多重PCR技术检测医院感染大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶基因型别

目的了解我地区大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌携带质粒介导AmpC酶的情况及基因型别. 方法用头孢西丁耐药表型筛选阳性可疑菌株,提取耐药质粒,然后采用多重PCR技术检测是否存在质粒介导的AmpC 基因及其基因型别;并对PCR产物进行测序. 结果 7株头孢西丁耐药的大肠埃希菌多重PCR均为阴性,4株肺炎克雷伯菌中3株多重PCR阳性,测序结果均为DHA-1型质粒AmpC酶. 结论多重PCR技术是一种灵敏、特异、快速的检测质粒AmpC酶及其基因型别的好方法;采用该方法在我地区首次检测出产DHA-1型质粒AmpC酶的肺炎克雷伯菌.     

大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌AmpC酶的检测

目的 了解医院大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌产AmpC酶情况.方法 按NCCLS推荐的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)确证试验,对369株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行ESBLs酶的检测,并用改良三维试验、三维试验抑制试验及AmpC酶诱导试验对表型可疑产AmpC酶的菌株进行检测.结果 73株表型可疑产AmpC酶的菌株中检出34株产AmpC酶,大肠埃希菌24株,肺炎克雷伯菌10株,其中有5株大肠埃希菌、2株肺炎克雷伯菌同时产ESBLs酶;2株肺炎克雷伯菌诱导产AmpC酶.结论 产生AmpC酶是大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢类抗菌药物耐药的又一重要机制,实验室应对其检测与监测给予足够重视,以指导临床合理选用抗菌药物、减缓对细菌耐药的选择性压力、避免医院感染的发生和流行.     

大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌质粒β-内酰胺酶检测

目的了解大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产质粒β-内酰胺酶的类型、检测方法及耐药性. 方法用NCCLS确证试验检测超广谱β-内酰胺酶,根据表型、纸片协同试验及头孢西丁三相试验检测AmpC酶. 结果 835株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,共检测出产超广谱β-内酰胺酶菌株220株,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌总ESBLs发生率为26%;根据头孢西丁三相试验结果,表现为产AmpC酶的菌株共有36株,检出率为4.31%,表型鉴别高产AmpC酶,表现为产AmpC酶的菌株共有37株,检出率为4.43%,与头孢西丁三相试验符合率为97.3%;纸片协同试验表现为产AmpC酶的为32株,检出率为3.83%,与头孢西丁三相试验符合率为88.9%. 结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶为主;表型筛选法检测AmpC酶结果可靠、方法简便,易于在临床实验室中推广应用.     

大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌产ESBLs表型与基因型分析

目的 了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌发生率及主要基因型分布特点.方法 采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的纸片扩散法对临床标本中分离的110株大肠埃希菌和94株肺炎克雷伯菌进行ESBLs的表型确定试验,同时分别用聚合酶链反应(PCR)扩增法检测TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-9耐药基因,并对其产物进行序列分析.结果 产ESBLs阳性菌株的检出率分别为:肺炎克雷伯菌占36.2%,大肠埃希菌占42.7%,总检出率为39.7%;ESBLs检出模式以头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸单组为底物阳性率最高,占阳性菌株的66.7%;单用头孢他啶,头孢他啶/克拉维酸一组为底物,会造成大肠埃希菌68.1%和肺炎克雷伯菌64.7%的漏检;耐药基因型分析显示,TEM、SHV、CTX-M-I、CTX-M-2、CTX-M-9基因检出率分别为54.3%、38.3%、21.O%、24.7%、70.4%,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌均以CTX-M型为主要基因型,占91.4%;同时携带>2种耐药基因菌株占71.6%.结论 医院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs菌株携带多种耐药基因严重,需引起临床的高度重视.     

