棉酚抑制仓鼠精子顶体酶类活性及其与受精能力的关系

为了预防棉酚引起生育力不可逆的问题,我们研究了棉酚对精子顶体酶类活力与其受精能力之关系.结果表明棉酚对体外仓鼠精子穿透牛宫颈粘液及受精率有明显的抑制作用.喂服棉酚6周后,它可明显地抑制仓鼠精子的受精率,延缓睾丸提取物扩散颗粒细胞的能力,提示透明质酸酶和其他精子顶体酶类可能受到抑制.此外棉酚还可显著降低精子顶体酶和芳香基硫酸酯酶活力.这些结果表明:棉酚抑制仓鼠精子顶体酶活力与其受精率的下降相一致,其抑制作用是可逆的,并与所用棉酚剂量和服药时间呈相关性.据此可得出结论,精子顶体酶活力可用来作为监护棉酚引起不育的指标.     

醋酸棉酚对公羊、牛精子膜钙的运载和 ATP 酶活性的影响

<正> 棉酚除了作用于睾丸外,还直接作用成熟精子,如抑制精子运动,对果糖的利用,影响乳酸脱氢酶—C_4的活性和顶体反应。根据棉酚的这些以微摩尔(μM)浓度的直接作用,有人提出可作为阴道杀精剂。H.Breilbart 等人对μM 浓度的棉酚作用进行了研究,检测了醋酸棉酚对精子膜的Mg-ATP 酶,Ga-Mg-ATP 酶和膜的钙摄入量的影响。作者用10μM 棉酚处理时,几乎可完全抑制以上三种参数。为了测定更高浓度棉酚的影响,作者通过ATP 依粒性钙泵对分离的精子膜囊泡进行钙负载,然后加入棉酚,观察钙的摄入情况。棉酚浓度为10μM 时,外加钙的摄入抑制为85%,     

消旋棉酚及其旋光异构体对小鼠乳酸脱氢酶(LDH)抑制作用的比较研究

本文用消旋棉酚及其旋光异构体比较研究了对纯化小鼠肝脏LDH-A_4,心脏LDH-B_4和睾丸LDH-C_4的抑制作用。其抑制程度与实验温度和棉酚剂量有关。37℃时的抑制作用比25℃时强得多。棉酚低浓度(1～4μM)时三种酶对同一种棉酚的反应有明显的不同,而在较高棉酚浓度(20～100μM)时棉酚对三种酶的抑制作用大体相同。对同一种酶来说,消旋棉酚,右旋棉酚和左旋棉酚对LDH的抑制作用并无差异。结论是,棉酚及其旋光异构体并不特异地抑制LDH-C_4,而在离体试验中,不能反映棉酚在体内试验中所表现的光学立体结构特异性。     

bcl～2反义基因调控用于人子宫颈癌体外治疗的研究

目的 探讨ｂｃｌ－２反义脱氧寡核苷酸（ＯＤＮ）及反义ＲＮＡ对人宫颈癌体外治疗的效果。方法 应用反义技术进行人宫颈癌Ｈｅｌａ细胞生长抑制及凋亡诱导,结果 Ｈｅｌａ细胞中ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ及蛋白均呈高表达。ｂｃｌ－２反义ＯＤＮ可有效抑制Ｈｅｌａ细胞生长及降低其内源性ｂｃｌ－２蛋白的表达,同时诱导其凋亡,ｂｃｌ－２反义ＯＤＮ浓度为１０μｍｏｌ／Ｌ时抑制效果最明显,抑制作用在转染后２４ｈ效果最明显,持续至     

