晚期糖基化产物受体信号传导在羧甲赖氨酸诱导足细胞表达单核细胞趋化因子中的作用

目的 了解足细胞上晚期糖基化产物受体（RAGE）激活后的细胞内信号的传导途径.方法 激光共聚焦显微镜观察细胞内反应性氧自由基（ROS）的产生.Western印迹方法检测足细胞内丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）家族磷酸化,RT-PCR方法检测单核细胞趋化因子-1（MCP-1）的mRNA表达.结果 足细胞细胞核内存在基础性的ROS,AGE和羧甲赖氨酸（carboxymethyllysine,CML）分别诱导细胞浆内ROS增加2.2和2.6倍.N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）抑制基础性和诱导性ROS形成,RAGE中和抗体则完全抑制诱导性的ROS产生.NAC也可直接抑制CML以及外源性H2O2诱导的MCP-1的表达.使用CML刺激足细胞10 min后,磷酸化细胞外信号调节激酶（ERK）增加3.8倍.而CML刺激足细胞120 min仍没有发现磷酸化的p38MAPK和应激活化蛋白激酶（SAPK）/氨基末端激酶（JNK）表达或上调.使用NAC,7氨4三氟甲基香豆素（AFC）可以完全防止ERK磷酸化并抑制MCP-1的mRNA表达.PD98059阻断了ERK磷酸化却并不能完全抑制MCP-1的mRNA的表达.结论 足细胞上RAGE激活后,通过ROS-p21Ras-ERK信号途径诱导足细胞表达MCP-1.     

反义单核细胞趋化蛋白1对大鼠系膜细胞增生的影响

目的研究反义单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）对系膜细胞MCP—1分泌及增生的影响。方法用逆转录病毒感染体外培养的系膜细胞，得到转染反义MCP—1的系膜细胞，经PCR及Southern印迹鉴定外源基因在系膜细胞基因组DNA上的整合。脂多糖（LPS）刺激反义MCP-1系膜细胞，以正常系膜细胞及转染空白载体的系膜细胞为对照，观察其增生情况。用RT-PCR法检测MCP-1、CC趋化因子受体2（CCR2）的mRNA表达。ELISA法检测细胞上清中MCP-1蛋白的分泌。结果经逆转录病毒转染得到的反义MCP-1的系膜细胞，其基因组DNA中有外源基因的整合。在正常的培养条件下，反义组与对照组系膜细胞的增生差异无统计学意义；MCP-1、CCR2的mRNA均有少量表达；MCP-1的蛋白也有微弱表达。在LPS的刺激下，反义组与对照组MCP-1的mRNA的表达均增高；MCP-1蛋白的分泌均增多。与对照组比较，反义组系膜细胞的增生受抑制[（16．83±1．16）×10^4／ml比（19．63±1．85）×10^4／ml]，MCP—1的mRNA的表达较少（0．424比0．866，P〈0．01），MCP—1蛋白的分泌减少。CCR2的mRNA表达与MCP-1的变化一致。结论（1）逆转录病毒载体pLXSN可有效地介导MCP-1 cDNA在系膜细胞的转染。（2）反义MCP-1可降低系膜细胞MCP—1的转录和翻译。（3）反义MCP—1的转染可降低系膜细胞在炎症状态时的增生。（4）大鼠系膜细胞具有CCR2的表达，在炎症状态时形成MCP-1、CCR2的自分泌环路。     

单核细胞趋化蛋白-1与糖尿病肾病

单核细胞趋化蛋白 1(MCP 1)是特异性的单核 /巨噬细胞趋化因子。糖尿病肾脏中单核 /巨噬细胞的广泛浸润可引起细胞外基质堆积、基底膜增厚 ,从而发展为肾小球硬化和间质纤维化 ,导致肾功能损害。肾组织中MCP 1的升高可能经由一系列复杂过程促进糖尿病肾病的发生发展     

单核细胞趋化蛋白—1与糖尿病肾病

单核细胞趋化蛋白－1（MCP－1）是特异性的单核／巨噬细胞趋化因子。糖尿病脏中单核／巨噬细胞的广泛浸润引起细胞外基质堆积，基底膜增厚，从而发展为肾小球硬化和间质纤维化，导致肾功能损害，肾组织中MCP－1的升高可能经由一系列复杂过程促进糖尿病肾病的发生发展。     

