megsin基因转染对高糖环境中肾小球系膜细胞增殖和基质金属蛋白酶2及其抑制因子表达的影响

目的 观察megsin基因转染对高糖环境中肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）和组织金属蛋白酶抑制因子2（TIMP-2）的表达及Ⅳ型胶原水平的影响,探讨megsin与系膜细胞增殖和细胞外基质代谢的关系。 方法 高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,分别于培养12、24、48 h末,应用MTT法检测细胞增殖程度;Western印迹法检测系膜细胞megsin、MMP-2、TIMP-2蛋白表达水平;放免法检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度。 结果 高糖环境中肾小球系膜细胞megsin、TIMP-2表达上调,MMP-2表达下调,细胞增殖明显,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高。megsin基因转染后上述变化趋势更加显著。 结论 megsin可诱导系膜细胞增殖,并通过上调TIMP-2、下调MMP-2抑制细胞外基质降解,是加速肾小球硬化的可能机制之一。     

肾小球系膜细胞增殖抑制因子

肾小球系细胞增对肾小球疾病的炎症过程及其进展具有重要作用，探讨其抑制因子对深入了解肾小球疾病发病机理及寻求治疗药物日益受到重视。本文对近年来在体外细胞培养，肾小球疾病的动物模型等研究中发现的肾小球膜细胞增殖抑制因子及其作用机制进行了综述。     

灵芝对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的：探讨灵芝对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖及细胞周期的影响。方法：用不同浓度的灵芝作用于高糖培养的MCs,采用MTT法观察其增殖情况,并通过流式细胞仪检测其细胞周期变化,MODIFIT LT软件分析。结果：（1）高糖组与正常组比较有统计学差异（P〈0.05）;其余各组与正常组比较无统计学差异（P〉0.05）,与高糖组比较有统计学差异（P〈0.05）,48h与24h比较有统计学差异（P〈0.05）,72h与48h、24h比较有统计学差异（P〈0.05）。苯那普利组与灵芝组比较无统计学差异（P〉0.05）。（2）培养48h时,高糖组相对于正常对照组G0-G1期细胞比例降低,S期细胞比例增高,细胞凋亡受到抑制（P〈0.05）;而不同浓度的灵芝、苯那普利均减低了高糖对系膜细胞的这种作用,使G0-G1期细胞比例增高,S期细胞数减少,促进过度增殖的系膜细胞凋亡（P〈0.05）。结论：灵芝通过抑制高糖诱导的MCs增殖并促使其凋亡,发挥对糖尿病肾病的保护作用。     

褪黑素对高糖条件下培养的大鼠系膜细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

糖尿病肾病（DN）晚期肾脏细胞凋亡与肾功能恶化程度成正比，抑制凋亡则可延缓肾小球硬化。褪黑素（MT）是松果体分泌的神经内分泌激素，肾脏是其靶器官之一。研究显示MT对DN肾脏有明显的保护作用，但MT对DN晚期肾小球系膜细胞（MC）凋亡的影响尚未检索到有关报道。本试验选用大鼠MC为研究对象，来观察MT对高糖诱导的MC凋亡的影响。     

霉酚酸酯对高糖所致大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

霉酚酸酯（MMF）是一种新型的免疫抑制剂。本研究旨在探讨MMF对不同浓度葡萄糖所致的系膜细胞增殖及细胞外基质增多是否有抑制作用。     

肾小球系膜细胞增殖抑制因子

肾小球系膜细胞异常增殖对肾小球疾病的炎症过程及其进展具有重要作用，探讨其抑制因子对深入了解肾小球疾病发病机理及寻求治疗药物日益受到重视。本文对近年来在体外细胞培养、肾小球疾病的动物模型等研究中发现的肾小球系膜细胞增殖抑制因子及其作用机制进行了综述。     

