银杏内酯B对肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨银杏内酯B（Ginkgolide B,GB）抑制肺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用机制。方法：以人肺腺癌细胞A549、人肺鳞癌细胞NCI-H520、人非小细胞肺癌NCI-H1975共3种肺癌细胞株为实验对象,MTT法检测GB对肺癌细胞增殖的抑制作用;Transwell小室法检测GB对肺癌细胞侵袭力的影响;划痕法检测GB对肺癌细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测GB对肺癌细胞增殖周期、凋亡的影响;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达。结果：GB对A549、NCI-H520及NCI-H1975细胞的生长抑制作用均呈时间和剂量依赖性,抑制率随着GB浓度的增加和处理时间的延长而升高;GB处理细胞后,小室膜下表面的细胞数与对照组相比明显减少,对A549、NCI-H520及NCI-H1975细胞的侵袭抑制率分别为35.6%、28.9%、30.2%;GB作用后肺癌细胞较对照组移行愈合率明显降低（P<0.05）。与对照组相比,低、中、高剂量的GB作用于肺癌细胞后,各给药组细胞G₀/G₁比例均明显升高（P<0.05）,细胞凋亡率显著增加（P<0.05）,并呈剂量相关性。并下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达（P<0.05）。结论：GB对肺癌细胞的侵袭迁移具有明显的抑制作用,对肺癌细胞生长的抑制作用与阻断细胞增殖周期、诱导凋亡有关。其作用机制与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平有关。     

小白菊内酯对人非小细胞性肺癌H1975细胞凋亡、侵袭与迁移的影响

目的探究小白菊内酯(parthenolide, PTL)对非小细胞性肺癌细胞株H1975凋亡、侵袭和迁移的影响及其可能机制。方法 MTT法和集落克隆实验检测PTL对H1975细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染、流式细胞仪检测PTL对H1975细胞凋亡的影响;Transwell实验检测PTL对H1975细胞侵袭和迁移的影响;Western blot检测细胞凋亡、侵袭和迁移相关蛋白,以及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达。结果 MTT和集落克隆实验结果显示,随着PTL浓度的增加,H1975细胞的增殖明显受到抑制,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05);Annexin V-FITC/PI双染结果显示,PTL能明显诱导H1975细胞发生凋亡(P<0.01);Transwell实验结果显示,PTL能明显抑制H1975细胞侵袭和迁移(P<0.01);Western blot结果显示,PTL明显上调H1975细胞Bax蛋白表达,下调Bcl-2、HIF-1α、MMP-9、Akt、p-Akt(Ser473)蛋白的表达(P<0.05),同时使caspase-3蛋白发生裂解。结论 PTL能明显诱导非小细胞性肺癌H1975细胞发生凋亡,抑制其侵袭和迁移,作用机制可能与PTL抑制PI3K/Akt信号通路有关。     

华蟾酥毒基通过FAK/PI3K/Akt通路抑制食管癌Kyse-520细胞迁移和侵袭

目的探讨华蟾酥毒基抑制食管癌Kyse-520细胞迁移和侵袭的相关机制。方法 CCK-8法检测Kyse-520细胞经不同浓度华蟾酥毒基作用12、24、48 h后的增殖活性;划痕愈合实验和Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭过程;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析Kyse-520细胞中FAK、Akt、PTEN、VEGF-A、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达;Western blot检测FAK、p-FAK(Tyr397)、Akt、p-Akt(Ser473)、PTEN、VEGF-A、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平。结果 CCK-8结果显示,华蟾酥毒基可以抑制Kyse-520细胞增殖,呈现时间和浓度依赖性,划痕实验和Transwell小室实验结果表明,华蟾酥毒基可以抑制食管癌细胞迁移和侵袭;RT-qPCR和Western blot结果显示,华蟾酥毒基对FAK、Akt mRNA及总蛋白无明显影响,但可以下调p-FAK、p-Akt、VEGF-A、MMP-2、MMP-9表达,上调PTEN的表达。结论华蟾酥毒基通过诱导PTEN表达,下调FAK/PI3K/Akt信号通路,抑制食管癌Kyse-520细胞的迁移和侵袭。     

