高镁对高磷诱导血管钙化的影响及其机制

目的 探讨高镁对高磷诱导血管钙化的影响及其可能的机制.方法 体外原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs),用β甘油磷酸盐(β-GP)诱导钙化.VSMCs细胞被分为4组:对照组、高磷组(10 mmol/L β-GP)、镁干预组(10 mmol/L β-GP+3 mmol/LMgSO4)、镁通道抑制剂(2-APB)干预组(10 mmol/L β-GP+3 mmol/L MgSO4+10-4 mol/L 2-APB).采用茜素红染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙化情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;RT-PCR法和Western印迹法检测细胞核心结合因子α-1(Cbfα-1)的表达.24只雄性SD大鼠被随机分为3组:对照组(甲基纤维素灌胃+高磷饮食)、血管钙化组(硫酸腺嘌呤灌胃+高磷饮食)、高镁干预组(硫酸腺嘌呤灌胃+高磷高镁饮食).造模成功后测定大鼠主动脉脉搏波速率(PWV);采用yon Kossa染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测胸主动脉钙化情况;免疫组织化学方法检测胸主动脉Cbfα-1表达.结果 细胞培养14 d后,与高磷组相比,镁干预组VSMCs钙盐沉积明显减少,ALP活性降低(P＜0.05),Cbfα-1表达下调;2-APB可抑制高镁对VSMCs的保护性作用.Cbfα-1的动态观察结果显示,镁干预组第3天Cbfα-1的表达下调(P＜0.05),其抑制效应随时间延长呈增强趋势.体内实验中,大鼠慢性肾衰竭血管钙化模型制备成功.和体外实验一致,与血管钙化组相比,高镁干预组大鼠血浆镁离子水平明显升高,胸主动脉PWV明显降低(P＜0.05),血管钙盐沉积程度亦明显减轻.免疫组织化学结果显示高镁可明显降低高磷诱导的Cbfα-1表达(P＜0.05).结论 高镁可抑制血管钙化,其机制可能与其抑制VSMCs骨源性分化相关.     

金属蛋白酶1组织抑制剂在慢性肾衰竭大鼠钙化动脉中的表达

目的 探讨金属蛋白酶1组织抑制剂（TIMP-1）是否参与慢性肾衰竭大鼠动脉钙化形成。 方法 雄性Wistar大鼠按随机数字表法分组,其中健康对照组8只,实验组36只。用2%腺嘌呤250 mg&#8226;kg－1&#8226;d－1灌胃制备动脉钙化模型。von Kossa染色观察主动脉、股动脉、肾动脉和冠状动脉钙化情况。RT-PCR和Western印迹检测主动脉TIMP-1表达。免疫组织化学方法检测TIMP-1、骨桥蛋白（OPN）、核心结合因子α1（Cbfα-1）在主动脉的表达。 结果 实验组大鼠给药2周后出现明显慢性肾衰竭表现,BUN、Scr、血磷、钙磷乘积和全段甲状旁腺素（iPTH）显著高于对照组（P < 0.01）;给药6周后主动脉、股动脉、肾动脉和冠状动脉中层出现不同程度的钙化。RT-PCR和Western印迹结果显示,实验组大鼠主动脉TIMP-1表达较对照组上调（P < 0.05）,随时间延长呈上升趋势。免疫组化的结果显示,给药后第2、4、6、8周主动脉平滑肌细胞TIMP-1蛋白表达均显著高于对照组（P < 0.05）;钙化主动脉出现Cbfα-1的阳性表达;OPN表达显著增多（P < 0.01)。TIMP-1的表达和OPN及Cbfα-1表达均呈正相关（r = 0.317,P = 0.000;r = 0.485,P = 0.000）。 结论 大鼠腺嘌呤肾衰竭模型血管钙化的病理变化与人类慢性肾衰竭血管钙化相似,是研究慢性肾衰竭血管钙化周期较短、较好的动物模型。TIMP-1高表达和慢性肾衰竭动脉血管钙化相关。     

慢性肾衰竭患者血管钙化机制的研究进展

慢性肾衰竭（CRF）患者普遍存在着血管钙化；血管钙化的发生是多方面因素共同作用的结果，但确切的病因及发病机制还不明确。血管平滑肌细胞向成骨细胞转分化是血管钙化发生的关键一步；骨调节蛋白，生物活性因子等也参与了血管钙化的发生。本文就CRF患者血管钙化机制的新近研究进展作一综述。     