卵巢癌细胞分泌转化生长因子－β1的雌激素调节及其与细胞增殖的关系

目的：观察在不同浓度的雌激素作用下，卵巢癌细胞转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）的分泌调节及其与细胞增殖的关系。方法：利用Ｗｅｓｔｅｒｎ斑点杂交与３Ｈ－胸腺嘧啶核苷酸掺入率测定技术，检测体外不同浓度（１０－１３ｍｏｌ／Ｌ～１０－５ｍｏｌ／Ｌ）的１７－β雌二醇（Ｅ２）作用下，卵巢癌ＡＯ与３ＡＯ细胞株ＴＧＦ－β１的分泌量及其细胞增殖的情况。结果：ＡＯ细胞在Ｅ２的作用下，ＴＧＦ－β１的分泌量及细胞增殖状况均呈剂量浓度反应，在低浓度（１０－１３ｍｏｌ／Ｌ）和高浓度（１０－５ｍｏｌ／Ｌ）的Ｅ２作用下，ＴＧＦ－β１的分泌量明显增加，而细胞增殖明显受抑制，两者呈负相关。３ＡＯ细胞在同样处理下，ＴＧＦ－β１的分泌与对照组相比无明显改变，而细胞增殖则呈剂量浓度反应，两者无明显相关性。结论：ＡＯ细胞存在ＴＧＦ－β１的自分泌环调节机制，在体外受到雌激素的调节，该机制可能参与了细胞的增殖调节。而同样条件下，３ＡＯ细胞的ＴＧＦ－β１的自分泌不受雌激素的调节，且与细胞增殖调节无关     

棉酚衍生物中的酚醛类和其它化合物的体外杀精作用

用金黄仓鼠附睾尾部精液，比较了４０个棉酚衍生物中酚醛类化合物的体外杀精作用，发现２５个化合物对精子有杀灭作用，其中１４个化合物的杀精作用强于棉酚。该结果提示酚基或酚醛基是这类化合物具有体外杀精作用的重要活性基团。对杀精作用较强的６个化合物，用不同种属动物及人精液进行比较；表明ＮＣ－００９与ＮＣ－０１０的体外杀精作用最强，它们对人精子的杀精作用（６．１×１０－５Ｍ）约为棉酚（９．６×１０－３Ｍ）的１００倍，略强于ＮＰ－９（１．９×１０－４Ｍ）。不同种动物的精子敏感性存在种属差异，且亦随化合物而异。大鼠、狗和人的精子对ＮＣ－００９与ＮＣ－０１０较为敏感（其杀精强度分别为；９．５×１０－５、６．１×１０－５与６．１×１０－５Ｍ）；小鼠、金色仓鼠和兔精子则相对不敏感。     

卵巢癌细胞分泌转化生长因子—β1的雌激素调节及其与细胞…

目的：观察在不同浓度的雌激素作用下，卵巢癌细胞转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）分泌调节及其与细胞增殖的关系。方法：ｅｓｔｅｒｎ斑眯杂交与＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷酸掺入率测定技术，检测体外不同深度（１０＾－１３ｍｏｌ／Ｌ－１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ）的１７－β雌二醇（Ｅ２）作用下，卵巢癌ＡＯ与３ＡＯ细胞株ＴＧＦ－β１的分泌量及其细胞增殖的情况。结果：ＡＯ细胞在Ｅ２的作用下，ＴＧＦ－β１的分泌量及细胞增殖状况     

脐血胆红素增加预测新生儿黄疸的价值

早期诊断新生儿黄疸对防治核黄疸具有重要意义。本文测定了１６６例足月正常新生儿脐静脐血清胆红素浓度和经皮胆红素水平。结果表明：新生儿病理性黄疸发生率为３４．９４％，当脐血胆红素浓度〈２０μｍｏｌ／Ｌ时，黄疸发生率为１２．６０％，而≥４５μｍｏｌ／Ｌ时，黄疸发生率高达８１．８２％。即随着脐血胆红素浓度的增加，新生儿病理性黄疸的发生率相应增高。提示：脐血胆红素测定能够更早地预测新生儿病理性黄疸，为早期诊     

