新型KATP通道开放剂埃他卡林对人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究新型KATP通道开放剂埃他卡林（iptakalim）对内皮素-1（ET-1）诱导培养的人肺动脉平滑肌细胞（HPASMC）增殖的影响。方法 内皮素-1诱导培养建立人肺动脉平滑肌细胞增殖模型;氚-胸腺嘧啶核苷（3H—TdR）掺入法观察脱氧核糖核酸（DNA）合成;流式细胞仪技术检测HPASMC细胞周期。结果埃他卡林能剂量依赖性抑制内皮素-1所致的3H—TdR掺入量增多,阻止HPASMC由静止期（G0／G1期）进入DNA合成期（S期）和有丝分裂期（G2／M期）。特异性KATP通道阻断剂格列本脲可拮抗埃他卡林对。H—TdR掺入的抑制作用。结论 埃他卡林可能通过激活KATP通道来抑制ET-1诱导入肺动脉平滑肌细胞的增殖作用,有望成为治疗肺动脉高压的新药。     

新型KATP开放剂埃他卡林对原代培养人肺动脉平滑肌细胞TGF-β1、PCNA mRNA表达的影响

目的 观察新型ATP敏感性钾(KAPT)开放剂埃他卡林(IPT)对原代培养人肺动脉平滑肌细胞转化生长因子β1(TGF-β1)和增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA表达的影响.方法 分离3～4级人肺小动脉,按照组织贴块法原代培养人肺动脉平滑肌细胞,用内皮素1(ET-1)诱导细胞增殖,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RQ-RT-PCR)技术检测TGF-β1和PCNA目的 mRNA表达变化.结果 ET-1(10 nmol/L)诱导人肺动脉平滑肌细胞增殖的同时,TGF-β1、PCNA mRNA 表达均增加;在相同条件下,加入ET-1(10 nmol/L)的同时,分别在培养基中加入IPT 10-7、10-6、10-5 mol/L 作用 24 h 后,IPT呈浓度依赖性地抑制TGF-β1、PCNA mRNA表达;加入ET-1(10 nmol/L)、IPT(10-5 mol/L)前30 min,预先加入特异性KATP拮抗剂格列本(Glibenclimide,GLI)10-7、10-6、10-5 mol/L,GLI呈浓度依赖性地拮抗IPT的抑制作用.结论 IPT通过开放KATP通道,浓度依赖性地抑制原代培养人肺动脉平滑肌细胞TGF-β1、PCNA mRNA表达,抑制人肺动脉平滑肌细胞增殖,有望今后成为治疗缺氧性肺动脉高压(HPH)、肺血管重构的药物.     

格列本脲对抗高血压新药盐酸埃他卡林心血管作用的影响

目的在不同的动物模型上观察ATP敏感性K+通道拮抗剂格列本脲对盐酸埃他卡林心血管作用的影响.方法以无损伤性套尾法测定清醒自发性高血压大鼠血压及心率,用四导生理记录仪记录麻醉正常血压大鼠股动脉压,用SMUP-PC软件记录心功能参数.结果在清醒自发性高血压大鼠上,盐酸埃他卡林1.5 mg*kg-1 po的降压作用确切、平稳,持续时间长,对心率的影响轻,特异性ATP敏感性K+通道拮抗剂格列本脲50 mg*kg-1 po既能对抗也能预防盐酸埃他卡林1.5 mg*kg-1 po的降压作用,并且格列本脲12.5 mg*kg-1*po-50 mg*kg-1 po的预防性对抗效应具有剂量依赖性.在麻醉正常血压大鼠上,盐酸埃他卡林0.125～2.0 mg*kg-1 iv可剂量依赖性地降低外周血压、减慢心率、抑制心脏收缩及舒张功能.同样条件下,吡那地尔1.0 mg*kg-1 iv与硝苯地平1.0 mg*kg-1 iv也具有上述作用.特异性ATP敏感性K+通道拮抗剂格列本脲20 mg*kg-1 iv能完全拮抗盐酸埃他卡林0.5 mg*kg-1 iv及吡那地尔1.0 mg*kg-1 iv的心血管作用,不影响硝苯地平1.0 mg*kg-1 iv的心血管作用.结论盐酸埃他卡林的心血管作用与硝苯地平不同,与吡那地尔相似,具备ATP敏感性K+通道激活剂的药理学特征.     

