KLF4蛋白在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨转录因子KLF4对结肠癌生物学行为影响的分子机制。方法收集58例手术切除的结肠癌组织标本,同时取58例相应癌旁组织作为对照。运用免疫组织化学检测结肠癌组织、癌旁组织中KLF4蛋白的表达情况。结果 58例结肠癌组织中KLF4的阳性表达率为20.7%,癌旁阳性率为75.9%。KLF4蛋白表达与患者性别、年龄、大体类型之间无显著相关(P>0.05),与结肠癌有无淋巴转移及临床分期之间呈显著相关(P<0.05)。随着不同临床分期的增加,KLF4表达逐渐下调,且有淋巴结转移的KLF4表达明显低于无淋巴结转移组。结论 KLF4与结肠癌的发生、临床进展、转移密切相关,其可能成为结肠癌治疗、预后判断的潜在生物学指标。     

携带小鼠 KLF4 基因重组慢病毒的构建及对 RAW264.7 细胞增殖的影响

目的 构建小鼠 Krüppel 样因子 4（KLF4）慢病毒表达载体,并建立 KLF4 过表达小鼠腹腔巨噬细胞 RAW264.7 细胞株。方法 采用聚合酶链式反应（PCR）技术扩增目的基因 KLF4 后,构建重组质粒 pLVX-KLF4,并 通过 PCR、双酶切和测序方法对其进行鉴定。重组质粒与 pSPAX2、pMD2.G 辅助质粒通过 Lipofectamine® 3000 共转 染 293T 细胞,包装病毒并测定病毒滴度。将获得的慢病毒感染 RAW264.7 细胞,实时定量 PCR 法检测 KLF4 mRNA 的表达。分选流式细胞仪分选 GFP 阳性 RAW264.7 细胞。流式细胞术检测 KLF4 对 RAW264.7 细胞周期的影响。 EdU 法检测 KLF4 对 RAW264.7 细胞增殖的影响。结果 经 PCR、双酶切鉴定和测序证实,成功构建了包含小鼠 KLF4 基因的慢病毒穿梭质粒,RT-PCR 证实 Lenti-KLF4 感染的 RAW264.7 细胞中 KLF4 mRNA 表达高于未感染的 对照组 RAW264.7 细胞（P＜0.05）。初次浓缩后测定小鼠 KLF4 基因重组慢病毒的滴度为 2.05×108 TU/mL。分选出 KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞。KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞周期变化显示为 S 期延长,G0/G1 期缩短。EdU 检 测显示 KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞增殖活性增高。结论 成功构建了 KLF4 的慢病毒表达载体,并建立 KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞株,KLF4 过表达促进了 RAW264.7 细胞的增殖。     

Krüppel 样因子4 在神经母细胞瘤中的表达及其与细胞 增殖和侵袭的关系

目的观察Krüppel样因子4(KLF4)在神经母细胞瘤中的表达及其对神经母细胞瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法RT-PCR和免疫组织化学法检测神经母细胞瘤组织及癌旁组织中KLF4的表达。采用电穿孔转染法将KLF4 siRNA转入神经母细胞瘤SK-N-MC细胞中,MTT检测KLF4对神经母细胞瘤SK-N-MC细胞增殖的影响,Boyden小室检测KLF4对神经母细胞瘤SK-N-MC细胞侵袭的影响。结果与癌旁组织相比,神经母细胞瘤组织中KLF4表达水平显著降低,并随病理分期的升高而降低(P<0.05)。转染KLF4 siRNA可显著下调神经母细胞瘤SK-N-MC细胞中KLF4的表达,而KLF4表达下调可显著促进SK-N-MC细胞的增殖和迁移(P<0.01)。结论KLF4可抑制神经母细胞瘤细胞的增殖和侵袭,KLF4低表达可能与神经母细胞瘤的发生和发展密切相关。     