槲寄生碱影响Ras蛋白表达抑制肺癌H358细胞增殖

目的研究槲寄生碱对非小细胞肺癌H358细胞的抑制作用及其相关作用机制。方法采用MTT法检测槲寄生碱对H358细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞仪检测槲寄生碱对H358细胞凋亡的影响;采用Western blot方法检测槲寄生碱对K-Ras、Bcl-2和Bax等蛋白表达的影响;测定caspase 3、caspase 8和caspase 9的活性;检测槲寄生碱在体内的抑瘤活性。结果槲寄生碱以质量浓度依赖的方式抑制H358细胞增殖,并能有效地诱导H358细胞凋亡;caspase 3、caspase 8和caspase 9受到了不同程度的激活;同时,槲寄生碱抑制K-Ras和Bcl-2的表达,而对Bax没有明显抑制作用;槲寄生碱在体内也表现出明显的抑瘤活性。结论槲寄生碱在体外能够抑制H358细胞增殖并诱导H358细胞凋亡,为K-Ras突变型非小细胞肺癌等肿瘤疾病的治疗奠定了实验基础。     

三叶青黄酮抗肺癌作用研究

目的研究三叶青黄酮对肺癌A549细胞增殖抑制和侵袭转移作用及其机制。方法采用MTT法检测三叶青黄酮对A549细胞增殖的抑制作用;集落形成试验检测三叶青黄酮对A549细胞抗癌活性的影响;划痕试验检测三叶青黄酮对细胞迁移力的影响;Transwell实验检测三叶青黄酮对A549细胞侵袭力变化;Western blot法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-2等侵袭转移相关蛋白表达水平。结果三叶青黄酮抑制A549细胞增殖程度与用药浓度、时间呈正相关;随着药物浓度的增高,细胞集落形成的数量明显减少,细胞向划痕区的迁移速度不断减慢;穿过Transwell小室的侵袭细胞亦明显减少;MMP-2、MMP-9蛋白表达逐渐降低,TIMP-2蛋白表达升高,呈浓度依赖性。结论三叶青黄酮能够抑制肺癌A549细胞的侵袭转移,可能与降低MMP-2、MMP-9蛋白表达有关。     

山酮类化合物抑制人脑胶质瘤细胞增殖活性及作用机制探讨

目的检测3种山酮类化合物对人脑肿瘤细胞(T-98、U251SP和KT)增殖的抑制作用,并进一步探讨其可能的作用机制。方法研究从3种微生物次生代谢产物中纯化的山酮类化合物对人脑肿瘤细胞增殖的抑制作用。MTT比色法检测细胞增殖抑制率;利用双荧光素酶报告基因检测系统检测p53和Bax报告基因的表达;采用Western blot分析与凋亡相关的蛋白表达变化。结果 Austocystin H对KT细胞的增殖显示极强的抑制活性,呈剂量依赖性,IC50仅为0.69μmol.L-1;Austocystin H可诱导KT细胞内Bax报告基因表达(P<0.01);Western blot分析结果显示由Austocystin H处理的KT细胞中的p53和Bax的表达与对照组相比增加(P<0.05)。结论 Austocystin H具有极强的抑制人脑肿瘤细胞增殖作用,其作用机制可能与其诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

荜茇酰胺对H1975非小细胞肺癌细胞增殖的影响

目的 探讨荜茇酰胺对体外培养的H1975非小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制.方法 采用不同浓度荜茇酰胺(0、1.25、2.5、5、10、20、30、40和50 μmol/L)孵育H1975细胞72 h,MTT法检测细胞生存率.采用荜茇酰胺0、2.5、5和10 μmol/L孵育H1975细胞,细胞集落形成实验和划痕实验分别测定细胞增殖和迁移情况,流式细胞术测定细胞凋亡情况和活性氧(ROS)水平,倒置显微镜观察ROS荧光水平、细胞焦亡情况和ROS变化对细胞焦亡的影响,Western blot法分析加斯德明E(GSDME)、GSDME-N端、GSDMD和前体Caspase-3蛋白表达的变化.结果 荜茇酰胺能够浓度依赖性地抑制细胞生长、集落形成和细胞迁移,诱导细胞凋亡和焦亡,提高细胞内ROS水平,下调GSDME、前体Caspase-3和GSDMD蛋白表达,上调GSDME-N端蛋白表达(P＜0.05).降低ROS水平后,抑制细胞焦亡(P＜0.05).结论 荜茇酰胺能促进H1975细胞凋亡,通过提高细胞内ROS水平诱导细胞焦亡;其机制可能与ROS作用于GSDMD/GSDME蛋白有关.     