顶体蛋白酶抑制剂KF-950对大鼠精子的影响

本文采用体外杀精实验检查ＫＦ－９５０对大鼠精子活力的影响和明胶底物膜法测定 ＫＦ－９５０对精子顶体蛋白酶活性的抑制作用。结果表明,ＫＦ－９５０与大鼠精液作用 ２０ ｓｅｅ 及 １２０ ｓｅｅ,最低杀精浓度分别为 １． ５６±０． １３ ｍｇ／ｍｌ和 ０． ７３±０． ０７ ｍｇ／ｍｌ,其杀精能力 明显低于壬苯醇醚（Ｐ＜０．０１）;当ＫＦ－９５０浓度为１× １０－１２ｍｇ／ｍｌ时,平均晕轮阳性率 （％）及平均晕轮直径（μｍ）分别为８３．００±７．１０及１８．２７±１．９４（与对照组比较Ｐ＜ ０．０１）,完全抑制浓度为 １×１０－３ｍｇ／ｍｌ。抑制平均晕轮阳性率和平均晕轮直径的半数有效 浓度ＥＤ５０分别为４．１５×１０－７ｍｇ／ｍｌ和２．３４×１０-7 ｍｇ／ｍｌ。本实验证明ＫＦ－９５０对精子顶 体蛋白酶具有高效抑制作用,而杀精子作用较弱,是一种新型的顶体蛋白酶抑制剂。     

米非司酮对人绒毛膜癌细胞株体外作用的观察

目的 探讨米非司酮对人绒毛膜癌细胞株ＪＡＲ的作用。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法,观察１、５、１０、２０μｍｏｌ／Ｌ的米非司酮对ＪＡＲ细胞的杀伤活性,通过免疫组化及酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）检测用药后,ＪＡＲ细胞均有杀伤作用,并呈剂量依赖性,以２０μｍｏｌ／Ｌ浓度的米非司酮作用最强,杀伤率达７３．１９％。５μｍｏｌ／Ｌ的米非司酮与ＪＡＲ细胞作用７２小时,Ｋｉ－６７抗原阳性率明显下降,第３天     

Effect of optical isomers of gossypol on mammalian spermatozoa: an in vitro study

Human, bull and monkey spermatozoa were treated with different optical isomers of gossypol in vitro. The spermatozoa (concentration 50 x 10(8)) were incubated with gossypol for 15, 30, 45 and 60 min. at 37 degrees C. The concentration of gossypol employed in the experiment was from 5-50 micrograms/ml. A marked inhibition in sperm motility was observed following gossypol treatment; levorotatory gossypol had more pronounced effect on sperm motility in comparison to dextrorotatory and racemic gossypol. Scanning electron microscope study revealed degenerative changes in the sperm head surface. Dextrorotatory gossypol, hitherto known to be non-effective in suppressing the fertility in vivo was found to be equally effective in inhibiting the motility and LDH-X activity of the spermatozoa. Both racemic and dextrorotatory gossypol inhibited fructolysis in bull spermatozoa. Our data suggest that whatever the mechanism of action of enantiomers of gossypol on sperm motility, fructolysis and LDH-X may be, it is evidently clear that dextrorotatory gossypol is equally active in inhibiting the sperm motility and enzyme active in vitro. The action of optical isomers of gossypol on spermatozoa in vitro, appears to be unrelated to the mechanism of orally administered gossypol.     

醋酸棉酚对大鼠初级精母细胞DNA含量的影响

本文报导棉酚对大鼠睾丸初级精母细胞DNA 含量的影响和体外抑制DNA合成试验的结果。大鼠服棉酚(30毫克/公斤/日)4及6周后,初级精母细胞核中DNA 的含量较对照组明显减少。其含量分布直方图主峰左移,不再呈典型的正态分布。体外抑制试验表明,当反应液中棉酚浓度为6微克分子时,DNA 合成受抑制率为12%,20微克分子时为20%,60微克分子时抑制率达最高峰值(23%)。根据上述结果,对棉酚干扰生精过程中DNA 代谢及其与抗生育作用的可能关系进行了分析和讨论。     

Studies on the male antifertility agent gossypol acetic acid: in vitro studies on the effect of gossypol acetic acid on human spermatozoa

The hypothesis that gossypol (an active ingredient associated with cottonseed oil) affects enzymes and other constituents of spermatozoa, resulting in alterations in motility and sperm viability after in vitro treatment, was tested using human semen samples. At a gossypol acetic acid concentration (and a 30 minute incubation) of .01 mcg, the percent motility was 71+ or -2.5 (P .01); at .1 mcg concentration, percent motility was 69+ or -4 (P .01); at 1 mcg motility was 66+ or -5 (P .005); at 10 cg, motility was 38.5+ or -3.5 (P .001). Control values for sperm motility were 77+ or -3. These investigations suggested that treatment with gossypol depletes production of adenosine triphosphate in the sperms and thus their metabolism does not proceed normally, rendering them immotile. It appears that the high vulnerability of the testis to gossypol and the uncoupling of oxidative phosphorylation in the respiratory chain of mitochondria of germ cells may be the mechanism responsible for infertility induction.     

