Exendin-4改善氧化应激减轻t-BHP诱导的HUVECs凋亡

目的 探讨Exendin-4对第三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响.方法 在原代培养的HUVECs中,采用t-BHP(100 μmol/L)干预4 h,加用或不加用Exendin-4(100 nmol/L)预处理细胞24 h,分为:对照组(A组)、t-BHP处理组(B组)、Exendin-4处理组(C组)及Exendin-4+t-BHP组(D组).应用MTT比色法检测细胞存活率,DAPI染色荧光显微镜观察细胞凋亡率,活性氧(ROS)检测试剂盒检测ROS的产生.结果 与A组比较,100 μmol/L t-BHP作用4 h,B组的HUVECs存活率下降40%(P<0.001);DAPI染色荧光显微镜观察证实,t-BHP可以诱导HUVECs凋亡;加用Exendin-4预处理细胞24 h,D组的HUVECs存活率较B组增高(P<0.01).DAPI染色荧光显微镜观察细胞凋亡率提示,与B组比较,Exendin-4预处理可使D组的细胞凋亡率减少44%(P<0.05),并减少ROS的产生(P<0.05).结论 t-BHP能够诱导HUVECs凋亡,Exendin-4可减少t-BHP诱导的HUVECs凋亡.     

普伐他汀对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响

目的:探讨普伐他汀对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖和氧化应激的影响.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞株,分对照组、高糖组和普伐他汀组,采用CCK-8细胞计数法测定系膜细胞增殖,比色法检测细胞培养液中的超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量的变化.结果:与对照组比较,高糖组出现系膜细胞增殖增加,上清液中SOD活性、GSH含量下降,MDA含量增加;与高糖组相比,普伐他汀组系膜细胞增殖减少,GSH含量、SOD活性上调,MDA含量下降.结论:普伐他汀能抑制高糖环境下的系膜细胞增殖,并显著减少高糖诱导的氧化应激水平.     

醛固酮抑制肾小球系膜细胞的自噬激活加速其在氧化应激状态下的凋亡

目的 探讨醛固酮对肾小球系膜细胞自噬激活的影响。 方法 通过3种经典的自噬活性检测方法检测醛固酮对体外培养的系膜细胞自噬的影响:(1)蛋白质印迹法检测不同浓度的醛固酮干预肾小球系膜细胞系(HMCL)后自噬相关的蛋白标记物LC3、SQSTM1/P62的表达水平变化;(2)向系膜细胞系转入GFP-LC3的真核表达质粒,用激光共聚焦显微镜观察醛固酮干预下系膜细胞荧光自噬点数量的变化并进行统计学分析;(3)通过电子显微镜观察醛固酮干预下系膜细胞自噬泡数量的变化并进行统计学分析。通过光镜下形态学观察及蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)剪切体的表达情况,分析醛固酮干预下系膜细胞在过氧化氢刺激后凋亡水平的变化。 结果 3种方法均证实高生理剂量醛固酮可以抑制系膜细胞自噬激活:(1)10^-7 mol/L醛固酮干预12 h后自噬标记蛋白LC3Ⅰ向LC3Ⅱ转化减少约40%;(2) 10^-7 mol/L醛固酮干预12 h能够降低饥饿及雷帕霉素诱导的系膜细胞自噬点数量,降低的比率分别为60%和47%;(3)醛固酮干预后可减少饥饿和雷帕霉素诱导的系膜细胞自噬泡的增加。10^-7 mol/L醛固酮干预系膜细胞12 h后接受过氧化氢2.5×10^-6 mol/L刺激较对照组细胞凋亡的比率明显增加(P <0.05)。 结论 高生理浓度的醛固酮能够抑制系膜细胞的基础自噬激活并促进系膜细胞在氧化应激条件下的凋亡。     