色胺酮对p53突变型肺癌H322细胞恶性行为的抑制作用

目的:探讨色胺酮对p53突变型肺癌H322细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法:利用不同浓度的色胺酮分别作用于H322细胞,通过CCK-8分析细胞增殖活性变化,Hoechst33258/PI双染法检测细胞凋亡水平,Transwell和划痕实验评价细胞迁移能力变化。应用Western blot检测mut-p53、bcl2、bax、caspase-3、cleaved caspase-3和转移相关标志物蛋白E-cadherin与N-cadherin的表达。结果:不同浓度的色胺酮均可抑制H322细胞的增殖且提升H322细胞的凋亡水平(P<0.05)。色胺酮可降低H322细胞的迁移能力(P<0.05)。此外,色胺酮可提高H322细胞中bax、cleaved caspase-3和E-cadherin蛋白的表达,同时降低H322细胞中mut-p53、bcl-2和N-cadherin蛋白的表达(P<0.05)。结论:色胺酮能够降低肺癌H322细胞的增殖和提升其凋亡能力,其核心机制与mut-p53表达抑制,继而激活bcl-2/bax/caspase-3信号轴相关;色胺酮能够抑制H322细胞...     

夏枯草乙醇提取物体外诱导肺癌细胞A549凋亡的研究

目的探讨夏枯草乙醇提取物对人肺癌细胞系A549细胞的增殖、迁移、细胞周期及凋亡的影响。方法不同质量浓度夏枯草提取物作用于人肺癌A549细胞,采用MTT比色法、细胞划痕实验等检测其对肿瘤细胞的生长及迁移的抑制作用,应用流式细胞术检测细胞增殖周期及凋亡率的变化情况,并使用Annexin-V FITC和PI双染试剂盒进行凋亡分析。结果一定质量浓度的夏枯草提取物可明显抑制肺癌细胞的增殖和迁移,并呈量效和时效关系,可诱导细胞发生G0/G1期或G2/M期细胞周期阻滞,且Sub G1峰比例明显上升,在低、中质量浓度(1.0和2.0mg·L-1)时以晚期凋亡为主,在高质量浓度(4.0mg·L-1)时主要发生早期凋亡。结论夏枯草提取物可抑制肺癌A549细胞的增殖和迁移,改变细胞周期,诱导肿瘤细胞凋亡。     

去氧鬼臼毒素抑制肺癌 NCI-H358 细胞增殖和 体外迁移的研究

摘要： 目的 探讨去氧鬼臼毒素对人肺癌 NCI-H358 细胞增殖和体外迁移的影响, 并初步探讨其作用机制。方 法 应用 CCK-8 法、 流式细胞术、 细胞划痕实验和 DCFH-D 法分别检测去氧鬼臼毒素对 NCI-H358 细胞增殖、 周期 分布、 凋亡、 体外迁移能力和细胞内活性氧（ROS）的影响, 并通过 Western blot 检测去氧鬼臼毒素对细胞周期蛋白 （Cyclin） B1、 细胞分裂周期蛋白 25 同源蛋白 （Cdc25c）、 细胞周期蛋白依赖性激酶 （CDK） 1、 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 （Caspase） -3、 p53 肿瘤蛋白、 B 淋巴细胞瘤 （Bcl） -2 和基质金属蛋白酶 （MMP） 9 的表达水平, 以及细胞外信号调节激 酶（ERK） 1/2、 p38 分裂原激活蛋白激酶（MAPK）和 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）的磷酸化水平的影响。结果 去氧鬼 臼毒素能明显抑制肺癌 NCI-H358 细胞的生长, 流式细胞结果显示其能诱导细胞停滞在 G2/M 和 S 期, 诱导细胞凋 亡和细胞 ROS 产生, 同时细胞体外迁移能力也明显下调。Western blot 结果显示, 去氧鬼臼毒素能使 Cyclin B1、 Cdc25c、 CDK1、 Bcl-2 和 MMP9 的蛋白表达明显下调, 而 Caspase-3 和 p53 的表达明显上调, 且 ERK1/2、 p38MAPK 和 JNK 的磷酸化水平明显受到抑制。结论 去氧鬼臼毒素可抑制肺癌 NCI-H358 细胞的增殖和体外迁移, 是一种潜在 的抗肿瘤药物     