五味子乙素降低苯并芘对HTR-8/SVneo细胞毒性作用的体外研究

目的：探索苯并芘[Benzo（a）pyrene,BaP]是否对人早孕胎盘绒毛膜外滋养层细胞HTR-8/SVneo具有毒性作用以及五味子乙素（Schisandrin B,Sch B）是否可以降低BaP的毒性作用。方法：以HTR-8/SVneo细胞为载体,构建BaP对HTR-8/SVneo细胞的染毒模型和Sch B对HTR-8/SVneo细胞的保护模型,利用MTS细胞增殖实验检测不同浓度的BaP单独给药和Sch B联合BaP给药对HTR-8/SVneo细胞增殖的影响。结果：0.01,0.1 μmol/L浓度的BaP并不抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖（P＞0.05）,而1,10,100 μmol/L浓度的BaP对HTR-8/SVneo细胞的增殖有抑制作用（P＜0.05）且随着其作用时间（6,12,24,36和48 h）的延长而增大,但作用24 h后其抑制作用趋于平衡,通过绘制HTR-8/SVneo细胞的生长曲线发现,20 μmol/L的BaP对HTR-8/SVneo细胞作用24 h后的抑制作用最佳,其抑制率达到24.95%;0.01,0.1,1 μmol/L浓度的Sch B并未抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖（P＞0.05）,高于10 μmol/L的Sch B抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖（P＜0.05）。0.25,0.5,1,2 μmol/L的Sch B可以降低BaP的毒性作用且对HTR-8/SVneo细胞没有毒性作用,且其保护作用随着浓度增加而增大（P＜0.05）,其中2 μmol/L的Sch B对HTR-8/SVneo细胞的保护作用最强,保护率达到17.84%。结论：BaP对HTR-8/SVneo细胞具有毒性作用,而一定浓度范围内的Sch B可以有效地降低BaP的这种毒性作用。     

邻苯二甲酸-单-乙基己基酯对人卵巢颗粒细胞活性及分泌功能的影响

目的研究邻苯二甲酸-单-乙基己基酯[Mono-(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP]对人卵巢黄素化颗粒细胞的活性及分泌功能的影响。方法选取北京大学人民医院行体外受精-胚胎移植患者19例,收集其卵泡液,提取颗粒细胞进行原代细胞培养72h,并分为低剂量组(10例,MEHP25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)和高剂量组(9例,MEHP300μmol/L、500μmol/L),两组均于加药后48h,采用细胞计数试剂盒检测颗粒细胞的活性、放免法检测雌二醇及孕酮水平,均与DMEM/F12培养液+二甲基亚砜(对照组)比较。结果高剂量组中,当MEHP≥500μmol/L时,颗粒细胞活性较对照组明显降低(P=0.001);当MEHP≥500μmol/L时,雌二醇水平较对照组明显降低(P=0.000);低剂量组中,当MEHP为50μmol/L、100μmol/L时,孕酮水平较对照组明显降低(P分别为0.007和0.02);高剂量组中,当MEHP为500μmol/L时,孕酮水平明显降低(P=0.002)。结论高浓度MHEP(≥500μmol/L)不仅降低人卵巢颗粒细胞活性,而且抑制了雌孕激素合成的功能。但目前人体暴露范围内(≤50μmol/L)的MHEP对颗粒细胞活性及雌激素合成无影响,对孕激素合成有明显抑制作用。     

Effect of gossypol on the fertility of male rats.