前列腺素E1对慢性肾衰竭患者肾功能的影响

肾脏是合成前列腺素的主要脏器之一,前列腺素E(PGEi)对血管有较强的作用,可扩张血管,使肾小球的出、入球动脉和叶间动脉阻力下降,抗血小板聚集,调节肾血流量,对肾功能改善有一定的作用.我们应用PGE1治疗慢性肾衰竭(CRF)患者36例,临床疗效满意,现报告如下. 材料和方法 1 病例选择随机选择我院1997年～2000年的66例CRF住院患者,其中男性40例,女性26例,年龄(45.76±12.52)岁.原发病为慢性肾小球肾炎37例,糖尿病肾病10例,肾小动脉硬化8例,慢性肾盂肾炎6例,慢性痛风性肾病5例.随机分为治疗组36例和对照组30例.     

帕米膦酸钠对高磷诱发大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响

目的 观察高磷对大鼠血管平滑肌细胞（RVSMC）钙化的影响,探讨帕米膦酸钠对RVSMC钙化的保护作用及相关机制。 方法 培养RVSMC细胞融合后,实验分为3组：正常磷对照组（Pi 1.4 mmol/L）、高磷组（Pi 4.5 mmol/L）、不同浓度帕米膦酸钠处理组（Pi 4.5 mmol/L+帕米膦酸钠10-5、10-6、10-7 mol/L）。甲O-酚酞络合酮吸光光度法测定细胞外基质钙含量。BCA法测定蛋白含量,用蛋白含量标化钙含量,同时以von Kossa染色半定量钙化情况。Western印迹检测不同组细胞的转录因子核心结合因子α1（cbfα-1）、骨钙素的表达量。 结果 培养3 d后,与高磷组相比,帕米膦酸钠干预组细胞外基质钙含量均显著减少（均P < 0.05）;von Kossa染色显示帕米膦酸钠干预组钙质沉积（黑色颗粒）亦显著减少。Western印迹显示,培养3 d后帕米膦酸钠处理组cbfα-1、骨钙素的表达量均较高磷组显著减少（均P < 0．05）。 结论 帕米膦酸钠对高磷诱导的RVSMC钙化有保护作用,此作用可能与其阻断RVSMC向成骨细胞转化有关。     

红细胞生成素对慢性肾衰竭大鼠外周血内皮祖细胞的影响

目的 探讨红细胞生成素（EPO）对慢性肾衰竭大鼠外周血内皮祖细胞（EPC）数量和功能的影响。 方法 采用分阶段5/6肾切除制备大鼠慢性肾衰竭模型。实验动物按数字随机表法分为4组（均n = 7）：假手术组、慢性肾衰竭组（模型组）、30 U/kg EPO干预组（小剂量组）和50 U/kg EPO干预组（大剂量组）。大鼠皮下注射EPO 6周后,取其外周血分离培养EPC,并检测EPC数量及其增殖、黏附和形成血管结构的能力。 结果 与假手术组比较,慢性肾衰竭大鼠外周血EPC数量及其增殖、黏附与形成血管结构的能力均显著下降（均P < 0.05）。应用EPO治疗能显著增加慢性肾衰竭大鼠外周血EPC数量（P < 0.05）,改善外周血EPC增殖、黏附及形成血管结构的能力（均P < 0.05）,并且呈剂量依赖性。 结论 EPO可改善慢性肾衰竭大鼠外周血EPC的数量和功能。     

体外高磷环境下血管平滑肌细胞转分化过程的研究

目的 观察体外高磷培养条件下,血管平滑肌细胞（VSMC）向类似成骨样细胞转分化的动态变化特点。 方法 Western印迹和免疫荧光法观察不同磷浓度（1.0、2.5、3.5 mmol/L）培养条件下,人VSMC的标志蛋白α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）以及成骨细胞特异性的核转录因子Cbfα1、相关骨基质蛋白（骨桥蛋白、I型胶原和骨钙素）的动态变化过程。实时荧光定量PCR法分析上述指标的基因表达水平。在此基础上,以硝酸银染色和茜素红染色了解细胞的钙盐沉积状况,最后通过电镜观察不同培养条件下细胞超微结构的改变。 结果 在无血清的培养条件下,高磷（2.5、3.5 mmol/L）刺激细胞12 h时,胞内 Cbfα1的表达就明显增加（P ＜ 0.05）;3 d后高磷组（2.5、3.5 mmol/L）细胞中I型胶原和骨桥蛋白的含量显著上调（均P ＜ 0.05）;第6天骨钙素的产生开始增加;15 d时高磷组（2.5、3.5 mmol/L）α-SMA的含量才显著下降（P ＜ 0.05）。实时荧光定量PCR结果显示,高磷环境培养1 d时,细胞中骨桥蛋白、I型胶原的mRNA水平显著升高（均P ＜ 0.05）;5 d时骨钙素的mRNA表达显著增加（P ＜ 0.05）;10 d时α-SMA的mRNA含量显著减少（P ＜ 0.05）。在高磷营养液中培养15 d时,细胞出现多处斑片状的钙盐沉积。电镜可见胞质内产生大量胶原纤维和钙化的基质囊泡。 结论 高磷可诱导VSMC向类似成骨样细胞转分化,这是一个复杂的、有多个环节、有序的动态变化过程。     

