姜黄素对TNF-α诱导人肾小球系膜细胞增殖及PTX3表达的作用研究

目的本实验研究姜黄素(Cur)对TNF-α诱导人肾小球系膜细胞过度增殖以及PTX3过度表达的影响,并对其作用机制进行初步探究。方法本实验选择人肾小球系膜细胞进行体外研究。实验共分为6组:空白对照组、TNF-α组、Cur 20,40和80μmol·L~(-1)组和PDTC组。1. Cur对TNF-α诱导人肾小球系膜细胞过度增殖及PTX3过度表达的影响。(1)使用MTT法检测Cur对人肾小球系膜细胞过度增殖的影响。(2)使用免疫荧光法检测Cu对人肾小球系膜细胞PTX3过度表达的影响。2. Cur对TNF-α诱导人肾小球系膜细胞PTX3过度表达的作用机制研究。(1)使用Western印迹法检测Cur对人肾小球系膜细胞内NF-κB信号通路中蛋白水平及PTX3蛋白表达的影响。(2)使用qRT-PCR法检测Cu对人肾小球系膜细胞内NF-κB信号通路中mRNA水平及PTX3 mRNA表达的影响。结果 (1)Cur对TNF-α诱导人肾小球系膜细胞PTX3的过度表达有良好的抑制作用。(2) Western印迹结果表明,Cur明显抑制NF-κB P65和IKKβ的蛋白表达,增加IκBα的蛋白表达。(3)qRT-PCR结果表明,Cur明显抑制NF-κB、P65和IKKβm RNA表达,增加IκBα的mRNA表达。结论 (1) Cur可有效抑制TNF-α诱导人肾小球系膜细胞的过度增殖。(2) Cur对TNF-α诱导人肾小球系膜细胞PTX3的过量表达产生良好的抑制效果,极有可能是通过抑制NF-κB信号通路的激活而达到。     

丁苯酞对大鼠骨髓间充质干细胞炎性损伤的改善作用及机制

目的 研究丁苯酞对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）炎性损伤的改善作用及其可能机制。方法 将大鼠BMSCs分为对照组、模型组和丁苯酞低、中、高浓度组（10、20、50μmol/L）。体外培养BMSCs并采用脂多糖（终浓度为10 mg/L）建立炎性损伤模型,经丁苯酞干预后检测细胞存活率、凋亡率和细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)含量以及细胞中核因子κB(NF-κB)p65 mRNA和胱天蛋白酶3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和NF-κB p65蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组细胞存活率和Bcl-2蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）;细胞凋亡率,TNF-α、IL-1β、IL-6含量,NF-κB p65 mRNA以及caspase-3、Bax、NF-κB p65蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）。与模型组比较,丁苯酞各浓度组上述指标均显著逆转（P<0.05）,且呈浓度依赖性。结论 丁苯酞对脂多糖诱导的BMSCs炎性损伤具有改善作用,其机制可能与抑制...     