单核细胞趋化蛋白-1基因表达在实验性腹主动脉瘤发病过程中的意义

目的　探讨实验性腹主动脉瘤 (abdominalaorticaneurysm ,AAA)不同阶段 ,动脉壁中单核细胞趋化蛋白 1(monocytechemotacticprotein 1,MCP 1)基因的表达及意义。方法　经腔内导管灌注制成大鼠AAA模型 ,分别于 3d、1、2、4周切取腹主动脉 ,应用原位杂交、Western蛋白质印迹、CD6 8免疫组织化学染色观察AAA发病不同时期动脉壁中MCP 1基因表达情况及巨噬细胞的浸润程度。结果　MCP 1mRNA表达于灌注后 1周达高峰 ,阳性率为 39 5 %± 7 5 % ;CD6 8、MCP 1蛋白表达均于灌注后 2周达高峰 ,与其他时段相比 ,差异有非常显著意义 (P <0 0 1)。结论　动脉壁中MCP 1基因做为AAA发病过程中的一种早期表达基因 ,诱导了单核巨噬细胞在动脉壁的黏附、浸润 ,对AAA的发生、发展起着重要的促进作用。     

脂蛋白脂酶过表达促进极低密度脂蛋白诱导人系膜细胞的胞内脂质积聚和单核细胞趋化蛋白1表达

目的 通过在人肾小球系膜细胞转染脂蛋白脂酶（LPL）基因，观察LPL在系膜细胞摄取极低密度脂蛋白（VLDL）中的作用并对其介导肾损害的可能机制进行探讨。 方法 以携带野生型人LPL基因（LPLwt）、无活性的突变型人LPL基因（LPL194)和对照人碱性磷酸酶基因（AP）的重组腺病毒转染人肾小球系膜细胞（HMCL）[Ad-LPLwt（活性型）、Ad-LPL194（无活性型）和Ad-AP（对照病毒）]，RT-PCR检测细胞LPL mRNA表达；细胞免疫化学染色检测细胞LPL蛋白表达；放射性核素标记的脂质体底物法检测LPL活性。分别以油红“O”染色和酶法定性和定量检测VLDL诱导的细胞内脂质沉积；MTT法检测VLDL刺激的HMCL增殖；实时荧光定量RT-PCR和ELISA法检测HMCL单核细胞趋化蛋白1（ MCP-1）mRNA和蛋白的表达水平；HMCL与T-H蛋白1(THP-1)单核细胞的共孵育，检测单核细胞向系膜细胞的趋化。 结果 细胞内脂质沉积分析显示，与Ad-AP组相比，Ad-LPLwt组和Ad-LPL194组细胞内三酰甘油的积聚分别增加3.55倍（P ＜ 0.01）和0.52倍（P ＜ 0.05）。细胞增殖实验表明，在40 mg/L VLDL刺激下，Ad-LPLwt组细胞上清较Ad-AP组对HMCL有更强的促增殖作用(0.2282±0.0168比0.1805±0.0254，P ＜ 0.05）。与Ad-AP组相比，Ad-LPLwt组细胞MCP-1 mRNA表达增加0.39倍（P ＜ 0.05），蛋白表达上调1.18倍（P ＜ 0.01）。Ad-LPLwt组THP-1单核细胞向系膜细胞的趋化能力也最强，为Ad-AP组的1.69倍（P ＜ 0.05）。 结论 活性型和非活性型LPL均能促进VLDL诱导的系膜细胞内三酰甘油的积聚，且活性型LPL起主要作用。在高VLDL条件下，LPL促进人系膜细胞转变为泡沫细胞，扩大VLDL对系膜细胞的促增殖效应，上调系膜细胞MCP-1的分泌及增加对THP-1细胞的趋化。LPL可能作为一个重要的因素参与富含三酰甘油的脂蛋白介导的肾损害的发生和发展。     

氧化低密度脂蛋白刺激人肾小球系膜细胞产生单核细胞趋化蛋白-1由核因子-кB活化调控

目的 研究核因子-кB（NF-кB）在氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL)诱导的体外培养的人肾小球系膜细胞表达单核/巨噬细胞趋化蛋白-1（MCP-1）中的作用。方法 采用凝胶迁移率变动分析检测NF-кB的DNA结合活性变化。以免疫组织化学观测细胞内p65的核转位，用细胞ELISA法检测细胞内MCP-1及IкBα蛋白含量变化。结果 不同浓度（10、25、50、100μg/ml)Ox-LDL刺激肾小球系膜细胞均可引起细胞NF-кB的DNA结合活性增强，IкBα蛋白表达下降以及MCP-1蛋白表达增强，以50μg/ml刺激1hNF-кB活化及IкBα表达减弱最明显，作用24hMCP-1表达水平最高，NF-кB活化的同时伴有p65核转位，上述效应可被NF-к特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯（PDTC）所抑制。结论 Ox-LDL刺激人肾小球系膜细胞产生MCP-1是由NF-кB调控，NF-кB参与了脂质肾损害的发病过程。     

