肾上腺髓质素抑制肺动脉平滑肌细胞低氧性增殖

目的观察肾上腺髓质素（AM）对肺动脉平滑肌细胞低氧性增殖的影响。方法体外培养猪的肺动脉平滑肌细胞,采用MTT比色法和PCNA的免疫组化法测定其增殖反应。结果低氧+AM组MTT比色法平均吸光度（A值）为0.394±0.025,显著低于缺氧组的0.514±0.035(P＜0.01),PCNA表达减少,图像分析平均吸光度（A值）为0.168±0.049,显著低于低氧组的0.307±0.078（P＜0.01）。结论肾上腺髓质素能抑制低氧性肺动脉平滑肌细胞增殖,提示AM在肺动脉高压的发生发展中起一定的保护作用。     

肾上腺髓质素对血管紧张素II的促血管平滑肌细胞增殖作用的影响

观察肾上腺髓质素前体N端20肽（PAMP）和肾上腺髓质素（ADM ）对血管紧张素II（AngII）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。用测定培养的大鼠VSMC3H-TdR掺入和蛋白激酶C（PKC）活性的方法。结果发现：10-8mol/L AngII刺激培养的VSMCs 3H-TdR掺入增加2.68倍（P＜0.01）、PKC活性增加1.02倍（P＜0.01）。而10-9mol/L-10-7mol/L的PAMP或ADM与10-8mol/L AngII同时孵育，则显著抑制AngII的上述作用（P＜0.01）。且两者的抑制作用无明显差异。PAMP和ADM均有抑制AngII所致的VSMC增殖作用，可能是通过抑制信号传导系统中的PKC活性来实现的。PAMP和ADM 与AngII相互作用，共同调节VSMC的增殖，从而维持循环系统功能的稳态。     

肾上腺髓质素在心血管系统的分布及在心血管功能调节中的作用

目的：观察肾上腺髓质素（ａｄｒｅｎｏｍｅｄｕｌｉｎ，ＡｄＭ）在大鼠心血管系统的分布及缩血管活性肽对血管平滑肌细胞中肾上腺髓质素表达的影响。方法与结果：应用免疫组织化学方法（ＡＢＣ法）证实，在大鼠的外周组织，尤其是主动脉和心肌等心血管组织以及培养的血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和心肌细胞，均含有丰富的免疫活性的肾上腺髓质素。应用半定量反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）分析方法证实，缩血管活性肽－内皮素（ＥＴ－１）和血管紧张素Ⅱ（ＡＧＴ）可明显地降低培养的血管平滑肌细胞中肾上腺髓质素ｍＲＮＡ水平，这一作用可选择性地分别被ＥＴ－１的特异性受体阻断剂ＢＱ１２３和ＡＧＴ的特异性受体阻断剂Ｄｕｐ７５３所抑制，提示ＥＴ－１／ＡＧＴ可抑制肾上腺髓质素的表达。应用［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入和细胞计数发现，肾上腺髓质素可抑制培养的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌细胞的ＤＮＡ合成和细胞增殖。结论：心血管系统含有丰富的肾上腺髓质素，其表达受ＥＴ－１和ＡＧＴ的调控，它可能作为一种增殖抑制因子而抑制ＳＨＲ血管平滑肌细胞ＤＮＡ合成和细胞增殖。     

肾上腺髓质素对尾加压素Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察肾上腺髓质素(ADM)对尾加压素Ⅱ(UⅡ)刺激的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法:贴块法培养大鼠胸主动脉VSMC;[³H]-胸腺嘧啶([³H]-TdR)掺入测定反映VSMCDNA合成;[γ-³²P]-ATP标记的同位素法测定丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性。结果:UⅡ(10^-8mol/L)显著促进VSMC-TdR掺入和激活MAPK比对照组分别高38%(P＜0.05)和260%(P＜0.01)。UⅡ加10^-10、10^-9、10^-8mol/LADM组VSMC-TdR掺入分别较UⅡ组低7%(P＞0.05)、32%(P＜0.05)和41%(P＜0.01)。MAPK活性分别低24%(P＞0.05)、32%(P＜0.05)和36%(P＜0.05)。结论:肾上腺髓质素抑制UⅡ诱导的VSMC增殖,可能与其抑制MAPK活性有关。     