淫羊藿次苷Ⅱ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞炎症反应

目的研究ICSⅡ对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞炎症反应的作用。方法体外分离新生SD大鼠脑皮质组织提取原代星形胶质细胞并进行培养。将星形胶质细胞分为空白组、空白+ICSⅡ高浓度组、模型组、模型+ICSⅡ低浓度组、模型+ICSⅡ中浓度组、模型+ICSⅡ高浓度组、模型+地塞米松组。ICSⅡ(5,10,20μmol·L-1)或DSMX(1μmol·L-1)预处理星形胶质细胞1 h后,继续与LPS共同作用24 h。采用MTT法检测ICSⅡ作用于星形胶质细胞的安全浓度范围,确定安全浓度后再观察ICSⅡ对LPS诱导的星形胶质细胞炎症反应的影响;采用ELISA法检测星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β,NO,Aβ1-40和Aβ1-42的水平;采用Western蛋白免疫印迹技术检测COX-2,i NOS,IκB-α,NF-κB(p65)(胞核),NF-κB(p65)(胞质)和BACE1的蛋白表达,以及NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β磷酸化水平;采用分子对接技术模拟ICSⅡ与BACE1蛋白的结合。结果 ICSⅡ(0～50μmol·L-1)对星形胶质细胞无毒性作用。模型组较空白组星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β和NO水平均显著上升(P<0.05);细胞炎症通路蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(p65)(胞核)及BACE1表达升高(P<0.05);IκB-α和NF-κB(p65)(胞质)表达显著降低(P<0.05);NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平明显上升(P<0.05)。给予ICSⅡ能够明显降低TNF-α,IL-1β和NO水平(P<0.05)。此外,ICSⅡ显著下调炎症相关蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(胞核)及BACE1的表达(P<0.05),明显上调NF-κB(胞质)和IκB-α蛋白表达(P<0.05)。同时,明显降低NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平(P<0.05),对LPS诱导的IκB-α降解、NF-κB活化及细胞核易位均具有显著的抑制作用。结论本研究条件下,ICSⅡ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路发挥其对LPS诱导的星形胶质细胞炎症损伤的保护作用。     

双氢青蒿素通过抑制炎症反应在血管重塑中的作用机制研究

目的 探究双氢青蒿素通过抑制炎症反应对血管重塑的抑制作用。方法 采用贴块法培养小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)，以TNF-α诱导建立体外平滑肌细胞增殖模型，通过手术剥夺动脉方式建立小鼠股动脉损伤模型，并采用双氢青蒿素干预细胞及股动脉损伤小鼠。采用CCK-8法检测细胞增殖；H&E染色评价股动脉组织病理变化情况并测量中膜厚度；ELISA法检测细胞中IL-1β、TNF-α、IL-6、CCR8及小鼠股动脉组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、TGF-β1的含量；免疫组织化学法检测股动脉组织NF-κB p65、CCR8表达；qRT-PCR分析细胞及股动脉组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、CCR8、NF-κB p65、TGF-β1、MCP-1 mRNA表达；Western blotting分析细胞及股动脉组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8、p-NF-κB p65、NF-κB p65、CCR8、TGF-β1、MCP-1蛋白表达。结果 在TNF-α诱导的VSMCs增殖及股动脉损伤小鼠模型中，VSMCs增殖及TNF-α、IL-6含量明显升高，IL-1β、IL-6、IL-8 mRNA表达明显升高，IL-6、CCR8、NF-κB p65蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01)；双氢青蒿素可明显降低TNF-α诱导的VSMCs中IL-1β、IL-8 mRNA及股动脉损伤小鼠IL-1β mRNA表达和IL-1β、p-NF-κB p65蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论 双氢青蒿素能降低血管炎症，延缓损伤血管的重塑，表明其为经皮冠状动脉介入治疗(如支架植入)的潜在治疗药物。     

丹皮酚对脂多糖诱导的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响

目的观察丹皮酚对体外培养的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法采用神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色法鉴定星形胶质细胞;实验分为对照组,模型组和2.5、5、10μmol·L-1丹皮酚组,0.5 mg·L-1脂多糖(LPS)诱导炎症反应。采用ELISA法测定培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用Western blot检测细胞IκBα蛋白表达和磷酸化水平及胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著增加(P<0.01),胞浆IκBα蛋白表达受抑(P<0.01),IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平上调(P<0.01);5、10μmol·L-1丹皮酚能减少LPS活化的星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平(P<0.05或P<0.01),增加胞浆IκBα蛋白表达(P<0.05或P<0.01),抑制LPS上调的IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论丹皮酚能抑制LPS诱导的星形胶质细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,IκBα/NF-κB信号通路可能参与了丹皮酚对星形胶质细胞炎症反应的抑制作用。     

