高压氧对急性坏死性胰腺炎胰腺腺泡细胞NF-κB活性与血液炎症细胞因子影响的研究

目的探讨高压氧对ANP胰腺腺泡细胞核转录因子NF-κB活性的影响。方法采用5%牛磺胆酸钠胰管逆行注射制备ANP动物模型。SD雄性大鼠40只,按随机分配原则分为ANP高压氧治疗组和ANP空白对照组。采用EMSA法检测胰腺腺泡细胞胞核NF-κB活性、Western-blot法检测胰腺腺泡细胞胞质IκBa活性及ELISA法检测血液IL-2、IL-6、IL-10、TNF-a及ICAM-1含量。结果高压氧在1、3、5及7h均可显著抑制ANP胰腺腺泡细胞胞核NF-κB活性[(24.47±5.39)μmol/Lvs(31.36±5.72)μmol/L、(28.58±4.51)μmol/Lvs(39.44±6.31)μmol/L、(26.47±4.13)μmol/Lvs(33.80±5.96)μmol/L及(20.38±3.79)μmol/Lvs(25.69±4.91)μmol/L](P<0.01);显著增强ANP胰腺腺泡细胞胞质IκBa活性[(8.94±1.43)μmol/Lvs(6.37±1.19)μmol/L、(7.83±1.72)μmol/Lvs(5.91±1.65)μmol/L、(8.31±1.54)μmol/Lvs(6.85±1.37)μmol/L及(8.62±1.12)μmol/Lvs(6.97±0.86)μmol/L](P<0.01);显著抑制血液中炎症细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、TNF-a及ICAM-1活性(P<0.05)。结论高压氧可通过显著抑制ANP胰腺腺泡细胞NF-κB活性,增加胰腺腺泡细胞胞质IκBa活性的能力,减少血液中炎症细胞因子活性,从而抑制ANP引起的过度炎症反应。     

急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织NF-κB活性变化及对其干预研究

目的：探讨NF-κB活化在大鼠急性坏死性胰腺炎（acute necrotizing pancreatitis,ANP）发生、发展中的作用,以及其抑制剂对ANP的预防治疗作用。方法：80只大鼠随机分为3组,即正常对照组（Z组）、胰腺炎组（Y组）和干预组。干预组又分为建模前1h二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）干预组（A组）、建模后1h PDTC干预组（B组）和建模后6h干预组（C组）。再按6、12、24h相应分为不同的时间段组。通过胰管注射5％牛磺胆酸钠建立大鼠ANP模型。干预组按不同时间腹腔注射PDTC。建模后按6、12、24h时间点分批处死大鼠,用酶联免疫吸附测定（ELISA）方法测定血清IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α水平,临床全自动生化仪检测血清淀粉酶,用凝胶迁移率改变分析法（EMSA）测定胰腺中NF-κB的活性。结果：在正常大鼠胰腺组织中几乎测不到NF-κB的活性,与Z组大鼠相比较,Y组大鼠胰腺组织中6～24h NF-κB活性明显增强（P〈0．001）,同时Y组各时间段血清IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α水平也均异常升高（P〈0．001）。建模前使用PDTC后组织NF-κB活性受到明显抑制,血清IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α水平均明显下降（P〈0．05）,A组的抑制效应较B组更为明显,C组抑制效果不明显（P〉0．05）。在ANP中,NF-κB活性的变化与上述细胞因子的表达水平密切相关。结论：NF-κB的异常活化与ANP有明显关系;在ANP中,NF-κB通过对细胞因子的调节而发挥作用。抑制NF-κB的活性可在整体水平上降低上述因子的表达水平,对ANP时多脏器功能不全综合征（MODS）的发生有一定的预防作用。     

急性胰腺炎大鼠胰腺组织核因子-κB动态变化

目的: 观察急性胰腺炎大鼠胰腺组织中核因子-κB (NF-κB)的表达和血清中细胞因子的变化,探讨胰腺组织NF-κB的表达和血清细胞因子的变化关系。方法: 实验动物随机分为5组,正常对照组(Normal组)、急性水肿性胰腺炎6h组(AEP6h组)和急性坏死性胰腺炎3h组(ANP3h)、6h组(ANP6h)、12h组(ANP12h),观察各组血清淀粉酶(Amy)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量及胰腺组织NF-κB的表达。结果: 急性水肿性胰腺炎大鼠TNF-α、IL-6、胰腺组织NF-κB的表达均较正常组明显增高(P<0.01),急性坏死性胰腺炎TNF-α、IL-6及胰腺组织NF-κB表达较水肿性胰腺炎增高(P<0.05~P<0.01),6h达高峰,此后下降。结论: 胰腺组织NF-κB参与急性胰腺炎的发病并呈动态变化;胰腺组织NF-κB表达与TNF-α、IL-6含量呈正相关。     

