4种不同破红液对血性胸水富集瘤细胞效果的研究

目的 探讨4种不同破红液在血性胸水富集瘤细胞行苏木精-伊红(H-E)染色及免疫细胞化学(ICC)染色中的效果。 方法 选取肺腺癌血性胸水样本22例,肉眼观察外观呈深红色或褐色,离心无法分层。分别用不同的破红液(1%乙酸液,50%乙醇液,50%乙醇与10%中性缓冲甲醛混合液,1%乙酸与50%乙醇及10%中性缓冲甲醛混合液)进行破红,观察H-E染色及ICC染色结果,并进行比较及评估。 结果 4组破红液均能消除红细胞,使肿瘤细胞显现,但肿瘤细胞在形态学和抗原表达方面,50%乙醇与10%中性缓冲甲醛混合液富集瘤细胞的染色效果明显优于另外3种破红液(P<0.001)。 结论 不同的破红液对血性胸水富集瘤细胞的H-E染色及ICC染色效果不尽相同,采用50%乙醇与10%中性缓冲甲醛混合液进行破红的效果最佳。     

血性胸水细胞蜡块制作的体会

目的研究血性胸水细胞蜡块制作的效果。方法南京大学附属鼓楼医院病理科2013—2015年临床2 h内送检新鲜血性胸水20例,每份标本均分3份,95%乙醇固定3种不同时间进行细胞蜡块制作,常规切片HE染色观察结果。结果本研究方法制作的细胞蜡块常规HE切片完整、镜下细胞结构清楚、背景干净;三种不同时间做出细胞蜡块个数率并无统计学意义,但从获取细胞量和时间上综合考虑95%乙醇固定4 h的制作效果最好。结论本研究方法选取95%乙醇固定4 h时间段,可得到最佳血性胸水的细胞蜡块制作效果。     

非小细胞肺癌胸腔积液细胞块分子病理检测的意义

目的分子病理检测所选取的肿瘤组织通常经外科手术获得,这会对患者造成一定的创伤,且并不适用于晚期或复发转移的肿瘤患者。文中探讨以非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)胸腔积液细胞块作为肿瘤组织替代材料进行分子病理检测的临床意义。方法 30例NSCLC胸腔积液分层离心获取肿瘤细胞并制作成细胞块,应用免疫组化、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)、基因测序等方法对其进行研究。结果细胞块切片中肿瘤细胞丰富并保存部分组织学结构特征;免疫组织化学染色能够辅助肿瘤确诊及分型;表皮生长因子受体(epidermal growth factor recep-tor,EGFR)基因的FISH检测阳性率为33.33%(10/30例),6例为EGFR基因高多体性扩增,4例为EGFR基因扩增;基因突变检测率为26.67%(8/30例),19外显子突变6例,21外显子突变2例。结论胸腔积液细胞块对于晚期NSCLC的诊治具有重要的临床意义,可辅助肿瘤确诊分型,并有效指导肿瘤的分子靶向治疗。     

胸水细胞8-OH-dG,k-ras基因突变在肺癌诊断中的意义

目的探讨胸水细胞8-OH-dG,k-ras基因蛋白表达和突变与肺癌的关系.方法采集53例肺癌病人、53例非肺癌病人的胸水,离心得细胞,将细胞成分离心涂片,用免疫组化学分别测定8-OH-dG,k-ras基因的蛋白表达和用PCR-SSCP法检测胸水细胞k-ras基因突变率.结果肺癌病人胸水细胞8-OH-dG,k-ras基因的蛋白表达阳性率分别为77.4%(41/53)与56.6%(30/53);非肺癌病人胸水细胞8-OH-dG,k-ras基因的蛋白表达阳性率分别为13.2%(7/53)与3.8%(2/53),两组比较差异有高度显著性(P＜0.01);PCR-SSCP法检测肺癌病人、非肺癌病人胸水细胞,k-ras基因突变为62.3%(33/53)与5.7%(3/53),两组比较差异有高度显著性(P＜0.01).53例肺癌病人胸水细胞8-OH-dG,k-ras基因的蛋白表达分值分别为1.68±1.21与1.37±1.13,等级相关分析呈高度正相关(Rs=0.743,P＜0.01).结论肺癌病人胸水细胞,8-OH-dG,k-ras基因的蛋白表达阳性率、分值以及PCR-SSCP法检测胸水细胞k-ras基因突变率均高于非肺癌病人;肺癌组胸水细胞8-OH-dG,k-ras基因蛋白表达两者有关联.     