大鼠慢性牙周炎与慢性肾衰竭模型的建立及相关性研究

目的 用SD大鼠建立慢性牙周炎（CP）和慢性肾衰竭（CRF）动物模型,探讨两种疾病是否相关。 方法 将40只健康雄性SD大鼠随机分为4组,每组10只：正常对照组、CP组、CRF组和CP＋CRF组。于8周末处死动物,检查记录牙周指标,检测血清中血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、白细胞介素（IL）1β、肿瘤坏死因子（TNF）α的含量,观察牙周和肾脏组织病理学改变,进行统计学分析。 结果 成功建立了CP和CRF动物模型。CP＋CRF组Scr（120.54±21.29） μmol/L, BUN（34.20±14.44） mmol/L;CRF组Scr（93.63±18.82） μmol/L,BUN（17.77±4.15） mmol/L,两组间差异有统计学意义（P < 0.05）。肾脏病理显示,CP组肾组织出现炎性改变,CP＋CRF组肾脏炎细胞浸润,PAS、Masson染色评分与CRF组差异有统计学意义。牙周病理显示,CP组、CP＋CRF组出现明显牙周炎,CP＋CRF组附着丧失（AL）（173.60±16.75）μm,CP组AL（124.00±23.87） μm,两组差异有统计学意义（P < 0.05）。CP组、CRF组、CP＋CRF组血清IL-1β、TNF-α水平显著高于正常对照组 （P < 0.05）,CP＋CRF组IL-1β显著高于CP组、CRF组（P < 0.05）,CP＋CRF组TNF-α水平高于CP组、CRF组,且与CP组差异有统计学意义（P < 0.05）。2×2析因设计方差分析结果显示,CP与CRF对Scr、BUN、AL的数值具有交互作用（P < 0.05）,且两因素各自对上述指标的主效应显著（P < 0.05）;CP与CRF对IL-1β、TNF-α的数值不具有交互作用（P > 0.05）,但两因素各自对IL-1β、TNF-α的主效应显著（P < 0.05）。 结论 本模型可在SD大鼠同时显现牙周炎和慢性肾衰竭,CP可加重肾衰竭,两者间有相关性,CP可能通过炎性机制加重肾脏的损害。     

五种血液净化单次治疗对肾衰竭患者血磷的清除效果比较

我们比较目前常用的常规间歇性血液透析（IHD）、IHD串联血液吸附器（IHD＋YTS-200、IHD＋HA．330）、持续缓慢低效血液透析（SLED）、日间持续性静脉一静脉血液滤过（CVVH）5种治疗模式单次治疗对急慢性肾功能衰竭患者血磷的清除效果。     

红细胞生成素对慢性肾衰竭大鼠肾小球内皮细胞功能的影响

目的 探讨红细胞生成素（EPO）对慢性肾衰竭（CRF）大鼠肾小球内皮细胞功能的影响。 方法 采用分阶段5/6肾切除术制备大鼠慢性肾衰竭动物模型。实验动物按数字随机法分为4组：假手术组（对照组）、慢性肾衰竭组（模型组）及EPO干预的两个剂量组（小剂量组EPO用量30 U/kg,大剂量组EPO用量50 U/kg）。慢性肾衰竭大鼠皮下注射EPO 6周后处死。检测各组大鼠血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、尿蛋白、血红蛋白（Hb）和血压的变化,并观察肾组织病理改变。免疫组化法检测肾小球CD34、CD31表达;RT-PCR检测肾组织内皮素1（ET-1）、内皮细胞一氧化氮合酶（eNOS）和血管内皮细胞生长因子（VEGF） mRNA的表达。 结果 与模型组比较,EPO治疗能显著增加大鼠肾小球CD34、CD31的表达（均P < 0.05）;下调肾组织ET-1 mRNA的表达（P < 0.05）;上调肾组织eNOS和 VEGF mRNA的表达（均P < 0.05）。此外,EPO治疗还能使大鼠Scr、BUN、尿蛋白和血压水平显著降低（均P < 0.05）,Hb水平显著增高（P < 0.05）,肾组织病理损害明显减轻。 结论 EPO能减轻慢性肾衰竭大鼠肾脏的病理损害,改善肾功能。这种作用可能与其促进肾小球内皮细胞的修复和改善内皮功能有关。     