血红素氧合酶1对尿毒症环境脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1表达的影响

目的 体外观察尿毒症患者血清对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）合成单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的影响，探讨诱导血红素氧合酶1（HO-1）高表达对调节MCP-1合成的作用。 方法 以含10％尿毒症血清的M199培养基体外培养HUVEC细胞株。采用RT-PCR法检测HUVEC MCP-1 mRNA的表达。用ELISA法检测HUVEC MCP-1蛋白的分泌。然后分别以HO-1诱导剂氯化血红素（hemin）及阻断剂原卟啉锌(ZnPP)预处理HUVEC，应用RT-PCR法和免疫组织化学法检测细胞内HO-1及MCP-1 mRNA及蛋白的表达。 结果 尿毒症血清可上调细胞MCP-1 mRNA的表达，促进MCP-1蛋白合成，MCP-1蛋白量为对照组的2.95倍。hemin诱导的HO-1高表达可下调尿毒症血清引起的MCP-1基因表达，抑制MCP-1蛋白合成，ZnPP可阻断其作用。30 μmol/L hemin可使HUVEC合成MCP-1蛋白减少34.4％，而hemin与ZnPP共同作用组的MCP-1蛋白量恢复至尿毒症血清组的98.0％。 结论 尿毒症血清可诱导HUVEC 的MCP-1高表达。促进HO-1高表达时可抑制MCP-1合成及分泌。HO-1有减轻尿毒症环境对内皮细胞功能损伤的作用。     

氧化低密度脂蛋白刺激人肾小球系膜细胞产生单核细胞趋化蛋白-1由核因子-κB活化调控

目的 研究核因子ＫＢ（ＮＦ－ＫＢ）在氧化低密度脂蛋白（Ｏｘ- ＬＤＬ）诱导的体外培养的人肾小球系膜细胞表达单核／巨噬细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）中的作用。方法 采用凝胶迁移率变动分析检测ＮＦ－ＫＢ的ＤＮＡ结合活性变化，以免疫组织化学观测细胞内ｐ６５的核转位，用细胞ＥＬＩＳＡ法检测细胞内 ＭＣＰ－１及ＩＫＢα蛋白含量变化。结果 不同浓度（１０、２５、５０、１００μｇ／ｍｌ）Ｏｘ－ＬＤＬ刺激肾小球系膜细胞均可引起细胞ＮＦ-ＫＢ的ＤＮＡ结合活性增强、ＩＫＢα蛋白表达下降以及ＭＣＰ－１蛋白表达增强，以５０μｇ／ｍｌ刺激１ｈ ＮＦ－ＫＢ活化及ＩＫＢα表达减弱最明显，作用２４ｈＭＣＰ-１表达水平最高。ＮＦ－ＫＢ俯活化的同时伴有ｐ６５核转位。上述效应可被ＮＦ－ＫＢ特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯（ＰＤＴＣ）所抑制。结论Ｏｘ－ＬＤＬ刺激人肾小球系膜细胞产生ＭＣＰ－１是由ＮＦ－ＫＢ调控，ＮＦ－ＫＢ参与了脂质肾损害的发病过程。     

单核细胞趋化蛋白-1在终末期肾病血液透析患者中的检测及意义

目的 探讨终末期肾病血液透析患者血浆单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的水平及其意义.方法 对本院维持性血液透析患者66例及健康志愿者22例,用ELISA法测定血浆MCP-1水平,用全自动生化仪测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、血肌酐(Scr)与血白蛋白(ALB)值.比较其结果并分析其意义.结果 血液透析组血浆MCP-1水平(115.9pg/ml±10.3pg/ml)明显高于对照组(60.3pg/ml±8.4pg/ml),其差异有统计学意义(P＜0.05).血液透析合并冠心病组血浆MCP-1水平明显高于非合并冠心病组[(136.2±11.7)pg/ml vs(91.6±9.4)pg/ml,P＜0.05].结论 终末期肾病血液透析患者血浆MCP-1水平显著高于正常人,合并冠心病患者血浆MCP-1水平更高,提示MCP-1水平升高与肾功能衰竭有一定关系,且是合并冠心病的重要危险因素.     