艳山姜总黄酮改善无水乙醇致胃黏膜细胞损伤的作用及机制

目的 探讨艳山姜总黄酮通过微RNA-146a-5p(miR-146a-5p)对无水乙醇诱导的胃黏膜细胞损伤的改善作用及潜在机制。方法 以人胃黏膜细胞GES-1为对象，以无水乙醇诱导建立急性胃溃疡细胞模型，在考察不同质量浓度艳山姜总黄酮对细胞活力影响及筛选作用浓度的基础上，检测细胞中miR-146a-5p的相对表达量，细胞中肿瘤坏死因子受体关联因子6(TRAF6)、核因子κB p65(NF-κB p65)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白的表达水平，以及细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、前列腺素E2(PEG2)水平；验证miR-146a-5p与TRAF6的靶向关系，并观察过表达miR-146a-5p、敲减TRAF6对模型细胞上清液中IL-1β、IL-6、PEG2水平的影响，以及敲减miR-146a-5p对艳山姜总黄酮抗胃溃疡作用的影响。结果 与空白组比较，模型组细胞中miR-146a-5p的相对表达量和上清液中PGE2水平均显著降低（P<0.01），细胞中TRAF6、NF-κB p65、TNF-α蛋白的表达水平和上清液中IL-1β、IL-6水平均显著升高（P<...     

姜黄素下调NF-κB信号通路抑制化学缺氧诱导的U87细胞炎症反应

目的 研究姜黄素对化学缺氧所致人源性神经星形胶质瘤细胞系U87炎症反应的影响,并探讨相关分子机制。方法 100 μmol/L CoCl₂处理U87细胞不同时间（1、3、6、12、24 h）,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α） mRNA表达变化。100 μmol/L CoCl₂处理U87细胞12 h制备化学缺氧模型,同时给予1、5和10 μmol/L姜黄素处理,对照组（不添加CoCl₂）和模型组给予等体积DMSO;qRTPCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达变化;Western Blotting法检测NF-κB/P65蛋白磷酸化水平及核转位。结果 CoCl₂上调U87细胞IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平并呈时间相关性,炎症反应在约12 h达到高峰。与模型组比较,姜黄素显著下调炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平,5和10 μmol/L浓度组差异显著（P<0.05）;显著下调p65的磷酸化水平（P<0.05）;导致细胞核内NF-κB/p65蛋白显著减少、细胞质中NF-κB/p65蛋白显著增加（P<0.05）。结论 姜黄素通过下调NF-κB信号通路抑制化学缺氧诱导的U87细胞炎症反应。     

姬松茸多糖上调miR-382-3p表达保护IL-1β诱导的软骨细胞损伤

摘要：目的:探讨姬松茸多糖（ABP）对白细胞介素1β（IL-1β）诱导软骨细胞CHON-001损伤的保护作用和分子机制。方法:以10 ng·ml-1的IL-1β处理CHON-001细胞建立软骨细胞炎症模型。将CHON-001细胞分为对照（Con）组、IL-1β组、IL-1β+ABP低剂量(ABP-L,10 mg·L-1)组、IL-1β+ABP中剂量(ABP-M,20 mg·L-1)组、IL-1β+ABP高剂量(ABP-H, 40 mg·L-1)组、IL-1β+miR-NC组、IL-1β+miR-382-3p组、IL-1β+ABP+anti-miR-NC组和IL-1β+ABP+anti-miR-382-3p组。采用流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附法检测CHON-001细胞培养液中白细胞介素6（IL-6）、γ干扰素（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的水平;Western blot检测B细胞淋巴瘤（Bcl-2）和Bcl相关x蛋白（Bax）水平;实时定量PCR检测miR-382-3p表达。结果:与Con组比较,IL-1β组IL-6、IFN-γ、TNF-α水平以及细胞凋亡率、Bax蛋白水平显著升高（P<0.05）,miR-382-3p表达及Bcl蛋白水平显著降低（P<0.05）。与IL-1β组比较,IL-1β+ABP-L组、IL-1β+ABP-M组、IL-1β+ABP-H组IL-6、IFN-γ、TNF-α水平以及细胞凋亡率、Bax蛋白水平显著降低（P<0.05）,miR-382-3p表达及Bcl蛋白水平显著升高（P<0.05）。与IL-1β+miR-NC组比较,IL-1β+miR-382-3p组IL-6、IFN-γ、TNF-α水平以及细胞凋亡率、Bax蛋白水平显著降低（P<0.05）,Bcl蛋白水平显著升高（P<0.05）。与IL-1β+ABP+anti-miR-NC组比较,IL-1β+ABP+anti-miR-382-3p组IL-6、IFN-γ、TNF-α水平以及细胞凋亡率、Bax蛋白水平显著升高（P<0.05）,Bcl蛋白水平显著降低（P<0.05）。结论:姬松茸多糖通过上调miR-382-3p表达来抑制IL-1β诱导的软骨细胞炎症反应和凋亡。     