格列本脲对抗高血压新药盐酸埃他卡林心血管作用的影响

目的　在不同的动物模型上观察ATP敏感性K+ 通道拮抗剂格列本脲对盐酸埃他卡林心血管作用的影响。方法　以无损伤性套尾法测定清醒自发性高血压大鼠血压及心率 ,用四导生理记录仪记录麻醉正常血压大鼠股动脉压 ,用SMUP PC软件记录心功能参数。结果　在清醒自发性高血压大鼠上 ,盐酸埃他卡林 1 5mg·kg- 1 po的降压作用确切、平稳 ,持续时间长 ,对心率的影响轻 ,特异性ATP敏感性K+ 通道拮抗剂格列本脲 50mg·kg- 1 po既能对抗也能预防盐酸埃他卡林 1 5mg·kg- 1 po的降压作用 ,并且格列本脲 1 2 5mg·kg- 1 ·po- 50mg·kg- 1 po的预防性对抗效应具有剂量依赖性。在麻醉正常血压大鼠上 ,盐酸埃他卡林 0 1 2 5～ 2 0mg·kg- 1 iv可剂量依赖性地降低外周血压、减慢心率、抑制心脏收缩及舒张功能。同样条件下 ,吡那地尔 1 0mg·kg- 1 iv与硝苯地平 1 0mg·kg- 1 iv也具有上述作用。特异性ATP敏感性K+ 通道拮抗剂格列本脲 2 0mg·kg- 1 iv能完全拮抗盐酸埃他卡林 0 5mg·kg- 1 iv及吡那地尔 1 0mg·kg- 1 iv的心血管作用 ,不影响硝苯地平 1 0mg·kg- 1 iv的心血管作用。结论　盐酸埃他卡林的心血管作用与硝苯地平不同 ,与吡那地尔相似 ,具备ATP敏感性K+ 通道激活剂的药理学特征     

新型KATP开放剂iptakalim对人肺动脉平滑肌KATP通道 mRNA表达的影响

目的研究新型KATP开放剂iptakalim对原代培养人肺动脉平滑肌细胞KATP通道亚基SUR2B／Kit6．1 mRNA表达的影响，以探讨iptakalim治疗肺动脉高压的分子生物学机制。方法分离人手术标本正常肺组织3～4级肺小动脉，原代培养人肺动脉平滑肌细胞。正常组不予干预，试验组分别加入内皮素-1（ET-1）、ET-1＋不同浓度iptakalim或Glyburide等孵育24h。以Trizol法抽提总RNA，逆转录为cDNA，以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RQ-RT—PCR）法检测各组细胞KATP通道mRNA表达量。结果 ET-1组SUR2B mRNA的表达量较正常组明显减少。iptakalim呈浓度依赖性拮抗ET-1作用，提高SUR2B mRNA表达量。Glyburide呈浓度依赖性拮抗iptakalim作用，减少SUR2B mRNA表达量。各组Kir6．1 mRNA表达量无统计学差异。结论新型KATP开放剂iptakalim呈浓度依赖性增加原代培养人肺动脉平滑肌细胞KATP通道mRNA表达量，可能成为较有前途治疗肺动脉高压的有效药物。     

吡格列酮保护大鼠心肌缺血再灌注损伤机制的研究

目的探讨吡格列酮保护大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制,观察细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的变化。方法将SD大鼠30只随机分为5组:假手术组,缺血再灌注组,吡格列酮5mg组,吡格列酮10mg组和吡格列酮20mg组,每组6只,利用体内结扎左前降支的方法建立缺血再灌注损伤模型,Western blot法检测心肌组织ERK1/2、磷酸化ERK1/2的变化,RT-PCR法检测HIF-1α mRNA的变化。结果缺血再灌注组心肌组织ERK1/2表达较假手术组无变化,吡格列酮各组对其表达无影响;缺血再灌注组磷酸化ERK1/2表达上调,吡格列酮各组表达进一步上调,与吡格列酮剂量相关;缺血再灌注组HIF-1α mRNA表达上调,吡格列酮各组促进其进一步上调,与剂量无关。结论心肌缺血再灌注损伤时,机体可调动内源性生存激酶表达上调,应对急性损伤,吡格列酮可进一步促进这些激酶上调,发挥抗心肌缺血再灌注损伤作用。     

高血压病人小动脉中磷酸化细胞外信号调节激酶1/2及ets样基因1的蛋白表达

目的 研究细胞外信号调节激酶系统(ERK)及其下游底物ets样基因1(Elk-1)在原发性高血压中的作用.方法 采用免疫组织化学方法,对比观察高血压和非高血压病人胃肠小动脉血管平滑肌细胞及内皮细胞中细胞外信号调节激酶(ERK1/2)和ets样基因1(Elk-1)的磷酸化情况.结果 高血压组胃肠小动脉血管平滑肌细胞中磷酸化ERK1/2染色阳性率(8.31%)明显高于非高血压组(0.53%),P＜0.05;高血压组内皮细胞中磷酸化ERK1/2的阳性率(4.97%)明显高于非高血压组(P＜0.05).高血压组胃肠小动脉血管平滑肌细胞中磷酸化Elk-1染色阳性率(3.53%)明显高于非高血压组(0.27%),P＜0.05.在血管平滑肌细胞、血管内皮细胞中磷酸化ERK1/2与磷酸化Elk-1的表达均有正相关关系.结论 原发性高血压患者的胃肠细小动脉血管平滑肌细胞以及内皮细胞中细胞外信号调节激酶及其下游底物Elk-1的磷酸化增加.     

