25份燕窝样品的线粒体细胞色素氧化酶I基因序列分析

目的 对多种燕窝进行DNA条形码鉴别，为确定燕窝的基原提供分子依据。方法 对25份燕窝样品的细胞色素氧化酶I（mitochondria cytochrome oxidase subunit I gene，COI）条形码序列进行PCR扩增和测序，分析燕窝正品来源的种内变异，与混伪品的种间变异，以及序列相似性和进化树研究，用Taxon DNA软件评估"Barcoding Gap"。结果 金丝燕种内COI序列变异小，种间存在较多的变异位点，种间的遗传距离显著大于种内的遗传距离。通过构建的系统聚类树图可以看出，燕窝不同来源个体均聚在一起，能够与其混伪品区分开。结论 基于COI序列的DNA条形码技术可以用于鉴定燕窝的正品来源及其混伪品。     

重楼属药用植物DNA条形码鉴定研究

为评价DNA条形码候选序列对重楼属药用植物的鉴定作用, 探讨重楼属药用植物鉴定新方法, 本研究对重楼属11个物种17份样品的psbA-trnH、rpoB、rpoC1、rbcL、matK和核ITS2序列进行PCR扩增和测序, 比较各序列扩增和测序效率、种内和种间变异, 进行barcoding gap分析, 采用BLAST1和Nearest Distance方法评价不同序列的鉴定能力。结果显示, ITS2序列在所研究的重楼属药用植物中的扩增和测序效率均为100%, 其种内种间变异、barcoding gap与其他DNA条形码候选序列相比具有明显的优势, ITS2序列在重楼属中的鉴定成功率达到100%, 而生物条形码协会 (CBOL) 植物工作组推荐的matK和rbcL序列的鉴定成功率分别为52.9% 和5.9%, 二者联合鉴定能力没有提高, 对于ITS2序列扩大至29个物种67份样品依然具有100%的鉴定成功率。实验结果表明, ITS2序列能够准确鉴定重楼属药用植物, 可以作为潜在的药用植物通用条形码序列。     

5SrRNA基因间隔区DNA序列在穿心莲道地性中的可行性研究

目的探讨5SrRNA基因间隔区DNA序列在穿心莲道地性研究中的可行性。方法提取不同产地穿心莲总DNA后,PCR特异扩增5SrRNA基因间隔区,采用荧光标记末端终止子双脱氧末端终止法测序,对测序结果进行多序列联配分析。结果成功得到321bp的5SrRNA基因间隔区碱基序列,经过多序列联配分析发现,不同产地穿心莲的此段5SrRNA基因间隔区DNA序列之间没有差异。结论5SrRNA基因间隔区DNA序列不适合用于研究穿心莲药材的道地性。     

急性胃肠炎暴发流行的病原学研究

目的查明承德市急性胃肠炎暴发原因,确定病原体。方法采集患者粪便标本,采用ELISA方法检测腹泻病人粪便标本病毒抗原,对ELISA结果阳性标本提取病毒核酸并通过特异性引物进行PCR扩增、测序并与参考株做同源性分析,结合临床症状及流行病学特征,确定发病原因。结果 21份粪便标本中,6份标本诺如病毒抗原阳性,核酸扩增和测序表明为诺如病毒GII型,序列分析表明,扩增片段序列与GII/12亚型诺如病毒序列相似性最高。结论证实该起胃肠炎由诺如病毒GII型引起。     

The etiological study on the outbreak of acute gastroenteritis in Chengde city of Hebei province

目的 查明承德市急性胃肠炎暴发原因,确定病原体.方法 采集患者粪便标本,采用ELISA方法检测腹泻病人粪便标本病毒抗原,对ELISA结果阳性标本提取病毒核酸并通过特异性引物进行PCR扩增、测序并与参考株做同源性分析,结合临床症状及流行病学特征,确定发病原因.结果 21份粪便标本中,6份标本诺如病毒抗原阳性,核酸扩增和测序表明为诺如病毒GⅡ型,序列分析表明,扩增片段序列与GⅡ/12亚型诺如病毒序列相似性最高.结论 证实该起胃肠炎由诺如病毒GⅡ型引起.     

