DNA疫苗及其优化策略

DNA疫苗既可以诱导细胞免疫又可以诱导体液免疫反应，是最有希望成功的新一代疫苗之一。但免疫原性相对较弱，限制了DNA疫苗的广泛应用，需要进一步优化。本文对DNA疫苗的历史，优缺点，免疫机制，尤其是优化策略进行了综述，并对DNA疫苗的应用前景进行了展望。     

DNA疫苗与抗肿瘤免疫

DNA疫苗是近年发展起来的新一代疫苗，能够诱导宿主体内细胞毒T细胞反应和抗体反应。本量实验研究证明，注射抗肿瘤DNA疫苗能获得肿瘤保护性免疫效应，在肿瘤免疫治疗中应用前景看好。本文对DNA疫苗抗肿瘤免疫的机制，影响因素及应用作一综述。     

DNA疫苗免疫原性的研究策略

DNA疫苗既能诱导体液免疫又能诱导细胞免疫,是近年来疫苗研究的热点领域,被称为疫苗史上的第三次革命.但DNA疫苗诱导特异性免疫应答的水平不高,限制了它的广泛应用.本文对提高DNA疫苗免疫原性的几种策略进行综述.     

GM-CSF增强DNA疫苗免疫效果的研究进展

DNA疫苗因既能诱导体液免疫应答，又能诱导细胞免疫应答而受到广泛关注，但作为治疗性疫苗其免疫效果尚需进一步提高。细胞因子作为DNA疫苗免疫佐剂受到了广泛重视，特别是GM—CSF，由于在细胞因子网络中占有重要地位，在免疫反应中具有重要作用，而成为研究的热点之一。本文就GM—CSF增强DNA的免疫效果及其作用机理作一简要综述。     

DNA疫苗及其在流感病毒疫苗研究中的应用

DNA疫苗能够诱导广谱免疫反应，已被广泛应用于预防性疫苗和针对各种感染性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病和过敏性疾病的免疫治疗的临床试验。自DNA疫苗技术出现，A型流感病毒就与其紧密地联系在一起，已被广泛应用于小鼠和其他动物模型以研究DNA疫苗的免疫作用和机理。     

单纯疱疹病毒DNA疫苗加分子佐剂的研究进展

迅速发展起来的DNA疫苗由于具有多项优点受到人们的高度重视，但其诱导的特异性免疫应答效果却不尽人意，因而妨碍了它们的实际应用。如何增强和提高DNA疫苗的免疫效果是新一代DNA疫苗分子设计和研究的关键问题，其中之一就是应用分子佐剂来优化DNA疫苗。本文就近几年在单纯疱疹病毒基因疫苗加分子佐剂方面的研究进展作一综述。     

乙肝DNA疫苗

DNA疫苗可以诱导长期的体液及细胞免疫，打破免疫耐受，作为未来治疗病毒、胞内菌、寄生虫等病原体感染及肿瘤的工具已进行了大量研究。本文就慢性乙型肝炎DNA疫苗的研究进行了总结，主要描述了二十一世纪以后乙肝DNA疫苗的发展。     

DNA疫苗的免疫机制及其优化策略

DNA疫苗的研究成为疫苗研究领域的热点,被誉为疫苗研究的第三次革命,开创了人类与疾病作斗争的疫苗研究新篇章。DNA疫苗既可以诱导细胞免疫又可以诱导体液免疫应答,成为最有希望的新型疫苗之一,但其免疫机制还不是十分清楚,免疫原性相对较弱,限制了DNA疫苗的广泛应用。     

DNA疫苗及其优化策略

DNA疫苗既可以诱导细胞免疫又可以诱导体液免疫反应,是最有希望成功的新一代疫苗之一.但免疫原性相对较弱,限制了DNA疫苗的广泛应用,需要进一步优化.本文对DNA疫苗的历史,优缺点,免疫机制,尤其是优化策略进行了综述,并对DNA疫苗的应用前景进行了展望.     