过表达KLF4对棕榈酸所致L6骨骼肌细胞胰岛素抵抗的影响

目的探讨Krtippel样因子4（KLF4）过表达对大鼠L6骨骼肌细胞胰岛素抵抗的影响。方法采用棕榈酸诱导法建立大鼠IJ6骨骼肌细胞的胰岛素抵抗模型,随机分为对照组和转染组。对照组转染腺病毒空载体（Ad）,转染组转染KLF4腺病毒表达载体（Ad—KLF4）。采用Real—timePCR和Western—blot检测两组KLF4、胰岛素受体（IR）和葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）的表达水平,采用葡萄糖氧化酶法检测两组培养液中的葡萄糖浓度。结果与对照组比较,棕榈酸诱导组对葡萄糖的摄取量显著降低（P〈0．05）,KLF4、IR、GLUT4表达显著下调（P〈0．05）。KLF4过表达可显著提高细胞对胰岛素的敏感性,并上调IR、GLUT4表达。结论过表达KLF4可导致IR、GLUT4表达上调,并改善骨骼肌细胞的胰岛素抵抗。     

胃癌中Kriilppel样核转录因子-4的表达与核转录因子特异性蛋白-1和Notch跨膜受体-1表达的关系及意义

目的研究胃癌组织中Kr／ilppel样核转录因子-4（KLF4）和核转录因子特异性蛋白-1（Spl）、Notch跨膜受体-1（Notchl）的表达,探讨KLF4和Spl、Notchl在胃癌组织中表达的相关关系及三者与胃癌临床病理的关系。方法采用免疫组织化学染色法,分别对76例胃癌手术标本及30名同期收集的正常胃组织标本中Spl、Notchl和KLF4进行蛋白检测,分析三者的表达水平与临床病理的关系及KLF4的表达与Spl、Notchl表达的关系。结果正常胃组织标本中可见KLF4蛋白强阳性表达率为77％,在胃癌组织中表达较弱或表达缺失;Spl在胃癌组织中阳性表达率为63％,正常组13％;Notchl在胃癌组织中阳性表达为66％,明显高于正常胃组织的23％,且三者表达与胃癌分化程度、胃癌分期及淋巴结转移密切相关（P＜0．05）。KLF4和Notchl在胃癌中表达呈负相关（r=-0．629,P〈0．05）,KLF4和Spl在胃癌组织中表达呈负相关（r=-0．566,P〈0．05）。结论KLF4和Spl、Notchl在胃癌组织中表达失衡可能对胃癌的发生发展起重要作用,三者可能成为胃癌预后的判断指标及潜在的治疗靶点．     

KLF6、KLF4及APC基因蛋白在结直肠癌中的表达和意义

目的研究转录因子KLF6、KLF4及APC基因在结直肠癌中的表达和意义。探讨它们在结直肠癌发生发展中的作用机制。方法应用免疫组化Envision法对58例结直肠癌组织、20例结直肠黏膜慢性炎症组织中的KLF6、KLF4及APC基因进行蛋白检测。结果KLF6、KLF4及APC蛋白在结直肠癌组织表达率分别为77.59%(45/58)、51.79%(30/58)、65.50%(38/58),低于在结直肠黏膜慢性炎症组织中的100%(20/20)、85%(17/20)、90%(18/20),差异有统计学意义(P<0.05);KLF6、KLF4及APC蛋白在结直肠癌组织中的表达与其浸润深度及预后有关(P<0.05),与淋巴结转移及Dukes分期无关(P>0.05)。结论KLF6、KLF4及APC基因可能在结直肠癌的发生发展中起重要作用。     

