三种蛔虫成虫抗原的生化、免疫分析

本实验应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、等电聚焦(IEF)、免疫扩散(ID)、免疫电泳(IE)和酶联免疫印迹(ELIB)比较人蛔虫、猪蛔虫和犬弓蛔虫成虫粗抗原。SDS-PAGE结果显示,人蛔虫全虫有38条区带,其中糖带4条;猪蛔虫全虫有39条     

蛔虫卵的扫描电镜观察及有关“卵盖”问题的商榷

本文用扫描电镜结合相差和微分相差显微镜观察了人蛔虫和猪蛔虫的未受精虫卵、受精虫卵、脱蛋白质膜虫卵、刚孵出幼虫的虫卵及在子宫各分段中的虫     

日本血吸虫表皮生长因子受体基因的鉴定和功能研究

目的鉴定日本血吸虫表皮生长因子受体基因(SjEGFR),并阐明其在日本血吸虫生长和生殖发育中的作用。方法通过5’-RACE和3’-RACE扩增、测序获取SjEGFR基因全长片段。采用荧光定量PCR(qPCR)技术检测该基因在日本血吸虫不同发育阶段(16、18、20、22、24、26 d)表达情况。使用整条虫体原位杂交法对感染24 d的日本血吸虫雌、雄虫SjEGFR基因转录本进行定位。通过体内持续RNA干扰(RNAi)技术特异性敲低SjEGFR基因,待虫体发育至30 d收集虫体。统计分析雌、雄虫回收数量以及虫体长度,通过明矾卡红染色观察虫体生长发育情况。结果首次鉴定了SjEGFR基因,其结构具有一个保守的酪氨酸激酶位点。整条虫体原位杂交定位显示该基因转录本在虫体各处均有表达,在雌、雄虫肠道部位呈现出明显着色的高表达。体内RNAi显示,SjEGFR基因表达被特异性敲低后,雌、雄虫生长受阻。RNAi组雌虫子宫内无虫卵,肠道内无色素沉积、卵黄腺发育迟滞、卵巢发育受阻;雄虫呈现睾丸个数减少、体积变小,出现了更多未成熟的精母细胞。结论特异性敲低SjEGFR基因表达可影响日本血吸虫生长和生殖发育,阻滞虫卵产生。     

日本血吸虫表皮生长因子受体基因的鉴定和功能研究（英文）

目的鉴定日本血吸虫表皮生长因子受体基因(SjEGFR),并阐明其在日本血吸虫生长和生殖发育中的作用。方法通过5'-RACE和3'-RACE扩增、测序获取SjEGFR基因全长片段。采用荧光定量PCR(qPCR)技术检测该基因在日本血吸虫不同发育阶段(16、18、20、22、24、26 d)表达情况。使用整条虫体原位杂交法对感染24 d的日本血吸虫雌、雄虫SjEGFR基因转录本进行定位。通过体内持续RNA干扰(RNAi)技术特异性敲低SjEGFR基因,待虫体发育至30 d收集虫体。统计分析雌、雄虫回收数量以及虫体长度,通过明矾卡红染色观察虫体生长发育情况。结果首次鉴定了SjEGFR基因,其结构具有一个保守的酪氨酸激酶位点。整条虫体原位杂交定位显示该基因转录本在虫体各处均有表达,在雌、雄虫肠道部位呈现出明显着色的高表达。体内RNAi显示,SjEGFR基因表达被特异性敲低后,雌、雄虫生长受阻。RNAi组雌虫子宫内无虫卵,肠道内无色素沉积、卵黄腺发育迟滞、卵巢发育受阻;雄虫呈现睾丸个数减少、体积变小,出现了更多未成熟的精母细胞。结论特异性敲低SjEGFR基因表达可影响日本血吸虫生长和生殖发育,阻滞虫卵产生。     