p38丝裂素活化蛋白激酶信号通路在单核细胞趋化蛋白1介导系膜细胞增殖及细胞外基质表达中的作用

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）信号通路在单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）介导大鼠系膜细胞（MCs）增殖及纤连蛋白（FN）和Ⅰ型胶原（ColⅠ）表达中的调控作用。方法用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）评估不同浓度的MCP-1（12．5、25、50、100ng／ml）及p38MAPK阻断剂SB203580（1、5、10μmol／L）于不同时间对体外培养的大鼠MCs的增殖作用。采用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）检测细胞内FN、ColⅠmRNA的表达。用ELISA法检测上清液FN、ColⅠ蛋白含量。结果MCP-1能刺激MCs的增殖，呈剂量和时间依赖性（P〈0．05），而p38MAPK阻断剂明显抑制上述MCP-1的作用（P〈0.01）。MCP-1能使细胞FN、ColⅠ的表达上调，而p38MAPK阻断剂能抑制其上调表达的作用。结论p38MAPK信号转导通路在MCP-1介导大鼠MCs增殖及FN和ColⅠ表达中起调控作用。MCP-1在系膜增生性肾小球肾炎（MsPGN）的发病中起一定的作用。     

Rg1、Rb1对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用及其对肾组织MCP-1 mRNA与蛋白表达的影响

目的：探讨人参皂苷Rg1、Rb1对糖尿病肾病大鼠肾组织MCP-1 mRNA及蛋白表达的影响。方法：75只雄性SD大鼠,正常组10只,其余采用腹腔内一次性注射STZ55mg/kg复制糖尿病大鼠模型,造模后血糖≥16.7mmol/L,尿糖（＋＋＋＋）以上者列入实验对象。随机分为模型组、厄贝沙坦组、Rg1大剂量组、Rg1小剂量组及Rb1组,各组分别给予相应药物灌胃治疗;每周测体重,于第4、8、12周末分别留尿用考马斯亮蓝法测24h尿蛋白。12周后处死大鼠,取血清检测BUN、Scr、TG。取肾脏称重,计算肾重体重比,将肾组织固定、包埋、切片后进行HE、PAM、Mallory和Masson染色,观察大鼠肾脏病理学变化。用免疫组化、原位杂交方法分别检测肾组织MCP-1 mRNA及其蛋白的表达。结果：各治疗组大鼠体重各周与模型组比较均有所增加,但无统计学差异。与模型组比,肾重/体重,Rb1组有统计学差异（P〈0.01）,Rg1大、小剂量组有统计学差异（P〈0.05）。24h尿蛋白定量与模型组比较,4周、8周,Rg1大、小剂量组及Rb1组有统计学差异（P〈0.01）;12周,Rg1大、小剂量组及Rb1组有统计学差异（P〈0.05）。Rg1、Rb1可以见降低BUN、Scr与TG,与模型组比较,BUN均有统计学差异（P〈0.01）,Scr为Rg1大剂量组及Rb1组有统计学差异（P〈0.01）,Rg1小剂量组（P〈0.05）;TG治疗组均有降低趋势,但无统计学差异。Rg1、Rb1均可以减轻DN大鼠肾脏病理损害。同时Rg1、Rb1还可以减少肾组织MCP-1蛋白及其mRNA的表达,与模型组比较,Rg1大、小剂量组及Rb1组肾组织MCP-1蛋白的表达均显著减少,具有统计学意义（P〈0.01）,Rg1大、小剂量组及Rb1组肾组织MCP-1 mRNA表达明显减少,其中Rg1大剂量组与模型组相比有统计学意义（P〈0.05）。结论：Rg1、Rb1可以改善DN大鼠肾脏功能、减轻肾脏病理损害,其具体机制可能与下调大鼠肾组织MCP-1 mRNA及蛋白表达水平有关。     

来氟米特对糖尿病肾病大鼠MCP-1表达的影响

目的：通过建立糖尿病肾病（DN）大鼠模型来研究来氟米特对大鼠肾脏MCP-1表达的影响,以进一步探讨来氟米特对DN大鼠的治疗作用及其机制。方法：健康雄性Wistar大鼠30只随机分为3组：对照组、DN组及来氟米特组,应用链脲佐菌素（STZ）诱导左肾切除大鼠DN模型,来氟米特组在成模后每日灌胃来氟米特5mg/kg。于实验第8周、12周末各组分别取5只动物测24h尿量及24h尿蛋白定量;心内采血测肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）;电镜标本观察肾组织病理改变,免疫组化法检测肾组织MCP-1蛋白的表达。结果：来氟米特组大鼠尿蛋白、Scr、BUN与同期DN组相比明显减少。病理组织学观察说明来氟米特可以减轻肾脏损害。经来氟米特治疗后,MCP-1的表达减少。结论：来氟米特可减少DN大鼠肾组织MCP-1的表达,减轻肾脏损害。     