细胞块石蜡包埋切片和细胞涂片鉴别诊断良、恶性胸腹腔积液的临床效果比较

［摘要］目的　对比细胞块石蜡包埋切片和细胞涂片鉴别诊断良、恶性胸腹腔积液的临床效果．方法　随机选取安康市中医医院2012年5月至2015年5月收治的胸腹腔积液患者80例,每1例送检标本分为2份,1份应用细胞块石蜡包埋切片法检测,另1份应用细胞涂片法检测．结果　细胞块石蜡包埋切片的细胞学诊断阳性率28.8%（23/80）显著高于细胞涂片22.5%（18/80）,P＜0.05,细胞病理学诊断的腺癌检出率32.5%（26/80）显著高于细胞涂片20.0%（16/80）,P＜0.05;80例标本中,31例为血性胸腹腔积液,其中13例为恶性,阳性率为41.9%;49例为非血性胸腹腔积液,其中11例为恶性,阳性率为22.5%．血性胸腹腔积液细胞病理学诊断的阳性率显著高于非血性胸腹腔积液（P＜0.05）．结论　细胞块石蜡包埋切片比细胞涂片鉴别诊断良、恶性胸腹腔积液的临床效果好．     

胸腔积液细胞蜡块技术在分子病理检测上的应用价值

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)胸腔积液细胞蜡块的制作方法及在分子病理检测上的应用价值。方法取30例NSCLC胸腔积液底部沉淀样本进行离心,取其离心沉淀物制成细胞蜡块,按常规组织标本进行脱水、包埋、切片、HE染色;应用免疫组化、RT-PCR法对其进行研究。结果应用此法制成的细胞蜡块病理切片中,肿瘤细胞丰富、形态结构保持完好,核浆染色对比鲜明,图像清晰;免疫组化染色效果良好,能够辅助肿瘤诊断及分型;EGFR基因突变阳性率为26.92%(7/26例),其中6例19号外显子19-DEL突变,1例21号外显子L858R突变。结论非小细胞肺癌(NSCLC)胸腔积液制作细胞蜡块,其操作方法简便,实用性强,可辅助肿瘤确诊分型,并可作为肿瘤组织替代材料进行分子病理检测,有效指导肿瘤的分子靶向治疗。     

非小细胞肺癌阳性胸水 BRAF V600E基因突变的研究

目的：分析BRAFV600E基因突变在非小细胞肺癌阳性胸水中的表达情况。方法将胸水内查见肺腺癌细胞的病例24例其阳性胸水离心沉渣制作细胞块。分离细胞块样品 DNA ,使用扩增突变系统（ARMS ）方法进行 PCR 扩增,检测BRAFV600E基因突变情况。结果检测成功率为100％,突变检出率为8％,检出突变2例,男性及女性各1例,FAM 信号Ct值分别为18.7及17.8,STD的 FAM 信号Ct值为18。结论可以应用非小细胞肺癌阳性胸水代替肺癌肿瘤组织检测BRA FV600E基因突变,对指导晚期非小细胞肺癌病人靶向药物治疗具有重要指导意义。     

HRM方法检测非小细胞肺癌患者胸水标本癌细胞基因突变的临床意义

[目的]探讨应用HRM方法检测非小细胞肺癌患者胸水标本癌细胞EGFR、KRAS基因突变用于指导EGFR酪氨酸激酶受体抑制剂治疗的可行性.[方法]收集36例非小细胞肺癌患者胸水标本,常规提取DNA,HRM方法检测KRAS基因第2外显子、EGFR基因第19和21外显子突变.统计分析胸水标本与前期检测过的非小细胞肺癌组织KRAS、EGFR突变率差异.[结果]胸水标本36例中,2例(5.6％)KRAS突变,10例(27.8％) EGFR突变(其中EGFR第19和21外显子突变各5例).前期检测过的非小细胞肺癌组织KRAS和EGFR突变率分别为5.8％和36.3％.KRAS和EGFR突变率在胸水标本与前期非小细胞肺癌组织中差异均无显著性意义(P＞0.05).[结论]对难以获得肺癌组织标本的非小细胞肺癌患者可应用HRM方法检测胸水标本筛查KRAS、EGFR基因突变,指导EGFR酪氨酸激酶受体抑制剂应用.     