硫化氢对大鼠肝星状细胞增殖及Ca2+浓度的影响

目的 探讨硫化氢(H2S)对大鼠原代肝星状细胞(HsC)增殖及Ca2+浓度的影响及其作用机制.方法 大鼠肝星状原代细胞作为研究对象,将过氧化氢(H2O2)作用于大鼠原代HSC制造肝纤维化的氧化应激模型,用钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载细胞,并在此基础上应用不同剂量的NaSH(H2S供体)和KATP通道抑制剂(格列本脲)对各组细胞进行干预,用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)和CCK-8的方法分别检测不同刺激条件对细胞内Ca2+浓度改变及细胞增殖情况的影响.结果 低浓度H2S(100μmo/L NaSH)明显降低HSC细胞内Ca2+浓度(P＜0.05),抑制细胞增殖;K离子通道阻断剂——格列本脲可阻断H2S的作用.高浓度H2S(1mmol/L NaSH)使HSC细胞内Ca2+浓度增加,促进细胞增殖.结论 低浓度H2S通过激活HSC细胞KATP通道,降低细胞内Ca2+浓度,从而抑制细胞增殖;高浓度H2S使HSC细胞内Ca2+浓度增加,促进细胞增殖.     

吡那地尔缺血后处理对心脏再灌注损伤细胞凋亡的作用

目的:研究缺血/再灌注(I/R)对大鼠心肌细胞凋亡蛋白表达的影响以及ATP敏感钾通道(KATP)开放剂（吡那地尔）缺血后处理(IPO)的作用。方法: 24只Wistar雄性大鼠,随机分为对照组、I/R组、吡那地尔IPO组及吡那地尔+格列本脲IPO组,每组6只动物(n=6)。在大鼠I/R过程中给予吡那地尔IPO后,对心肌细胞中Bax、Bcl-2和纤维连接蛋白(FN)凋亡蛋白的早期变化以及表达采用免疫组化染色法和图像分析技术进行定量分析。结果: 心肌I/R后,心肌细胞中Bax、FN蛋白的表达上调、Bcl-2蛋白的表达下调;吡那地尔IPO组Bax、FN蛋白的表达下调、Bcl-2蛋白的表达上调,各组平均吸光度(A)值有显著性差异(P<0.05)。结论: 吡那地尔本身具有抗细胞凋亡的作用,以其进行IPO具有减轻I/R损伤的作用。     

内皮素-1经蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路诱导大鼠肺细小动脉平滑肌细胞肥大

目的 探讨过表达内皮素-1(ET-1)对体外培养的大鼠肺细小动脉平滑肌细胞(RPMC)增殖/肥大的影响及其作用机制研究.方法 采用组织灌注法体外分离培养RPMC,脂质体介导法瞬时转染ET-1基因,经实时荧光定量逆转录-PCR和免疫印迹法鉴定后,用流式细胞技术检测细胞周期和细胞体积的变化,用免疫印迹法和细胞免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,同时检测细胞总蛋白/总DNA比值的变化,并用免疫印迹法检测蛋白激酶B(Akt/PKB)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的磷酸化水平.采用SPSS 11.0统计软件处理数据,各组间比较均采用t检验.结果 成功分离和培养RPMC并瞬时转染ET-1基因.与空载相比,转染48 h后RPMC细胞周期分布和细胞增殖指数未见明显差异,但转染72 h后检测到α-SMA合成功能增强,分别为空载转染组的1.3倍和1.2倍,细胞总蛋白/总DNA比也增高,分别为空载转染组的1.6倍和1.5倍.流式细胞术检测显示,与空载相比,转染72 h后RPMC细胞体积增大,分别为空载转染组的1.1倍和1.2倍.免疫印迹法检测显示,转染48 h后,Akt/PKB和mTOR的磷酸化水平升高,ERK1/2的磷酸化水平降低.结论 过度表达ET-1可能经Akt/PKB-mTOR信号通路诱导RPMC肥大,在肺动脉高压的血管重塑过程中发挥重要作用.