马鞭草苷对口腔扁平苔藓免疫反应的抑制作用及机制

目的 探讨马鞭草苷对口腔扁平苔藓（OLP）免疫反应的抑制作用及机制。方法 用脂多糖（LPS）体外刺激角质形成细胞系HaCaT细胞构建OLP炎症模型,CCK-8法检测细胞活力;实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）法检测细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的基因表达变化;蛋白质印迹法检测细胞中核因子-κB p65(NF-κB p65)和p-NF-κB p65蛋白的表达变化。结果 在HaCaT细胞中,LPS刺激抑制细胞活力,并诱导TNF-α、IL-1β和IL-6基因的表达上调,以及NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白的表达上调;20 mg/L马鞭草苷作用24 h可减轻LPS诱导的HaCaT细胞损伤、抑制炎症因子的表达和NF-κB p65信号通路的活化;同时,经G蛋白偶联受体18(GRP18)抑制剂O1918预处理后,马鞭草苷的保护作用显著减弱。结论 马鞭草苷可以通过激活GPR18受体抑制NF-κB信号通路的活化,进而降低炎症因子的表达和减轻OLP口腔黏膜炎症反应。     

齐墩果酸对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭、转移的影响及其作用机制研究

目的:探讨齐墩果酸抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭、转移的作用及其机制。方法:采用CCK-8法检测不同浓度齐墩果酸(10、20、40、60、80、100μmol/L)作用12、24、36、48 h对卵巢癌SKOV3细胞增殖能力的影响;采用Transwell实验观察低、高剂量齐墩果酸(20、40μmol/L)作用24 h对SKOV3细胞迁移及侵袭能力的影响;采用Western Blotting法检测低、高剂量齐墩果酸对SKOV3细胞中核因子κB p65(NF-κB p65)、肝再生磷酸酶3(PRL-3)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、上皮钙黏着蛋白E(E-cadherin)等蛋白表达的影响;运用脂多糖(LPS)诱导和NF-κB p65质粒转染SKOV3细胞,采用Western blotting法和实时荧光定量PCR考察低、高剂量齐墩果酸对NF-κB/PRL-3通路相关蛋白及其mRNA表达的影响。结果:随着齐墩果酸给药浓度的增加和作用时间的延长,SKOV3细胞的增殖能力有随之降低的趋势,各剂量组的细胞存活率均显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)。低、高剂量的齐墩果酸组的迁移和侵袭细胞数均显著减少(P<0.05或P<0.01),且其NF-κB p65、PRL-3、TNF-α、IL-6蛋白的相对表达量均显著降低,E-cadherin蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。经LPS刺激后,LPS模型组细胞中NF-κB p65、PRL-3、TNF-α、IL-6蛋白及其m RNA的相对表达量较对照组显著升高,E-cadherin蛋白及其m RNA的相对表达量均显著降低(P<0.05或P<0.01);低、高剂量齐墩果酸组细胞中NF-κB p65、PRL-3、TNF-α、IL-6蛋白及其mRNA的相对表达量均显著降低,E-cadherin蛋白及其m RNA的相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。在NF-κB p65过表达SKOV3细胞中,低、高剂量齐墩果酸同样能够显著下调NF-κB p65、PRL-3、TNF-α、IL-6蛋白的表达,显著上调E-cadherin蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:齐墩果酸能够通过调控NF-κB/PRL-3信号通路来抑制人卵巢癌细胞SKOV3的增殖、侵袭、转移。     