Relationship between serum 25-hydroxyvitamin D3 and heart valvular calcification in chronic kidney disease patients stage 3-5

Objective To detect the prevalence of heart valvular calcification (VC) and its related risk factors, and to investigate correlation between serum 25-hydroxyvitamin D3[25(OH)D3] and VC in chronic kidney disease (CKD) stage 3-5 patients. Methods A total of 294 CKD patients stage 3-5 were admitted in The Second Affiliated Hospital of Anhui Medical University. Their clinical and laboratory data were collected, patients were classified into two groups according echocardiography: patients with VC were defined as VC group while others were defined as non-VC group. The differences of 25(OH)D3 level and other data in two group were assessed, and related risk factors of VC were analyzed. Results Among 294 CKD patients, 82 were with VC (27.9%) while 212 were without VC (72.1%); serum 25(OH)D3 level was significantly higher in VC group than in non-VC group [(11.9±9.3) μg/L vs (9.6±7.2) μg/L, P＜0.05]. Age, cystatin C, hypersensitive C-reactive protein, pulmonary artery pressure, proportion of secondary hyperparathyroidism, incidence of abdominal aortic calcification and taking active vitamin D proportion were higher in VC group than in non-VC group (P＜0.05). Two classification logistic regression analyses showed that advanced age, high intact parathyroid hormone (iPTH) and 25(OH)D3, pulmonary arterial hypertension were risk factors for VC in CKD stage 3-5 patients. Conclusions The prevalence of VC is high in CKD stage 3-5 patients. Advanced age, bone metabolic disorder and pulmonary arterial hypertension are associated with VC.     

慢性肾衰竭患者血清骨保护素浓度与心脏瓣膜钙化的关系

目的探讨慢性肾衰竭（CRF）患者血清骨保护素（OPG）水平与心脏瓣膜钙化的关系。方法以75例CRF患者[非透析组（ND）25例,腹透组（PD）28例,血透组（HD）22例1和10例健康人（对照组）为研究对象,采用酶联免疫复合物法测定患者血清OPG水平,分析其与心脏瓣膜钙化之间的关系。结果各组CRF患者血清中OPG水平[ND组（4.77±1.74）μg/L、PD组（5.22±1.57）μg/L、HD组（5.35±1.72）μg/L]显著高于对照组[（2.04±0.57）μg/L,P〈0.01]。OPG水平与年龄（r=0.311,P〈0.05）和C反应蛋白水平（r=0.353,P〈0.01）呈正相关。根据有无心脏瓣膜钙化分组后发现,存在瓣膜钙化的CRF患者OPG水平较无瓣膜钙化组显著升高[（6.28±1.66）μg/L比（4.59±1.40）μg/L,P〈0.01]。Logistic回归分析显示血清OPG水平是CRF患者心脏瓣膜钙化发生的一项独立危险因素（P〈0.01）。结论在CRF患者中,血清OPG水平与心脏瓣膜钙化相关。     

不同时期慢性肾脏病患者胎球蛋白A与血管钙化因素的相关性

目的 探讨不同时期慢性肾脏病(CKD)患者血胎球蛋白A(Fetuin-A)与引起血管钙化因素的相关性.方法 分别收集了2010年3月至2011年1月中心医院肾内科入选正常组、CKD3期、CKD4期、CKD5期以及MHD期患者各20例,采用美国ALOCK型彩色B型超声仪检查颈动脉内膜-中层的厚度;用7180型全自动生化分析仪(日本)检查血钙、磷、ALB、TB;用速率比浊法检测血清CRP;用ElISA法检测Fetuin -A.结果 各期慢性肾脏病患者的血胎球蛋白A水平与CRP(p ＜0.05)水平、血钙磷乘积水平(p＜0.05),尤其是与血磷水平(P＜0.05)相关;患者血胎球蛋白A浓度越低,颈动脉内膜-中层厚度增厚越明显(p＜0.05).结论 血清胎球蛋白A有拮抗CKD患者颈动脉钙化的作用.     