青蒿琥酯对日本血吸虫生殖作用的影响

目的观察青蒿琥酯对日本血吸虫成虫生殖的影响。方法小鼠感染日本血吸虫尾蚴后第20d灌服青蒿琥酯300mg/kg,给药后3周解剖小鼠,用灌注法收集成虫,计算减虫率;取肝右叶做石蜡切片,观察虫卵肉芽肿;剩余肝脏溶解后计数虫卵;收集无损虫体进行体外培养,观察虫卵形态,并计数产卵量;取完好的虫体做石蜡切片,HE染色后镜下观察生殖器官的发育。结果给药组小鼠体内雌虫产卵量与对照组存在显著的差异,体外培养结果与体内产卵结果相一致。给药组小鼠体内的雌虫的卵巢发育缓慢,比对照组的小,且卵巢内多为未成熟的卵细胞。结论青蒿琥酯能抑制雌虫卵巢的发育,降低或抑制雌虫的产卵量,具有抗日本血吸虫雌虫生殖的作用,能有效的减轻血吸虫病的病情和控制传播。     

过继转移RNA干扰日本血吸虫的发育表型评价技术的建立

目的建立RNA干扰后的日本血吸虫转移至小鼠体内发育情况的评价技术,为后组学时代功能基因研究提供工具。方法设计引物扩增日本血吸虫组织蛋白酶B1(SjCB1)基因dsRNA、绿色荧光蛋白(GFP)dsRNA。用日本血吸虫尾蚴感染小鼠,收集14 d的日本血吸虫童虫。用6 mg/L SjCB1 dsRNA体外培养浸泡法对日本血吸虫童虫的SjCB1基因进行特异性敲低(SjCB1干扰组),对照组加6 mg/L GFP dsRNA(GFP干扰组)。采用外科手术将干扰后的童虫过继转移至小鼠肠系膜静脉(SjCB1干扰组、GFP干扰组各3只小鼠,40条/鼠),待虫体发育至性成熟时收集虫体。统计分析雌雄虫回收数量、合抱率、虫体回收率以及虫体长度,观察虫体生长发育情况。采用荧光定量PCR检测干扰后的14 d雌、雄童虫以及回收的雌、雄成虫SjCB1基因的表达情况。结果SjCB1干扰组、GFP干扰组回收的雌、雄虫数量,合抱率,虫体回收率分别为(9.0±1.4)、(9.0±2.1)条,(13.0±2.9)、(11.3±2.5)条,100%、100%和58.60%、54.67%。两组雌、雄虫数量,合抱率,虫体回收率差异均无统计学意义(P0.05)。SjCB1干扰组过继转移前雌、雄童虫SjCB1基因的相对表达量为1.022±0.019、0.643±0.105,均低于GFP干扰组的2.880±0.297、2.753±0.164(t=0.000、0.000,P0.01);SjCB1干扰组回收的雌、雄虫SjCB1基因相对表达量分别为1.286±0.211、1.182±0.287,均低于GFP干扰组的5.506±0.326、4.986±1.230(t=0.013、0.000,P0.01)。SjCB1干扰组、GFP干扰组雌虫长分别为(7.059±1.255)、(8.433±0.749)cm,雄虫长分别为(6.993±2.734)、(10.561±1.375)cm,两组间雌、雄虫差异有统计学意义(t=0.003、0.001,P0.01)。SjCB1干扰组、GFP干扰组虫体外观形态及内部的生殖系统、消化系统未见差异,两组雌虫在卵模与子宫中均有成形的虫卵。结论建立了干扰特异性基因后观察虫体体内发育表型的技术,体外培养浸泡干扰后日本血吸虫童虫、成虫SjCB1基因表达水平被显著敲低,该方法可用于研究发育相关基因的表型。     

人蛔虫、猪蛔虫和犬弓蛔虫乳酸脱氢酶同工酶的比较研究

我们在成都地区采集了人肠道,人胆道和猪肠道蛔虫,用乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳进行比较研究,同时选用形态上与其有明显区别的犬弓蛔虫进行对比,以期为了解人蛔虫和猪蛔虫是否同种提供生化依据。 材料标本来源人肠道蛔虫和人胆道蛔虫均取自手术病人。猪蛔虫和犬弓蛔虫分别来自屠宰场和我院动物饲养中心。虫体置于盛有37℃任氏溶液的保温瓶中带回实验室。     