紫草素通过调节NF-κB通路改善糖尿病心肌病的研究

目的 研究紫草素改善糖尿病心肌病的作用及其对炎症相关信号通路的影响。方法 构建糖尿病心肌病细胞模型,用不同浓度的紫草素处理细胞,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,qRT-PCR法检测炎症细胞因子的表达,western blotting检测蛋白表达水平。结果 体外高糖培养乳鼠心肌H9C2细胞后IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症指标明显升高（P<0.01）,NF-κB信号通路被激活（P<0.01）,不同浓度紫草素处理高糖诱导的H9C2细胞,紫草素可呈时间和浓度依赖性改善糖尿病心肌病炎症,降低IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA及NF-κB p65表达水平。结论 紫草素可能通过调节NF-kB通路改善高糖诱导的H9C2心肌细胞炎症反应。     

lncRNA PACER对高糖诱导的人肾小管上皮细胞中炎性因子表达和转分化的影响

摘要：目的:探讨P50相关的环氧合酶2外源性RNA（PACER）对高糖诱导的人肾小管上皮细胞中炎性因子表达和转分化的影响。方法:实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测60例单纯2型糖尿病（T2D）患者（T2D组）、60例糖尿病肾病（DN）患者（DN组）及60例健康体检者（正常对照组）血清中PACER表达水平。体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,转染PACER小干扰RNA后用25 mmol·L-1葡萄糖诱导24 h, RT-qPCR检测细胞中PACER表达水平,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）和单核细胞趋化因子-1（MCP-1）表达,蛋白印迹（Western Blot）法检测细胞中E-钙黏蛋白（E-cadherin）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、核因子-κB p65（NF-κB p65）和磷酸化的NF-κB抑制蛋白α（p-IκBα）。结果:与正常对照组比较,T2D组和DN组患者血清中PACER表达水平升高（P<0.05）;与T2D组比较,DN组患者血清中PACER表达水平升高（P<0.05）。高糖作用HK-2细胞后,HK-2细胞中PACER表达水平升高（P<0.05）,细胞培养上清液中TNF-α、IL-6和MCP-1表达水平均升高（P<0.05）,细胞中E-cadherin蛋白表达水平降低（P<0.05）,α-SMA、NF-κB p65和p-IκBα蛋白表达水平均升高（P<0.05）。下调PACER降低了高糖诱导的HK-2细胞培养上清液中TNF-α、IL-6和MCP-1的表达及细胞中α-SMA、NF-κB p65和p-IκBα的蛋白表达（P<0.05）,促进了细胞中E-cadherin蛋白表达（P<0.05）。结论:PACER在DN患者血清和高糖诱导的HK-2细胞中表达升高,下调PACER表达可有效抑制高糖诱导的HK-2细胞中炎性因子的表达及EMT过程,其作用机制可能与NF-κB信号通路有关。     

绿原酸抑制NF-κB/NLRP3炎性体通路减轻LPS诱导小胶质细胞神经炎症损伤研究

摘要：目的:探究绿原酸（CGA）对脂多糖（LPS）诱导的小胶质细胞神经炎症损伤及核因子κB（NF-κB）/Nod样受体家族含pyrin结构域蛋白3（NLRP3）炎性体通路的影响。方法:培养小胶质细胞BV2,3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）法检测不同浓度(0,1,2,4,8 mmol·L-1)CGA对BV2细胞活力的影响;再次培养BV2细胞,依次分为对照（Control）组、LPS组、脂多糖和药物溶剂对照[LPS+二甲亚砜（DMSO）]、脂多糖和阳性药物对照（LPS+Positive）组以及脂多糖和绿原酸处理（LPS+CGA）组。免疫荧光法检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素（IL）-1β表达情况;ELISA法检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12和诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）含量;免疫印迹分析NF-κB/NLRP3炎性体通路和凋亡相关蛋白水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:与CGA 0 mmol·L-1比较,CGA 1,2,4 mmol·L-1对BV2细胞增殖活力的影响无统计学意义（P>0.05）,CGA 8 mmol·L-1显著降低BV2细胞增殖活力（P<0.05）。LPS诱导后细胞凋亡率升高,细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12和iNOS分泌量增多,IL-10分泌量减少,细胞中NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白（p-IκBα）、NLRP3、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（Caspase-1）和B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）蛋白水平上调,细胞中Bcl-2蛋白水平下调（P<0.05）。添加CGA可明显改善LPS对BV2细胞的影响（P<0.05）。结论:CGA通过抑制NF-κB/NLRP3炎性体通路减轻LPS诱导的BV2细胞神经炎症损伤。     