慢性肾脏病5期患者桡动脉gremlin表达与血管钙化的关系

目的 探讨慢性肾脏病（CKD）5期患者桡动脉中骨形态发生蛋白（BMP）拮抗剂gremlin表达与血管钙化的关系。 方法 40例CKD5期患者为试验组,于行首次动静脉内瘘术时取桡动脉标本;38例单纯外伤性脾破裂患者为对照组,取其脾小梁动脉标本。用钙盐特异性染色法（von Kossa）对动脉进行钙化染色;用免疫组化法检测动脉gremlin、BMP-2、-7的表达,并用ELISA法检测血清中3者浓度;用病理图像分析系统（IPP6.0）对组织切片进行半定量化图像分析;用SPSS 19.0统计分析软件进行数据处理。 结果 试验组12例（30%）钙盐染色显著阳性,位于中膜的平滑肌细胞层,而对照组无显著钙盐染色。试验组钙盐染色显著阳性的桡动脉均有gremlin、BMP-2显著表达,位于中膜的平滑肌细胞层,且2者的表达量与钙盐染色程度均呈正相关。试验组BMP-7的表达量显著低于对照组。 结论 gremlin、BMP-2均可能参与了CKD5期患者桡动脉平滑肌细胞向成骨样细胞表型转化这一过程,而BMP-7可能阻止此过程的进展。     

糖尿病肾病大鼠肾脏cbfa1表达与钙化的关系

目的:探讨糖尿病肾病大鼠肾脏钙化与骨分化核心结合因子1(cbfa1)表达的关系。方法:用链脲佐菌素诱导糖尿病肾病大鼠模型,并以正常大鼠作为对照组,于第3、6月末分别采用Von Kossa染色观察肾脏钙盐沉积、肾脏免疫组化、RT-PCR、Wester Blot法观察肾脏cbfa1的表达水平。结果:糖尿病肾病大鼠肾脏有cbfa1的表达,且与钙盐沉积程度有关。正常大鼠肾脏没有发现cbfa1的表达。结论:糖尿病肾病晚期时肾脏出现钙盐沉积,肾脏cbfa1的表达水平与钙盐沉积程度呈正相关。     

Risk factors of bone density disorder and vascular calcification in non-dialysis chronic kidney disease patients

Objective To explore the risk factors of bone density disorder and vascular calcification in non-dialysis chronic kidney disease (CKD) patients. Methods Clinical data of non-dialysis CKD patients who were admitted to the First Affiliated Hospital of Fujian Medical University between January 2013 and June 2014 were retrospectively analyzed. Using dual energy X-ray absorptiometry to evaluate their bone mineral density (BMD) and T value. Patients were divided into normal BMD group (T≥-1), osteopenia group (-2.5＜T＜-1) and osteoporosis group (T≤-2.5). The vascular calcification was evaluated by pectoral computed tomography. Multi-factor stepwise logistic regression analysis was used to assess the risk factors for low bone density and vascular calcification in non-dialysis CKD patients. Results A total of 337 non-dialysis CKD patients were enrolled. There were 110 (32.6%) patients with normal BMD, and 146(43.3%) patients with osteopenia, and 81(24.0%) patients with osteoporosis. Gender, history of hypertension, 25-hydroxy vitamin D and N-terminal osteocalcin shown statistical differences among three groups (all P＜0.05). The incidence rate of 25-hydroxy vitamin D deficiency shown statistical difference among three groups (P=0.012). Further, the rates were increased with the decreased bone mass (χ2=7.100, P=0.008). The other mineral bone disorders, such as hypocalcemia, hyperphosphatemia, low intact parathyroid hormone (iPTH) and high iPTH had no statistical difference among three groups (all P＞0.05). Multi-factor stepwise logistic regression analysis revealed that increased iPTH (OR=1.938), and low bone density (OR=1.724) were independent risk factors for CKD patients with vascular calcification (all P＜0.05), while women (OR=3.312) and vascular calcification (OR=1.742) were independent risk factors for CKD patients with low bone density (all P＜0.05). Conclusion Increased iPTH and low bone density are independent risk factors for non-dialysis CKD patients with vascular calcification, while women and vascular calcification are independent risk factors for non-dialysis CKD patients with low bone density.