氧化低密度脂蛋白诱导人肾小球系膜细胞凋亡机制的研究

肾小球硬化的重要病理特征是进行性肾小球细胞外基质积聚和细胞的丧失。在肾小球炎症过程中 ,细胞过度凋亡导致细胞减少是肾小球硬化的重要原因[1] 。氧化低密度脂蛋白(Ｏｘ -ＬＤＬ)是引起肾小球硬化的重要因素[2 ,3] ,低浓度的Ｏｘ-ＬＤＬ(<10 0 μｇ/ｍｌ)抑制系膜细胞增殖 ,促进系膜细胞凋亡[4 ] ,但Ｏｘ -ＬＤＬ诱导系膜细胞过度凋亡的机制尚不清楚。我们利用体外培养的人肾小球系膜细胞进行实验 ,以探讨Ｏｘ-ＬＤＬ诱导系膜细胞凋亡的可能机制 ,为寻找延缓肾小球硬化的有效方法提供新思路。1　材料与方法1.1　实验材料　Ｂａｘ及Ｂｃ…     

肝素对脂多糖诱导人肾小球系膜细胞增殖及细胞分泌物影响

为了解肝素对脂多糖诱导人肾小球系膜细胞增殖和细胞因子分泌的影响。作者采用四甲基偶氮唑蓝比色分析法及生物活性法,分别测定了人肾小球ＭＣ增殖和细胞因子的分泌情况。结果显示;在正常培养条件下,人肾上球ＭＣ分泌一定理的白细胞介素６（ＩＬ－６０和肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）。脂多糖诱导ＭＣ增殖及分泌ＩＬ－６,ＴＮＦ－α。高浓度的肝素（５００Ｕ／ｍｌ）促进ＭＣ增殖及分泌细胞因子,低浓度的肝素（５Ｕ／ｍｌ）抑制     

肾小球内皮细胞对系膜细胞表达细胞粘附分子的影响

肾小球内皮细胞对系膜细胞表达细胞粘附分子的影响傅博程庆砾陈香美李文歌肾小球内皮细胞与肾小球基底膜、系膜细胞相毗邻，肾小球内皮细胞的损伤往往可以导致系膜细胞的病变［１］。为了探讨内皮细胞与系膜细胞相互关系在肾小球损伤演变过程中的作用，我们观察了肾小球内...     

氧化低密度脂蛋白对体外培养的肾小球系膜细胞的影响

我们观察了经氯化铜氧化修饰所形成的氧化低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）对体外培养的人肾小球系膜细胞生长、释放肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的作用。结果发现，Ｏｘ－ＬＤＬ刺激肾小球系膜细胞４８ｈ、７２ｈ以及１０６ｈ，均有抑制该细胞生长的作用。刺激４８ｈ时，细胞对ＭＴＴ的摄入量（以Ａ５７０表示），与Ｏｘ－ＬＤＬ的浓度成反比（ｒ＝－０．９９５，Ｐ＜０．０１）。刺激１８ｈ的细胞上清对Ｌ９２９细胞（ＴＮＦ敏感株）的杀伤能力有所增强，上清中的ＬＤＨ含量明显升高。与未修饰的低密度脂蛋白相比，Ｏｘ－ＬＤＬ对系膜细胞表现出明显的毒性，在高脂血症肾损伤时具有重要意义     

系膜细胞的功能对肾小球滤过作用的影响

系膜细胞有两种类型即肾小球内系膜细胞和肾小球外系膜细胞，研究表明系膜细胞内有收缩系统存在，肾上球内系膜细胞与收缩功能有密切的关系，肾小球外系膜细胞功能的改变在管－球反馈的信号转导中起关键作用。此外，系膜细胞还有吞噬及产生并分泌多种生物活性物质等功能。其中系膜细胞的收缩在调节肾小球血液动力学如滤过系数和管－球反馈的变化方面可能具有重要的生理意义。     