Ghrelin对重症急性胰腺炎大鼠的保护作用及机制研究

目的观察Ghrelin对重症急性胰腺炎大鼠模型的保护作用，同时探讨其作用机制。方法Wistar大鼠54只，随机分为对照组，模型组，Ghrelin治疗组，每组18只。各组又分3个亚组，分别于造模后6h、12h、24h处死，留取标本。测定各组大鼠血清淀粉酶、TNF-α、IL-6，观察胰腺病理变化，免疫组织化学法检测肝脏NF-κB蛋白活性表达。结果模型组大鼠各时间亚组的血清淀粉酶、TNF-α、IL-6、NF-κB的表达显著升高（P〈0．01），并有明显的胰腺组织学改变，治疗组中6h、12h亚组大鼠较模型组胰腺病理改变减轻，血清淀粉酶、TNF-α、IL-6、NF-κB的表达较模型组降低（P〈0．01），24h亚组胰腺病理、血清淀粉酶变化并不明显（P〉0．05）。结论Ghrelin对重症急性胰腺炎大鼠有明确的保护作用，对其胰酶的释放有抑制作用，并且在炎症反应方面对IL-6及TNF-α有明显的抑制作用，其机制可能与影响了NF-κB的表达，从而干预了炎症信号传导过程有关。     

柴芩承气汤对急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺核因子-κB活化的影响

目的：通过观察柴芩承气汤（Chaiqin Chengqi Decoction,CQCQD）对急性坏死性胰腺炎（acute necrotizing pancreatitis,ANP）大鼠的作用,探讨其治疗机制。方法：将30只SD大鼠随机分成3组：假手术（sham-operated,SO）组、ANP组和CQCQD治疗组。大鼠胆总管内逆向泵入3.5%牛胆酸溶液制备ANP模型。6h后分别行腹腔静脉采血送检,取胰腺组织做病理切片;酶标记免疫吸附测定法检测血浆肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）;HE染色光学显微镜观察胰腺组织病理情况;免疫组织化学染色SP法检测胰腺核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）的活化。结果：ANP组白细胞（white blood cell,WBC）计数和血清淀粉酶（amylase,AMY）值较SO组明显升高（P〈0.05,P〈0.01）,CQCQD组血清WBC计数和AMY水平均较ANP组有所下降（P〈0.05）。ANP组的水肿、炎症浸润、出血、坏死和总积分情况较SO组严重（P〈0.01）;CQCQD组的水肿、炎症浸润、出血和总积分水平均较ANP组降低（P〈0.05）。CQCQD组胰腺NF-κB p65阳性细胞的积分光密度（integraloptical density,IOD）值低于ANP组（P〈0.05）。结论：CQCQD可减少血清TNF-α及IL-6含量,降低胰腺NF-κB的活性,减轻胰腺病理损害。     

抑制炎症反应治疗急性肺损伤的实验研究

目的通过观察急性肺损伤（ALI）大鼠血液和肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒ等炎性细胞因子的变化,探讨抑制炎症反应在治疗急性肺损伤中的作用。方法应用气管内滴入内毒素（LPS）复制大鼠急性肺损伤模型。将48只大鼠随机分成4组：对照组（N组）、LPS组、N-乙酰半胱氨酸（NAC）治疗组（NAC组）、NAC联合地塞米松（Dex）治疗组（NAC＋Dex组）,采用免疫印迹法（Western Blotting）检测NF-κΒ的含量,采用RT-PCR检测肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒmRNA的表达,并采用放免检测血清及支气管肺泡灌洗液（BALF）中的IL-6、TNF-α的含量。结果LPS组大鼠肺病理可见明显的肺损伤表现,NAC组及NAC＋Dex组肺组织病理改变明显减轻;NAC组及NAC＋Dex组肺NF-κB,肺IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒmRNA表达水平及血清和BALF中的IL-6、TNF-α含量明显高于N组（P〈0.01）,而明显低于LPS组（P〈0.05）。结论NAC、Dex等可以抑制炎症反应,减少炎性介质的释放从而减轻肺损伤的程度,达到防治急性肺损伤的目的。     

还原性谷胱甘肽对急性坏死性胰腺炎肺损伤的影响

目的:观察急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肺组织核因子-κB(NF-κB)mRNA,细胞因子(TNF-α,IL-1β,IL-18),髓过氧化物酶(MPO)的变化,探讨还原性谷胱甘肽(GSH)治疗肺损伤的机制. 方法:72只Wistar大鼠随机分成3组: ANP组, GSH组,SO组(假手术组). 于术后6,12,18 h取肺组织供实验用. 免疫组化测定肺中IL-1β,IL-18,TNF-α的表达,比色法测定MPO的活性,RT-PCR检测NF-κB p65 mRNA的表达,胰、肺行组织学观察. 结果:ANP组肺组织NF-κB mRNA,IL-18, IL-1β,TNF-α,MPO的水平升高,NF-κB,IL-1β,TNF-α在12 h达高峰,与SO组相比各时间点均有统计学差异(P＜0.05). GSH治疗后IL-1β,IL-18,TNF-α在各时间点均降低,NF-κB mRNA,MPO在12 h降低(P＜0.05). 结论:ANP时NF-κB,IL-18,IL-1β,TNF-α及MPO均参与了肺损伤,GSH能够抑制肺NF-κB活化,促炎因子的表达及中性粒细胞的聚集,对肺损伤有保护作用.     

