检测抗-HIV1的固相红细胞粘附免疫试验:一种简单、快速和准确的筛检供体的方法

本文报道了第二代检测人类免疫缺陷症病毒抗体(抗-HIV)的方法,即将与红细胞交联的抗人IgG作为与待检标本起反应的抗体指示剂,用以筛检器官和血液供体。以裂解病毒或病毒蛋白质吸附微量凝集板,以适量蛋白溶于50μl pH9.5的碳酸盐缓冲液中,全HIV-1为每孔0.14μg,肽为每孔5μg,吸附后将微量凝集板置1280g离心5分钟,于37℃培育2小时,再于4℃过夜,用含0.05%吐温20的生理盐水洗涤4次,干燥后,保存于4℃备用。血清以含5%奶粉的磷酸盐缓冲液(PBS)作1∶100稀释,将50μl稀释血清加至包被孔内,置室温作用5～10分钟,以含0.05%吐温20的0.9%盐水洗涤3次后加入1滴与红细胞交联的抗-人IgG,于180g离心3分钟并     

协同凝集用于脑膜炎球菌的血清学分群与脑脊液中抗原之检测

本文作者参照Kronvall(1973),与Olcen等(1975)所提出协同凝集(缩写为CoA)的方法对脑膜炎双球菌的分群和脑脊液中抗原的检测作了不同方法的比较。兹介绍如下: 稳定的A蛋白葡萄球菌悬液之制备:将金黄色葡萄球菌(NCTC 8530)接种于营养琼脂上,经36℃孵育过夜后,用20ml“D”氏PBS(pH7.3)将十个平皿上(直径9cm)之菌苔洗下,以PBS洗二次,用0.5％甲醛PBS处理3小时,洗涤后,加PBS至原体积,80℃加热30分钟,再用PBS洗,最后用PBS制成10％悬液加硫柳汞防腐置4℃中备用。抗体致敏法:吸取脑膜炎球菌A·B·C·X·Y·Z·29E与W_(135)等群之抗血清各0.1ml加到1.0ml上述之10％悬液中,置室温10分钟后以PBS洗,最后加10mlPBS使成致敏菌悬液。     

用酶联免疫吸附法(ELISA)测定麻疹病毒特异的IgG抗体

本文报导一种用固相ELISA测定麻疹病毒IgG抗体的方法,并与血凝抑制(HI)及补体结合(CF)两种试验方法进行比较。作者采集了63份健康成人、11份儿童(包括7个未接种麻疹疫苗及4个无麻疹病史的儿童)和36份麻疹患者血清标本。抗原是粗制品,制备方法如下:将Edmonston株病毒接种于VERO细胞,培养3～5天后,用无钙、镁离子的PBS洗二次,并稀释成1∶20,置-70℃反复冻融,再经超声处理60秒,4℃离心5分钟(1,400g)后的上清液,再用PBS稀释到蛋白浓度为0.3mg/ml。未感染病毒的细胞悬液经同法处理作为对照。用U型孔聚苯乙烯微量滴定板进行ELISA测定,其步骤如下:每孔加0.025ml(75μg)麻疹抗原或对照抗原,室温过夜,干燥(并可贮于-70℃备用)。用含0.05％吐温20的PBS     

用新的非侵入性抗原检测诊断幽门螺杆菌感染

为寻找新的非侵入性技术诊断幽门螺杆菌 (Hp)感染 ,本文评价了检测粪便 Hp抗原(Hp SA)酶免疫测定 (EIA)在 Hp感染的诊断和疗效观察中的准确性。用作 Hp SA EIA检测的粪便标本来自欧洲 1 1个胃镜室的 5 0 1例进行胃镜检查的患者。作者先将抗 Hp多克隆抗体吸附到微孔上作为捕获抗体 ,然后将稀释液稀释的粪便标本和结合过氧化物酶的多克隆抗体加入到微孔中 ,室温培育 1小时后 ,洗去未结合的物质 ,加入底物室温培育 1 0分钟。如有结合的 Hp抗原存在 ,即出现显色反应 ,加入终止液 ,用分光光度计 (45 0 nm)读取结果 ,<0 .1 40为阴性 ,0 .1 …     

