P-gp、MRP1、LRP、survivin蛋白的阳性表达率均高于癌旁组织(P＜0.05);pokemon蛋白表达与P-gp、survivin蛋白表达间存在正相关关系(r=0.385 2,P=0.002;r=0.342 4,P=0.007).Pokemon、P-gp、MRP1、survivin蛋白在SGC7901/ADR细胞株中的表达高于细胞株SGC7901及GES-1;SGC7901/ADR细胞株的耐药性最强,SGC7901次之,GES-1最弱(P＜0.01).Pokemon-siRNA转染SGC7901/ADR细胞后细胞中pokemon mRNA的表达明显受到抑制;转染后化疗药物对细胞的抑制能力增强,P-gp、survivin表达减弱(P＜0.05).结论 Pokemon与P-gp、survivin通过相互调控而促进胃癌耐药性的形成.Pokemon可能成为胃癌靶向治疗的候选基因.     

左金丸通过ABCB1/P-gp途径对裸鼠人结肠癌多药耐药的抑制作用

目的:探讨左金丸对人结肠癌多药耐药细胞(HCT-116)/奥沙利铂(L-OHP)的抑制作用及其可能机制。方法:建立裸鼠人结肠癌皮下移植瘤耐药模型,随机分为空白对照(生理盐水)组、阳性对照(L-OHP)组、左金丸组,以及左金丸低、中、高剂量联合L-OHP组。分别给予相应药物连续干预28 d,每组留下半数荷瘤裸鼠观察生存期;其余裸鼠于末次给药后12 h,剥取肿瘤,测量、计算抑瘤率,并用免疫组织化学法检测肿瘤组织中P-糖蛋白(P-gp)表达,用qRT-PCR法检测多药耐药基因ABCB1的mRNA表达。结果:左金丸高剂量联合L-OHP组荷瘤小鼠的中位生存时间明显长于其他各组(P0.05);而在抑瘤率方面,左金丸低、中、高剂量联合L-OHP组的抑瘤率均显著高于L-OHP组(P0.01),且高剂量组优于低、中剂量组(P0.05),呈剂量依赖性。左金丸联合L-OHP干预后,肿瘤组织内P-gp和ABCB1基因表达明显降低(P0.01),并且随着左金丸浓度的增加,其抑制作用也加强,具有剂量依赖性。结论:左金丸可抑制人HCT-116/L-OHP结肠癌多药耐药细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,延长裸鼠的中位生存时间,其作用机制可能与下调肿瘤组织中P-gp和ABCB1 mRNA的表达有关。     

去甲基化药物逆转结肠癌细胞株sw620/L-OHP耐药性的作用及机理研究

目的 探讨甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-dC)对结肠癌奥沙利铂(L-OHP)耐药细胞株sw620/L-OHP耐药性的逆转作用及其作用机制.方法 应用5-aza-dC作用于结肠癌细胞sw620与其L-OHP耐药细胞sw620/L-OHP,CCK-8法检测其逆转耐药作用;应用Western blot检测5-aza-dC使用前后sw620/L-OHP细胞中BNIP3基因及耐药基因编码的P糖蛋白(P-GP)、多药耐药相关蛋白(MRP)表达水平的变化;应用同位素微量示踪法检测5-aza-dC使用前后3w620/L-OHP细胞中甲基转移酶(DNMT)的活性.结果 1.4 μmol/L5-aza-dC能使L-OHP对sw620/L-OHP细胞IC50由(0.335±0.043)μg/mL降到(0.069±0.023)μg/mL,逆转耐药倍数为8.26倍(P＜0.001);5-aza-dC能使sw620/L-OHP细胞中P-GP、MRP蛋白表达增加(P＜0.05),但增加程度与5-aza-dC剂量变化无关(P＞0.05);另外5-aza-dC还能使表达低下的BNIP3蛋白重新表达,且其表达水平随5-aza-dC浓度的增加而增加(P＜0.001);5-aza-dC能够降低sw620/L-OHP细胞中DNMT的活性(P＜0.001).结论 5-aza-dC通过降低DNMT活性来上调BNIP3的表达,并协同某种机制抑制P-GP、MRP的进一步表达,从而逆转sw620/L-OHP细胞耐药性.     