大豆苷元对人非小细胞肺癌A549、H1299细胞增殖、迁移能力的影响及机制

目的探究大豆苷元(daidzein,Daid)对非小细胞性肺癌细胞株A549和H1299增殖、迁移能力的影响及可能机制。方法以A549和H1299为研究对象,CCK-8法检测Daid(0,5,10,25,50,100,200μmol·L^-1)抑制A549和H1299两种细胞的增殖情况。划痕和Transwell小室实验检测Daid对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测Cleaved Caspase-3和LC3Ⅱ/Ⅰ等的蛋白表达。结果与对照组相比,Daid在体外可明显抑制肺癌细胞的增殖,且抑制作用呈浓度依赖关系。Daid(100μmol·L^-1)可明显降低人肺癌细胞A549和H1299的迁移侵袭能力。Western blot结果显示,Daid(100μmol·L^-1)预处理后,两种肺癌细胞的Cleaved Caspase-3及LC3Ⅱ/Ⅰ表达升高。结论Daid可抑制人非小细胞肺癌A549和H1299细胞的增殖,使上述细胞的迁移侵袭能力明显下降,其机制可能与Daid诱导细胞凋亡及自噬有关。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对肺癌SPC-A1细胞增殖及SFRP1、MGMT甲基化蛋白表达的影响

目的观察甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对肺癌SPC-A1细胞增殖、细胞划痕和凋亡的影响,探讨抑癌基因分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1,SFRP1)和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA-methyltransferase,MGMT)基因启动子区DNA甲基化mRNA和蛋白在其中的表达和意义。方法CCK-8法检测不同浓度的5-Aza-CdR对人肺癌SPC-A1细胞增殖影响,划痕实验测定5-Aza-CdR对SPC-A1细胞迁移能力的影响,Hoechst 33258染色检测(0、3、10、30μmol·L^-1)5-Aza-CdR处理肺癌SPC-A1细胞24h后细胞凋亡情况,RT-PCR、Western blot法检测SPC-A1细胞中SFRP1和MGMT的mRNA、蛋白表达。结果5-Aza-CdR可以浓度梯度的抑制肺癌SPC-A1细胞增殖,IC 50为21.2μmol·L^-1;5-Aza-CdR(3、10、30μmol·L^-1)作用48 h后,肺癌SPC-A1细胞划痕愈合分别为对照组的(92.4±2.6)%、(83.6±4.2)%、(76.7±4.5)%;5-Aza-CdR处理肺癌SPC-A1细胞后,出现典型的细胞凋亡形态学改变;不同浓度5-Aza-CdR(3、10、30μmol·L^-1)处理SPC-A1细胞24 h后,SFRP1、MGMT mRNA和蛋白表达增加(P<0.05)。结论5-Aza-CdR可抑制肺癌SPC-A1细胞增殖,抑制肺癌细胞划痕修复和促进凋亡,可能与升高MGMT和SFRPl的甲基化表达有关。     

玛卡多糖抗非小细胞肺癌作用及其机制

目的:探讨玛卡多糖抗非小细胞肺癌作用及其机制.方法:采用一定浓度的玛卡多糖处理非小细胞肺癌A549细胞,CCK-8法、划痕实验和Transwell小室检测玛卡多糖对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响;流式细胞术检测玛卡多糖对A549细胞周期和凋亡的影响;实时荧光定量PCR和Western Blot法检测细胞周期和凋亡相...     

隐丹参酮抑制A549细胞复发转移的机制

目的：研究隐丹参酮对非小细胞肺癌A549细胞生长、迁移、侵袭、细胞周期分布的影响及机制。方法以不同浓度的隐丹参酮作用于体外培养的A549细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性的改变;划痕实验和Transwell实验分析细胞迁移、侵袭能力的改变;流式细胞仪检测细胞周期及E－cadherin和β整合素的表达情况。结果 MTT检测结果显示,一定浓度的隐丹参酮可抑制A549细胞的增殖,且随着浓度的增加其抑制作用明显增强。划痕实验和Transwell实验显示,A549细胞经隐丹参酮作用后,其迁移和侵袭能力受到抑制。流式细胞术显示,A549细胞经隐丹参酮作用后,细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,且药物作用后细胞表面的E－cadherin表达上调、β整合素的表达下降。结论隐丹参酮可抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移、侵袭,其机制可能与E－cadherin的上调和β整合素下调及阻滞细胞周期有关。     