NG2蛋白多糖促进肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质积聚

目的 探讨NG2蛋白多糖参与肾小球硬化过程的可能机制。 方法 构建针对NG2的特异性shRNA（Psilencer-NG2）和对照shRNA（Psilencer-NC）。将Psilencer-NG2、Psilencer-NC和全长型NG2真核表达载体pcDNA/NG2以及空质粒pcDNAⅠ分别转染到体外培养的大鼠系膜细胞（RMC）。实时定量PCR和Western印迹检测转染质粒对NG2 的干扰效率和过表达效率;MTT法观察各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期变化;实时定量PCR检测各组层粘连蛋白（laminin）的表达。 结果 转染pcDNA/NG2后的HBZY-1细胞NG2 mRNA和蛋白表达水平均明显增加（P < 0.05,P < 0.05）,而针对NG2的特异性shRNA干扰导致HBZY-1细胞NG2 mRNA和蛋白表达水平均显著下调（P < 0.01;P < 0.01）,分别表明达到过表达和沉默NG2的效应。过表达NG2后,RMC中laminin β1表达显著增加（1.25±0.04比 1.00±0.09,P < 0.05）;RMC增殖明显,处于S期的细胞数明显增加,而G0/G1期的细胞数减少。而沉默NG2后,laminin β1表达显著减少（0.81±0.02比1.00±0.08,P < 0.05）;RMC增殖缓慢,处于G0/G1期的细胞数明显增加,而S期的细胞数减少。 结论 NG2蛋白多糖可能通过促进系膜细胞增殖和细胞外基质积聚参与肾小球硬化的过程。     

衣霉素对高糖刺激肾系膜细胞增殖的影响及其机制研究

目的 观察N-糖链抑制剂衣霉素(TM)对肾小球系膜细胞(GMC)β1整合素以及其下游重要信号分子粘着斑激酶(FAK)和细胞周期正调控蛋白cyclinD1表达的影响。了解衣霉素在抑制高糖刺激GMC增殖中的重要作用。方法 体外培养的大鼠系膜细胞株分为：正常对照组，高糖组，甘露醇组，高糖加不同浓度衣霉素(TM)组。用流式细胞技术检测B1整合素的表达；免疫组化方法测定FAK和细胞周期素D1(cyclin D1)的表达，四唑盐比色(MTT)法测定细胞增殖。结果 正常系膜细胞中B1整合素、FAK和cyclin D1均有一定表达，高糖作用24h可以使3者表达明显升高，细胞增殖能力增强，且与渗透压无关。衣霉素(TM)可呈浓度依赖性的抑制高糖的这种作用。结论 N-糖链抑制剂TM通过阻断细胞表面糖蛋白的糖基化过程，形成脱糖蛋白，从而抑制β1整合素的表达，并进一步影响细胞FAK和cyclin D1表达，使高糖诱导的细胞增殖受抑制。     

TRIM55对大鼠系膜细胞增殖的调控作用

目的系膜增殖性肾炎是世界范围内高发的肾小球疾病,其发病与系膜细胞异常增殖有关,但调控系膜细胞增殖的内在分子机制尚不明确。本研究旨在探索TRIM55对大鼠系膜细胞(RMCs)增殖的调控作用及机制。 方法向8周龄雄性SD大鼠尾静脉注射2.5 mg/kg抗Thy-1抗体建立抗Thy-1肾炎模型。PAS染色观察肾脏病理表现,qPCR检测大鼠肾小球TRIM55 mRNA表达量;利用质粒及siRNA转染分别得到TRIM55过表达及低表达的RMCs,利用流式细胞仪检测其细胞周期;Western印迹检测p27及Cyclin D1的蛋白表达量。 结果TRIM55在抗Thy-1肾炎模型系膜增殖期高表达(P<0.01,T＝3.625)。体外RMCs中,TRIM55过表达可促进RMCs细胞周期由G1期向G2/S期转化,诱导系膜细胞增殖(P<0.01,T＝13.1);TRIM55低表达可引起RMCs的G1期阻滞,抑制RMCs增殖(P<0.01,T＝5.31)。此外,TRIM55过表达可下调p27表达、上调Cyclin D1;反之,TRIM55低表达可上调p27表达、下调Cyclin D1。 结论TRIM55可通过调节p27及Cyclin D1表达水平影响细胞由G1期到G2/S期的转化,进而调控RMCs的增殖。     

牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其作用的可能机制。方法 用噻唑蓝MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期及凋亡，吖啶噔活体染色观察细胞凋亡形态，免疫细胞化学结合计算机图文分析系统检测cjn,cfos表达。结果 在5－50mmol/L浓度范围内牛磺酸能剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖，可使G0－G1期细胞增多，S期细胞减少，并能明显抑制c-jun,c-fos的表达（P＜0．01），而牛磺酸并不诱导系膜细胞的凋亡。结论 牛磺酸可显著抑制系膜细胞增殖，使系膜细胞阻滞于G0－G1期；牛磺酸对系膜细胞增殖的抑制作用与其抑制c-jun,c-fos的表达有关。牛磺酸对系膜细胞凋亡无诱导作用。     

MicroRNA-377 knockdown suppresses high glucose-induced proliferation and inflammation in human mesangial cells