沉默TRPM2-AS对耐奥沙利铂的结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)瞬时受体电位通道M2反义RNA(TRPM2-AS)对耐奥沙利铂(L-OHP)的结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及可能机制.方法 采用L-OHP浓度递增处理结直肠癌细胞HCT-8,获得L-OHP耐药细胞HCT-8/L-OHP,RT-qPCR法分别检测HCT-8和HCT-8/L-OHP...     

人结肠癌耐药细胞系HT29/L-OHP的建立及其生物学特性

目的建立人结肠癌奥沙利铂耐药细胞系HT29／L-OHP,探讨结肠癌对奥沙利铂（Oxaliplatin,L-OHP）产生耐药的特征规律和耐药的机制。方法采用逐步递增L-OHP浓度,间歇作用体外诱导法培养建立了人结肠癌L-OHP耐药细胞模型HT29／L-OHP。MTT法测定生长曲线、交叉耐药性和耐药指数;并用光镜、电镜、流式细胞仪（FCM）等方法观察其一般生物学特性的改变。结果历时3个月建成了L-OHP耐药细胞模型HT29／L-OHP,其耐药性能稳定,耐药指数为10．64;并且与5-氟尿嘧啶、长春新碱、阿霉素等多种抗癌药有不同程度的交叉耐药性。HT29／L-OHP的细胞形态及染色体数目发生了改变;体外细胞群体倍增时间较亲代细胞延长29．71h;细胞周期分析结果显示其S期与G0／G1期细胞减少、G2／M期细胞增多。结论HT29／L-OHP细胞是模拟临床用药特点建立的耐药性较稳定的多药耐药细胞,具有耐药细胞的基本生物学特性,是研究L-OHP耐药机制及筛选逆转剂的理想细胞模型。     

人结肠癌细胞HCT-8/V及HCT-8中葡萄糖神经酰胺合成酶的表达

目的:观察人结肠癌HCT-8细胞和其耐药细胞株HCT-8/V中葡萄糖神经酰胺合成酶(CCS)的表达及意义.方法:体外培养HCT-8细胞和HCT-8/V,采用CCK8法检测2种细胞对长春新碱(VCR)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)及顺铂(DDP)的耐药性,计算IC50.采用免疫细胞化学法和RT-PCR法检测2种细胞中GCS蛋...     

TOFA协同柔红霉素诱导肠癌细胞株HCT-8细胞凋亡

目的研究TOFA及柔红霉素（DNR）联合应用对肠癌细胞株HCT-8的作用,探讨其联合应用于临床的可能性。方法将1×10^4个HCT-8细胞种植于96孔板,采用MTT比色法测定不同浓度TOFA或／和DNR对同步化处理后的HCT-8细胞的生长抑制效果;DNA降解分析法（DNA Fragmemation）检测TOFA与DNR联合使用对HCT-8细胞DNA的损伤。Westernh10t检测TOFA与DNR联合使用对凋亡蛋白p53以及PARP的水解作用。结果单用TOFA或DNR均可呈浓度依赖性抑制肠癌细胞HCT-8的生长,其IC50值分别为7．5μg／mL和0．18μmoL／L;当用20μg/mLTOFA或0．6μmol／LDNR处理时,活性细胞只有正常对照组（无药物处理组）的26．2％±5．1％或22．3％±4．5％。当用20μg/mLTOFA和0．6μmol/LDNR两药联合应用时,活性细胞只有正常值的10．4％±3．0％。同时联合应用可显著增加肿瘤细胞DNA的降解;并显著诱导凋亡蛋白p53表达,促进PARP的水解。结论TOFA与DNR联合应用可协同抑制肠癌细胞株HCT-8细胞的生长,其效应与药物诱导细胞凋亡有关。     