基于TCGA筛选结肠癌预后相关lncRNA及建立预后风险模型

目的　筛选与结肠癌预后相关长链非编码RNA（lncRNA）,并构建结肠癌预后风险模型。方法　数据提取时间：建库至2022年3月1日。从癌症基因组图谱（TCGA）数据库下载并整理结肠癌转录组数据,构建配对样本lncRNA表达矩阵,利用“edgeR”R包筛选获得差异表达lncRNA（DElncRNA）。对DElncRNA先后行COX回归模型单变量分析、Lasso回归分析、Kaplan-Meier（K-M）生存分析、多元COX回归模型分析,获取预后相关lncRNA。依据多元COX回归模型中回归系数构建结肠癌预后风险模型。通过C指数值、时间依赖的受试者工作特征曲线（ROC）和ROC下的面积（AUC）及K-M生存分析评估模型预测的准确性。对模型中lncRNA构建竞争性内源RNA（ceRNA）网络,对相关的mRNA进行基因本体论（GO）、京都基因与基因组大百科全书数据库（KEGG）富集分析,探索lncRNA影响结肠癌进展的机制。结果　整理转录组数据得到5 460个lncRNA,配对样本分析获得DElncRNA 868个,其中上调548个、下调320个。单变量COX回归分析后获得40个lncRNA,经Lasso回归分析过滤共线性因素,得到lncRNA 34个,K-M生存分析后,得出14个候选lncRNA。再进行多元COX回归分析,得到7个预后相关lncRNA（下调：LINC01132;上调：ELFN1-AS1、RP5-884M6.1、LINC00461、RP1-79C4.4、RP4-816N1.7、RP3-380B8.4）,依据回归系数构建预后风险模型。模型的C指数值为0.82;3年和5年的AUC值分别为0.79、0.84;进行K-M生存分析提示高低风险组生存率差异有统计学意义（P<0.000 1）。随后构建ceRNA网络,通过KEGG富集分析提示下调lncRNA可能是通过肌动蛋白细胞骨架的调控、癌症中蛋白聚糖、PI3K-Akt信号通路等抑制结肠癌进展,上调lncRNA可能是通过细胞粘附分子、局灶性粘连、吞噬体等通路促进结肠癌进展。结论　本研究构建了一个包含7个lncRNA的结肠癌预后风险模型,具有较好预测患者生存预后准确性,每个lncRNA是潜在单独的预后生物标志物,对临床上结肠癌患者预后评估具有一定参考价值。     

miR-132通过靶向KLF7抑制鼻咽癌细胞增殖和迁移

目的探讨miR-132靶向负调节Kruppel样因子7(KLF7)表达对鼻咽癌(NPC)细胞增殖和迁移的影响。荧光定量PCR(qPCR)检测NPC组织和细胞及正常鼻咽组织和细胞中miR-132表达,Western blot检测KLF7蛋白表CNE-2Z细胞增殖、迁移和侵袭能力,裸鼠成瘤实验、免疫组化法检测CNE-2Z细胞体内生长、瘤内血管情况。结果鼻咽癌组织较正常鼻咽组织miR-132表达水平降低,KLF7蛋白表达增加;鼻咽癌CNE-2Z细胞较正常鼻咽上皮细胞NP69 miR-132表达水平降低,KLF7蛋白表达增加(P<0.05)。TargetScan预测及双荧光素酶检测显示,KLF7是miR-力,迁移和侵袭数量,肿瘤体积及微血管密度(MVD)显著降低(P<0.05),KLF7-OE组结果均相反(P<0.05)。相比miR-132 mimics组,miR-132 mimics+KLF7-OE组KLF7蛋白表达水平,36、48、60 h细胞增殖活力,迁移和侵袭数量、肿瘤体积及MVD显著升高(P<0.05)。结论 miR-132可通过负调控KLF7表达,影响NPC...     

基于生物信息学分析微小染色体维持蛋白2在头颈部鳞状细胞癌中的表达及意义

目的 探讨头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）中微小染色体维持蛋白2(MCM2)的表达情况及意义。方法 通过基因表达公共（GEO）数据库比较MCM2在HNSCC和正常组织中的表达差异。利用UALCAN数据库分析不同因素下MCM2在HNSCC和正常组织中的表达情况;TIMER数据库分析MCM2与免疫细胞的相关性;运用Linked Omics数据库和STRING数据库研究与MCM2密切相关的基因。最后运用GSCALite数据库分析相关关键基因的药物靶点。结果 MCM2在HNSCC中表达高于正常组织,差异有统计学意义（P<0.05）。MCM2在不同年龄段、性别、肿瘤分级、临床分期和淋巴转移的HNSCC中表达均高于正常组织,且人乳头瘤病毒（HPV）阳性患者MCM2表达高于HPV阴性患者,差异有统计学意义（P<0.05）。HNSCC中MCM2的表达与免疫细胞的浸润水平成正相关（P<0.05）。GSCALite数据库分析显示MCM2受NPK76-II-72-1、Navitoclax、GSK1070916和I-BET-762等药物调节。结论 MCM2在HNSCC中高表达,可作为HNSCC...     