大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌traA、tnp513基因研究

目的为了解大肠埃希菌(ECO)、肺炎克雷伯菌(KPN)traA基因和tnp513基因携带状况。方法应用PCR检测ECO、KPN traA基因和tnp513基因。结果29株ECO traA基因阳性24株(82.8%),tnp513基因阳性24株(82.8%);25株KPN traA基因均阴性,tnp513基因阳性23株(92.0%)。结论ECO、KPN耐药性高可能与traAt、np513高携带率有关。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性分析

[目的]分析从住院患者中分离出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性变化,为临床合理使用抗生素提供依据.[方法]用常规方法分离鉴定病原菌,用K-B法做药物敏感试验.[结果]从2004-2006年,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共检出781株.其中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌占67.2%.3年中ESBLs总的检出率依次为51.6%,60.8%,78%,ESBLs的检出率呈逐年上升趋势.产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的细菌对抗菌药物的耐药率明显高于不产ESBLs的细菌. [结论]本地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs的菌株检出率逐年上升,临床应严格合理使用抗菌药物.防止产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌在医院内暴发流行.     

198株肺炎克雷伯菌和491株大肠埃希菌耐药性分析

目的　探讨肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌ESBLs的耐药性情况 ,为产ESBLs细菌的监控和治疗提供依据。方法　采用MicroscanwatRAway 4 0系统全自动细菌鉴定 /药敏分析仪、双纸片协同试验法和K B纸片扩散法进行产ESBLs菌株鉴定及药敏测定。结果　两年中共分离到肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌 6 89株 ,产ESBLs菌株 77株 ,总检出率为 11.18% ,其中肺炎克雷伯菌检出率 16 .16 % ,大肠埃希菌检出率 9.16 % ;产ESBLs菌株主要分布在ICU、血液科、烧伤病房 ;两种产ESBLs菌株对阿米卡星、亚胺培南均有高度敏感性 ,对头孢唑啉、头孢拉啶、氨苄西林、哌拉西林、阿莫西林 /棒酸、替卡西林、庆大霉素、妥布霉素和奈啶酸均有极高的耐药性 (耐药率 >80 % ) ,高于不产ESBLs组 ,差别有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的产ESBLs菌株在临床分离率较高 ,对多种抗生素具有较高耐药性 ,应加强对ESBLs的检测和预防。     

泌尿系感染产ESBLs大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的耐药性分析

目的 分析泌尿系感染产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的耐药性,为临床合理选用抗菌药物提供依据.方法 收集2009年1月-2010年7月中段尿标本共1019份,采用法国生物梅里埃VITEK-2 Compact全自动微生物分析仪进行细菌学鉴定和药敏试验,采用NCCLS推荐的双纸片和表型确证试验检测产ESBLs细菌.结果 1019份标本中共分离革兰阴性杆菌254株,阳性率为24.9％,其中大肠埃希菌127株占50.0％,肺炎克雷伯菌74株占29.1％;产ESBLs大肠埃希菌50株,检出率为39.4％,产ESBLs肺炎克雷伯菌33株,检出率为44.6％;两组产与非产ESBLs菌株对头孢替坦、亚胺培南、美罗培南及哌拉西林/他唑巴坦表现为低耐药性,耐药率＜24.2％,产ESBLs菌株对其他β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类及磺胺类等药物体表面现出多药耐药,非产ESBLs大肠埃希菌表现为中介或耐药,非产ESBLs肺炎克雷伯菌对氨苄西林和哌拉西林表现为高耐药,耐药率＞97.6％,除头孢呋辛酯外,对其他药物体表面现为低耐药性.结论 泌尿系统感染产ESBLs菌株的耐药性较非产ESBLs菌株高,且呈多药耐药性,是临床抗菌药物治疗失败的一个重要原因;因此,加强产ESBLs菌株的监测,根据药敏试验科学用药,对控制耐药菌的产生和临床治疗具有十分重要的意义.     

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药分析

目的 了解医院近1年半产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的发生率及与细菌耐药性的关系.方法 用API半自动微生物鉴定系统进行鉴定及药敏试验.结果 大肠埃希菌中产ESBLs菌株占22.2%、肺炎克雷伯菌中占21.8%;产ESBLs菌株对青霉素类和头孢类抗菌药物大多耐药,而对亚胺培南与美罗培南敏感,产ESBLs菌株对抗菌药物的耐药率高于非产ESBLs菌株.结论 ESBLs是细菌对青霉素类和头孢类抗菌药物耐药的重要机制,及时监测产ESBLs菌的发生率及其耐药趋势以指导临床用药至关重要.     

肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶的基因型研究

目的检测质粒AmpC酶的基因型及耐药特性,指导临床合理使用抗菌药物,减少耐药菌株的流行及传播。方法选择华中科技大学同济医学院附属同济医院细菌室2004年1-12月,非重复分离肺炎克雷伯菌218株,改良三维试验筛选产AmpC酶菌株,多重PCR和基因测序检测质粒AmpC酶基因型别,琼脂稀释法检测其对15种抗菌药物的最低抑菌浓度。结果改良三维试验检出13株AmpC酶,检出率为5.96%,经多重PCR测定,7株菌约在405 bp出现阳性条带,经基因测序证实为DHA-1型质粒AmpC酶,检出率为3.2%;7株质粒AmpC酶肺炎克雷伯菌对头孢西丁、头孢唑林、头孢呋辛及酶抑制剂联合制剂阿莫西林/克拉维酸全部耐药,对其他头孢类、单环β-内酰胺酶类、含酶抑制剂药物、氨基糖苷类及氟喹诺酮类药物普遍耐药,只有亚胺培南对其显示较好抗菌活性,尚未见耐药菌株出现。结论同济医院肺炎克雷伯菌中检出DHA-1型质粒AmpC酶,检出率为3.2%,产酶株显示多重耐药特性。     

产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌的基因型分析与耐药性检测

目的研究湖南地区产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌的检出和耐药情况,确定其基因型并对其流行病学特征进行研究。方法采用头孢西丁纸片扩散法进行肺炎克雷伯菌AmpC酶表型初筛,提取质粒采用多重PCR技术检测质粒介导AmpC酶基因,设计引物进行结构基因的全长扩增和测序;并应用重复一致序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)进行菌株同源性分析,用琼脂倍比稀释法检测产酶菌的药物敏感性。结果产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌的检出率为19.1%,均为DHA-1型质粒介导AmpC酶;ERIC-PCR结果显示,21株肺炎克雷伯菌有6种图谱类型,产质粒介导AmpC酶菌株呈多药耐药,但对亚胺培南的敏感率为100.0%。结论湖南地区产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌检测率高,其质粒介导的ampC耐药基因为DHA-1型基因,产酶菌株存在质粒传播和克隆传播,治疗相关感染以碳青酶烯类抗菌药物为首选药物。     

肺炎克雷伯菌质粒编码的AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的表型和基因型分析

目的研究肺炎克雷伯菌质粒编码的AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的表型和基因型。方法利用3-氨基苯酚硼酸及ESBLs确认试验检测AmpC酶与ESBLs表型,接合转移试验了解质粒在细菌间的传递;通过质粒的提取、纯化,PCR反应及序列分析,研究肺炎克雷伯菌质粒携带的ampC基因和ESBLs基因类型。结果从肺炎克雷伯菌中获得1条约15 kb大小的质粒,此质粒可通过接合转移方式将耐药性传递至大肠埃希菌,以从肺炎克雷伯菌及接合转移后的接合子细菌中,提取的质粒为模板,均可扩增出DHA型ampC基因及SHV型ESBLs基因,序列分析进一步证实ampC及ESBLs基因型分别为DHA-1型及SHV-12型。结论从肺炎克雷伯菌可转移的质粒中,检测到DHA-1型ampC基因及SHV-12型ESBLs基因。     

大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的基因型和耐药性。方法收集产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的临床菌株30株,应用PCR基因扩增技术及DNA测序方法,分别对其TEM、SHV、CTX-M、VEB、PER编码基因进行分析。结果在30株菌株中有26株为CTX-M型,占86.67%;其中CTX-M-9型共计16株占61.5%,CTX-M-1型8株占30.8%,CTX-M-2型7株占26.9%;同时产CTX-M-1型及CTX-M-2型共4株占15.4%,产CTX-M-2型及CTX-M-9型1株占3.8%,产CTX-M-1型及CTX-M-9型1株占3.8%。结论产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的主要临床流行基因型是CTX-M-9型。     