Roles of AKAP1 in high-glucose induced mitochondrial fission in podocytes

Objective To investigate the roles of A kinase anchoring protein1(AKAP1)in high-glucose induced mitochondrial fission in podocytes. Methods Conditionally immortalized human podocytes were cultured in serum-free medium for 24 hours, and then exposed to different glucose concentration conditions in different time periods. The protein expressions of AKAP1 were observed by immunofluorescence, and AKAP1, dynamin related protein1 (Drp1) and phospho Ser 637-Drp1 (p-Drp1) were analyzed by Western blotting. AKAP1 siRNA was transfected to block AKAP1 expression.Podocytes were then divided into normal control group (5 mmol/L glucose), hypertonic group (30 mmol/L mannitol+5 mmol/L glucose), high glucose group (35 mmol/L glucose), and high glucose+AKAP1 siRNA group. Mitochondrial morphological changes were assessed by mitotracker red staining. Podocyte apoptosis was assessed by flow cytometry. Results Compared with normal group, high-glucose induced more podocytes apoptosis (P＜0.05), more mitochondrial fission with decreased aspect ratio and form factor (all P＜0.05). Upregulated AKAP1 protein level, and increased ratio of p-Drp1/Drp1 (all P＜0.05) in time and concentration dependent manners were also observed. Compared with high glucose group, transfection of AKAP1 siRNA showed less apoptosis (P＜0.05), less mitochondrial fission with increased aspect ratio and form factor (all P＜0.05), and down-regulated AKAP1 protein level as well as p-Drp1/Drp1 ratio (all P＜0.05). Conclusion High glucose induced mitochondrial fission might be induced through AKAP1-Drp1 pathway.     

青藤碱对UUO小鼠肾组织间质纤维化与炎症因子表达的干预作用

目的：通过抗风湿药青藤碱对UUO小鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、炎症介质细胞间黏附分子（intercellular adhesion molecule1,ICAM-1）、单核细胞趋化因子（monocyte chemoattractant protein1,MCP-1）表达的影响,探讨其防治肾间质纤维化作用及其机制。方法：实验采用小鼠单侧输尿管结扎（UUO）模型,用不同剂量青藤碱进行干预,用血管紧张素受体抑制剂蒙诺作为对照。肾脏病理用HE和Masson染色;肾组织α-SMA表达采用免疫组化;ICAM-1蛋白质表达采用Western-blotting方法检测;MCP-1基因表达采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法。结果：UUO模型组小鼠肾间质纤维化程度以及肾组织α-SMA的表达较假手术组显著增高,肾小管间质中炎细胞浸润亦较假手术组显著增强;青藤碱各治疗组肾间质纤维化程度、α-SMA和ICAM-1蛋白、MCP-1基因表达均显著低于模型组;蒙诺治疗亦可显著降低肾间质纤维化程度和肾组织α-SMA的表达,但对于炎细胞浸润和炎症因子抑制作用显著较青藤碱弱。而且未见其具有抑制ICAM-1表达的作用。结论：抗风湿药青藤碱可显著抑制肾间质纤维化和肌成纤维细胞的积聚,可能与其显著抑制肾组织炎症因子的表达及炎细胞浸润有关。     

MCP-1、ICAM-1在糖尿病肾病大鼠肾脏损害中作用及厄贝沙坦干预的影响

目的：探讨MCP-1、ICAM-1在糖尿病肾病大鼠肾脏损害中作用及厄贝沙坦对二者的影响.方法：采用高糖高脂饮食合并链脲佐菌素腹腔注射的方法建立糖尿病肾病大鼠模型.将大鼠随机分为正常对照NC 组、糖尿病肾病DN组、厄贝沙坦DI组,检测各组大鼠24 h尿量、24 h尿白蛋白定量（24 h UTP）、血糖（BG）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、肾重指数（KI）;行HE染色观察各组大鼠病理学形态,免疫组化观察MCP-1、ICAM-1蛋白的表达,RT-PCR观察MCP-1 mRNA、ICAM-1mRNA的表达.结果：与NC组比较,DN组大鼠肾脏病理改变加重,24 h尿量、24 h UTP、KI、BG、Scr、BUN、肾脏组织中MCP-1mRNA和ICAM-1mRNA及蛋白水平均显著增加,差异均有统计学意义（P＆lt;0.01）;与DN组比较,DI组大鼠BG、BUN、Scr有所改善,差异无统计学意义;肾脏病理改变减轻,其余指标明显降低,差异有统计学意义（P＆lt;0.05）.结论：MCP-1、ICAM-1在糖尿病肾病肾脏损害过程中可能起重要作用;厄贝沙坦能够减轻糖尿病肾病肾组织MCP-1、ICAM-1的表达,缓解了肾脏病理损伤.