DNA疫苗在病毒感染疾病中的应用进展

DNA疫苗属于继第一代减毒、灭活疫苗，第二代重组基因工程亚单位疫苗之后的第三代新型疫苗。DNA疫苗不仅能诱导体液免疫反应，而且还可以有效地激发细胞免疫。考虑到细胞免疫在病毒感染性疾病的机体免疫过程中发挥重要作用，且目前临床上对病毒感染性疾病的防治措施及其相对效果都不尽如人意，DNA疫苗在此方面更是被寄于厚望。本文对DNA疫苗的历史发展，针对病毒防治方面的部分疾病研究进展、问题及前景进行简要综述。     

IFN-γ基因对表达DHBV preS/S蛋白质的DNA疫苗诱生免疫应答的影响

目的 利用DHBV感染鸭模型，研究鸭IFN-γ真核表达质粒作为免疫佐剂对：DNA疫苗诱导免疫应答的影响和预防DHBV感染的作用。方法 用DuIFN-γ真核表达质粒与DHBpre S／S DNA疫苗共免疫，或用DHBpreS／S DNA疫苗单独免疫正常幼鸭，检测经免疫前后鸭PBMC表达DuIFN-γ的mRNA水平(半定量竞争性RT-PCR)、诱生的抗体水平(ELISA)、病毒攻击免疫鸭后血清和肝脏中的病毒DNA变化(斑点和Southern印迹核酸杂交)。结果 IFN-γ表达质粒作为免疫佐剂，可以增强DNA疫苗诱导的鸭PBMC IFN-γ的mRNA表达水平。用大剂量病毒攻击免疫鸭的结果显示，用DuIFN-γ表达质粒和DHB preS／S DNA疫苗共免疫鸭清除：DHBV的速度，明显比仅用DHBpreS／S DNA疫苗免疫鸭清除病毒的速度快，肝脏中DHBV总DNA和共价闭环DNA(eccDNA)的量也低于DHBpreS／S DNA单独免疫组。结论 IFN-γ真核表达质粒作为免疫调节佐剂在：DNA免疫中具有潜在的应用价值。     

HIV-2 DNA疫苗免疫小鼠的免疫反应观察

目的：用构建的HIV－2外膜蛋白gp105和核心蛋白gag基因的DNA疫苗免疫小鼠，评价其免疫效果。方法：将HIV－2型gp 105和gag基因克隆到表达载体pIRES1neo中，构建重组DNA疫苗质粒。间接免疫荧光试验证明，构建的DNA疫苗在真核细胞中表达了gp105或／和gag.构建的疫苗免疫小鼠后，用流式细胞仪测定CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞亚类数，并用HIV－2抗体ELISA检测试剂盒检测免疫鼠血清中抗HIV－2抗体水平。结果：构建了3种HIV－2 DNA疫苗pIRES1gag、pIRSE1gp105和pIRES1gag-gp105，转染BHK细胞后均能表达抗原蛋白，免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖并诱导产生抗HIV－2特异性抗体，其中pIRES1gag-gp105免疫鼠中，淋巴细胞增殖最显著，而pIRES1gp105免疫鼠中HIV－2特异性抗体水平最高。结论：构建的DNA疫苗均能诱导机体产生免疫反应，其中pIRES1gp105诱导的体液免疫应答最显著，而pIRES1gag-gp105 诱导的细胞免疫响应最显著。     

表达前列腺特异性膜抗原的DNA疫苗对肿瘤细胞的抑制作用

目的构建表达前列腺特异性膜抗原（PSMA）的DNA疫苗，观察其在体外对肿瘤细胞的免疫攻击和在体内对肿瘤细胞攻击的免疫保护作用。方法通过稳定转染构建表达PSMA的小鼠黑色素瘤细胞系B16-PSMA，将DNA疫苗pCDNA3．1-PSMA通过肌肉注射导入C57BL／6小鼠体内，分离小鼠脾细胞，检测细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）反应。以B16-PSMA细胞攻击免骺小鼠，观察免疫动物的无瘤生存期和肿瘤体积增长情况，评价DNA疫苗的抗肿瘤作用。结果DNA疫苗可诱导小鼠脾淋巴细胞CTL活性，经过免疫后的小鼠成瘤率降低，无瘤生存期延长，肿瘤生长缓慢，肿瘤组织内有较多淋巴细胞浸润，表明产生较强的抗肿瘤反应。结论表达PSMA的DNA疫苗能够诱导小鼠产生特异性免疫反应，对表达PSMA的肿瘤细胞的攻击产生免疫保护作用，为前列腺癌的预防和免疫治疗提供了新的思路。     