Objective To investigate the effect and potential mechanism of microRNA (miRNA)-377 on high glucose-induced proliferation and inflammation in human mesangial cells. Methods Cells were randomly divided into six groups: control group (5.5 mmol/L glucose), high glucose group (30.0 mmol/L glucose), negtive miRNA inhibitor transfection+high glucose group, negtive miRNA mimic transfection+high glucose group, miRNA-377 inhibitor transfection+high glucose group (miR-377i+high glucose group), miRNA-377 mimic transfection+high glucose group (miR-377m+high glucose group). miRNA-377 expression was detected by real-time PCR. Cell proliferation and cell cycle were detected by BrdU assay and flow cytometry, respectively. The release of tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin (IL)-18, IL-6 and macrophages chemotaxis protein-1 (MCP-1) were evaluated by ELISA. The activations of NF-κB pathway, including the expressions of phosporylated (p)-IκBα, p-P65 and nuclear P65, were measured by Western blotting. Results Compared with those in control group, in high glucose group cell viability, miRNA-377 expression and cell proliferation rate increased (all P＜0.05), proportions of S phase cell and G2/M phase cell in cell cycle increased (all P＜0.05), the levels of TNF-α, IL-18, IL-6 and MCP-1 were higher (all P＜0.05), as well as the expressions of p-IκBα/IκBα, p-P65/P65 and nuclear P65 were increased (all P＜0.05). Compared with high glucose group, cell proliferation rate was restrained (P＜0.05), proportions of S phase cell and G2/M phase cell in cell cycle was descreased (all P＜0.05), the levels of TNF-α, IL-18, IL-6 and MCP-1 were lower (all P＜0.05), as well as the expressions of p-IκBα/IκBα, p-P65/P65 and nuclear P65 were reduced (all P＜0.05) in miR-377i+high glucose group. However, miR-377m+high glucose group presented opposite results (all P＜0.05). Conclusions miRNA-377 knockdown can partially suppress high glucose-induced human mesangial cell proliferation and cell cycle transition, and restrain inflammatory molecules release. Its mechanism may be related to the inhibition of NF-κB pathway.     

S期激酶相关蛋白2调控大鼠系膜细胞增殖

目的 探讨S期激酶相关蛋白2（Skp2）表达变化对系膜细胞增殖的影响。 方法 设计合成大鼠Skp2 siRNA和对照siRNA、pIRES-GFP-Skp2质粒和pIRES-GFP质粒。采用脂质体转染法进行细胞转染。半定量PCR和Western印迹法检测Skp2的mRNA、蛋白表达。原代培养的大鼠系膜细胞以每孔3000个接种于96孔板,分为以下6组：（1）无血清组;（2）20％胎牛血清（FCS）组;（3）10％FCS+pIRES-GFP质粒转染组;（4）10％FCS+pIRES-GFP-Skp2质粒转染组;（5）20％FCS+对照siRNA组;（6）20％FCS+Skp2 siRNA组。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞相对活力和相对细胞数;BrdU标记法检测S期细胞;流式细胞仪检测细胞周期。 结果 半定量PCR法结果显示,与阴性对照siRNA组相比,Skp2 siRNA转染后Skp2 mRNA表达显著下调。Western印迹结果显示,与pIRES-GFP质粒转染组相比,pIRES-GFP-Skp2质粒转染后Skp2蛋白表达显著上调。MTT、BrdU和细胞周期分析显示,与相应对照组相比,Skp2质粒转染后相对细胞数增加（A值：0.419±0.088 比 0.305±0.036,P ＜ 0.01）、S期细胞数增多（BrdU 阳性细胞：0.21±0.04比0.15±0.03,P ＜ 0.01;S期细胞数：20.18±0.64比14.33±0.37,P ＜ 0.01）;Skp2 siRNA转染后相对细胞数减少（A值：0.328±0.069比0.482±0.133,P ＜ 0.01）;S期细胞数减少（BrdU 阳性细胞：0.17±0.01比0.24±0.00,P ＜ 0.01;S期细胞数：16.52±0.75比23.81±1.25,P ＜ 0.01）。 结论 Skp2过表达促进系膜细胞增殖,下调Skp2表达可抑制系膜细胞增殖。     