肾上腺髓质素对内皮素促家兔气道平滑肌细胞增殖的抑制作用

在体外培养的家兔气道平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）上，观察肾上腺髓质素（ＡＭ）对内皮素（ＥＴ）促ＡＳＭＣ增殖的影响及丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性的变化。以探讨ＡＭ对ＡＳＭＣ增殖的调控。结果显示１０－８ｍｏｌ／ＬＥＴ－１显著刺激ＡＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ参入及ＭＡＰＫ激活（Ｐ＜０．０１）。ＡＭ（１３－５２）呈剂量依赖地抑制ＥＴ－１的上述作用（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）。单独应用ＡＭ（１３－５２）对ＡＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ参入及ＭＡＰＫ活性无明显影响。表明ＡＭ（１３－５２）可抑制ＡＳＭＣ对ＥＴ－１的增殖反应，其机理可能涉及ＭＡＰＫ活性的抑制。     

肾上腺髓质素抑制溶血磷脂酸诱导的大鼠主动脉外膜增殖

目的：观察溶血磷脂酸（LPA）和肾上腺髓质素（ADM）之间的相互作用对大鼠主动脉外膜增殖的影响。 方法： 分别以放射免疫方法和RT-PCR方法检测主动脉外膜ADM的生成释放量及其mRNA水平的变化，同时用［3H］-TdR的掺入量表示血管外膜的增殖程度。 结果： 5、10、20 μmol/L的LPA呈浓度依赖性刺激血管外膜［3H］-TdR的掺入及ADM分泌，且高浓度和低浓度LPA均上调ADM 基因表达。外源性ADM呈浓度依赖性抑制LPA的促外膜增殖作用，分别以ADM受体阻断剂ADM22-52及CGRP8-37与LPA共孵育可明显增强LPA的促增殖作用。 结论： LPA呈浓度依赖性刺激主动脉外膜合成分泌ADM，并上调其mRNA表达，生成的ADM反过来抑制了LPA诱导的外膜增殖效应。     

血管紧张素转换酶抑制剂抑制血管平滑肌细胞增殖的机制

目的: 探讨血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)抑制动脉平滑肌细胞增殖及向内膜迁徙的机理。方法: 球囊导管损伤Wistar大鼠颈总动脉, 实验组于术前2 d开始给与ACEI(temocapril-HCl 10 mg·kg^-1·d^-1), 术后2 d、3 d、5 d分批处死。用抗人PDGF-A、-B及其受体, 抗人MMP-1、MMP-9等抗体以ABC法行免疫染色。动脉组织行放射自显影乳剂原位酶谱分析。电镜下观察细胞质内小器官及细胞周围弹性、胶原纤维的密度。结果: 给ACEI后, PDGF及其受体、MMP-1、-9蛋白阳性细胞率及明胶酶活性显著降低, 并抑制了中膜平滑肌细胞的表型转换。结论: ACEI可能通过继发地抑制PDGFs、MMPs蛋白表达, 阻碍细胞表型转换, 从而阻止中膜平滑肌细胞增殖及向内膜迁徙。     

一氧化碳抑制缺氧所致大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖

目的:研究内源性及外源性一氧化碳(CO)对缺氧状态下肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响。方法:选用第3-5代培养的大鼠PASMC,分别在常氧及缺氧条件下用HO酶促进剂氯血红素(hemin)、CO清除剂牛血红蛋白(Hb)和CO气体进行干预。通过MTT比色、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的免疫细胞化学检测上述条件对PASMC代谢及增殖的影响,用流式细胞术检测不同条件对PASMC细胞周期的影响。结果:PASMC在缺氧时MTT比色、PCNA表达及S期、G₂/M期细胞所占比例明显高于对照组(P＜0.01),使用hemin和CO后上述指标显著低于缺氧组(P＜0.01或P＜0.05),而用Hb干预则PASMC代谢和增殖较缺氧组进一步增高(P＜0.01或P＜0.05)。结论:缺氧时PASMC产生的内源性CO以自分泌方式抑制PASMC自身增殖,使用hemin促进内源性CO生成或直接使用外源性CO气体均可抑制PASMC在缺氧状态下的增殖。     

养血清脑血清拮抗溶血磷脂酸诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:观察养血清脑药物血清对溶血磷脂酸(LPA)诱导的大鼠血管平滑细胞(VSMC)增殖作用的影响。方法:在培养的大鼠平滑肌细胞上,测定[³H]-胸腺嘧啶核苷([³H]-thymidine,[³H]-TdR)掺入、丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)活性及脂质过氧化终产物丙二醛(malonyldialdehyde,MDA)含量。结果:1×10^－9、1×10^－8和1×10^－7 mol·L^-1 LPA呈浓度依赖性引起VSMC[³H]-TdR掺入量、MAPK活性及MDA含量增加。5％、10％和15％养血清脑血清预孵育使1×10^－7 mol·L^-1 LPA诱导VSMC[³H]-TdR掺入量分别下降23.0％、42.0％和52.0％(P<0.01);使VSMC MAPK的活性分别下降13.9％(P<0.05)、29.6％(P<0.01)和48.9％(P<0.01);使细胞MDA含量分别下降19.4％、24.7％和43.2％(P<0.01)。结论:LPA呈浓度依赖性引起VSMC增殖及脂质过氧化,VSMC增殖与其细胞内信号转导MAPK途径有关。养血清脑血清可有效地拮抗LPA诱导的VSMC增殖、MAPK激活和脂质过氧化损伤。     