布氏杆菌pCDNA3.1-L7/L12核酸疫苗的构建及其免疫学评价

目的 获得布氏杆菌保护性抗原L2／L12重组蛋白及pCDNA3．1-L7／L12重组质粒，并比较其诱导特异性免疫应答的能力。方法 PCR扩增布氏杆菌核蛋白L7／L12基因分别构建至原核表达载体PET32a( )和真核表达载体pCDNA3.1( )中；pET32a-L7／L12重组质粒转化BL21(DE3)，所表达蛋白经SDS-PAGE、免疫印迹分析、纯化后免疫小鼠；pCDNA3.1-12／L12重组质粒配以GM-CSF同时肌肉注射免疫小鼠，3次免疫后测定免疫功能进行免疫效果的评价。结果ELISA、Western blot检测到免疫鼠体内有特异性抗体产生，蛋白苗所诱导的抗体效价远远高于DNA疫苗；通过淋巴细胞增殖实验、细胞因子和CD分子测定表明DNA疫苗以诱发TH1型免疫为主。结论 所构建的布氏杆菌DNA疫苗和蛋白苗均具有诱导特异性细胞和体液免疫应答的能力，DNA疫苗诱导产生的细胞免疫反应强于蛋白苗，可作为潜在的布氏菌新型疫苗，有进一步研究的意义。     

DNA疫苗非病毒载体的研究进展

DNA疫苗（DNA vaccine）又称为核酸疫苗或基因疫苗,是将编码特异性抗原的基因构建在表达性质粒中,经某种方法导入体内后,利用宿主细胞表达系统合成相应的病原体蛋白,诱导机体产生免疫应答以达到预防和治疗疾病的目的。DNA疫苗白1990年发现以来,因具有良好的安全性及可诱导广泛的体液免疫和细胞免疫,己越来越受到人们的关注,是继减毒疫苗、基因工程疫苗之后的第三代疫苗,     

疟疾DNA疫苗免疫接种方法对小鼠 体液免疫应答的影响

目的 探讨DNA疫苗免疫接种方法对抗体水平及辅助性T细胞极化的影响。方法 利用DNA重组技术构建恶性疟原虫红内期多表位DNA疫苗,通过基因枪、肌肉注射、皮内注射等接种方法免疫小鼠,经ELISA测定该疫苗诱导产生特异性抗体的总量、亚型及表位特异性,比较不同免疫接种方法对DNA疫苗诱导产生抗体及辅助性T细胞极化的影响。结果 接种DNA疫苗的小鼠经3次免疫后都产生了较高滴度的抗重组蛋白抗体。基因枪组单位DNA诱导抗体滴度是肌注组的120倍。基因枪组小鼠血清抗体以IgG1升高为主,而肌注和皮内注射组小鼠血清抗体均以IgG2a升高为主。各免疫接种组诱导产生的抗表位多肽抗体特异性相同。结论 不同免疫接种方法不但会影响血清总免疫球蛋白水平,还能使辅助性T细胞向不同方向极化。肌注和皮内注射诱导产生以IgG2a为主的TH1型免疫应答,基因枪接种诱导产生以IgG1为主的TH2型免疫应答。DN疫苗的摄取方式可明显影响辅助性T细胞的极化。     