日本血吸虫酚氧化酶的组化定位研究

目的观察酚氧化酶(phenol oxidase,PO)在日本血吸虫成虫的组织学分布.方法酚氧化酶组化方法:将42 d虫龄的日本血吸虫活成虫置含25 mmol/L邻苯二酚的磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中,37℃孵育30 min后,转移虫体至载玻片上,吸去虫体表面液体,将其中一部分虫体置Olym-pus显微镜下观察酚氧化酶在虫体的组织学分布.荧光组织化学方法:经上述过程处理后,在另一部分虫体上滴加2滴含0.05%戊巴比妥钠的PBS溶液,然后置Leica荧光显微镜下观察酚氧化酶在虫体的组织学分布.结果酶组织化学方法显示,日本血吸虫酚氧化酶仅分布于雌虫卵黄腺及子宫内虫卵卵壳表面,呈现棕褐色显色反应;雌虫卵巢和雄虫均未发现酚氧化酶活性.然而,荧光组织化学方法显示,酚氧化酶除主要分布于雌虫卵黄腺及子宫内虫卵卵壳表面,呈现强荧光外,还少量分布于雄虫体壁表层,呈现弱荧光反应.结论不仅日本血吸虫雌虫含有酚氧化酶活性,而且雄虫也含酚氧化酶活性,只不过其含量少、活性低.荧光组织化学方法能更灵敏地显示日本血吸虫酚氧化酶活性,更适用于日本血吸虫酚氧化酶的组织学定位.     

人蛔虫和猪蛔虫染色体核型研究初报

以人蛔虫成虫的睾丸和猪蛔虫成虫的睾丸和卵巢为材料,研究其染色体的核型.结果表明,两种虫的染色体数目均为2n=20,n=10.人蛔虫较大的中型中部着丝粒染色体、中型中部着丝粒染色体、较小型的亚中部着丝粒染色体和较小型端部或亚端部着丝粒染色体各为2、5、1和2个;猪蛔虫则各为1、6、1和2个。根据染色体的相对长度、着丝粒位置可将蛔虫的染色体分为四组.Ⅰ组:人蛔虫为1～2号染色体;猪蛔虫为1号染色体;Ⅱ组:人蛔虫为3～7号染色体;猪蛔虫为2～7号染色体;Ⅲ组:人蛔虫与猪蛔虫均为8号染色体;Ⅳ组:人蛔虫与猪蛔虫均为9～10号染色体.     

雌性蛲虫异位寄生于男性泌尿系

泌尿系统的蛲虫感染甚为少见。现报道一例如下: 患者,男性,32岁,常发尿略感染,伴有遗精。1978年12月～1979年6月,两次在精液中发现活的雌蛲虫各1条。虫体经透明后观察,呈乳白色,头泡清楚,角皮具横纹,后端1/3为尖尾,食道球圆球形。全虫长7.8×0.4mm,比正常雌蛲虫稍短小。虫的生殖     

猪蛔虫提取物对人血液凝固的抑制作用

猪蛔虫全虫提取物可以延长血浆复钙时间(RT)和白陶土部分凝血活酶时间(KPTT),但不能延长凝血酶元时间(PT),说明全虫提取物只对内源性凝血系统具有抑制作用。全虫提取物可以抑制由ADP所诱导的血小板聚集,而对肾上腺素所诱导的血小板聚集无影响。全虫提取物和体腔液均不能引起纤维蛋白溶解,且全虫提取物不能增强或减弱由尿激酶所致的纤维蛋白溶解。KPTT测定结果表明角皮提取物的抗凝作用最强,而全虫提取物和体腔液相近,提示猪蛔虫的抗凝性物质可能主要存在于虫体的体表。     

环孢菌素A体外抗曼氏血吸虫的透射电镜观察

ＭＦ１小鼠实验感染曼氏血吸虫６ｗｋ后，经主动脉和门静脉灌注收虫。虫体暴露在含有２５μｇ／ｍｌ环孢菌Ａ的１９９型培养液中体外培养。药物所致的虫体损害作透射电镜观察。结果表明，雄虫较雌虫体外对环孢菌素Ａ更敏感，药物作用８ｈ后，雌虫皮质基层有空泡形成；药物作用１６ｈ后，雌虫外质膜破溃、皮棘松动；药物作用２４ｈ后，雌虫实质中有空泡形成、卵黄腺细胞破坏、卵黄小滴减少，雄虫基质有巨大空泡形成、皮棘缺损。结果显     