独一味胶囊联合地塞米松治疗复发性口疮的临床研究

目的 验证炎调方对脓毒症急性肺损伤（ALI）大鼠的保护效应,并观察炎调方对核因子κB（NF-κB）信号通路主要指标活性调控的时效关系。方法 清洁级健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、炎调方（生药量为9.9 g/kg）组、地塞米松（0.45 mg/kg）组,均每天ig给药1次,连续给药3 d。假手术组、模型组予等体积生理盐水,末次给药2 h后进行手术。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症ALI模型,各组分别于造模后4、6、8、10、12、18、24 h进行HE染色后肺组织损伤程度评分、检测肺组织NF-κB/p65 mRNA表达量和血清NF-κB、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8水平。结果 与模型组比较,炎调方组造模后12、18、24 h肺组织损伤程度评分均显著降低（P<0.01）。炎调方组和地塞米松组肺组织NF-κB/p65 mRNA相对表达量、血清NF-κB水平均显著低于模型组（P<0.01）;高于假手术组（P<0.01）;炎调方组大鼠肺组织NF-κB/p65 mRNA相对表达量、血清NF-κB均随CLP后时间的延长呈现上升趋势,12 h后变化趋缓。不同时间点炎调方组和地塞米松组血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8均显著低于模型组（P<0.01）,显著高于假手术组（P<0.01）;炎调方组血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8随CLP后时间的延长呈现上升趋势。脓毒症ALI大鼠肺组织NF-κB/p65mRNA相对表达量与血清NF-κB和促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平呈强正相关。结论 炎调方对脓毒症ALI大鼠肺组织保护效应的机制与下调NF-κB基因表达、进而下调炎性信号通路下游的促炎细胞因子水平相关。     

蚤休薯蓣皂苷经Notch1/NF-κB p65信号转导途径抑制巨噬细胞损伤

目的研究蚤休薯蓣皂苷(rhizome dioscin,RD)对氧化损伤的小鼠巨噬细胞(Ana-1)炎症反应的影响及与Notch1/NF-κB p65信号转导途径的关系,探讨RD抗炎性效应的分子机制。方法体外培养Ana-1,RD 3个浓度预处理,加入氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导氧化损伤,MTT比色法检测细胞存活率,ELISA测定培养液中白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量、流式细胞术Annexin V/PI双染色以及激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡率及凋亡的细胞形态变化,Western blot检测Notch1、NF-κB p65的表达。结果与正常对照组相比,经ox-LDL损伤后,细胞存活率降低(P<0.05、P<0.01)、而IL-6和TNF-α的释放量增加(P<0.05、P<0.01)、凋亡细胞数目增多并呈现典型的凋亡形态学改变、Notch1和NF-κB p65的表达与正常组比较均升高。而RD各剂量组预处理能提高细胞存活率(P<0.05、P<0.01)、降低细胞上清液IL-6和TNF-α含量(P<0.05、P<0.01)、降低细胞凋亡率、改善细胞的凋亡形态以及Notch1和NF-κB p65的表达。结论 RD可抑制ox-LDL炎性损伤和凋亡,提高细胞存活率,其作用机制可能是通过激活Notch1NF-κB p65途径而实现的。     