分泌磷酸蛋白1对肺腺癌A549细胞生物学特性的影响

目的　探讨分泌磷酸蛋白1（SPP1）在肺腺癌（LUAD）中的表达情况及对LUAD细胞生物学功能的影响。方法　通过UALCAN、GEPIA数据库分析SPP1 mRNA在LUAD中的表达情况,GEPIA、K-M数据库分析SPP1 mRNA表达与预后的关系;通过实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot检测SPP1在LUAD组织及细胞系中表达情况。构建SPP1干扰序列并将其转染入A549细胞中,设为Blank组（不转染）、NC组（转染NC序列）、siSPP1组（转染siSPP1序列）。Western blot检测细胞中SPP1沉默效果;CCK-8、EdU、细胞克隆形成实验检测siSPP1对LUAD细胞增殖能力的影响;TUNEL实验检测siSPP1对LUAD细胞凋亡的影响;Transwell和划痕实验检测siSPP1对LUAD细胞侵袭和迁移能力的影响。结果　生物信息数据库分析显示,SPP1 mRNA在LUAD中高表达（P＜0.05）,且SPP1 mRNA高表达者累积生存率较低（P＜0.05）;LUAD组织及A549细胞中SPP1均高表达（P＜0.05）;沉默SPP1表达能够抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力,诱导细胞凋亡（P＜0.05）。结论　SPP1可作为肺腺癌诊治的潜在靶点,其可能通过调控细胞增殖、迁移及侵袭等特性影响肺腺癌的发生、发展。     

新化合物OSU-03012对结肠癌细胞增殖、迁移以及凋亡的影响

摘要： 目的 在细胞水平上初步探讨新化合物OSU-03012抗结肠癌的机制。方法 分别用1、 3、 5和10 μmol/L OSU-03012化合物干预的人结肠癌细胞株HCT-116作为研究对象, 以等体积二甲基亚砜 （DMSO） 处理的HCT-116 细胞作为对照组。CCK-8法检测各组细胞干预24、 48、 72 h时的抑制率, 划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移能力, 流式细胞术检测各组细胞凋亡情况, 免疫荧光、 Western blot检测各组细胞Bcl-2、 Caspase-3蛋白表达情况, Real-time PCR检测各组细胞Bcl-2、 Caspase-3 mRNA表达情况。结果 对照组、 1 μmol/L组、 3 μmol/L组、 5 μmol/L 组和10 μmol/L组的细胞抑制率、 凋亡率呈逐渐升高趋势, 而细胞迁移距离、 细胞迁移数目呈逐渐减小或降低趋势, 组间多重比较差异均有统计意义 （均P＜0.05）; 3、 5、 10 μmol/L组Bcl-2 mRNA和蛋白表达量低于对照组, 而Caspase-3 mRNA和蛋白表达量高于对照组 （均P＜0.05）。结论 新化合物OSU-03012可抑制结肠癌细胞增殖与迁移, 并促进结肠癌细胞凋亡, 且呈剂量依赖效应。     

扁塑藤素调控Notch信号通路诱导人肺癌条件重编程细胞死亡的作用机制研究

目的：应用条件性重编程细胞（conditionally reprogrammed cells，CRCs）技术建立人肺癌细胞体外长期培养体系，研究扁塑藤素对人肺癌CRCs增殖和迁移能力的影响，并探讨相关作用机制。方法：免疫组化法检测Notch 1、HES1和Cyclin D3在肿瘤组织和癌旁组织中的表达水平；使用CRCs技术分离培养非小细胞肺癌原代细胞；使用2，4，8，16 μmol·L^-1的扁塑藤素处理人肺癌CRCs，MTS法检测细胞活力，Annexin V/PI流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell法检测细胞迁移能力，Western Blot检测细胞中Notch信号通路相关蛋白Notch 1、HES1和Cyclin D3的表达水平。结果：在非小细胞肺癌患者肿瘤组织中Notch 1、HES1和Cyclin D3的表达水平高于癌旁组织；扁塑藤素能够诱导人肺癌CRCs死亡，并在一定范围内呈现时间和浓度依赖性（P<0.05）；随着扁塑藤素作用浓度的增高，人肺癌CRCs凋亡率明显增高（P<0.05），细胞迁移能力下降（P<0.05）；扁塑藤素能够下调人肺癌CRCs中Notch 1、HES1和Cyclin D3的蛋白表达水平。结论：扁塑藤素可能通过调控Notch信号通路相关蛋白的表达水平，抑制人肺癌CRCs的增殖和迁移，并诱导其凋亡，为肺癌的治疗提供新的实验数据和理论依据。