鸡蛔虫黄山市分离株的形态学和分子特征分析

目的 通过对鸡蛔虫的形态学和分子特征分析,进一步明确鸡蛔虫的分类地位。 方法 对分离自安徽省黄山市的鸡蛔虫分离株在光学显微镜和扫描电子显微镜下分别进行形态学上的观察;PCR 扩增鸡蛔虫 COⅠ、 ITS基因,分别利用其核苷酸序列构建鸡蛔虫与其他线虫的系统发育分析树。 结果 形态学观察鸡蛔虫死后固定虫体呈乳白色,雌虫的尾部尖直而雄虫的尾部卷曲。 虫体头部唇瓣 3 个,大小几乎相等;雄虫尾部具有乳突 10 对;所获得的鸡蛔虫 COⅠ和 ITS 基因序列长度分别为 655 bp 和 1 034 bp;鸡蛔虫黄山市分离株与其他国家 / 地区的鸡蛔虫参考株同源性很高,COⅠ最高达 100%,ITS 最高达 99. 9%,并与其他鸡蛔虫在系统发育树上聚集在同一支系。 结论 鸡蛔虫的形态学和分子特征分析可为鸡蛔虫的鉴定以及鸡蛔虫病的防控奠定理论基础。     

人群蛔虫感染调查粪检与驱虫结果比较

目的探讨社区人群蛔虫感染调查中粪检与驱虫结果的关系。方法选择江西省南昌县塘南乡张溪村为试点,采用Kato Katz法粪检,双羟萘噻嘧啶化疗驱虫后收集虫体,对两者结果进行比较分析。结果共检测1 019名村民,人群实际蛔虫感染率为30.23%,其中粪检阳性率为20.41%,淘虫阳性率为23.75%。淘虫阳性感染者平均虫荷2.64条,虫荷数高的感染者所占比例较低。感染者虫荷数越多,检出虫卵的概率越高,当感染者寄生7条以上蛔虫,虫卵检出率为100%。粪检虫卵假阴性者中,感染雄虫者占61.00%,感染雌虫幼虫并有或无雄虫者占7.00%,感染成熟雌虫者占32.00%。人群粪检虫卵漏检率为32.47%。其中,因不排虫卵(生物学)漏检率为22.08%,Kato Katz法(方法学)漏检率为10.39%。结论人群蛔虫感染调查中粪检阳性率较实际感染率偏低,粪检虫卵检出率与感染虫荷数有关。     

江西省农村居民肠道寄生虫感染调查及蛔虫生物流行病学研究

目的探讨江西农村居民肠道寄生虫感染现状及蛔虫病生物流行病学特点.方法采用粪检、化疗驱虫后收集虫体等方法对江西进贤县鹿塘试区625名居民进行了研究.结果该试区居民感染9种肠道寄生虫,总感染率为72.80%,其中蛔虫、钩虫、鞭虫卵的阳性率分别为51.52%、11. 80%和34.60%.以噻嘧啶对全体居民治疗后,在59.40%的居民中检获蛔虫,感染者平均虫荷为2.97条(范围1～32条),10.00%的排虫者可见未成熟蛔虫,推算人群每月蛔虫再感染率为5.13%.对粪检虫卵假阴性人群的分析显示,仅有单性蛔虫寄生者(单雄或单雌)占82.93%,有1条未成熟雌虫和1～4条雄虫寄生者占17.03%.粪检虫卵假阴性率随着寄生蛔虫数的增加而减少,当感染6条以上蛔虫时,无假阴性出现.结论该社区人群肠道寄生虫感染率高,蛔虫再感染严重,有必要进行反复治疗以巩固防治效果;由于单性感染或未成熟蛔虫的缘故,居民实际蛔虫感染率要高于Kato-Katz法检查所见.     