抑制NF-κB信号通路对顺铂致肺癌大鼠肾损伤的保护作用及其分子机制研究

摘要：目的:探索抑制核转录因子（NF）-κB信号通路对顺铂致肺癌大鼠肾损伤的保护作用及其分子机制研究。方法:将50只大鼠随机分为5组:正常对照组、肺癌组（Lewis细胞）、顺铂组(Lewis细胞+腹腔注射顺铂溶液5 mg·kg-1)、吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）组(Lewis细胞+腹腔注射PDTC 25 mg·kg-1)、PDTC+顺铂组（Lewis细胞+腹腔注射顺铂和PDTC）,每组10只。末次给药后,生化分析仪检测血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、胱抑素C（Cys C）、尿液肾损伤分子-1（Kim-1）水平,ELISA法测定肾组织中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平,RT-PCR检测肾组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6水平,Western Blotting检测核因子2相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶-1（HO-1）、NF-κB p65、p-IκBα/IκBα的表达,HE染色检测肾组织损伤。结果:与肺癌组相比,顺铂组大鼠血SCr、BUN、Cys C、尿Kim-1水平及肾组织MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA、Nrf2、HO-1、NF-κB p65和p-IκBα/IκBα的表达明显升高（P<0.05）,肾组织SOD活性和GSH-Px活性明显降低（P<0.05）;与顺铂组相比,PDTC+顺铂组大鼠血SCr、BUN、Cys C、尿Kim-1水平及肾组织MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA、NF-κB p65和p-IκBα/IκBα的表达明显明显降低（P<0.05）,肾组织SOD、GSH-Px、Nrf2和HO-1的表达明显升高（P<0.05）。结论:抑制NF-κB信号通路可以降低炎症因子水平,还可以激活Nrf2的表达,降低氧化应激水平,保护顺铂致肺癌大鼠的肾组织损伤。     

甲氨蝶呤对脂多糖诱导的大鼠脊髓神经胶质细胞pIκBα-NF-κBp65-炎性因子通路的影响

目的 观察甲氨蝶呤对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的大鼠脊髓神经胶质细胞pIκBα-NF-κBp65-炎性因子通路的影响。方法 脊髓组织块法培养神经胶质细胞。将分离的神经胶质细胞接种于多孔板培养48 h后,分为空白对照组、LPS组、LPS+pIκBα抑制剂组、LPS+甲氨喋呤组。随后应用免疫印迹法测定各组分的pIκBα与胞核及胞浆NF-κBp65水平变化,酶免疫法（ELISA）测定炎性因子TNF-α、IL^-1β、IL-6含量。结果 神经胶质细胞经LPS诱导后,pIκBα、胞核NF-κBp65和细胞上清液炎性因子TNF-α、IL^-1β、IL-6水平均显著增加（P<0.05或P<0.01）。甲氨喋呤可明显抑制经LPS诱导的神经胶质细胞pIκBα水平,显著降低胞核NF-κBp65水平和细胞上清液炎性因子TNF-α、IL^-1β、IL-6的含量（P<0.05）。结论 甲氨喋呤对LPS诱导的脊髓神经胶质细胞pIκBα-NF-κBp65-炎性因子通路有显著的抑制作用。     