消退素RvD1抑制LPS诱导的大鼠胰腺腺泡细胞炎性反应的实验研究

目的 探讨消退素RvD1对脂多糖 (LPS)诱导的胰腺腺泡细胞（AR42J）炎性效应的干预作用,并分析其机制。方法 将AR42J细胞分为6组:RvD1（100 nmol/L)组,LPS组, RvD1 （1、10、100 nmol/L）+LPS组和生理盐水对照组。其中LPS组和RvD1+LPS组以100 mg/L LPS刺激AR42J细胞,构建急性胰腺炎的体外模型,RvD1+LPS组在建模前先用不同浓度 （1、10、100 nmol/L）RvD1对AR42J细胞预处理30 min。实时荧光定量PCR检测各组AR42J细胞TNF-α、IL-6、及NF-κB活性亚基p65的mRNA表达;ELISA检测培养液上清中TNF-α、IL-6蛋白浓度的改变;流式细胞术检测AR42J细胞的NF-κB激活率。结果 RvD1可以抑制LPS诱导的AR42J炎症细胞因子TNF-α、IL-6 mRNA及蛋白的表达, 且呈剂量依赖方式。RvD1同样以剂量依赖方式抑制LPS诱导的AR42J细胞p65 mRNA表达及NF-κB激活率。结论 RvD1可以呈剂量依赖方式抑制LPS诱导的腺泡细胞NF-κB激活,进一步抑制TNF-α、IL-6等细胞因子的分泌,从而抑制胰腺腺泡细胞的炎性反应。     

生长激素对急性坏死性胰腺炎大鼠肠粘膜损害NF-κB表达的影响

目的:观察急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肠粘膜绒毛细胞(IMN)核因子κB(NF-κB)及其介导的细胞因子的变化,探讨其在ANP并发肠道衰竭中所起的作用,并观察生长激素(GH)对NF-κB活化及细胞因子的下调作用。方法:36只SD大鼠随机分成正常对照组,ANP组,GH处理组。采用5%牛磺胆酸钠逆行性胰胆管注射制备ANP动物模型,GH处理组在造模前30min经尾静脉注射GH(0.75U/kg)。术后6h处死各组动物,行末端回肠灌洗,检测末端回肠灌洗液(TILF)中TNF-α、IL-1β、iNOS、ICAM-1和MCP-1含量,检测肠粘膜细胞中NF-κB活性水平,并行肠粘膜组织病理学检查。结果:对照组末端回肠组织未见病理改变,ANP组和GH处理组末端回肠组织均出现充血、水肿、炎性渗出等病理改变,但GH处理组病变程度轻与ANP组;ANP组TILF的TNF-α、IL-1β、iNOS、ICAM-1和MCP-1含量较正常对照组明显升高。GH处理组肠粘膜NF-κB活化细胞明显少于ANP组;ANP组,GH处理组IMN中NF-κB的表达活性呈负相关。结论:NF-κB活化及其介导的细胞因子过度表达参与了ANP大鼠肠粘膜损伤,GH能显著降低肠粘膜组织炎性细胞因子、粘附分子和趋化蛋白的表达,减少NF-κB活化,进而减轻肠粘膜损伤。     

核转录因子-κB及肿瘤坏死因子-α在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及NAC对其表达的影响及对视网膜的保护作用

目的探讨核转录因子-κB（NF—κB）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达及N-乙酰-L-半胱氨酸（N—acetylcysteine）对其表达的影响及对视网膜的保护作用。方法建立结扎左侧颈总动脉的大鼠视网膜缺血再灌注模型，60只SD大鼠随机分为缺血再灌注组和缺血再灌注＋NAC组。每组按再灌注后不同时间段分为1、6、12、24、48和72h组，每组5只，以原位杂交法检测视网膜中NF—κB和TNF-α的表达，每只大鼠处死前行视网膜电图（ERG）检测。并计算出左／右眼ERG的比值。结果缺血再灌注组在6h开始检测到NF-κB和TNF—α的表达，在24h表达最强，以后逐渐减弱。缺血再灌注＋NAC组在再灌注6h未能检测到NF-κB和TNF-α的表达，在第12h有NF-κB和TNF-α的表达，24h表达最强，但低于缺血再灌注组（P〈O．05）。缺血再灌注组在再灌注6h后各期ERG相对恢复率明显低于缺血再灌注＋NAC组（P〈0．05）。结论NF-κB及其诱导的TNF-α在视网膜缺血再灌注损伤中发挥重要作用，NAC可能通过抑制NF-κB的活性减轻视网膜缺血再灌注损伤。