恶性疟原虫AMA1不同类型疫苗组合免疫接种研究

目的 探索应用恶性疟原虫DNA疫苗、重组痘苗病毒疫苗和重组蛋白疫苗进行组合免疫接种，诱导针对恶性疟原虫红内期抗原AMA1的保护性抗体。方法PCR扩增云南株恶性疟原虫AMA1编码基因，构建和制备DNA免疫质粒VR1020/E（疫苗D）、重组改良安卡拉痘苗病毒rMVME（疫苗V）和重组原核表达AMAl胞外域蛋白E（疫苗P）。用疫苗D单独或与小鼠GM-CSF表达质粒共同对小鼠进行初始免疫，用疫苗V和疫苗P进行单次或先后各一次追加强化。采用疫苗D-V组合方案免疫新西兰白兔。ELISA测定小鼠血清IgG及其亚类IgG1和IgG2a的水平，用免疫动物血清进行疟原虫裂殖子体外入侵抑制实验。结果在疫苗D初始免疫的基础上，采用疫苗V或疫苗P进行强化免疫可显著提高小鼠针对AMA1的抗体应答，小鼠血清特异性IgG平均增加15至137倍，GM-CSF表达质粒对疫苗D-V组合免疫小鼠的抗体应答有显著促进作用。采用疫苗D-V组合免疫在家兔可诱导明显的抗体应答。小鼠和家兔免疫血清在体外可显著抑制疟原虫裂殖子对RBC的入侵。结论将DNA疫苗、重组改良安卡拉痘苗病毒疫苗和重组蛋白疫苗进行组合免疫接种是诱导疟疾红内期保护性抗体的有效方法。     

DNA疫苗与抗肿瘤免疫

DNA疫苗是近年发展起来的新一代疫苗 ,能够诱导宿主体内细胞毒T细胞反应和抗体反应。大量实验研究证明 ,注射抗肿瘤DNA疫苗能获得肿瘤保护性免疫效应 ,在肿瘤免疫治疗中应用前景看好。本文对DNA疫苗抗肿瘤免疫的机制、影响因素及应用作一综述     

CpG协同calpain DNA疫苗诱导BALB/c鼠TH1免疫应答和抗日本血吸虫感染

目的 探讨含非甲基化CpG单核苷酸(cpG-ODN)协同calpain DNA疫苗抗日本血吸虫感染的保护性作用、诱导的免疫应答类型及其免疫机理。方法 calpain基因从原核表达载体pGEX-2TK亚克隆到含小鼠IL-2基因启动序列的真核表达载体pVAC，构建含日本血吸虫疫苗候选分子calpain基因的真核表达体系pVAC-calpain的DNA疫苗，构建的DNA疫苗与CpGODN免疫BALB/c小鼠，在不同阶段采血测定免疫鼠抗体的动态变化、RT-PCR分析免疫鼠细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-12的表达，加强免疫1周后用日本血吸虫尾蚴攻击感染免疫鼠，用减虫率、减卵率及其病理组织学指标考核保护性免疫的效果。结果 pVAC-calpain的DNA疫苗体系诱导了IgG抗体的产生，免疫3周后细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-12的表达表现出差异。特别是在CpG-ODN和pVAG-calpain免疫组IFN-γ、IL-12有高度表达，而IL-4的表达受到相对抑制，对攻击感染的日本血吸虫表现出了45％的减虫效果，虫卵肉芽肿的面积显著性的减少。结论 Cp GODN协同日本血吸虫calpain DNA疫苗诱导了THl为主的免疫应答，并能部分抵抗日本血吸虫感染和减轻感染鼠由于TH2免疫应答所导致的虫卵肉芽肿反应，提示CpG ODN能够协同calpain DNA疫苗抗日本血吸虫感染和缓解日本血吸虫免疫病理反应。     

006 DNA疫苗与抗肿瘤免疫

DNA疫苗是近年发展起来的新一代疫苗,能够诱导宿主体内细胞毒T细胞反应和抗体反应.大量实验研究证明,注射抗肿瘤DNA疫苗能获得肿瘤保护性免疫效应,在肿瘤免疫治疗中应用前景看好.本文对DNA疫苗抗肿瘤免疫的机制、影响因素及应用作一综述.