舌鳞状细胞癌的蛋白质组学图谱及差异表达蛋白功能分析

目的 在舌鳞状细胞癌中,蛋白质表达的改变对疾病的发生发展起着至关重要的作用。本研究旨在绘制舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma, TSCC)的蛋白质组学图谱并进行生信分析,筛选TSCC诊断和治疗相关的生物标记物并进行验证。方法 选用5对TSCC癌与癌旁组织,利用液相色谱-串联质谱技术(LC-MS/MS)绘制TSCC蛋白质组学图谱,通过差异分析揭示TSCC癌与癌旁组织的差异表达蛋白,并将差异表达蛋白进行亚细胞定位分析、GO分析及蛋白质互作网络富集分析,最后将富集出的典型差异蛋白用另外15对TSCC癌与癌旁组织标本加以验证。结果 TSCC癌与癌旁组织共检测出6 894个蛋白质,其中鉴定出159个差异表达蛋白。这159个差异表达蛋白多富集在转录、信号转导、转录调节等通路;亚细胞定位主要分布在胞质和细胞核中,其中上调最为显著的3个蛋白是Q06546(GABPA)、P23443(RPS6KB1)和P46952(HAAO),下调最为显著的3个蛋白是Q6NXR4(TTI2)、Q9H981(ACTR8)和Q9H930(SP140L)。将GO分析富集在转录和信号转导...     

膀胱癌m6A调节因子预后模型建立与分析

目的 分析m6A调节因子对膀胱癌（bladder cancer, BC）预后的影响,建立预后预测模型。方法 从癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas, TCGA）数据库获取397例BC组织的高通量测序数据和对应的临床病理特征数据。在26个m6A调节因子中,采用单因素Cox回归筛选预后相关的m6A调节因子,利用最小绝对值收敛和选择算子（least absolute shrinkage and selection operator, LASSO）Cox回归分析方法构建BC预后预测模型,比较高低风险组总生存期（overall survival, OS）、免疫检查点相关基因和靶向治疗相关基因表达的差异。通过基因集富集分析比较高低风险组中信号通路的富集情况,采用单样本基因富集分析（single sample gene set enrichment analysis,ssGSEA）和估计恶性肿瘤组织中基质和免疫细胞（estimation of stromal and immune cells in malignant tumors using expression data...     

长链非编码RNA BCYRN1对肺腺癌细胞生物学行为的影响

摘要：目的　探究长链非编码RNA（lncRNA）脑胞质RNA1（BCYRN1）在肺腺癌细胞中的表达及对细胞周期、凋亡、侵袭和迁移能力的影响。分析BCYRN1表达与肺腺癌患者临床病理特征及预后的关系。方法　分别培养正常肺上皮细胞BEAS-2B和肺腺癌细胞A549、H1299,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测BCYRN1在正常细胞和肺腺癌细胞中的表达水平;分别将BCYRN1敲低及对照质粒转染入H1299肺腺癌细胞,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡的变化;通过划痕实验、Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化。结合癌症基因组图谱（TCGA）数据库,分析BCYRN1表达与肺腺癌患者临床病理特征的相关性。利用癌症阵列的lncRNA（lnCAR）数据库中lncRNAs表达数据,采用Cox回归分析BCYRN1表达与患者预后的关系。结果　BCYRN1在肺腺癌细胞中的表达水平显著高于肺正常上皮细胞（P＜0.05）;流式细胞分析提示BCYRN1敲低组的细胞出现S期阻滞,细胞凋亡率增加;划痕实验和Transwell实验显示BCYRN1敲低组H1299细胞侵袭和迁移能力减弱。生物信息学分析显示BCYRN1的表达与患者的N分期和肿瘤分期相关（P＜0.05）,BCYRN1高表达患者总生存期显著缩短。结论　LncRNA BCYRN1在肺腺癌细胞中高表达,下调BCYRN1可抑制肺腺癌细胞的侵袭和迁移能力,并使细胞周期发生阻滞。其高表达与肺腺癌患者N分期和肿瘤分期相关,BCYRN1高表达患者预后较差。     

