~(125)Ⅰ标记抗MIF单克隆抗体制备及其生物学活性的研究

目的:建立125Ⅰ标记抗巨噬细胞移动抑制因子(MIF)单克隆抗体(mAb)方法,探讨其在体内外生物学活性。方法:①利用Iodogen法,Na125Ⅰ标记Anti-mMIF mAb,用Sephadex G-25柱凝胶过滤层析法分离纯化,测定其标记率。纸层析法测定放射化学纯度和稳定性。②采用ELISA和改良MMI鉴定其免疫活性及生物学活性。③观察小鼠体内的生物学分布情况。结果:①标记的最佳条件为Iodogen 40~100μg、抗体20~50μg[Iodogen(m)∶抗体(m)=2∶1],加入Na125I15~30 MBq、室温反应10~15 min,标记率为(90.40±3.34)%,放射化学纯度为(97.60±1.14)%,比活度为12.2~26.0 MBq/μg;标记物4℃条件下放置3周后放射化学纯度仍为90.36%。②125Ⅰ-mMIF mAb能与抗原MIF特异性结合,较好地保持其免疫活性及生物学活性。③体内生物学分布,在肺、肝、脾、肾内具有较高的放射性计数。结论:Iodogen法获得高标记率和放射化学纯度的125Ⅰ-mMIF mAb,具有很好的体外稳定性,其在体内外保持较好的生物学活性。为进一步应用125I-mMIF mAb进行放射免疫显像和靶向治疗奠定了实验基础。     

抗人CD40 mAb 5H6的125I标记及其与卵巢癌细胞株HO8910体外结合的生物学特性

目的:研究抗人CD40单克隆抗体(mAb)5H6的125I标记及与卵巢癌细胞株HO8910体外结合的生物学特性.方法:氯氨-T法125I标记mAb 5H6(125I-5H6),纸层析法测定125I-5H6的标记率和放射化学纯度,三氯醋酸沉淀法分析125I-5H6体外稳定性,细胞结合饱和实验进行Scatchard分析,lindmo法及其改良方法计算125I-5H6的免疫活性分数,细胞结合实验分析125I-5H6同HO8910细胞的内化和滞留.结果:(1)mAb5H6的125I标记率为(85.4±5.2)%,放射化学纯度为(99.2±0.5)%.(2)125I-5H6存放于4℃磷酸缓冲液中7 d后其放射化学纯度为(80.3±4.7)%,在37℃血浆中存放24h后其放射化学纯度为(95.3±0.8)%.(3)125I-5H6与HO8910细胞亲和力Kd=(0.711±0.06)nmol/L,最大结合位点数(Bmasx)=(2.17±0.08)×105个/细胞.(4)125I-5H6免疫活性分数达(38.6±5.4)%.(5)4℃2 h125I-5H6同HO8910细胞滞留率为(89.8±6.0)%,37℃2 h125I-5H6同HO8910细胞内化率达(54.9±2.6)%.结论:氯氨-T法进行125I-5H6标记具有良好的标记率和放射化学纯度,以及良好的体外稳定性和较高的免疫活性分数,且125I-5H6与HO8910细胞具有很高的亲和力,可用于动物体内实验.     

125I标记抗人CD40 mAb 5H6在荷人卵巢癌(HO8910)BALB/c裸鼠体内分布及放射免疫显像

目的研究125I标记抗人CD40单克隆抗体(mAb)5H6同卵巢癌细胞HO8910体外结合的生物学特性以及在荷瘤鼠体内的分布和放射免疫显像.方法氯胺-T法进行mAb 5H6125I标记(125I-5H6),Lindmo法计算125I-5H6的免疫活性分数;细胞结合饱和实验进行Scatchard分析计算解离常数Kd及最大结合位点数Bmax;建立荷人卵巢癌(HO8910)裸鼠模型,分析125I-5H6在体内的分布,并用SPECT进行放射免疫显像.结果mAb 5H6标记率为(85.4±5.2)%,放射化学纯度为(99.2±0.5)%,125I-5H6免疫活性分数为(38.6±5.4)%,与HO8910细胞的亲和力Kd=(0.711±0.06)nmol/L.在荷瘤鼠体内特异性结合HO8910肿瘤,48小时达到高峰,放射免疫显像肿瘤清晰可见.结论125I-5H6同卵巢癌HO8910细胞在体外结合具有很高亲和力,在体内能特异性结合HO8910肿瘤,能获得优质的放射免疫图像.     