产AmpC酶和ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药性分析与耐药基因检测

目的 了解浙江省温州、台州地区的肺炎克雷伯菌耐药性及存在状况.方法 采用VITEK 60型和VITEK 32型、肉汤稀释法测定56株产C类头孢菌素酶(AmpC)和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的药敏结果;采用聚合酶链反应(PCR)分析ESBLs、质粒介导的AmpC酶和AMEs基因型.结果 产AmpC酶和ESBLs肺炎克雷伯菌首选亚胺培南(100%敏感),对其他抗菌药物均有不同程度的耐药;20株菌株100%检出TEM基因,90%检出CTX-MⅠ基因,100%检出SHV基因,85%检出DHA基因,15%检出MIR基因,90%检出不同的氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因.结论 产AmpC酶和ESBLs肺炎克雷伯菌表现多药耐药,碳青酶烯类药物亚胺培南是治疗效果最好的药物,同时存在2～6种不同类型的耐药基因.     

多药耐药肺炎克雷伯菌GyrA突变及超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的研究多药耐药肺炎克雷伯菌GyrA突变及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型。方法对2008年分离的46株肺炎克雷伯菌〔(30株分离自零售食品(凉拌菜),16株分离自医务人员鼻腔拭子)〕采用K-B法进行药敏试验,检测多药耐药菌是否产ESBLs,PCR法扩增多药耐药菌环丙沙星耐药相关基因gyrA,ESBLs基因bla-TEM、blaSHV和blaCTX-M,3类整合酶基因(intⅠ1,intⅠ2,intⅠ3)及第1类整合子可变序列;对PCR产物进行测序分析,脉冲场凝胶电泳(PFGE)对多药耐药菌进行分子分型。结果 9株菌为多药耐药菌,3株菌在GyrA的QRDR区83位Ser→Ile,1株菌在GyrA的QRDR区83位Ser→Thr,8株菌产ESBLs,6株菌携带SHV型ESBL,其中3株菌同时携带TEM型ESBL;2株菌携带OKP型ESBLs;未检测到CTX-M型ESBLs,1株菌intⅠ1基因阳性,携带有第1类整合子和耐药基因盒aacA7,PFGE将9株菌分为8个PFGE型,2株菌为同一个PFGE型。结论耐药基因的获得如gyrA基因突变和携带ESBLs基因是肺炎克雷伯菌产生多药耐药的主要机制。     

哈尔滨地区肺炎克雷伯菌质粒型AmpC酶基因型检测及耐药性分析

目的确定哈尔滨地区临床分离产质粒型AmpC酶肺炎克雷伯菌基因型别,分析其耐药表型与基因的关系。方法收集临床分离头孢西丁抑菌环直径≤18mm的肺炎克雷伯菌,用6组PCR特异引物检测AmpC酶基因型别。结果231株肺炎克雷伯菌中,63株头孢西丁抑菌环直径≤18mm,其中产AmpC酶菌26株,占11.3%;PCR检测ACT、DHA和CIT型分别为13、8、5株,有5株菌同时产ACT型和DHA型AmpC酶,未检测到ACC、MOX和FOX型存在;AmpC阳性株对头孢西丁、头孢噻肟、头孢他啶、阿莫西林/克拉维酸、环丙沙星、阿米卡星、亚胺培南的耐药率分别是76.9%、70.2%、53.8%、50.0%、57.7%、38.5%、7.7%。结论哈尔滨地区产AmpC酶主要为ACT、DHA和CIT型,AmpC阳性株对头孢西丁和三代头孢菌素耐药性较高。     

肺炎克雷伯菌耐药性分析及质粒介导的 AmpC酶基因型检测

目的了解肺炎克雷伯菌的耐药性和质粒介导的AmpC酶基因型。方法采用K-B法进行抗菌药物敏感试验,用酶提取物三维试验检测AmpC酶,用聚合酶链反应(PCR)产物测序确定AmpC酶基因型。结果产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阳性率41.90%、AmpC酶阳性率0.95%、ESBLs AmpC酶阳性率2.86%;药敏试验结果显示,对青霉素类、头孢菌素类、酶抑制剂复合剂、氨曲南、氟喹诺酮类均有较高耐药,亚胺培南敏感率100.00%;AmpC酶阳性菌株为质粒介导DHA型AmpC酶。结论可见临床分离的肺炎克雷伯菌中已经出现产质粒介导AmpC酶菌株,其耐药基因可在同种或不同种传播。