关于寄生蠕虫病化学治疗的研究(20)山道年对广州管圆线虫和其他寄生线虫的神经药理学作用

山道年的作用方式和作用部位已有很多报道,由于选用的虫种、虫体标本的部位、山道年的浓度各不相同,其结果不尽一致,迄今尚未得出统一的结论。本文作者报道了山道年用于广州管圆线虫、猪蛔虫等的结果。实验所用的寄生线虫均为雌性成虫,采用广州管圆线虫整体标本和按Baldwin(1943)法制作的头部切除神经环标本(把虫体的两端切除     

家兔感染猪蛔虫卵后血清抗体水平的变化

为了寻找能准确反映蛔虫感染情况和流行动态的调查方法,我们用ELISA试验定期检测实验感染猪蛔虫卵的家兔的血清抗体水平。 材料和方法 1 抗原 从刚屠宰的猪肠管内收集活的雌蛔虫,用自来水和无菌生理盐水反复洗涤后,收集体腔液,10000rpm离心沉淀30min。上清液经硫酸铵     

环孢素A体内抗日本血吸虫的实验研究

目的 观察环孢素A体内抗日本血吸虫的作用。方法 96只长爪沙鼠随机分8组,每组12只,A组为正常组,B组为模型组,C、D、E、F、G和H为治疗组。B、C、D、E、F、G和H组以腹部贴片法感染日本血吸虫尾蚴,每鼠感染120±2条尾蚴,于感染后(Day 0)和第3周(Day 21)对C、D、E、F、G和H各组分别给予3种不同剂量(10,20,50 mg/kg·d)的环孢素A治疗,连续5天。5周后解剖全部沙鼠,经门静脉灌注收集成虫,计数虫荷,计算减虫率。收集到的虫体重新分组,扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察虫体表面损害情况。病理学观察:取沙鼠肝脏和肠壁制作常规病理切片,然后进行HE染色观察虫卵肉芽肿面积大小,Masson染色观察肝脏纤维化程度。结果 解剖结果显示,所有被感染沙鼠均有不同程度的虫卵结节产生,经环孢素A治疗后,各剂量组沙鼠肝脏虫卵结节均有减少,尤其高剂量组效果显著。HE染色结果显示,低剂量组肉芽肿面积与模型组相比没有明显改变,随着剂量的增加,肉芽肿面积减小,虫卵数量减少。高剂量组几乎未见虫卵。Masson染色同样显示随着剂量提高,纤维化程度逐渐减轻。应用扫描电镜可观察到未给药组雄、雌虫体体壁结果正常,凹窝、体棘和感觉乳突等清晰可见。用药后雄、雌虫体体壁表面破损严重,低剂量组可见表皮皱缩,凹凸不平;高剂量组虫体表皮溃烂,伴有大面积的脱落。透射电镜可见雌、雄虫体体壁产生大量空泡产生,体表细胞结构紊乱。结论 环孢素A在体内可使童虫和成虫受损或致死,呈剂量依赖性,具有明显的抗日本血吸虫作用。     

BTW5对体外培养日本血吸虫成虫及童虫的杀灭效果

目的观察BTW5对体外培养的日本血吸虫成虫和童虫的杀灭效果。方法小鼠感染日本血吸虫尾蚴18 d后用肝门静脉灌注法收集童虫,感染5周后用同法收集雌、雄成虫,分别体外培养于DMEM培养液中,加入不同浓度BTW5连续培养3 d,观察虫体死亡及活力降低情况,并设空白对照组。对虫体进行盐酸卡红染色,观察其损伤情况。结果在含不同浓度BTW5的DMEM培养液中,日本血吸虫成虫及童虫的死亡率与活力降低率均显著高于对照组(P均<0.05)。盐酸卡红染色直观显示BTW5对雌雄虫的体表和肠管有损伤作用,另外对雌虫的卵巢也有损伤。结论BTW5具有体外杀灭日本血吸虫成虫和童虫的作用。     

曼氏血吸虫成虫皮肤表面的扫描电子显微镜摄影

作者应用50～10,000倍的扫描电子显微镜摄影研究曼氏血吸虫皮肤表面结构。从约300张照片中选出12张,逐张作了详细的观察。雌、雄虫的大小比例约为1:5。雌虫的特点是全身没有疣,虫体后端有刺密布,刺向前端。雄虫的口有领状口吸盘,虫体腹面口吸盘的后面和口吸盘里面有数以千计的刺并延