过氧化氢介导人瓣膜间质细胞产生氧化应激细胞模型的建立

目的 建立过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)介导的瓣膜间质细胞(valve interstitial cells,VICs)氧化应激模型,为心脏瓣膜病始发机制的研究以及未来抗氧化治疗药物筛选提供细胞学模型.方法 将分离培养的原代人主动脉瓣VICs随机分为对照组和处理组,分别以含10％胎牛血清的DMEM培养液和普通培养液+不同浓度梯度(0、50、100、300、500、800、1 000 μmol/L)的H2O2进行培养.采用H-E染色、MTT比色法、Annexin Ⅴ/PI双染流式细胞术检测细胞生存能力和凋亡的发生.结果 处理24 h后,MTT结果显示各组VICs细胞存活率差异有统计学意义(P＜0.01),H2O2浓度在50、100μmol/L时细胞存活率与对照组相比升高(P＜0.05),随后细胞存活率随H2O2浓度升高开始下降,在800 μmol/L时出现快速降低的拐点,此时细胞存活率为(69.8±8.3)％,1 000 μmol/L时细胞存活率降为(14.3±11.0)％.H-E染色显示在800μmol/L时VICs形态皱缩,胞核固缩.流式细胞检测则进一步证实800 μmol/L时VICs出现明显凋亡,此时多为中晚期凋亡.结论 H2O2最佳作用浓度为800 μmol/L,作用时间为24 h,在该条件下可成功建立氧化应激细胞模型.     

蟾蜍灵对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响

目的:探讨蟾蜍灵(bufalin)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)凋亡的影响.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞.分为对照组、LPS刺激组和蟾蜍灵干预组,应用台盼蓝拒染法检测蟾蜍灵对GMC的细胞毒性作用,应用透射电镜观察系膜细胞超微结构的变化,采用逆转录PCR检测Bax和Bcl-2基因mRNA的表达.Western blot法检测Bax和Bcl-2的蛋白表达.结果:透射电镜观察蟾蜍灵干预组可见凋亡早期形态学改变.逆转录PCR和Western blot结果显示蟾蜍灵组较脂多糖组Bax表达增多,Bcl-2表达减少,差异均具有统计学意义(P＜0.01),蟾蜍灵干预后,Bax较Bcl-2表达过量.结论:蟾蜍灵可能通过调节Bax和Bcl-2的相对表达量而诱导脂多糖作用后肾小球系膜细胞发生凋亡.     

BDNF基因修饰淋巴细胞培养上清对 PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

[目的] 研究脑源性神经营养因子基因( brain- derived neurotrophic factor, BDNF gene)修饰淋巴细胞对 PC12细胞氧化应激损伤的保护作用.[方法] MTT法检测 H2O2和多巴胺( dopamine, DA)对 PC12细胞生长的抑制率, Hoechst染色和 PI染色流式细胞仪( flow cytometry, FCM)检测 H2O2和 DA对 PC12细胞凋亡的诱导作用.[结果] BDNF基因修饰的大鼠淋巴细胞的培养上清可降低 H2O2和 DA对 PC12细胞生长的抑制率并能抑制 H2O2和 DA诱导 PC12细胞凋亡.[结论] BDNF基因修饰淋巴细胞的培养上清对 PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用.     

槲皮素抗人脐静脉内皮细胞氧化损伤的作用研究

目的观察槲皮素（quercetin,Que）对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）过氧化氢损伤的保护作用及可能机制。方法用体外培养的HUVECs传代后进行实验,实验分为3组：对照组常规培养;过氧化氢损伤组;药物干预组加入Que低、中、高浓度组（62.5、125、250 umol/L预处理）。用MTT法观察Que对过氧化氢损伤的内皮细胞活性的影响,各组均测定细胞中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（（malondialdehyde,MDA）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogense,LDH）的活性,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果 Que使过氧化氢损伤的内皮细胞的脂质过氧化物MDA生成减少,LDH漏出液减少,SOD活力增加;过氧化氢损伤可以诱导内皮细胞凋亡,Que可显著减少过氧化氢诱导的内皮细胞的凋亡。结论 Que处理对过氧化氢所致的内皮细胞的损伤有保护作用,机制可能通过抗脂质过氧化,对氧自由基的清除,以及抗细胞凋亡有关。     

硫化氢对H2O2损伤PC12细胞的保护作用

目的 探讨硫化氢对氧化应激损伤PC12细胞的保护作用.方法 以H2O2损伤PC12细胞为氧化应激损伤的模型,甲氮甲唑蓝法检测细胞增殖状况;Hoechst荧光染色观察细胞形态和核形态;碘化丙啶染色、流式细胞术检测细胞凋亡.结果 硫化氢可明显减少H2O2诱导的PC12细胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光的细胞数;200和400 μmol/L硫化氢均可降低200和400 μmol/L H2 O2作用24 h后对PC12细胞生长的抑制率,明显抑制200和400 μmol/L H2O2作用24 h后对PC12细胞凋亡的诱导作用.结论 硫化氢对氧化应激损伤PC12细胞具有保护作用.     