Wnt1诱导信号通路蛋白1在胃腺癌中的表达及其意义

目的 探讨Wnt通路成员Wnt1诱导信号通路蛋白1（WISP1）在胃腺癌组织中表达及其与预后的关系。方 法 免疫组化染色分析 200 例胃腺癌组织样本中 WISP1、血管内皮生长因子（VEGF）、Twist1 和基质金属蛋白酶 （MMP）-2的表达,并分析WISP1与患者临床特征及预后的关系。利用GEPIA和UALCAN在线工具分析癌症基因组 图谱（TCGA）数据库中WISP1在胃腺癌及癌旁组织中的表达差异以及WISP1与患者临床预后的关系。R软件包分析 GEO数据库GSE13861胃腺癌数据集中WISP1在胃腺癌及癌旁组织中的表达差异和TCGA数据库中WISP1与Twist1 等基因表达的相关性。基于TCGA数据库和GSE13861胃腺癌数据集,选出WISP1基因用R包作基因本体（GO）和京 都基因与基因组百科全书（KEGG）及基因集富集分析（GSEA）软件进行基因集富集分析。结果 免疫组化染色结果 显示200例胃腺癌中WISP1阳性表达116例（58%）,阴性表达84例（42%）,其中TNM Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、远处转 移和（或）复发的胃腺癌患者WISP1阳性表达率升高,同时WISP1阳性表达患者的生存时间短于阴性表达者（24个月 vs. 52个月,Log-rank χ2=5.368,P＜0.05）。TCGA-STAD数据库和GSE13861胃腺癌数据集显示,WISP1在胃腺癌组织 的表达水平高于癌旁组织和正常胃组织（P＜0.05）。免疫组化结果显示VEGF、Twist1和MMP-2蛋白在WISP1阳性 组中呈现一定程度的关联。TCGA-STAD数据库中WISP1与VEGF、CDH5、MMP-2、MMP-9、Twist1、Snail和Vimentin 的表达呈正相关,但与CDH1表达呈负相关（P＜0.05）。GO分析结果表明,WISP1基因参与单核细胞迁移、细胞外基 质构造和细胞间黏附等生物过程,具有与整合素和胶原结合及细胞因子激活的分子功能。KEGG通路富集分析结果 表明,WISP1参与细胞外基质结合和细胞黏附的信号传导通路;GSEA富集结果表明,当WISP1高表达时,血管生成 和上皮间质转化（EMT）的相关基因上调。结论 胃腺癌中WISP1在基因和蛋白水平上均呈现高表达,其可能通过 促进血管生成或EMT的发生而参与胃腺癌转移和（或）复发过程。     

转录因子D位点结合蛋白对原代大鼠系膜细胞中 免疫炎症因子的调控作用

目的 通过基因表达谱分析,探讨并验证转录因子D位点结合蛋白（DBP）对原代大鼠系膜细胞（RMCs）中 免疫炎症因子的调控作用。方法 从8周龄SD大鼠中分离、培养并鉴定原代RMCs,利用小干扰RNA技术敲低其 DBP表达,进而行RNA-seq测序分析;筛选差异表达基因（DEGs）,并对DEGs行Gene Ontology（GO）注释及KEGG信 号通路分析;采用qPCR验证DBP低表达的RMCs中免疫炎症因子mRNA表达水平;利用质粒转染技术获得DBP过表 达RMCs并采用qPCR检测DBP过表达对免疫炎症因子mRNA表达的影响。结果 成功分离、培养原代RMCs,并获 得DBP低表达的原代RMCs。RNA-seq测序结果显示,与野生原代RMCs相比,DBP低表达的原代RMCs中共有267 个DEGs（上调84个,下调183个）。GO注释及KEGG信号通路分析表明,DEGs主要富集在免疫炎症相关的生物学过程 及信号通路。原代RMCs中,DBP敲低可明显下调免疫炎症因子C-C模体趋化因子配体2（CCL2）、C-X-C模体趋化因 子（CXCL）10、CXCL1、肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1、IL-6 mRNA表达,DBP过表达则可明显上调上述免 疫炎症因子mRNA表达。结论 原代RMCs中,DBP可通过调控免疫炎症因子表达参与免疫炎症反应。     