快速斑点免疫结合试验在硝酸纤维素膜上检测病毒抗体

ELISA所用的聚苯乙烯板结合蛋白的能力很低。本文报道以硝酸纤维素(NC)为基质的快速斑点免疫结合试验(DIA)检测病毒抗体。作者用10μg/ml补骨脂素衍生物和长波紫外线灭活几种病毒抗原。每种抗原取1μl,滴在8×11cm的NC膜上(1cm间隔)或在印有3mm格子的8.8×8.8cmNC膜上,每3格滴1个抗原,干燥30分钟,将NC膜浸于PBS(含5%脱脂奶粉、0.01%抗泡剂A和0.0001%硫柳汞)中,封闭未结合位点。1小时后,用含0.1%吐温20的PBS洗涤。另将待     

被动颗粒凝集试验检测人类免疫缺陷症病毒抗体

作者将感染人类免疫缺陷症病毒(HIV)的MOLT-4细胞培养上清液经15～50%的蔗糖密度梯度离心,收集病毒逆转录酶活性最大的部份,再以0.5%Nonidet P-40裂解,获得病毒抗原(约150μg/ml)。将病毒抗原与等体积经鞣酸活化的5%明胶颗粒悬液混和,抗原致敏颗粒经PBS洗涤后,冻干。检测时在U型微量板每孔加25μl不同稀释度血清和25μl 1%的抗原致敏颗粒,混匀,室温置2小时后观察结果。作者共检测了663份血清标本,其中有来自美国的获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者48人,AIDS相关复征(ARC)患者21人、无症状男性同性恋者(AMH)29人和健康者10人,另外有来自日本的血友病患者105人、     

间接固定细胞免疫荧光法检测AIDS相关逆转录病毒(HTLV-Ⅲ/LAV)抗体的特异性、敏感性和实用性

作者使用HTLV-Ⅲ/LAV感染的CEM/LAV-N1细胞作为间接免疫荧光法的抗原,这种细胞可以产生并释放HTLV-Ⅲ/LAV,将细胞悬液滴在12孔玻片上,丙酮固定后贮存在-70℃供使用。从三个大陆的不同患者及正常人群中采取2233份血清,取已知AIDS病人血清作阳性对照,未感染的CEM细胞及异性恋者血清作阴性对照。检测时将待检和对照血清作倍比稀释,与感染和未感染细胞共同于37℃培育30分钟后,用PBS充分洗涤,然后每孔加1:15稀释的羊抗人IgG Fab_2荧光     

用聚乙二醇和Ⅰ~(125)标记的A蛋白快速测定含IgG的循环免疫复合物

[Stevens WJ et al:Immunol Letters3(1):1,1981(英文)] 本文报告了用市售制剂快速测定含IgG的循环免疫复合物(CIC)的方法。其操作过程主要为:将血清用PBS(pH7.4)1:1稀释,取100μl与等量的5％的PEG(分子量6,000,溶于PBS中)混合,放4℃1小时,3,000g 4℃沉淀1小时,去上清,加0.5ml 2.5％的PEG(溶于0.1％吐温20 PBS中)混悬,再3,000g     

肾综合征出血热灭活疫苗的研制

作者将汉坦病毒属的B-1病毒在新生小鼠脑内连续传26代,作为疫苗的毒种。接种病毒后7天收获鼠脑,加含5mM乙二胺四乙酸(EDTA)的PBS(2.5ml/脑),超声处理后,经12300g离心30分钟,取上清加硫酸鱼精蛋白,再经12300g离心30分钟,上清液加福尔马林灭活。用1∶1000、1∶4000和1∶8000福尔马林灭活病毒的结果表明,完全灭活病毒的时间分别为3、7和18天。灭活的病毒悬液经1∶10稀释后,加两倍体积的氢氧化铝,即为佐剂吸附疫苗。作者研究了疫苗、1∶4和1∶10稀释疫苗腹腔注射BALB/c小鼠1针或2针的免疫效果。结果表明,注射1针未稀释疫苗后,免疫荧光(IF)抗体效价为1∶16～1∶32,血凝抑     

体外检测灭活组织培养狂犬病疫苗效力的酶免疫测定法的标准化:用多克隆抗血清测定狂犬病毒糖蛋白

作者标化Essen-效力-ELISA作为灭活组织培养狂犬病疫苗质量控制的体内效力试验的补充。该ELISA的主要步骤是以碳酸盐缓冲液(pH9.6)将疫苗作1:16～1:256倍稀释每孔以50μl固定到微孔平底板中;抗原在37℃自然干燥后,用含1%tween 20的PBS洗8次;每孔加50μl预先用方阵滴定过,用20%胎牛血清稀释的相应抗原成份的适当过量的     