胸水细胞蜡块在肺癌诊断和EGFR 基因 检测中的应用研究

目的 探讨胸水细胞蜡块结合免疫组织化学染色技术在肺癌诊断和EGFR 基因检测中的应用 价值。方法 胸水标本常规离心、涂片后,沉渣包埋制成细胞蜡块,结合免疫组织化学染色明确诊断,应 用ARMS-PCR 法检测175 例肺腺癌EGFR 基因突变情况,并与同期活检或手术的305 例肺腺癌组织块的 EGFR 基因突变进行对比。结果 细胞蜡块结合免疫组织化学染色的癌细胞检出率高于常规涂片者（P <0.05）, 且不确定构成比低于后者（P <0.05）。用细胞蜡块与组织块检测EGFR 基因突变的阳性率及男女构成比比较, 差异无统计学意义（P >0.05）。结论 胸水细胞蜡块可作为实体瘤组织的良好替代样品,有助于明确肿瘤类型、 来源,并可用于肺癌的EGFR 基因突变检测,有效指导其分子靶向治疗。     

晚期非小细胞肺癌的靶向及免疫治疗的研究进展

肺癌是中国截至目前最常见的癌症类型,其中非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占比可达80 %以上。早期可切除的NSCLC的主要治疗手段是手术联合全身辅助治疗,晚期NSCLC的治疗基石为化疗,但以铂类为主的传统化疗方案毒副作用较多,整体疗效有限,晚期NSCLC患者的生存率仍然较低。随着基因检测技术陆续发现驱动基因,相应的靶向治疗成为热点,免疫治疗为驱动基因阴性的晚期NSCLC患者提供了新的治疗方式。本文针对晚期NSCLC的靶向治疗及免疫治疗研究进展进行综述。     

老年晚期非小细胞肺癌EGFR基因突变情况的研究

目的 通过检测非小细胞肺癌(NSCLC)的人表皮生长因子受体(EGFR)基因突变,以探讨老年晚期患者的EGFR突变类型及突变特征。方法 45例经CT引导下经皮肺穿刺术的NSCLC的病理组织标本,经基因测序法检测其EGFR基因突变情况,并对EGFR基因各外显子的突变类型进行统计分析。结果 45例NSCLC标本,EGFR基因突变率为37.8%,其中外显子19约占52.9%;外显子21占41.2%,两者合占基因总突变数的94.1%。外显子19突变主要发生在DNA链上的碱基序列第746～753位密码子上,均为碱基删除突变,其中,最常见的突变类型是del E746-A750;外显子20突变1例,突变发生在DNA链上的碱基序列第768位密码子上的错义突变;外显子21突变发生在DNA链上的碱基序列第848、858、861位密码子上的错义突变,而L858R是最常见类型。突变阳性率,男性22.7%,女性52.2%;吸烟者15.4%,非吸烟者46.9%;鳞癌14.2%,腺癌48.4%;Ⅲ期26.5%,Ⅳ期36.8%,EGFR基因突变率在性别比例、吸烟情况以及病理类型之间的比较,差异均有显著性学意义(P&lt;0.05);在肺癌分期的比较,差异无意义(P&gt;0.05)。结论 (1)EGFR基因突变约占NSCLC总数的37.8%, 以外显子19、21突变为主。(2)EGFR主要突变类型为碱基删除突变、错义突变,大部分突变发生在女性、非吸烟、腺癌患者,其中,半数以上存在复合突变。     

30例晚期非小细胞肺癌胸腔积液KRAS基因突变的检测

目的通过对合并胸腔积液的非小细胞肺癌(NSCLC)患者胸腔积液KRAS基因的检测,建立非组织来源KRAS检测的替代方法,探讨KRAS突变情况及主要临床病理特征。方法收集30例NSCLC胸腔积液标本,用焦磷酸测序法和锁核酸探针-桑格测序法(LNA-PCR sanger)检测各标本中KRAS突变情况,统计分析KRAS突变与临床病理特征之间的关系。结果焦磷酸测序法检出3例突变,而LNA-PCR sanger测序法则检出6例突变。6例突变中有4例位于第2外显子第12号密码子,2例位于第2外显子第14号密码子。统计学分析KRAS突变与性别、吸烟史、年龄、病理类型及体力状况(PS)评分无关。结论 LNA-PCR sanger测序和焦磷酸测序法均可用于胸腔积液标本KRAS突变检测,可为NSCLC基因检测提供良好的非组织标本替代方法。     