尿激酶型纤溶酶原激活物对高糖诱导大鼠系膜细胞增殖及表型转化的影响及其机制

目的 通过体外培养大鼠系膜细胞（MC）,观察尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）对高糖环境下MC增殖及表型转化的影响及其可能的信号转导机制。 方法 体外培养大鼠MC,分为4组：对照组、高糖组、高糖+渥曼青霉素组、高糖+uPA组。MTT法检测各组MC增殖情况。流式细胞仪分析各组MC细胞周期改变。Western印迹法检测各组MC表达CDK2与p27Kip1变化,并测定MC中信号蛋白Akt的活性。激光共聚焦显微镜检测各组MC中α-SMA表达方式及表达量变化。 结果 培养24 h后高糖组MC增殖程度较对照组显著增加（P < 0.01）,渥曼青霉素与uPA组可明显抑制细胞增殖（P < 0.01）。高糖刺激Akt活性,渥曼青霉素与uPA组Akt活性均较高糖组显著降低（均P < 0.01）。高糖组MC培养24 h后, p27Kip1蛋白表达较对照组显著减少（P < 0.01）;高糖+渥曼青霉素组、高糖+uPA组p27Kip1蛋白表达均较高糖组显著增加（均P < 0.01）;各组CDK2蛋白表达无明显变化。高糖组MC培养24 h后,胞质中α-SMA表达较对照组显著增加（P < 0.01）,并在核周出现聚集;高糖+渥曼青霉素组、高糖+uPA组α-SMA表达量均较高糖组显著减少（均P < 0.01）,其分布与对照组无显著差异。 结论 uPA可能通过抑制Akt信号分子活性,上调p27Kip1表达,拮抗高糖所致MC增殖与表型转化。     

细胞外信号调节蛋白激酶介导醛固酮诱导的肾小球系膜细胞增殖

Objective To determine the role of extracellular signal-regulated kinases (ERK1/2) in aldosterone-induced rat mesangial cells (RMCs) proliferation. Methods RMCs were obtained from intact glomeruli of 4- to 6-week-old Sprague-Dawley rats and characterized according to published methods. RMCs between passages 5 and passages 10 were used. Protein levels of mineralocorticoid receptor(MR) in RMCs were analyzed by Western blotting. The cells were divided into the following groups: control group, PD98059(10 ?滋mol/L) group, eplerenone (1 ?滋mol/L) group, aldosterone (100 nmol/L) group, aldosterone (100 nmol/L) ＋PD98059 (10 ?滋mol/L) group, aldosterone(100 nmol/L)＋eplerenone (1 ?滋mol/L) group. ERK1/2 activity was measured by Western blotting. Cell proliferation of RMCs was evaluated by [3H]-thymidine uptake measurements. Results MR protein expression in RMCs was confirmed by Western blotting. Aldosterone activated ERK1/2, and the maximal ERK1/2 activation induced by aldosterone was at a concentration of 100 nmol/L. Aldosterone (100 nmol/L)-induced activation of ERK1/2 peaked at 10 minutes (P<0.05). Pretreatment with a selective MR antagonist eplerenone (1 ?滋mol/L) significantly attenuated aldosterone-induced ERK1/2 phosphorylation. Aldosterone (100 nmol/L) treatment for 30 hours increased [3H]-thymidine incorporation of RMCs (135%±8% of controls, P<0.05). Cellular proliferation induced by aldosterone could be prevented by pretreatment with eplerenone or an ERK (MEK) inhibitor PD988059. Conclusion Aldosterone induces RMCs proliferation through MR and ERK1/2 activation, which may contribute to the pathogenesis of glomerular mesangial injury.     

沉默RelB表达诱导耐受性树突状细胞产生

目的 利用RelB短发卡RNA(shRNA)慢病毒转染树突状细胞(DC)诱导耐受性DC的产生.方法 将Lenti-RelB shRNA转染未成熟DC后,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测DC中RelB的表达;流式细胞仪检测DC凋亡以及表型分子人类主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅱ、CD80、CD86、CD83的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测分泌的细胞因子白细胞介素(IL)-10、IL-12、转化生长因子-β1(TGF-β1)以及核因子(NF)-κB各亚基的DNA结合活性.结果 比较不成熟组、成熟组、空载体对照组DC 、Lenti-RelB shRNA-DC下调RelB的表达;而凋亡率同其余3组比较差异无统计学意义(P＞0.05);同时下调DC表型分子MHC-Ⅱ(0.34±0.04)、CD80(0.38±0.03)、CD86(0.17 ±0.02)、CD83(0.21 ±0.02)的表达;转染后的DC低表达IL-12[(96.3±32.8)ng/L],高表达IL-10[(218.2 ±43.3) ng/L];而RelB的DNA结合活性(0.28±0.06)较其他组显著下降,但其他亚基的DNA结合活性各组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 利用LentiRelB shRNA沉默RelB表达可体外诱导耐受性DC的产生.     