脑心通胶囊中全蝎的特异性DNA鉴别

目的建立正品全蝎(东亚钳蝎)的特异性DNA分子鉴别方法。方法采用DNA条形码技术,基于线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列,设计全蝎的特异性引物,对全蝎药材及含全蝎的中成药脑心通胶囊进行PCR扩增及测序,将获得的序列在GenBank数据库中应用BLAST进行结果判定,结果中相似性最高的序列对应物种为待测样品最接近的物种。结果引物SF1R1和SF2R4均可特异性扩增东亚钳蝎的DNA,产生大小为250～260 bp的条带;且应用这两对引物均在脑心通胶囊中检测到东亚钳蝎,与胶囊所用投料药材一致。结论基于COⅠ序列的DNA条形码技术可用于全蝎药材及脑心通胶囊中全蝎的鉴定,该方法准确、简便、具有高特异性和灵敏度,具有实际应用价值。     

中药材蛇胆的DNA分子标记鉴定研究

目的　运用分子标记技术鉴定药材蛇胆的真伪,以克服目前仅依据形态、显微特征及理化性状进行鉴别的不足。方法　分别从药材蛇胆的胆衣和胆汁、原动物棕黑锦蛇的肌肉和胆汁中提取DNA,经PCR扩增得到约400bp的12SrRNA基因片段,并对该基因片段进行测序研究。结果　从少量药材蛇胆的胆衣和胆汁中可提得足够用于PCR扩增的DNA模板,扩增产物的测序结果表明同一动物的胆衣和胆汁、肌肉和胆汁的碱基序列完全一致。结论　DNA分子标记技术可用于中药材蛇胆和胆汁的鉴定,提示该技术也可用于其他动物分泌物类型药材的鉴别。目前市场上药材蛇胆来源较复杂,需加强质量监督和控制。     

基于5S-rRNA 基因间区碱基序列鉴定繁缕

目的建立快速准确鉴定民间药繁缕(Stellariamedia)的方法。方法首次利用DNA分子鉴定技术对繁缕及混淆品牛繁缕(Myosotonaquaticum)进行了5SrRNA基因间区的PCR扩增和测序。结果DNA序列和限制性酶切谱可以用于鉴定繁缕及牛繁缕。同时对石生繁缕(S.vestita)、长叶繁缕(S.longifolia)及垂梗繁缕(S.radians)进行了5SrRNA基因间区的PCR扩增和测序,认为上述5种植物各自的DNA序列和限制性酶切谱可用于繁缕属分子系统学研究。结论该方法可用于药用植物繁缕的鉴定及繁缕属分子系统学研究。     

大黄药材基原物种叶绿体基因组分析与特异DNA条形码开发

大黄是我国常用大宗药材之一,其基原植物为唐古特大黄、药用大黄和掌叶大黄。不同基原的大黄药材活性成分和药效存在差异,为快速准确鉴定大黄药材3个基原物种,本文利用Illumina高通量测序技术对大黄药材基原物种叶绿体基因组进行测序,完成其组装注释与结构特征解析,并基于叶绿体基因组高变区开发精准鉴别大黄药材3个基原物种的特异DNA条形码,最后进行验证。结果如下:唐古特大黄、药用大黄和掌叶大黄叶绿体基因组全长分别为161 039 bp、161 093 bp和161 136 bp,呈典型四分体结构,均编码131个基因,包括86个蛋白质编码基因、37个tRNA基因和8个rRNA基因。基于高变区设计的5对引物均可对42份样品有效扩增,测序结果分析证明rps16-trnQ、psaA-ycf3、psbE-petL、ndhF-rpl32与trnT-trnL均可作为特异DNA条形码准确鉴定唐古特大黄、药用大黄和掌叶大黄。本文可为大黄药材3个基原物种分类鉴定、保证大黄药材临床用药安全及规范大黄药材市场提供依据。     