TCT 联合免疫组织化学在NSCLC 恶性 胸腔积液诊断中的价值

目的 采用液基薄层细胞学检查（TCT）与免疫组织化学检测甲状腺转录因子1（TTF-1）、细 胞角蛋白7（CK7）、细胞角蛋白5/6（CK5/6）和P63 在恶性胸腔积液中的表达,探讨这2 种检测方法联合 诊断非小细胞肺癌（NSCLC）致恶性胸腔积液及在分型诊断中的临床价值。方法 采用TCT 对703 例胸 腔积液进行细胞学涂片,筛选出疑似肿瘤细胞和肿瘤细胞标本281 例;再利用免疫组织化学染色对确诊为 NSCLC 恶性胸腔积液的137 例患者进行肺腺癌、鳞癌分型诊断;最后采用ROC 曲线计算其曲线下面积,进 一步判断该指标是否具有诊断价值。结果 初筛703 例胸腔积液,137 例为NSCLC 所致的恶性积液,其中肺 腺癌110 例、肺鳞癌25 例、肺腺鳞癌2 例。CK5/6、P63、TTF-1 及CK7 在肺鳞癌和肺腺癌致恶性胸腔积 液标本中的阳性表达率比较,差异有统计学意义（P <0.05）。CK5/6 在肺鳞癌所致恶性胸腔积液中敏感性、 特异性分别为92.86%（95% CI ：0.64,0.99）和89.58%（95% CI ：0.77,0.99）;P63 在肺鳞癌致恶性胸腔积液 中敏感性、特异性分别为91.67%（95% CI ：0.60,0.99）和72.73%（95% CI ：0.54,0.86）。TTF-1 在肺腺癌 致恶性胸腔积液中的敏感性、特异性分别为87.18%（95% CI ：0.77,0.93）和90.63%（95% CI ：0.74,0.98）; CK7 在肺腺癌致恶性胸腔积液中敏感性、特异性分别为94.23%（95% CI ：0.83,0.98）和75.00%（95% CI ： 0.41,0.93）。TTF-1 和CK7 诊断肺腺癌致恶性胸腔积液的ROC 曲线下面积（AUC）分别为0.821 和0.774 ; CK5/6 和P63 诊断肺鳞癌致恶性胸腔积液的（AUC）分别为0.805 和0.755。结论 TTF-1 和CK7、CK5/6 和P63 分别对肺腺癌、鳞癌致恶性胸腔积液有重要的诊断价值,TCT 联合免疫组织化学对良恶性胸腔积液的 鉴别诊断及NSCLC 致恶性胸腔积液的分型诊断具有临床应用价值,值得推广应用。     

Clinical significance of co-expression of VEGF-C and VEGFR-3 in non-small cell lung cancer

Lymphangiogenesishastraditionallybeenovershadowedbythegreateremphasisplacedonthebloodvascularsystem(angiogenesis)becauseofthelackofidentificationoflymphangiogenicfactorsandsuitablemarkers Inrecentyears ,thishasbeenchangingrapidlyfollowingthediscoveryofvascularendothelialgrowthfactorC (VEGF C)andoneofitsreceptors ,VEGFR 3 1　VEGF CisamemberoftheVEGFfamily VEGFR 3ismainlyexpressedinlymphaticendotheliumofadulthumantissues Inthepresentstudy ,weassessedtheexistenceofVEGF CandVEGFR 3in…     

高渗氯化钠羟乙基淀粉40对猪脑外伤并失血性休克后脑灌注的影响

目的 观察高渗氯化钠羟乙基淀粉40（HSH40）对猪脑外伤并失血性休克后脑灌注的影响。方法 12只实验用小型猪在麻醉镇静、机械通气下,采用脑额叶气击伤、硬膜外球囊及股动脉放血的方法,建立脑外伤急性颅高压并失血性休克模型。建模后稳定1 h,将12只动物随机分入三组（n=4）,分别静脉输注等失血量的羟乙基淀粉200/0.5（HES组）、20%失血量的7.5%高渗氯化钠注射液（HS组）、35%失血量的HSH40注射液（HSH组）。观察建模前（T01）、建模后60 min 即复苏处理前（T0）、复苏处理后15 min（T15）、30 min(T30)、60 min(T60)、120 min(T120)、180 min(T180)时平均动脉压（MAP）、颅内压（ICP）、脑灌注压（CPP）的变化;同时观察T01、T0、T15、T60、T120五个时点的血钠、血浆渗透压（OSM）、动静脉血氧含量差（Da-jvO2）、氧摄取率（OER）的变化。结果 与复苏处理前（T0）比较,各组复苏处理后MAP均明显上升,HSH组上升速度最快;达峰后,HSH组和HES组MAP呈缓慢下降趋势;而HS组MAP则下降迅速。HSH组和HS组复苏处理后各时点ICP较T0均明显降低(P<0.05);复苏处理后,HES组各时点ICP均高于T0,除T15外的各时点ICP与T0比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。复苏处理后,各组CPP均迅速上升,达峰后下降,各时点CPP均明显高于T0（P<0.05）;HSH组、HS组CPP的上升速度快于HES组;HSH组CPP在复苏处理后各时点均高于HES组（P<0.05）,达峰后明显高于HS组（P<0.05）。各组Da-jvO2和OER在T0时较T01时增大（P<0.05）,复苏处理后各时点较T0时降低（P<0.05）;HS组和HSH组的OER于T60降至T01水平（P>0.05）,但HS组T120时的OER又高于T01（P<0.05）。HSH组、HS组复苏处理后各时点的血Na+浓度和OSM较T0均明显升高（P<0.05）,峰值出现于T15。结论 小剂量（约6.6 mL/kg）HSH40在有效纠正猪脑外伤合并失血性休克MAP的同时,可以降低升高的ICP,提升CPP,恢复性增加脑血流量,改善脑氧供需平衡。     