咪唑立宾对大鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用

目的探讨咪唑立宾（MZ）对肾小球系膜细胞增殖的抑制作用及其对细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物p27^kip1表达的影响。方法大鼠系膜细胞同步后分为无血清组、20％FCS刺激组、20％FCS＋MZ组。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞数。BrdU标记法检测S期细胞。流式细胞仪检测细胞周期。Western印迹检测p27^kip1蛋白的表达。结果MZ可抑制20％FCS刺激所致的系膜细胞增殖，呈剂量依赖性。与20％FCS刺激组比较，20％FCS＋MZ组S期细胞的百分比显著降低[（10．28±1．26）％比（21．04±5．38）％，P〈0．05]。MZ可改善由20％FCS刺激诱导的GO／G1期细胞减少[（83．53±2．50）％比（71．15±1．25）％]和S期细胞增加[（12．22±1．22）％比（23．19±0．38）％，P〈0．051。20％FCS刺激后p27^kip1蛋白表达显著下降，MZ上调p27^kip1蛋白表达。结论MZ能够有效抑制系膜细胞增殖，作用时相在G1／S期转化，其抑制系膜细胞增殖的作用部分是通过上调p27^kip1蛋白表达实现的。     

白细胞介素6反义RNA对肾小球系膜细胞的影响

目的 为了观察白细胞介素6(IL-6)反义RNA对肾小球系膜细胞(MC)的影响。方法 将IL-6反义RNA用脂质体导入包装细胞PA_(317),经C_(418)筛选,PCR技术分析,并用~3H-胸腺嘧啶(~3H-TdR)掺入法、KD_(83)细胞株、North-ern杂交技术分别检测IL-6反义RNA对肾小球系膜细胞增殖、分泌IL-6以及表达IL-6mRNA的影响。结果 重组假病毒滴度为1×10~7CFU/ml,肾小球系膜细胞~3H-TdR掺入率及IL-6产生与mRNA表达均明显低于对照组。结论 IL-6反义RNA可抑制MC增殖,下调MC中IL-6的产生与表达。     

雷帕霉素对肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察不同浓度雷帕霉素对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。 方法 使用不同浓度雷帕霉素（1 μg/L、2 μg/L、4 μg/L、8 μg/L、16 μg/L）处理大鼠肾小球系膜细胞,并设正常对照组。MTT法测不同浓度雷帕霉素干预24 h、48 h、72 h后对细胞增殖的影响,并描记生长曲线。干预72 h后,采用RT-PCR和Western印迹法分别检测各浓度雷帕霉素组细胞周期负调蛋白p27和p53的mRNA和蛋白表达变化;用流式细胞计量术检测各浓度雷帕霉素组细胞周期及凋亡率。 结果 小剂量雷帕霉素（1 μg/L）对系膜细胞增殖即具有明显的抑制作用,停滞于G1期的细胞数明显增加,但对系膜细胞凋亡无明显影响。较大剂量雷帕霉素(8~16 μg/L)能够明显增加肾小球系膜细胞凋亡。雷帕霉素能够增加肾小球系膜细胞p27、p53 mRNA和蛋白表达,且呈剂量依赖性。 结论 雷帕霉素可能通过增加p27、p53表达抑制肾小球系膜细胞增殖和促进系膜细胞凋亡。     

体外肾系膜细胞对成骨细胞增殖及功能的影响

目的:从生长因子角度研究肾小球系膜细胞对成骨细胞增殖及功能的影响和机制。方法:应用体外细胞培养的方法,将成骨细胞分为正常血清组和系膜细胞组,分别予10%正常血清培养液及20%系膜细胞培养上清液。MTT法分别检测培养24、48、72、120 h后两组成骨细胞增殖情况;在培养72及144 h后检测上清液骨钙素(BGP)及骨桥蛋白(OPN)浓度;在培养144 h后检测培养液胰岛素样生长因子-α(IGF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)的浓度。结果:在培养的各个时间点,系膜细胞组的成骨细胞增殖均明显高于正常血清组(P<0.05)。在培养72、144 h后,系膜细胞组BGP及OPN的浓度分别高于正常血清组11.3%、16.4%和55.0%、39.6%。在培养144 h后,系膜细胞组的IGF-α、TGF-β浓度比正常血清组分别增高10.1%和47.7%。结论:肾小球系膜细胞能直接作用于成骨细胞,促进成骨细胞的增殖及功能。这种作用可能是通过促进成骨细胞分泌TGF-β来实现的。