Iodogen法131I标记抗IGF1R单克隆抗体1H7及产物性质鉴定

目的探讨放射性碘标记抗IGF1R单克隆抗体1H7的实验条件及其性质。方法131I-1H7采用Iodogen法标记,Sephadex G-50层析柱分离纯化;纸层析测标记物放射化学纯度(RCP),分别置于室温、4℃、-20℃,于第8 d、16 d、24 d测定各自RCP,评价其体外稳定性,以竞争结合法鉴定其生物学性质。结果131I标记率为64.6%,131I-1H7放射性比活度5.48 MBq/μg,RCP 96.42%,即使在室温放置24 d后RCP仍达91.8%;131I-1H7与HepG2细胞结合的亲和常数K值为1.81×1011L/mol。结论Iodogen法131I标记1H7,所得产物放射化学纯度及放射性比活度高,体外稳定,生物活性保持完好,为进一步研究奠定了基础。     

^125I标记单克隆抗体4E5的制备及其在小鼠体内的分布

目的：探讨放射性核素^125I标记单克隆抗体4E5的方法,观察标记物在正常小鼠体内的生物学分布。方法：采用Iodogen法进行单克隆抗体4E5的Ⅲ标记,标记产物用SephadexG-50分离纯化,三氯醋酸（TCA）法测定标记率和放化纯,并对标记物的稳定性进行分析。取45只昆明小鼠随机分成9组,每只小鼠从尾静脉注入剂量为148KBq／0．2ml的^125I-4E5,分别于注药后5min、15min、30rain及1h、2h、6h、24h、48h、72h各处死一组小鼠,取主要脏器称重并测量其放射性计数,计算各脏器每g组织百分注射剂量率（％ID／g）。结果：”I标记4E5的标记率为（79．24-2．6）％,放射化学纯度为（97．1±1．1）％,比活度为294．5MBq／mg;^125I－4E5加入到血清及PBS中放置1w后,放化纯度仍〉90％;体内分布显示^125I-4E5在小鼠体内主要分布于肝、脾、肾,在血液中清除较快。结论：Iodogen法^125I标记4E5的标记率和放化纯度高,方法简便,标记物的稳定性好;。I-4E5在小鼠体内主要通过肝和肾代谢,血液中清除较快。     

第二抗体对~(131)I标记单抗放射免疫显像的改善作用

~(131)I标记抗体用于肿瘤放射免疫显像的主要问题是本底放射性,特别是血液中本底放射性较高。抗标记抗体的第二抗体可促进未与肿瘤结合的标记抗体加速从体内排出。 用Iodogen法标记抗结肠癌单抗2C_(10),标记抗体放化纯度96％,放射比4.47μCi/μg,     

软骨链蛋白在小鼠体内分布和代谢的示踪研究

目的　研究软骨链蛋白125I的标记和在小鼠体内的分布与代谢，为该蛋白质在肿瘤、软骨、结缔组织疾病以及地方病等领域的基础研究提供方法学指导和代谢参数.方法　氯胺-T法标记软骨链蛋白，亲和凝胶层析法分离标记物进行体内示踪研究.结果　软骨链蛋白标记率为89.90%，放射化学纯度为92.77%,样品比活度为8.13×10     

利用国产~(125)碘源制备~(125)I-心得静及实验考核

用国产Na~(125)I源、氯胺-T法、制备(-)~(125)I心得静标记配体【(-)~(125)I-IPIN】,放射色谱法分离复合物,测得(-)_(125)I-IPIN的Rf值为0.35,比活度为46.12～55.32TBq/mmol,标记率为37％,放射化学纯度达95％以上,该标记配体与小鼠脑细胞膜β受体的结合用受体的放射配体结合分析法(RBA)考核,呈典型的饱和曲线,Scatchard分析呈一直线,平衡解离常数(Kd)为0.041±0.001nM,Hill系数接近于1(0.99)。     

131Ⅰ-SAP的制备及应用安全性研究

目的探讨一种新型淀粉样变性诊断标记物131I-SAP的制备方法及其应用安全性。方法应用Iodogen法对SAP标准品进行131I标记;纸层析法测定131I-SAP的标记率与放射化学纯度。将131I-SAP分别于4℃和37℃新鲜人血清中0h,24h,48h,72h和96h,测定放射化学纯度,评价其体外稳定性。对131I-SAP进行热原、异常毒性等安全性实验。结果131I-SAP的标记率为70.6%,96h后的放射化学纯度仍大于90%。热原、异常毒性实验均为阴性。结论131I-SAP具有较好的体外稳定性,并且无热原及明显毒性反应,适合进一步临床实验及应用的安全性。     

软骨链蛋白在小鼠体内分布和代谢的示踪研究

目的 研究软骨链蛋白125I的标记和在小鼠体内的分布与代谢，为该蛋白质在肿瘤、软骨、结缔组织疾病以及地方病等领域的基础研究提供方法学指导和代谢参数.方法 氯胺-T法标记软骨链蛋白，亲和凝胶层析法分离标记物进行体内示踪研究.结果 软骨链蛋白标记率为89.90%，放射化学纯度为92.77%,样品比活度为8.13×109Dpm/μg，该蛋白与透明质酸的最大结合率为89.23%.平均血浆半减期为1.84小时,血浆清除率为1.75ml/h,排除速率为10.03ml/h,稳态双库代谢模型为：Ct=2.4986e-0.5635t+3.24e-0.2833t.结论 为临床相关疾病的研究提供实验指导和代谢参数.