应用四种重组抗原诊断EBV初次感染和再激活的新免疫印迹试验

作者设计了一种新的免疫印迹试验检测EB病毒 (EBV) Ig G和 Ig M抗体来诊断 EBV初次感染和再激活 ,并与免疫荧光 (IF)法进行比较新方法是将 EBV编码的重组抗原 ,病毒核壳抗原 (VCA) p2 3(BL RF2 )、早期抗原(EA) - D p5 4(BMRF1 )、EA p1 38(BALF2 )和 EBV核抗原 (EBNA) - 1 p72 (BKRF1 )分别结合到硝酸纤维素膜条上 ,同时加抗人Ig G和 Ig M作对照 ,经与 1 :1 0 0稀释人血清培育和以碱性磷酸酶标记的羊抗人 Ig G或Ig M反应后再用底物显色。根据与相应对照条带的颜色强度相比来判断结果。IF法是通过间接 IF法和抗补体…     

青霉素G对人类单核细胞吞噬的金黄色葡萄球菌的作用

目前认为治疗细菌性感染,抗生素对吞噬细菌的作用非常重要。抗生素能否渗入细胞内杀伤细菌,不少学者已经用粒细胞作过研究,并证明了青霉素 G 在粒细胞内没有活性。但至今未见青霉素 G 对单核细胞吞噬的金黄色葡萄球菌的作用的报道。为此,作者进行了如下研究。作者从健康自愿者血液中分离单核细胞。用每毫升含0.5单位的肝素洗四次,再用HBSS 把单核细胞稀释成10~7浓度的悬液。金黄色葡萄球菌(42D 型)用含10%的AB 型血清悬液,在37℃孵育30分钟,而后将细菌在1500g 离心10分钟,用冰冷的 HBSS明胶洗两次后,用 HBSS 明胶把金黄色葡萄球菌稀释为每毫升含10~7的菌液。检测青霉素 G 对吞噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的作用。将每毫升含10~7预先处理的金黄色葡萄球菌和每毫升含10~7的单核细胞一起,37℃孵育3分钟后,在冰浴中冷却迅     

反向间接血凝试验检测乙型脑炎疫苗病毒抗原的标准化

反向间接血凝(RIHA)试验经常用于检测病毒抗原及其他抗原。作者为了对乙型脑炎(JE)疫苗进行质量控制,用标化的RIHA试验检测疫苗中病毒抗原滴度。疫苗病毒经福尔马林灭活后以K-Ⅱ区带离心纯化。用于致敏红细胞的抗体是由JE疫苗免疫5～6周龄LACA品系小鼠后所获得的。每只小鼠分别于第0、2、4、7、14和21天腹腔接种0.5ml疫苗。于免疫后7天采血,用硫酸铵沉淀法提取抗体。测定IgG浓度后以1/100的浓度致敏经戊二醛固定的5%羊红细胞或鹅红细胞,最后用pH7.2、含0.5%正常兔血清(NRS)的PBS制成0.5%红细胞悬液。     

血小板过氧化物酶反应技术

我们对血小板过氧化物酶(Platelets pe-roxidase,PPO)反应的固定技术作了改进,证实了以0.5％戊二醛固定30分钟较佳。孵育液配制用H_2O_2的浓度以介于1％～0.5％之间为宜。现将结果报告如下。材料和方法血小板的收集和固定:取正常人静脉血5ml,置塑料试管内,在室温下用普通离心机离心500转/分,分离出血浆分装两只试管,再2000转/分离心15～20分钟,弃上清液,留试管底血小板团。一管用0.5％戊二醛(0.1M磷酸缓冲液配制,PH7.2)固定30～35分钟,另一管用1％戊二醛固定15分钟。再将血小板凝块切成1~(mm)×0.5~(mm)薄片。0.1M磷酸缓冲液洗3次,每     