Thirty male rats were grouped into 5 groups of 6 animals each. Animals in groups II-V were given gossypol at a dose of 5 mg/kg, 10 mg/kg, 20 mg/kg and 40 mg/kg body weight per day for 45 days respectively. Animals of group I served as control. A significant decrease in body weight after administration of 40 mg/kg body weight of gossypol was observed; low doses of gossypol, however did not affect the body weight. Testis, epididymis, prostate and seminal vesicles weights decreased gradually with the increasing doses of gossypol. With the increasing doses of gossypol, a marked decrease in the vas deferens sperm motility was observed. At 40 mg/kg dose there was a total inhibition of sperm motility. Histological studies after 5 mg/kg revealed no apparent sign of degeneration, while after 10 mg/kg dose the changes in the individual cell types were accompanied by overall disorganisation of the germinal epithelium involving displacement of the spermatocytes. The rats treated with 20-40 mg/kg gossypol showed a pronounced deleterious effect on the histological structure of the testis. The drug effect was dose dependent developing sequentially; from the uppermost layer of elongated spermatids affecting round spermatids and finally spermatocytes. Quantitatively the ratios of pachytene spermatocytes: resting spermatocytes, stage 7 spermatids: pachytene spermatocytes, and stage 19 spermatids: stage 7 spermatids and tubular diameter and germinal height decreased significantly. The activities of glucose-6-phosphatase, fructose 1, 6-diphosphatase, glucose-6-phosphate isomerase in testis decreased significantly at high dose (40 mg/kg), while the activity of amylase and glycogen content increased significantly with the increasing doses of gossypol.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

5-羟色胺对人胎盘滋养细胞钙通道的影响

目的探讨5-羟色胺对胎盘滋养细胞钙通道的影响。方法将体外培养的胎盘滋养细胞分成3组,低深度5-羟色胺组(5-TH,1μmol/L)、高浓度5-TH组(10μmol/L)和对照组。采用全细胞膜片钳方法,在胎盘滋养细胞外液中分别加入L-型钙通道阻滞剂、T-型钙通道阻滞剂、钠通道阻滞剂及5-TH,检测其电流值。结果在-60～-50mV电压时,胎盘滋养细胞L-型钙通道开放,-40～-30mV时,其最大峰值电流为(82.31±6.46)皮安(pA)。加入尼莫地平(Nimodpine)可阻断大部分电流。氟桂利嗪(Flunari-zne)和替曲朵辛(TTX)不能抑制该电流成分。加入1μmol/L和10μmol/L5-TH,其峰值电流分别为(104.77±10.84)pA和(117.16±9.67)pA,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);加入5-TH(1μmol/L)和Nimodpine、5-TH(10μmol/L)和Nimodpine后,峰值电流分别为(85.35±6.54)pA和(89.42±7.62)pA,与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论5-TH可激活胎盘滋养细胞L-型钙通道,促使钙电流值增加。     

丁内酯-Ⅰ对小鼠卵母细胞体外成熟及发育能力的影响

目的:观察丁内酯-Ⅰ(BL-Ⅰ)对小鼠未成熟卵的体外成熟及发育能力影响。方法:用不同浓度的BL-Ⅰ培养液培养小鼠未成熟卵3h或6h,观察卵母细胞生发泡破裂(GVBD)的发生率。将6.25μmol/L和100μmol/L的BL-Ⅰ培养液分别培养未成熟卵3h和6h,以抑制其核的成熟,然后移入成熟培养液继续培养成熟,行体外受精,观察受精率和胚胎发育至囊胚的能力,并与对照组进行比较。结果:BL-Ⅰ培养液培养3h时,6.25μmol/LBL-Ⅰ就可抑制未成熟卵发生GVBD;培养6h时,100μmol/L才能抑制未成熟卵的GVBD。两种情况下,各组间的成熟率无差异。6.25μmol/L组卵母细胞的受精率(83.1%)和囊胚形成率(25.4%)虽低于体内成熟组(93.3%和46.4%),但显著地高于体外成熟组(59.9%和4.9%)。结论:BL-Ⅰ能可逆性地抑制小鼠未成熟卵的核成熟且不影响其成熟能力,适量的BL-Ⅰ对核成熟的短暂性抑制可显著提高小鼠未成熟卵的发育能力。