复方银杏丹参颗粒对H9c2细胞氧化应激损伤的保护作用

目的观察复方银杏丹参颗粒（Compound Yinxing Danshen Granules,CYDG）对大鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。方法利用过氧化氢（hydrogen peroxide,H2O2）作为外源性自由基生成系统,体内模拟心肌细胞的脂质过氧化损伤,观察CYDG对H2O2致心肌细胞损伤的保护作用。结果 CYDG能明显提高细胞生存率,降低乳酸脱氢酶的漏出率,并可使细胞内丙二醛含量降低,超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性升高,亦可减少细胞内活性氧的产生及提高血红素加氧酶蛋白表达。结论 CYDG对H2O2造成H9c2心肌细胞氧化应激损伤具有明显保护作用,提高心肌细胞的抗氧化能力。     

铁皮石斛多糖对MPP+诱导的PC12

目的 观察铁皮石斛多糖对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP⁺）所致PC12细胞损伤的抑制作用及可能机制。 方法 实验分为对照组、MPP⁺损伤模型组、铁皮石斛多糖组（50、100、200和400 μg/mL）。MPP⁺损伤模型组细胞用含10 μmol/L MPP⁺的培养基处理细胞24 h;铁皮石斛多糖组细胞用含50、100、200和400 μg/mL铁皮石斛多糖的培养基预处理2 h后,再加入MPP⁺（10 μmol/L）处理细胞24 h;对照组细胞给予等量生理盐水处理。MTT比色法检测细胞存活率,检测细胞内丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性。 结果 与对照组比较,MPP⁺处理显著降低了PC12细胞的存活率,显著升高了细胞培养液中LDH的水平和细胞中MDA的含量,显著降低了细胞中SOD的活性（均P<0.05）;与损伤模型组比较,200和400 μg/mL铁皮石斛多糖组PC12细胞的存活率显著升高,细胞培养液中LDH的活性和细胞中MDA的含量显著升高,细胞中SOD的活性显著降低（均P<0.05）。 结论 铁皮石斛多糖抑制了MPP⁺诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与铁皮石斛多糖抑制氧化应激有关。     

氧化应激对3T3-L1脂肪细胞MCP-1、PAI-1、脂联素表达的影响

目的观察氧化物质第三丁基过氧化氢(t-BHP)对3T3-L1脂肪细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、1型纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)、脂联素的影响初步探讨氧化应激引发脂肪细胞功能障碍的可能作用机制。方法培养3T3-L1脂肪细胞,将其诱导分化为成熟的脂肪细胞,不同浓度t-BHP(100,200,300,400,500μmol/L)作用10min后继续培养。MTT比色法检测24h时3T3-L1脂肪细胞的存活率;荧光定量PCR检测8h时MCP-1、PAI-1、脂联素的表达,Real-time PCR检测t-BHP(500μmol/L,10min)作用于3T3-L1脂肪细胞后不同时间点(2,4,8,12,24h)MCP-1、PAI-1、脂联素的表达。结果 (1)t-BHP对3T3-L1脂肪细胞的存活状态无明显影响;(2)t-BHP可剂量依赖性的降低脂联素而增加MCP-1、PAI-1mRNA的表达;(3)500μmol/L的t-BHP对脂联素、MCP-1、PAI-1的调节具有时间相关性。结论氧化损伤能够促进MCP-1、PAI-1的表达、抑制脂联素的表达,这是其介导脂肪细胞功能障碍的可能机制之一。     