PTEN和survivin在胃癌中的表达及相关性研究

目的研究PTEN与Survivin在胃癌组织中的表达,探讨两者相互作用机制。方法采用免疫组化SP法染色检测60例胃癌组织、10例正常胃黏膜组织中PTEN和Survivin的表达。结果胃癌组织中的nEN蛋白阳性表达率为46．7％．明显低于正常胃黏膜组（P〈0．05）,并与胃癌TNM分期、淋巴结转移显著相关（P〈0．05）,与组织分化程度和浸润深度无关（P〉0．05）;胃癌组织中的Survivin蛋白阳性表达率为71．7％,明显高于正常胃黏膜组（P〈0．05）。并与组织分化程度、胃癌TNM分期和淋巴结转移显著相关（P〈0．05）,与肿瘤浸润深度无关（P〉0．05）;PTEN和Survivin蛋白在胃癌组织中的阳性表达率呈负相关（P〈0．05）。结论在胃癌组织中PTEN表达下调而Survivin表达上调．与胃癌的发生和临床进展关系密切．可作为判断胃癌生物学行为和预后的参考指标。     

MIF和MMP-2在宫颈癌中的表达及临床意义

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子（MIF）及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在宫颈癌的表达及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测68例宫颈癌组织、24例宫颈上皮内瘤病变（CIN）组织和21例正常宫颈组织（对照组）中MIF及MMP-2的表达,并对宫颈癌组织MIF与MMP-2表达进行相关性分析。结果宫颈癌组MIF和MMP-2阳性表达率显著高于CIN组和对照组;宫颈癌组不同临床分期、组织分化、有无淋巴结转移之间比较,MIF和MMP-2的阳性表达率均有显著性差异（P〈0.05）,且二者表达强度呈显著正相关（r=0.82,P〈0.05）。结论 MIF和MMP-2过表达可能与宫颈癌的发生、发展有关,二者联合检测可作为评估宫颈癌恶性程度、判断预后及指导治疗的重要参考指标。     

Stat1和MMP-2在胰腺癌中表达的意义

目的 探讨胰腺癌中信号转导子和转录激活子 1（STAT1）与基质金属蛋白酶（MMP）-2 表达的相关性及其临床意义。 方法 采用 SP 免疫组化染色技术检测 115 例胰腺癌中 STAT1 及 MMP-2 的表达情况, 并收集患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM 分期、分化程度及术后生存时间等临床资料。 结果 115 例胰腺癌中, STAT1 高表达 52 例, MMP-2 高表达 56 例, 不同临床分期、肿瘤分化程度以及淋巴结是否转移患者 STAT1 和 MMP-2 蛋白的表达差异有统计学意义（P＜ 0.05）。 STAT1 与 MMP-2 表达呈负相关（rs=-0.50, P＜ 0.01）。 有淋巴结转移、临床分期级别高、STAT1 低表达胰腺癌患者术后生存时间相对缩短。 结论 STAT1 低表达与 MMP-2 高表达在胰腺癌的进展中起重要作用。 STAT1 表达对于判断预后和指导治疗具有一定的临床价值。     