金属硫蛋白抑制同型半胱氨酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:研究金属硫蛋白(MT)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增殖的影响及其作用机制。方法:以[³H]-TdR掺入法测定VSMCs增殖程度,免疫沉淀法测定VSMCs内丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性,[¹⁰⁹Cd]-血红蛋白饱和法测定MT含量,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,NADH氧化法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量。结果:Hcy(10^-6-10^-4mmol/L)呈浓度依赖性的刺激培养大鼠VSMCs[³H]-TdR掺入,0.1mmol/LHcy刺激[³H]-TdR掺入比对照组高4.2倍(P＜0.01)。Hcy亦呈浓度依赖性地激活VSMCsMAPK活性、增加细胞MDA的生成和LDH的漏出(P均<0.01)。单独MT孵育,对VSMCs的上述指标均无明显影响(P＞0.05)。但MT(10^-6-10^-4mol/L)呈浓度依赖性抑制100μmol/LHcy的促增殖效应(r=0.98,P＜0.01)。MT显著抑制Hcy对VSMCs的MAPK活性、MDA生成和LDH漏出的激活作用(均P＜0.01)。以0.5mmol/LZnCl₂预孵育6h后,VSMCsMT含量比非诱导细胞高5.7倍(P＜0.01),这种内源性MT高表达的细胞,显著抵抗Hcy刺激的-TdR掺入和MAPK激活;抑制Hcy的促细胞MDA生成与LDH漏出效应(均P＜0.01)。结论:MT能有效抑制Hcy促大鼠VMSCs增殖作用,其机制可能与MT拮抗Hcy对MAPK的激活和其抗氧化作用有关。     

氟伐他汀抑制大鼠血管平滑肌细胞迁移的机制

目的:研究氟伐他汀抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移的可能机制。方法:采用体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞;用特异性单克隆磷酸化热休克蛋白27(phospho-HSP27)抗体的Western blotting检测HSP27的活性;用FITC-鬼笔环肽标记F-actin并在激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架的形态变化;采用改良的Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验。结果:AngⅡ和PDGF-BB呈浓度依赖性诱导VSMCs的HSP27磷酸化,使VSMCs内F-actin数量明显增加,纵向平行排列,形成应力纤维丝,并促进细胞迁移。100μmol/L HSP27阻断剂槲皮素可阻抑AngⅡ、PDGF-BB刺激VSMCs后产生的应力纤维丝形成,对AngⅡ、PDGF-BB诱导的VSMCs迁移的抑制率分别为55.3%和53.6%,P0.01。氟伐他汀抑制AngⅡ和PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化,并有量效关系,抑制作用在10-5mol/L时最显著,最大抑制率分别为42.1%和58.5%,P0.01。结论:氟伐他汀可能通过抑制HSP27磷酸化影响VSMCs的迁移。     

脱氧核酶抑制人脐动脉平滑肌细胞增殖

目的：观察增殖细胞核抗原（PCNA）基因特异性的10-23脱氧核酶（DNAzyme）对人脐动脉平滑肌细胞（HUASMC）增殖的影响。 方法： 设计合成针对PCNA基因起始密码AUG的DNAzyme，应用脂质体转染法将其转入体外培养的HUASMC。检测DNAzyme干预HUASMC 2 d后［3H］-TdR的掺入量；通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法分析HUASMC的增殖；采用流式细胞仪检测细胞周期。 结果： 1.0 μmol/L DNAzyme干预HUASMC 2 d后，［3H］-TdR的掺入量低于对照组（P<0.05）。1.0 μmol/L的DNAzyme和反义寡聚核苷酸（ASODN）组处理2、3和5 d后，MTT比色吸光度值低于对照组（均P<0.01）。DNAzyme对细胞增殖的抑制呈剂量依赖性。细胞干预2 d后，DNAzyme、ASODN和对照组的G0/G1期细胞的比率分别为73.8%、54.7%和41.1%。 结论： 针对PCNA的DNAzyme能有效抑制HUASMC的体外增殖。     