基于分子生物学特异性扩增的方法鉴别菲牛蛭

目的：通过DNA条形码鉴定和建立特异性引物扩增的方法,有效区分菲牛蛭与其他水蛭品种。方法：通过聚合酶链式反应（PCR）对水蛭样品的COI序列进行扩增,利用MEGA 6.06软件通过建树法进行NJ树聚类分析,针对菲牛蛭素的编码基因序列、利用Primer Premier 5软件进行引物设计,对经设计、合成的8对引物通过PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳实验进行筛选,并确定特异性引物的最佳退火温度。结果：通过COI序列的NJ树聚类分析可以确定20批水蛭样品中的9批菲牛蛭样品,经过Primer Premier 5软件进行引物设计共选出8对引物进行合成,通过PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳预实验筛选出引物7、为最佳实验引物,且确定了引物7的最佳退火温度为49℃。结论：通过COI序列的DNA条形码研究,确定了样品中的菲牛蛭,通过特异性引物PCR扩增和电泳检测,有效地将菲牛蛭与其他水蛭样品进行区分,为菲牛蛭的分子生物学鉴定方法提供了参考。     

免疫性血小板减少症转化为RUNX1基因阴性的儿童急性巨核细胞白血病临床分析

目的 分析免疫性血小板减少症转化为RUNX1基因阴性的儿童急性巨核细胞白血病患者资料,复习此类罕见病的文献资料,探讨该病的临床特征。方法 选择安徽省儿童医院血液科2018年1~12月收治的2例急性巨核细胞白血病患儿为研究对象,回顾性分析患儿的临床资料及实验室检查结果。结果 2例患儿既往经骨髓细胞学等检查诊断为免疫性血小板减少症（ITP）,曾对激素、丙球显效或部分显效,其后因出血症状就诊,经骨髓MICM分型等检查,确诊为RUNX1基因阴性的急性巨核细胞白血病。结论 反复血小板减少幼儿患者,应密切随访骨髓细胞学检查,并及时进行相关基因检测。     

基于matK和ITS2及二级结构对药材香薷及其混伪品的鉴别研究

目的 快速、准确鉴别药材香薷及其混伪品，保障香薷的药材质量和用药安全。方法 收集石香薷、江香薷和香薷植物材料分别进行matK和ITS2序列的扩增与测序，测序结果经Codon Code Aligner软件校对，同时从GenBank下载石香薷、江香斋及其易混品种海州香薷、香薷、密花香薷、牛至等物种的matK和ITS序列。其中，ITS序列经隐马尔可夫模型去除两端的5.8S和28S序列，共得到16个物种的ITS2序列50条；经Clustal软件校对共获得9个物种的matK序列28条。通过Mega7.0软件分析matK和ITS2序列，计算所有物种种内和种间遗传距离，构建邻接法(neighbor joining，NJ)聚类树，通过ITS2 Database预测ITS2二级结构，采用4Sale软件比对二级结构，通过ProfDistS软件构建基于联合ITS2一级序列及其二级结构的剖面邻接(profile neighbor-joining，PNJ)系统发育树。结果 基于matK和ITS2序列的遗传距离均表明香薷正品与其各种混伪品之间存在明显barcoding gap。NJ和PNJ进化树的拓扑关系一致，可以区分药材香薷及其混伪品。香薷的ITS2二级结构与其各混伪品具有显著差异。结论 建议matK和ITS2序列均可以作为鉴别香薷与其混伪品的DNA条形码，ITS2二级结构信息的加入可丰富鉴定结果，为香薷药材的准确鉴别、香薷属与石荠苎属植物的科学分类提供参考。     

基于网络药理学探讨人参调控铁死亡抗阿尔茨海默病的潜在作用机制

目的 采用网络药理学方法探讨人参抗阿尔茨海默病的可能靶标及作用机制.方法 利用TCMSP数据库获取人参活性成分及其所对应的靶标.通过GeneCards数据库获取阿尔茨海默病的治疗靶标.利用Venn在线工具获得人参活性成分和阿尔茨海默病的共同作用靶点.运用Cytoscape软件构建人参、活性成分、靶标间相互作用网络关系图...     