康复新液对博来霉素诱导大鼠肺纤维化模型的治疗作用

目的 探讨康复新液对博来霉素(BLM)诱导的肺纤维化(PF)模型大鼠的治疗作用以及可能的机制。 方法 Wistar大鼠48 只,雌雄各半,随机分为对照组、模型组及模型鼠康复新液治疗组(康复新液组)和地塞米松阳性对照组(DXM组); 用BLM 5 mg/kg气管内一次性滴注复制模型。鉴定模型成功后,使用康复新液和DXM进行灌胃治疗。康复新液组康复新液治疗剂量为5 mL·kg^-1·d^-1,DXM组的DXM治疗剂量为0.25 mL·kg^-1·d^-1,灌注周期为21 d。治疗后取大鼠肺组织,行H-E和马松染色,显微镜下观察; 采用PCR方法检测肺组织中层连结蛋白(LN)、纤维连结蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达情况,采用WB方法检测肺组织中LN,FN及α-SMA的表达情况。 结果 显微镜下可见模型组肺组织纤维化较对照组明显,LN,FN及α-SMA蛋白的mRNA水平及蛋白表达均有上升; 使用康复新液和DXM治疗后,镜下可见康复新液组和DXM组的肺组织纤维化较模型组明显改善,LN,FN及α-SMA蛋白的mRNA水平及蛋白表达均有下降。 结论 康复新液可减轻BLM诱导的大鼠PF,其作用与其下调肺组织LN,FN及α-SMA蛋白表达有关。     

二甲双胍对人结肠癌HT29细胞的抑制作用及可能机制

目的 探讨二甲双胍对人结肠癌HT29细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。 方法 体外培养人结肠癌细胞株HT29,随机分为2组,二甲双胍干预组采用5,10,20及40 mmol/L的二甲双胍进行干预,对照组加入等量PBS液,干预24,48及72 h后用MTT法检测细胞的增殖情况。二甲双胍干预组HT29细胞在上述各浓度的二甲双胍干预24 h后,于光镜下观察形态学改变; 40 mmol/L的二甲双胍干预48 h后,行AnnexinV-FITC和PI染色,并采用流式细胞术检测分析凋亡情况。二甲双胍干预组二甲双胍干预浓度为5及40 mmol/L,对照组加入等量PBS液,干预48 h,Western-blot法检测PI3K,AKT,P-AKT,GSK-3β及P-GSK-3β蛋白的表达。 结果 二甲双胍可抑制结肠癌HT29细胞的增殖,并呈时间-剂量依赖性,各组间抑制率差别有统计学意义(P均<0.05)。光镜下可见细胞数目减少,由多边形变为圆形,体积缩小,核固缩,细胞核溶解,且随着二甲双胍浓度的增高,细胞凋亡比例升高。流式实验结果显示,干预48 h的二甲双胍干预组凋亡率大于对照组(P<0.05)。Western-blot检测结果显示,二甲双胍可抑制HT29细胞的PI3K,P-AKT及P-GSK-3β蛋白表达量,且呈浓度依赖性,而对AKT及GSK-3β蛋白表达量无明显影响。 结论 二甲双胍可抑制人结肠癌HT29细胞的增殖能力并促进细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT/GSK-3β通路相关蛋白的表达有关。     

热休克反应对氧化应激所致nucleolin裂解的影响

观察热休克反应对氧化应激（0.5 mmol/L H2O2）诱导细胞凋亡发生时 nucleolin(C23)裂解的影响并探讨其机制。方法： 采用caspase-3 活性定量分析及免疫印迹技术检测氧化应激诱导的原代心肌细胞、RAW 264.7巨噬细胞 及K562白血病细胞凋亡及C23的裂解;通过热休克反应观察热休克反应对C23裂解的影响。结果： 0.5 mmol/L H2O2处理细胞2 h caspase-3活性显著升高,12 h达高峰。免疫印迹结果显示上述各种细胞的C23蛋白均发生了裂解（有80 kD裂解片断出现）,而且最早出现裂解片段的时间都在H2O2处理30 min到1 h左右;同时热休克反应通过诱导HSP70,HSP25等应激蛋白表达而显著减少氧化应激所致C23的裂解。结论： 氧化应激诱导凋亡发生的同时也引起C23的裂解;热休克反应显著抑制氧化应激所致C23的裂解,其机制与热休克反应诱导多种热休克蛋白表达有关。