Expression of T cell factor- 4 in non-small-cell lung cancer

Background　Tcellfactor 4 (TCF 4)playsanimportantroleindevelopmentandcarcinogenesis Recently,theroleofTCF 4hasbeendescribedincoloncancerandothercancers However, whetherTCF 4playsasimilarroleinlungcancerisunknown Toanswerthisquestion, westudiedtheexpressionofTCF 4proteinandmRNAinnon small celllungcancer(NSCLC)andtherelationofTCF 4expressionpatterntohistologicaltypeandcelldifferentiation Methods　TissuesamplesfromsixtycasesofpathologicallydiagnosedNSCLCandeightnormaltissuesampleswere…     

FGF-2和osteopontin在非小细胞肺癌中的表达及其相关性

目的：探讨成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其相关性。方法：应用免疫组织化学SP法分析76例NSCLC组织及15例正常肺组织中FGF-2和OPN蛋白的表达水平。采用RT-PCR和Western印迹检测FGF-2对人肺腺癌细胞株A549中OPN mRNA及蛋白表达水平的影响。结果：NSCLC组织中FGF-2和OPN的阳性率分别为65.8%（50/76）和60.5%（46/76）,显著高于正常肺组织13.3%(2/15)和0(0/15)（P<0.01）,FGF-2和OPN的阳性表达与淋巴结转移、临床分期密切相关（均P<0.01）,与年龄、性别和病理分型无明显相关（均P>0.05）。两者表达在NSCLC中呈正相关（r=0.552,P<0.01）。FGF-2可以明显上调A549细胞中OPN mRNA和蛋白的表达（P<0.05）。结论：FGF-2和OPN的高表达与NSCLC的发生及侵袭转移有关,FGF-2的促癌机制可能部分通过上调OPN的表达。     

Super-ARMS法检测EGFR突变在NSCLC的临床应用

目的:探讨Super-ARMS法检测体液EGFR突变在晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者治疗中的应用。方法:收集天津医科大学肿瘤医院自2019年4月1日—2019年12月30日161例NSCLC患者的血液、脑脊液、心包积液标本,采用Super-ARMS法对EGFR基因片段进行检测,根据突变结果对EGFR突变类型分析判断。结果:161例NSCLC患者标本中,86例（53.4％）EGFR突变阳性。19号外显子（19-del）缺失、21号外显子（L858R）基因点突变及T790M点突变最常见。S768I有5例（3.1%）;G719X突变4例（2.5％）;L861Q有1例（0.6%）;不同性别、是否吸烟者之间突变差异均无统计学意义（均P>0.05）;在年龄、是否存在EGFR-TKIs治疗史间差异均有统计学意义（均P<0.05）。EGFR基因突变率在女性、不吸烟患者中较高。结论:NSCLC患者EGFR突变率较高。Super-ARMS法可用于体液EGFR突变检测,其结果较准确,且可同时检测多种突变及并存突变。     

结肠癌中MMP-11和Moesin mRNA的表达与肿瘤转移及预后的关系

目的检测结肠癌中基质金属蛋白酶-11(matrix metalloproteinase 11,MMP-11)和膜突蛋白(Moesin)mRNA表达水平并探讨其表达与肿瘤转移和预后的关系。方法采用原位杂交方法检测68例结肠癌组织及40例正常结肠组织中MMP-11和Moesin mRNA的表达情况。结果结肠癌组织中MMP-11和Moesin mRNA表达显著高于正常组织(P<0.05);癌组织中MMP-11和Moesin mRNA表达与组织学分化、淋巴结转移和临床分期有关,MMP-11表达还与浸润深度相关;MMP-11 mRNA阳性表达患者5年生存率(46.8%)明显低于阴性表达患者(75%),差异有统计学意义(P<0.05),但Moesin mRNA阳性表达患者五年生存率与阴性表达患者差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MMP-11和Moesin mRNA高表达与结肠癌的浸润和转移密切相关,其中MMP-11可以作为结肠癌预后的指标。