新抑癌基因GPD1在结肠癌细胞HCT-8中的作用及其预后潜力研究

目的 探究新抑癌基因甘油-3-磷酸脱氢酶1（glycerol-3-phosphate dehydrogenase 1,GPD1）在结肠癌发生、发展中的作用及其与临床预后的关系。方法 应用HCT-8结肠癌细胞系,以siRNA干扰GPD1表达后进行细胞功能实验,分别以MTS实验与集落形成实验检测细胞增生活力与集落形成能力,以划痕试验、Transwell实验探究GPD1对HCT-8细胞系迁移能力的影响。对TCGA数据库进行生物信息学分析,探究GPD1表达水平与结直肠癌患者临床预后的关系,并明确GPD1低表达与其编码基因甲基化之间的关系。结果 干扰GPD1基因表达后,HCT-8细胞增生活力明显增强,重复实验差异具有统计学意义（P<0.01）;集落形成实验结果显示,GPD1干扰后的HCT-8细胞集落数目增多且集落直径增大,差异具有统计学意义（P<0.01）。划痕实验与Transwell实验结果显示,敲低GPD1表达的HCT-8细胞迁移能力无显著变化,表明GPD1对结肠癌细胞迁移能力无影响。生物信息学分析结果显示,GPD1低表达的结直肠癌患者总存活率（χ²=4.1,P=0.040）及无病存活率（χ²=13.2,P<0.000 1）均明显低于GPD1高表达患者,且GPD1低表达水平是结直肠癌预后不良的独立风险因素（P<0.05）。甲基化分析结果显示,结直肠癌组织中GPD1低表达与其编码基因高甲基化呈负相关（P<0.05）。结论 GPD1在结肠癌中发挥抑制细胞增生与集落形成的作用,且GPD1低表达是结直肠癌患者不良预后的独立预测因素。     

血管生成素2经PI3K/Akt途径对HCT-8细胞增殖的促进作用

目的:研究外源性血管生成素2(Ang-2)蛋白对结肠癌细胞株(HCT-8)中Tie-2、1-磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、Akt基因及蛋白表达的影响,探讨其与PI3K/Akt通路的关系.方法:用不同浓度的Ang-2蛋白(0、0.2、0.4、0.8、1.2、2.0、3.0 mg·L-1)作用于HCT-8细胞,用MTT法...     

肠胃清逆转耐草酸铂结肠癌细胞的DNA损伤修复实验研究

目的:观察肠胃清药物血清联合化疗药物干预HCT116、HCT116/L-OHP细胞DNA损伤修复情况的影响,进一步探讨肠胃清增效的分子机理。方法:采用MTT法,观察肠胃清药物血清的增效作用;采用Western blot方法,从DNA损伤修复的两条通路,观察L-OHP、肠胃清药物血清对XRCC1、XRCC2、XPF、ERCC1蛋白的影响,比色测定法检测DNA损伤指标AP位点。结果:肠胃清药物血清可逆转HCT116/L-OHP多药耐药。HCT116/L-OHP中XRCC1、XRCC2、XPF、ERCC1的含量较HCT116均显著增多(p<0.05),AP位点表达较HCT116显著减少(p<0.05),HCT116经L-OHP、L-OHP+肠胃清药物血清联合作用后XRCC1、XRCC2、ERCCl蛋白含量均显著减少(p<0.05),AP位点表达均显著增加(p<0.05),HCT116/L-OHP中L-OHP联合肠胃清药物血清组与对照组相比XRCC2、XPF、ERCC1蛋含量有减少趋势。结论:结肠癌耐药细胞胞内的AP位点降低,进而增加细胞的修复能力,提高耐药性。L-OHP攻击结肠癌细胞,是通过降低BER、NER的能力,导致DNA损伤加重,干扰DNA复制,达到治疗目的。肠胃清药物血清能增加L-OHP的该项能力。     