基于网络药理学与分子对接技术探讨蛇床子治疗阿尔茨海默病的作用机制

目的 运用网络药理学结合分子对接技术探讨蛇床子治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法 借助TCMSP数据库获取蛇床子的活性成分及潜在作用靶点;检索GeneCards、OMIM、DisGeNET数据平台得到阿尔茨海默病的潜在作用靶点,筛选两者共同靶点;应用Cytoscape 3.7.1构建蛋白相互作用（PPI）网络图并筛选发挥治疗作用的关键靶点,再借助R语言进行基因本体（GO）功能分析、京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析;运用AutoDock Vina软件,对核心靶点和药物主要活性成分进行分子对接,验证网络分析结果。结果 蛇床子包含主要活性成分20个,化学成分与疾病共同靶点56个,网络拓扑分析显示B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、雌激素受体α(ESR1)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、糖原合成酶激酶3β(GSK3B)、半胱氨酸蛋白水解酶3(CASP3)为关键靶点,通过调控神经活性配体-受体的相互作用、钙信号通路、p53信号通路、多种细胞凋亡、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)信号通路、白细胞介素-17(IL-17)信号通路等发挥治疗作用。分子对接验证中...     

基于线粒体动力学失衡调控研究锁阳醋酸乙酯提取物对阿尔茨海默症小鼠行为学的改善作用

目的 探究锁阳醋酸乙酯提取物（ECS）对阿尔茨海默症（AD）模型小鼠行为学、线粒体组织形态学及线粒体动力学相关蛋白表达的影响和作用机制。方法 采用8周龄AD模型5xFAD转基因小鼠为模型组,8周龄野生型C57BL/6小鼠为对照组,ECS组为模型鼠ig ECS 47 mg/kg,每天1次,连续14 d。给药6和12周分别进行跳台、水迷宫、旷场行为学检测;给药12周后取海马部位进行电镜观察;Western blotting检测线粒体融合相关蛋白MFN1、OPA1和线粒体分裂相关蛋白DRP1的表达。结果 水迷宫结果显示,给药6周,3组间均无显著性差异;给药12周后,与对照组比较,模型组小鼠潜伏期时间延长（P<0.05）,穿越平台次数显著减少（P<0.05）;与模型组比较,ECS组小鼠潜伏期时间显著缩短（P<0.05）,穿越平台次数显著增加（P<0.05）;跳台结果显示,与对照组比较,给药6周及12周,模型组小鼠跳台潜伏期时间显著缩短（P<0.05）,跳台次数显著增多（P<0.05）;与模型组比较,给药6周,ECS组无显著性差异;给药12周,ECS组跳台潜伏期时间显著延长（P<0.05）,跳台次数显著减少（P<0.05）。旷场结果显示,给药12周,三组均无显著性差异。电镜结果显示,对照组线粒体结构清晰膜完整,嵴排列整齐;模型组线粒体膜破裂、直径变小、嵴扭曲模糊;ECS组线粒体嵴不完全变形,部分基质出现空泡。Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组OPA1及MFN1蛋白表达水平显著下调,DRP1蛋白表达水平显著上调（P<0.05）;与模型组比较,ECS组MFN1、OPA1蛋白表达水平显著上调（P<0.05、0.01）,DRP1蛋白表达水平显著下调（P<0.05）。结论 ECS显著改善AD模型小鼠的行为学,机制可能与调节线粒体动力学失衡相关。     

基于网络药理学探讨金钗石斛和霍山石斛治疗阿尔茨海默病的作用机制

目的 基于网络药理学探讨及比较金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.和霍山石斛D. huoshanense活性成分治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法 基于中国知网、万方和PubMed数据库收集金钗石斛、霍山石斛的有效成分;PubChem平台查询活性成分结构;SwissADME平台筛选金钗石斛、霍山石斛活性成分的靶点;SwissTartgetPrediction平台预测各活性成分的作用靶点;GeneCards和OMIM数据库检索阿尔茨海默病相关靶点;Cytoscape 3.9.1构建“活性成分–疾病–靶点”网络图;String数据库分析并构建药物与疾病的蛋白质相互作用（PPI）网络;利用Metascape进行基因本体（GO）功能及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。结果 共获得金钗石斛有效成分84个,核心成分为crepidatin、N-isopentenyl-6-hydroxydendroxinium、3-O-methylgigantol等;霍山石斛有效成分56个,核心成分为erianin、dendrocrepine、dendrocandin U等;金钗石斛...     