温郁金二萜类化合物C对幽门螺杆菌诱导人胃GES-1上皮细胞炎症的抑制作用及其对NF-κB信号通道的影响

目的通过体外实验研究温郁金二萜类化合物C对幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)诱导炎症的抑制作用及对NF-κB信号通路的影响。方法选用Hp I型菌株感染人胃上皮细胞株GES-1,建立体外Hp感染细胞模型,并予不同浓度温郁金二萜类化合物C、阿莫西林等进行干预,ELISA法检测上清液中IL-8、IL-4,并应用Wester blot方法检测NF-κB中p65、IKKα、IKKβ蛋白表达。结果 MTT法显示温郁金二萜类化合物C对胃GES-1细胞的IC5为5 mg.L-1,阿莫西林为5 mg.L-1,Hp作用于人胃GES-1上皮细胞后,上清液中IL-8明显升高,其中以12 h浓度最高,而予不同浓度温郁金二萜类化合物C、阿莫西林组干预后,IL-8水平在各个时间段均低于模型组,其中以高浓度温郁金二萜类化合物C组下降最为明显(P<0.05)。而IL-4水平在Hp作用于人胃GES-1细胞后下降,予中浓度温郁金二萜类化合物C组、高浓度二萜类化合物C组干预后IL-4水平明显升高(P<0.05)。温郁金二萜类化合物C具有抑制Hp促p65进入胞核,抑制Hp所刺激的IkBα的降解,抑制p65、IkBα磷酸化,抑制蛋白IKKα、IKKβ的表达等作用。结论 NF-κB信号通路在Hp引起慢性胃炎的发病机制中起到核心作用,采用温郁金二萜类化合物C可阻断NF-κB信号通路,可以有效减少Hp诱导的促炎性因子的分泌与增加抑炎因子的分泌。     

柚皮苷通过P38 MAPK/NF-κB通路抑制脂多糖致HaCaT细胞炎症反应

目的 探讨柚皮苷通过P38 MAPK/NF-κB通路对脂多糖（LPS）致HaCaT细胞炎症损伤的抑制作用。方法 LPS（0、0.1、1.0、10.0、20.0 μg/mL）孵育24 h刺激人永生化角质细胞HaCaT,模拟银屑病模型,MTT法观察细胞存活率变化,Western bloting法检测白介素（IL）-6和NF-κB蛋白表达;MTT法观察柚皮苷（0、5、10、20、40、80、160、320μmol/L）作用24 h对HaCaT存活率的影响;选择LPS、柚皮苷最佳作用浓度。柚皮苷（20和40 μmol/L）作用银屑病模型HaCaT细胞24 h,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测IL-6、IL-1β、IL-17和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA表达水平变化;Western blotting法检测细胞核内转录因子NF-κB p65、P38 MAPK磷酸化蛋白水平以及炎症因子IL-6蛋白水平。结果 LPS增加HaCaT细胞存活率,并上调NF-κB p65和IL-6蛋白表达,呈剂量相关性,炎症反应在20 μg/mL达到高峰;5~160 μmol/L柚皮苷对HaCaT细胞无明显毒性作用。与模型组比较,柚皮苷能够显著抑制炎症因子IL-6、IL-1β、IL-17和TNF-α的转录水平（P<0.05）;同时能够显著抑制LPS诱导的NF-κB p65和P38 MAPK磷酸化蛋白水平、抑制IL-6蛋白的表达（P<0.05）。结论 柚皮苷抑制脂多糖致HaCaT细胞炎症反应,发挥改善银屑病的作用,机制可能与抑制P38 MAPK/NF-κB信号通路有关。     

柴胡陷胸汤含药血清对高脂血清致人脐静脉内皮细胞损伤的影响及机制

目的 探究柴胡陷胸汤含药血清对高脂血清致人脐静脉内皮细胞ECV304损伤的影响及机制。方法 制备高脂血清和柴胡陷胸汤含药血清。以高脂血清诱导ECV304细胞损伤,并以低、中、高浓度（3.47、6.94、13.88 g/kg,以生药量计）的柴胡陷胸汤含药血清进行干预,检测各组细胞增殖率和细胞上清液中相关炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)]、血管内皮功能指标[内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、一氧化氮（NO）、内皮素1(ET-1)]水平,检测细胞中细胞间黏附分子1(ICAM-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的表达水平以及Toll样受体4(TLR4)、核因子κB抑制因子α(IκBα)、磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白的表达水平和磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)/NF-κB p65比值。结果 与对照组比较,模型组细胞增殖率,TNF-α、IL-6、ET-1水平,ICAM-1 mRNA表达水平,TLR4、p-IκBα蛋白表达水平和p-NF-κB p65/NF-κB p65比值均显著升高（P<0.05）,e NOS、NO水平,TGF...