姜黄素逆转结肠癌裸鼠移植瘤多药耐药的研究

目的探讨姜黄素体内对人结肠癌耐长春新碱细胞株HCT-8/VCR多药耐药的逆转作用及其可能机制。方法将HCT-8/VCR种植于裸鼠皮下,建立肿瘤耐药模型。移植瘤裸鼠20只依据治疗方法的不同分为对照组(PBS)、长春新碱(Vincristine,VCR;2 mg/kg)组、姜黄素(50 mg/kg)组、姜黄素联合VCR(50 mg/kg姜黄素+2 mg/kg VCR)4组,每组5只。治疗2周后收集标本,称量各组瘤体质量,采用RT-PCR、Western blot分别检测瘤组织内MDR1 mRNA、survivin mRNA和P-gp、survivin蛋白的表达水平,HE染色观察瘤组织细胞形态学变化,评估姜黄素在不同处理因素中逆转肿瘤多药耐药的效果。结果姜黄素联合VCR能显著抑制瘤体的生长,姜黄素联合VCR组瘤质量[(0.42±0.23)g]明显低于对照组[(1.21±0.25)g]、VCR组[(1.13±0.27)g]、姜黄素组[(0.75±0.27)g](P<0.05)。RT-PCR、Western blot结果显示姜黄素能够下调MDR1 mRNA、survivin mRNA和P-gp、survivin蛋白的表达,姜黄素联合VCR组MDR1 mRNA(0.18±0.05)、survivin mRNA(0.63±0.04)、P-gp(0.15±0.02)、survivin(0.31±0.09)和姜黄素组MDR1 mRNA(0.39±0.11)、survivinmRNA(0.80±0.12)和P-gp(0.34±0.07)、survivin(0.40±0.11)蛋白表达明显低于对照组MDR1 mRNA(0.99±0.23)和survivin mRNA(1.19±0.32)表达,以及P-gp(0.71±0.23)、survivin(0.88±0.15)蛋白表达(P<0.05)。HE病理切片显示姜黄素组和姜黄素联合VCR组较其他2组有较多的淋巴细胞浸润,核固缩较多,核分裂相少,坏死更为广泛。结论多种机制参与姜黄素体内逆转肿瘤多药耐药,姜黄素可能通过下调MDR1、survivin mRNA表达和P-gp、survivin蛋白的表达,促进肿瘤细胞凋亡等多种途径逆转肿瘤的多药耐药性。     

TSG101-siRNA表达载体对结肠癌HT29/L-OHP细胞株耐药的逆转作用

目的 构建TSG101(tumour susceptibility gene101,TSG 101)小干扰RNA(TSGl01-siRNA)的真核表达载体,观察RNA干扰沉默TSG101基因后化疗药物奥沙利铂(L-OHP)对结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP增殖的影响.方法 根据小干扰RNA的设计原则由计算机软件辅助设计TSG101的靶序列,应用DNA重组技术将目的 序列克隆入小干扰RNA的表达载体;RT-PCR检测TSG101.siRNA对HT29/L-OHP细胞TSG101 mRNA表达的影响;Western blot榆测TSGl01-siRNA对TSGl01基因表达蛋白的抑制效率;采用MTT法测定TSGIOI-siRNA联合化疗药物L-OHP对HT29/L-OHP的增殖抑制作用;FCM分析TSG101-siRNA转染HT29/L-OHP细胞前后的细胞周期分布情况.结果 测序显示干扰载体构建成功,TSG101-siRNA能抑制TSG101mRNA表达,使HT29/L-OHP细胞TSG101蛋白的表达下降,明显增强L-OHP对HT29//L-OHP的增殖抑制,TSG101-siRNA转染HT29/L-OHP细胞后G0/G1期和s期细胞数有增加,而G2/M期细胞数有减少.结论 TSG101-siRNA的真核表达载体能有效地抑制HT29/L-OHP细胞的TSG101 mRNA、TSG101蛋白的表达,提高化疗药物奥沙利铂对HT29/L-OHP的抑制率,能逆转结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP对L-OHP的耐药性.