2016—2021年清镇市第一人民医院神经外科患者下呼吸道标本病原菌分布特征及耐药性分析

目的 探讨清镇市第一人民医院神经外科患者下呼吸道标本病原菌构成特点及耐药情况,为临床合理使用抗菌药物治疗提供参考依据。方法 收集2016年1月—2021年12月清镇市第一人民医院神经外科患者送检的合格下呼吸道标本,采用梅里埃VITEK 2-compact分析仪进行细菌鉴定和药物敏感性试验。结果 共检出663株细菌,其中革兰阴性杆菌有556株,占比83.9%;革兰阳性球菌有107株,占比16.1%;常见病原菌为肺炎克雷伯菌（214株,32.3%）、鲍曼不动杆菌（93株,14.0%）、金黄色葡萄球菌（91株,13.7%）、铜绿假单胞菌（80株,12.1%）和大肠埃希菌（61株,9.2%）。耐药性监测结果显示,肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株分别占33.1%、60.6%,对碳青霉烯类药物的耐药率为8.9%、1.6%;鲍曼不动杆菌对氨曲南、头孢他啶、氨苄西林/舒巴坦、环丙沙星和头孢吡肟的耐药率超过60.0%,对亚胺培南的耐药率为53.8%;铜绿假单胞菌对庆大霉素、阿米卡星和妥布霉素的耐药率低于15.0%,对亚胺培南的耐药率为45.0%。金黄色葡萄球菌中甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）检出率为62.6%,MRSA的耐药率明显高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）,未检出对替加环素、万古霉素和利奈唑胺耐药的菌株。结论 清镇市第一人民医院神经外科患者下呼吸道感染病原菌以革兰阴性杆菌为主,肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌是常见的病原菌。病原菌对临床常用抗菌药物耐药严重,多重耐药细菌检出率高,临床用药治疗前应及时采样进行细菌培养和药物敏感性试验,根据药敏试验结果制定合理的治疗方案。     

市售覆盆子药材DNA条形码鉴定研究

目的基于ITS2条形码序列检测市场销售覆盆子药材,为保证覆盆子药材使用的正确性和安全性提供一种新的鉴定手段。方法获取掌叶覆盆子及其5种常见同属易混种ITS2序列,以及GenBank上下载的共计48条序列。使用Gene Tool软件分析ITS2序列长度,GC含量和变异位点等情况,利用Clustal X和MEGA 7.0软件计算遗传距离和构建邻接系统发育聚类树。同时随机检测24份市售覆盆子药材,利用中药材DNA条形码鉴定系统和构建邻接系统发育聚类树确定物种,鉴别真伪。结果掌叶覆盆子基原植物可与其同属易混种进行明显区分;市售药材中正品22份,伪品1份,混合物1份。结论基于ITS2序列的DNA条形码技术能够成功鉴定市场销售的掌叶覆盆子及其混伪品。     

N6-苯甲酰基-2'-叔丁基二甲基硅氧基腺苷-3'-H-膦酸的合成工艺研究

目的 研究N~6-苯甲酰基-2′-叔丁基二甲基硅氧基腺苷-3′-H-膦酸的合成工艺。方法 以腺苷为起始原料,先对腺苷的嘌呤氨基进行苯甲酰基保护,再分别向腺苷的5′位和2′位引入二甲氧基三苯甲基(DMT)和叔丁基二甲基硅基(TBDMS)保护基,制备得到关键中间体N~6-苯甲酰基-5′-二甲氧基三苯甲氧基-2′-叔丁基二甲基硅氧基腺苷(3)。中间体3与磷试剂2-氯-4H-1,3,2-苯并二氧磷杂环己烷-4-酮反应引入膦酸基团,最后使用二氯乙酸脱除DMT保护基得到目标产物。结果 经过5步反应得到了目标化合物N~6-苯甲酰基-2′-叔丁基二甲基硅氧基腺苷-3′-H-膦酸,并利用~1H-NMR、~(31)P-NMR、质谱等方法确证了其结构。本合成工艺的总收率为35.7%,目标化合物的质量分数为98.5%。结论 该合成工艺与原有方法相比步骤短,操作简单,具有良好的应用前景。