提高狂犬病病毒抗体血凝抑制试验的敏感性

作者用含5%硅酸胶的pH 9.0硼酸盐水与等量豚鼠血清混合后,室温作用30分钟,取上清,血清即为1:2稀释,人血清则先用丙酮处理,然后用硅酸胶除去血清中的非特异性狂犬病病毒血凝素抑制物。结果表明:296份人血清中有289份(97.6%)的1:2稀释血清,用血凝抑制(HI)试验未能检出非特异性抑制物;7份1:8～1:16稀释血清可检出低水平的抑制物,其中3份经1:4稀释后,即测不到抑制物,但另4份经各种处理,仍不能去除抑制物。多次鸡胚传代(HEP)的狂犬病病毒Flu-ry株、攻击病毒标准(CVS)株及RCEH株经     

灰黄霉素发酵液效价测定的改进

我厂灰黄霉素效价测定原来是以发酵液经生石灰处理后用乙醇萃取4～6次,不仅操作时间长,误差也较大。目前我们作了如下改变:(1)把乙醇改为丙酮乙醇(1∶2)一次萃取;(2)水解后用乙醇稀释改为水稀释。该法操作简单、省时,误差小,能比较及时配合车间生产,适宜于灰黄霉素中间体的检验。操作方法如下: 精密称取均匀发酵液5克置于10毫升离心试管中,加生石灰200～300毫克,以玻璃棒搅拌5分钟左右,用1∶2丙酮乙醇液20毫升分次将离心试管内样品洗入50毫升容     

用ABC-ELISA直接测定细胞在悬液中产生的抗体

本文报道利用高度敏感的亲和素-生物素过氧化物酶(ABC)试剂,建立一种测定体外合成抗体的ELISA.将抗原致敏动物的脾脏细胞悬液直接加在包盖过抗原的微量滴定板孔内,置37℃的CO_2培养箱内温育6小时后,洗去细胞,各孔加生物素化第二抗体,温育2小时后洗板,继加ABC,反应30分钟后洗板,加底物显色.若在细胞悬液中加入蛋白合成抑制剂嘌呤霉素,可使光密度读数下降,从而证明参加反应的抗体确系体外合成.此法测定重复样品的     

由重组CMV包膜糖蛋白B和新型佐剂制备的亚单位疫苗

本文报道与新型佐剂 MF5 9结合的巨细胞病毒 ( CMV)包膜糖蛋白 B( g B)疫苗在 46名血清阴性健康成人中的随机、双盲、安慰剂对照 期试验的结果。　　作者将在中国仓鼠卵巢细胞上表达和分泌并经突变失去一个蛋白酶裂解位点和删除跨膜区的重组 CMV g B作为抗原 ,与 MF5 91∶ 1混合制成含抗原为 5、30和 10 0 μg的 3种剂量的疫苗 (每个剂量组 10名受试者 ) ,另设 10 0 μg抗原氢氧化铝佐剂组 ( 10名 )和枸橼酸盐安慰剂组 ( 6名 )。肌肉接种 3次 ( 0、1、6月 )或 4次 ( 12月 )。观察并记录每次免疫后30分钟、2 4小时至 7天的局部及全身…     

间接酶联免疫吸附法测定血液中抗西尼罗河病毒单克隆抗体MIL94浓度及其应用

目的 建立食蟹猴血清中抗西尼罗河病毒单抗MIL94的间接酶联免疫吸附(ELISA)定量测定法,并进行食蟹猴体内药动学初步研究.方法 抗原包被量为每孔100 ng,酪蛋白封闭液于37℃孵育1 h,血清样品用PBS进行前处理,二抗按1:10000稀释,3,3′,5,5′-四甲基联苯胺溶液室温显色10 min,硫酸终止反应....     

用于血清制品标准化的细胞贴壁试验

本文报道一种能常规用于血清和血清制品质量控制的细胞贴壁试验。试验用BIIK-21细胞系,当细胞进入缓慢流动有切力的液体中时,需高度依赖血清因子才能贴壁。试验方法是:用DMEM 3倍系列稀释血清样品,加2ml稀释的血清到16×125mm硼硅酸盐玻璃培养管中,每管接种0.1m1 2.5×10~5BHK-21细胞,放在37℃CO_2孵箱内,旋转培养4小时,弃去营养液,用无Ca~(++)、Mg~(++)的磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤,并用胰酶-乙二胺四乙酸(EDTA)分散细胞,加等量的含10%小牛血清的DMEM液灭活胰