CDK5 与EMT 相关蛋白在头颈部鳞状细胞癌中异常表达的相关性研究

目的探讨头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）中细胞周期素依赖蛋白激酶5（CDK5）及上皮间充质转化（EMT）相关蛋白N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）及E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达,以及CDK5 的表达与患者预后的关系。方法免疫组化方法检测55 例HNSCC 患者癌组织中CDK5 及EMT 相关蛋白的表达情况;分析不同临床病理特征患者CDK5 及EMT 相关蛋白表达的差异,CDK5 与EMT 相关蛋白表达的相关性,以及CDK5 表达与患者生存之间的关系。结果CDK5 高表达率在有淋巴结转移患者中高于无淋巴结转移患者（91.67% vs 30.23%, P < 0.05）,在T3~T4 期患者中高于T1~T2 期患者（85% vs 20%, P < 0.05）;有淋巴结转移患者N-cadherin、Vimentin 高表达率高于无淋巴结转移的患者（75.00% vs 6.98%; 91.67% vs 27.91%, 均P < 0.05）,E-cadherin 高表达率低于无淋巴结转移的患者（8.33% vs 86.05%, P < 0.05）;CDK5 与N-cadherin、Vimentin 表达呈正相关,与E-cadherin 表达呈负相关（rs 分别为0.512、0.443、-0.363,均P < 0.01）;CDK5 高表达患者3 年生存率低于低表达患者（37.5% vs 87.0%,Logrank χ2=12.678,P < 0.01）。结论CDK5 及EMT 相关蛋白在转移性HNSCC 中异常表达;CDK5 的表达状态对预测 HNSCC 患者的预后有一定价值。     

shRNA沉默eIF4E基因表达对人喉癌细胞Hep-2生物学行为的影响

目的构建靶向真核细胞翻译起始因子4E（eIF4E）的shRNA表达载体，观察eIF4E表达抑制对喉癌细胞生物学行为的影响。方法根据人eIF4EmRNA序列设计并构建2个靶向人eIF4E基因的shRNA真核表达载体（pSilencer 4．1-sl和pSileneer4．1-s2）；然后以脂质体转染的方法将shRNA表达质粒转染至人喉癌细胞系Hep-2，经G418筛选出稳定转染的阳性细胞；分别通过反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blotting技术对构建成功的2个shRNA干扰质粒进行有效性筛选，分析其eIF4E mRNA及蛋白表达水平，并筛选出表达抑制最强的稳定转染喉癌细胞系（Hep-2-s2）。通过噻唑蓝（MTT）试验检测Hep-2-s2细胞的体外增殖活性，流式细胞仪技术（FCM）检测其细胞周期和凋亡变化情况。结果经双酶切证实转录shRNA的目的基因片段已成功克隆入pSileneer4.1-CMVneo真核表达载体中，经测序证明插入序列完全正确；eIF4E—shRNA2可以显著下调eIF4EmRNA及蛋白表达水平；eIF4E基因的表达下调明显抑制Hep-2细胞的体外增殖（P〈0．05）；Hep-2-s2细胞的G0／G1期细胞比例显著增加了（14．7±1、1）％，而S期细胞比例减少了（13.2±1．6）％（P〈0．05）；Hep-2-s2的细胞凋亡率显著增加到（18．3±1．7）％（P〈0．051。结论shRNA介导的eIF4E基因表达下调可显著降低喉癌细胞的增殖活性，同时诱导其细胞周期阻滞和凋亡率增加．为喉癌基因治疗筛选出了新的靶点。     

MMP-7、MMP-9、VEGF-C、VEGF-D在胃癌中的表达及其临床意义

目的探讨基质金属蛋白酶7（MMP-7）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、血管内皮生长因子-C（VEGF-C）、血管内皮生长因子-D（VEGF-D）在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学染色检测133例胃癌MMP-7、MMP-9、VEGF-C、VEGF-D的表达情况。结果 MMP-7、MMP-9表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、分化程度密切相关（P〈0.05）,与肿瘤大小及患者性别无关（P〉0.05）。VEGF-C和VEGF-D的表达与肿瘤分化程度、浸润程度、淋巴结转移及临床分期显著相关（P〈0.05）,而与肿瘤大小及患者性别无相关性（P〉0.05）。结论 MMP7、MMP9、VEGF-C、VEGF-D的表达与胃癌的生物学行为密切相关,可作为判断胃癌进展和预后的有用指标。