白介素10抑制晚期糖基化终产物诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的：观察重组人白介素10（rhIL-10）对晚期糖基化终产物刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法：体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞，应用不同浓度的AGE分别刺激VSMCs并设立对照组进行比较，将不同剂量的rhIL-10与AGE共同作用并设立对照组进行比较，采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖程度。结果：与对照组相比，晚期糖基化终产物对血管平滑肌细胞增殖具有明显的刺激作用（P<0.05）。rhIL-10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响（P>0.05）。在晚期糖基化终产物刺激下，rhIL-10可明显抑制血管平滑肌细胞的生长（P<0.05）。结论：结果提示rhIL-10可抑制晚期糖基化终产物诱导的血管平滑肌细胞增殖。     

高胰岛素血症对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的: 观察胰岛素、内皮素-1(ET-1)和胰岛素+ET-1对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和形态结构的影响。方法: 体外培养VSMC中分别加入320 mIU/L胰岛素,10^-9 mol/L ET-1,320mIU/L胰岛素加10^-9 mol/L ET-1, 通过细胞计数和[³H]-TdR掺入量反映VSMC增殖情况, 进行细胞形态学观察。结果: ①胰岛素和ET-1都能促进VSMC的增殖(均为P<0.05); ②胰岛素和ET-1的联合应用使VSMC增殖约是对照组的两倍(P<0.01), 二者的联合作用也明显强于胰岛素(P<0.05)或ET-1(P<0.05)的单独作用; ③3组VSMC均有不同程度出现形态结构的改变, 由收缩表型转为合成表型。结论: 高胰岛素血症和/或ET-1水平增加均有助于糖尿病和胰岛素抵抗致动脉粥样硬化等血管病变的发生和发展。     

缺氧对兔胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的: 观察缺氧对培养的兔胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响及其可能的机制。方法: 采用析因实验设计, 测定在正常或缺氧环境下, 不同浓度的胎牛血清对培养的血管平滑肌细胞数量、[³H]-TdR掺入量、MTT比色以及细胞cGMP水平的影响; 透射电镜观察细胞超微结构。结果: 缺氧组平滑肌细胞的数量、[³H]-TdR掺入量以及MTT比色显著多于常氧组(P<0.01); 电镜下可见缺氧组较正常组细胞器发达, 可见大量分泌胞, 少量髓样变线粒体; 缺氧组平滑肌细胞内的cGMP浓度明显高于常氧组。结论: 缺氧可促进血管平滑肌细胞DNA合成, 促进细胞增殖, 可能与提高细胞内的cGMP水平有关。     

氧化型胆固醇下调血管平滑肌细胞金属蛋白酶组织抑制剂基因表达

目的:研究氧化型胆固醇对血管平滑肌细胞MMP-9及TIMP-1表达的影响。方法:离体培养兔主动脉血管平滑肌细胞,分别用胆固醇、Triol与25-OH负载细胞,狭缝杂交测定TIMP-1mRNA表达,细胞免疫化学测定MMP-9与TIMP-1蛋白表达。结果:Triol与25-OH(1 mg/L,24 h)抑制TIMP-1 mRNA及蛋白表达,对MMP-9蛋白表达无影响。结论:氧化型胆固醇可以下调血管平滑肌细胞TIMP-1基因表达。     

降钙素基因相关肽对人血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：从细胞周期的角度探讨降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）地人血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的影响,揭示其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法：流式细胞仪分析ＣＧＲＰ对ＶＳＭＣ细胞周期的影响,免疫组织化学检测细胞周期蛋白Ｄ１、Ｅ的表达。结果：ＣＧＲＰ使细胞停留于Ｇ０／Ｇ１期,并能降低细胞中周期蛋白Ｄ１、Ｅ的表达。结论：ＣＧＲＰ可能是通过抑制周期蛋白Ｄ１、Ｅ的积累,使人ＶＳＭＣ停留于Ｇ０／Ｇ期,限制细胞周期的     

重组人IL-10抑制TNF-α和PDGF-BB所致大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的:观察重组人白介素10(rhIL-10)对SD大鼠血管平滑肌细胞及血管损伤后新生内膜增殖的影响。方法:培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态,应用流式细胞术测定细胞周期。利用大鼠血管损伤模型,观察rhIL-10对新生内膜增殖的影响。结果:与对照组相比,rhIL-10单独应用对血管平滑肌细胞生长没有影响(P>0.05)。rhIL-10可抑制在TNF-α和血小板源性生长因子分别刺激下的血管平滑肌细胞的生长(P<0.05)。流式细胞术测定的结果显示rhIL-10分别可以使TNF-α和PDGF-BB作用下的VSMC大部分处于G₀/G₁期,与对照组相比有明显差异(P<0.01)。大鼠颈动脉损伤后,rhIL-10治疗组的动脉血管新生内膜/中层面积比低于对照组约45%(P<0.01)。结论:抗炎细胞因子rhIL-10可抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖。