VEGF在子宫内膜异位症在位内膜的表达及意义

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）在子宫内膜异位症（EMs）在位内膜与对照组子宫内膜表达的差异。材料与方法取EMs在位内膜16例、正常子宫内膜（对照组）16例，以免疫组化染色法，研究VEGF在不同月经周期的表达。结果（1）VEGF在对照组子宫内膜基质及腺体细胞均有较高的阳性表达，增殖期高于分泌期（P〈0．05）。（2）在EMs在位内膜中，VEGF于增殖期在基质及腺体中表达降低，而于分泌期在基质细胞中表达明显升高（P〈0．05）。结论VEGF在EMs在位内膜分泌期基质中的高表达，提示EMs在位内膜基质细胞在分泌期侵袭、种植能力增强，验证了EMs“在位内膜决定论”的新概念。     

白细胞介素-1β增强子宫内膜基质细胞表达RANTES的研究

目的：探讨白细胞介素-1β（IL-1β）与正常T细胞表达和分泌的调节活化蛋白（RANTES）的相互关系及其在子宫内膜异位症（EMs）发病中的作用。方法：培养EMs在位内膜基质细胞作为体外实验模型,分别加入浓度为0．1、1．0、10．0ng／ml的IL-1β后采用RT-PCR、ELISA法从转录及转录后水平观察趋化因子RANTES的表达。结果：RT-PCR结果显示,基础状态下EMs在位内膜基质细胞有RANTESmRNA的表达。0．1ng／ml的IL-1β作用4h即可明显增加细胞RANTES mRNA的表达（P〈0．05）,1．0ng／ml的IL-1β作用8h时作用达高峰,随着时间的递增,mRNA水平呈递减趋势,且各浓度组之间差异无显著性。ELISA结果显示,基础状态下细胞培养上清液内有微量RANTES蛋白的表达。0．1ng／ml浓度的IL-1β作用4h即可显著诱导细胞分泌RANTES,1．0ng／ml浓度的IL-1β作用12h培养上清液中RANTES含量达高峰。结论：IL-1β可增强EMs在位内膜基质细胞对RANTES的基因表达,二者在EMs的发病过程起重要作用。     

hCG对人卵巢癌细胞株3AO体外生长和细胞周期的影响

目的 研究人绒毛膜促性腺激素（hCG）对卵巢癌细胞株3AO体外生长及2细胞周期的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术（FCM），观察卵巢癌细胞株3AO在加入含不同浓度hCG培养液后细胞活性和生长周期的变化。结果 （1）浓度为0．1，1μg/ml的hCG可刺激3AO细胞株的生长，生长率分别增加到109％和121％；hCG浓度为10μg/ml时对细胞的生长几乎滑有影响，浓度为100μg/ml则抑制细胞生长。（2）hCG可使3AO细胞株G0/G1期细胞比例下降，G2／M期细胞比例增加，S期细胞变化不明显。结论 hCG在卵巢癌的发生和发展过程中有潜在的促进作用。     

姜黄素对胰腺癌细胞体外生长及其细胞周期的影响

目的探讨姜黄素对人胰腺癌细胞PANC—1株体外生长及其细胞周期的影响。方法MTT法检测肿瘤细胞活性，流式细胞仪（FCM）进行细胞周期时相分析。结果MTT结果表明姜黄素对PANC-1细胞具有细胞毒作用。30μM、60μM浓度的姜黄素对细胞增殖的抑制率分别为45．9％、78．1％，10μM浓度抑制作用较小。姜黄素处理24h，分裂相细胞的比例可达8～10％。FCM结果显示姜黄素处理24h时，主要使细胞阻滞于S，G2／M期，使此期的细胞比例增加。而GO／l期的细胞比例减少。处理48h后，G2／M期的细胞比例反而降低，部分可能由于G2／M期细胞并发凋亡所致。结论姜黄素可抑制胰腺癌PANC-1细胞的生长，其机制可能与干扰细胞周期有关。     

孕激素对孕激素受体阴性的子宫内膜腺癌细胞JEC增殖的影响

目的探讨不同浓度的孕激素（P）对孕激素受体（PR）阴性的子宫内膜腺癌细胞系JEC细胞增殖和细胞周期的影响。方法取JEC细胞进行体外培养，加入含不同浓度P的培养液，采用细胞计数法、四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术（FCM）的方法，观察JEC细胞的增殖活性和细胞周期时相变化；同时用免疫细胞化学染色及图像分析，检测JEC细胞在加入P前后细胞周期调控蛋白cyclin A表达的变化。结果①10^-5、10^-6、10^-7、10^-8 mol／L的孕激素作用JEC细胞后，经细胞计数法与MTT法研究得知，P抑制JEC细胞生长而使其细胞数明显减少。②P作用JEC细胞48h及72h后，可使G0/G1期的细胞比例增加，S及G2/M期的细胞比例减少；③P可明显抑制JEC细胞内cyclin A蛋白的表达。结论PR阴性的JEC细胞生长可受到孕激素的调控，一定浓度的孕激素对JEC细胞的生长产生明显的抑制效应，其作用可能具有剂量和时间效应性。研究还提示，这种调控作用可能与cyclin A表达的变化有关。     

粉防己碱对人乳腺癌细胞 MDA - MB -435S的作用

目的：探讨粉防己碱（Tet）对雌激素受体（ER）阴性人乳腺癌 MDA - MB -435S 细胞的作用。方法 MTT 方法检测 Tet 对 MDA - MB -435S 细胞体外生长的影响。用碘化丙啶单染流式细胞术测定法检测 Tet 对 MDA - MB -435S 细胞周期的影响。结果 Tet 对 MDA - MB -435S 细胞生长的抑制作用随着 Tet 浓度的增加、时间的延长而增大,Tet 剂量与时间之间存在交互作用（P ﹤0.01）。Tet 作用于 MDA - MB -435S 细胞24 h 后,G0/ G1期细胞比例均显著增多,随 Tet 浓度增加,G0/ G1期细胞比例增多;S 期、G2 M 期细胞比例均明显降低,并且随 Tet 浓度增加,S 期、G2 M 期细胞比例降低。结论 Tet 对雌激素受体阴性乳腺癌细胞系 MDA - MB -435S 增殖有明显抑制作用,且存在浓度和时间依赖性。Tet 阻滞 MDA - MB -435S 细胞于 G0/ G1期,降低 S 期比例,抑制 DNA 合成是其抑制乳腺癌细胞生长的机制之一。     

全反式维甲酸对卵巢癌细胞系作用的研究

目的：探讨全反式维甲酸（ATRA）对人卵巢细胞生长的抑制作用及可能机制。方法：应用MTT比色法、LDH检测及流式细胞仪周期分析对药物作用后的人卵巢癌腹水细胞系（COC1、COC2）、卵巢癌上皮细胞系（CA-OV3）3种卵巢癌细胞系进行检测。结果：ATRA能抑制卵巢癌细胞生长，当浓度达10μmol/L时，G0、G1期细胞比例增加，G2M、S期细胞比例下降，细胞增殖速度较对照组减缓。MTT及LDH检测提示在ATRA30μmol/L时，癌细胞抑制率最佳。结论：ATRA应用可有效抑制卵巢癌细胞增殖，促进细胞分化，从而达到抑瘤作用，并在ATRA10-30μmol/L时，作用最佳。     

雌二醇促进甲状腺乳头状癌细胞生长

目的：探讨雌激素对甲状腺癌细胞生长的影响及其作用机制。方法：采用原代细胞培养获得甲状腺乳头状癌细胞，用不同浓度的β-雌二醇与甲状腺乳头状癌细胞共培养，4-甲基偶氮四唑蓝（MTT）法观察甲状腺癌细胞增殖情况，流式细胞仪DNA定量法分析雌二醇对甲状腺癌细胞细胞周期的影响，半定量RT-PCR法测定雌激素对甲状腺癌细胞CyclinD1 mRNA表达的影响。结果：β-雌二醇刺激甲状腺乳头状癌细胞的增殖，并具有时间和浓度依赖性（P〈0．05）；β-雌二醇刺激甲状腺癌细胞后G0-G1细胞的比例减少，S期细胞增加（P〈0．05）；CyclinD1mRNA的表达升高（P〈0．05）。结论：雌二醇促进甲状腺癌细胞从G1期向S期的转化而促进甲状腺癌细胞生长。     

紫杉醇诱导黑色素瘤细胞凋亡的研究

目的：探讨紫杉醇体外抑制人黑色素瘤细胞（A375细胞）增殖及诱导凋亡作用机制。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法测定细胞活力；光镜和电镜观察细胞形态变化；流式细胞术（FCM）检测细胞周期和凋亡率。结果：紫杉醇通过诱导细胞凋亡抑制A375细胞生长。并呈时间和剂量依赖性（P〈0．01）；当0．01-1μmol／L紫杉醇作用于培养细胞24h后即可引起猾亡小体等典型细胞凋亡形态学改变；FCM分析显示：紫杉醇在0．001μmol／L即可诱导细胞凋亡，但不影响细胞周期，在0．01μmol／L时使G0／G1期细胞明显减少，在0．1μmol／L以上时使细胞发生G2／M期阻滞。结论：紫杉醇具有抑制A375细胞生长和诱导细胞凋亡作用。不同浓度紫杉醇诱导细胞凋亡的作用机制不同。     

生长激素对结肠癌肿瘤细胞体外影响

目的: 检测生长激素对体外培养的结直肠癌细胞的影响,并探讨其作用机制?方法:结肠癌细胞株Lovo细胞随机分组,加或不加不同浓度的生长激素孵育不同时间后,以MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞周期,Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡情况?结果:MTT法测定表明,生长激素对Lovo细胞有明显的促进增殖效应,12~24 h起效,48 h时达高峰,生长激素达到一定浓度后,其促增殖作用不再增加?流式细胞仪检测生长激素对结肠癌细胞的影响显示:浓度为200 ng/ml的生长激素作用Lovo细胞24 h后,G0/G1细胞比例下降,S期细胞比例明显上升,G2/M期细胞比例稍上升,凋亡指数无明显变化(P=0.187);72 h时, G0/G1期细胞下降更为明显,S期细胞比例上升亦更为明显,G2/M期细胞上升明显,凋亡细胞比例明显增高(P < 0.01)?结论:生长激素对Lovo细胞有明显的促增殖作用,并有受体饱和效应?该作用是通过改变细胞周期分布,促进G0/G1期细胞向S期?G2/M期细胞转变实现的?     

神经生长因子对子宫腺肌病基质细胞生存率及雌激素受体α表达的影响

目的研究神经生长因子（NGF）对子宫腺肌病患者离体培养在位子宫内膜基质细胞雌激素受体仅表达的影响。方法用10ng／ml、50ng／ml和100ng／ml的神经生长因子分别对体外原代培养人子宫内膜细胞进行干预,用MTT法测定内膜基质细胞生长的增殖情况,用Westen—blotting测定50ng／mlNGF对病例组基质细胞雌激素受体仪表达的变化。结果50ng／ml的NGF可促进子宫内膜基质细胞增殖,细胞存活率为82．61％,比其他浓度NGF显著升高（P〈0．05）;50ng／mlNGF对病例组和对照组不同细胞雌激素受体表达有影响,病例组腺上皮细胞和基质细胞总体均数差异均具有统计学意义（P〈0．01）。结论50ng／ml的NGF可促进子宫腺肌病在位内膜基质细胞增殖及腺上皮细胞和基质细胞雌激素受体仅表达。     

GENISTEIN INHIBITS PROLIFERATION OF HUMAN ENDOMETRIAL ENDOTHELIAL CELL IN VITRO

Objective To explore the effect of genistein on proliferation of human endometrial endothelial cells （HEECs） and glandular epithelium. Methods In vitro HEECs and human endometrial cancer-1B cell （HEC-1B ） were cultured with 0, 1, 10, 50, 100, and 200 μmol/L of genistein alone or indicated concentrations of genistein combined with 0.2 or 1 nmol/L 17β- estradiol （ 17β-E2）. Cell proliferation was determined by [ 3H ] -thymidine incorporation and cell cycle was measured by flow cytometry. Results After 96 hours of treatment, genistein inhibited the proliferation of HEECs in a dose-dependent manner. The stimulation index reduced from 100% （ without genistein treatment ） to about 1% （ 200 μmol/L genistein ）. HEECs were arrested at G1/0 and G2/M phase when treated with genistein for 96 hours. When the concentration of genistein was 200 μmol/L, the percentages of HEECs at G1/0, G2/M, and S phase were 96. 0%, 2.1%, and 1.9%, respectively. However, when HEECs were treated without genistein, the percentages of HEECs at G1/0, G2/M, and S phase were 76. 7%, 8.5%, and 14. 7%, respectively. 1713-E2 could not influence the effects of genistein on the proliferation of HEECs. Meanwhile, genistein could suppress the proliferation of HEC-1B. If the stimulation index of HEC-IB was defined as 100% when HEC-1B was treated with different doses of 1713-E2 （without genistein）, it was 67%, 19%, as well as 32% when cell was supplemented with 200 μmol/L genistein combined with 0, 0. 2, or 1 nmol/L 17β-E2, respectively. Conclusion Genistein at the concentration of 200 μmol/L can sufficiently inhibit the proliferation of HEECs and endometrial glandular epithelium simultaneously in vitro.     

来曲唑对人子宫内膜癌细胞作用的研究

目的：探讨第3代芳香化酶抑制剂来曲唑（letrazole）对子宫内膜癌细胞生长的抑制作用。方法：体外培养人子宫内膜癌细胞株RL-952，培养液中加入来曲唑和（或）丙酸睾酮、醋酸甲地孕酮（MA），用计数法分析细胞的生长，用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡细胞，并对药物处理过的细胞进行苏木精．伊红（H-E）染色、光镜下观察细胞形态和凋亡细胞。结果：来曲唑联合丙酸睾酮、MA对RL-952子宫内膜癌细胞周期有影响，使G0／G1期的细胞增加，S期、G2／M期细胞减少；单用丙酸睾酮或来曲唑对RL-952子宫内膜癌细胞周期均无明显影响。结论：芳香化酶抑制剂来曲唑可抑制丙酸睾酮所致RL-952子宫内膜癌细胞株的增殖。     

抑癌基因PTEN对人原代子宫内膜细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:通过人原代子宫内膜细胞实验研究第10号染色体缺失的磷酸酶(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)对子宫内膜异位症发生?发展的作用和意义?方法:利用慢病毒载体分别在人原代子宫内膜细胞中过表达和静默PTEN基因的表达;流式细胞仪检测慢病毒感染之后不同PTEN表达组的细胞周期及凋亡变化情况?结果:PTEN过表达组人原代子宫内膜细胞G0/G1期比例增加,与对照组比较差异具有统计学意义,G2/M期比例逐渐减少,细胞周期阻滞在G0/G1期;空白对照组?PTEN过表达组?PTEN静默组的细胞凋亡率分别是(11.70 ± 0.03)%?(15.80 ± 0.14)%?(5.33 ± 0.08)%?结论:PTEN可显著增加人原代子宫内膜细胞凋亡,抑制细胞周期,对子宫内膜异位症的发生发展有一定抑制作用?     

IL-18联合IL-2诱导NK92细胞的实验研究

目的：探讨白细胞介素18（IL 18）联合白细胞介素2（IL 2）对自然杀伤细胞系NK92抗卵巢肿瘤作用的影响。方法：用不同浓度的IL 18联合IL 2（5?U/ml）体外诱导刺激NK92细胞,流式细胞仪检测细胞周期变化。乳酸脱氢酶释放试验观察刺激前后NK92细胞及培养上清对SKOV3体外生长的抑制作用。ELISA测定NK92细胞杀伤活性最大时IFN γ、TNF α含量。结果：IL 18（25?ng/ml）+IL 2（5?U/ml）刺激后的NK92细胞与对照组比较,S期细胞增多,G0/G1期减少（P＜0.05）。效靶比为10∶1时,诱导后NK92细胞对SKOV3细胞作用4?h杀伤活性最高,IL 18+IL 2刺激前后的NK92细胞杀伤率分别为（42.3±4.82）%、（77.63±5.27）%。NK92培养上清36?h对SKOV3杀伤作用达到最高峰,刺激前后上清杀伤率分别为（21.2±3.49）%、（37.14±2.69）%。NK92细胞杀伤活性最大时,上清中IFN γ、TNF α水平明显升高（P＜0.05）。结论：IL 18联合IL 2可提高NK92细胞的抗肿瘤活性,为临床应用NK92细胞免疫治疗卵巢肿瘤提供了实验依据。     

低剂量辐射对HCT-8细胞周期及其相关蛋白表达的影响

目的：研究低剂量照射(LDR)对人结肠癌细胞(HCT-8)增殖、细胞周期及其相关信号蛋白表达的影响,为低剂量辐射临床应用提供理论依据。方法：体外培养人结肠癌细胞HCT-8,分为7个实验组：假照组（0 mGy）,25、50、75、100和200 mGy低剂量X线照射组和1 000 mGy高剂量X线照射组。照射后用细胞计数法及噻唑蓝比色(MTT)检测细胞增殖率,用流式细胞术测定细胞周期中G₀/G₁、S、G₂/M期的比例。应用蛋白法分析检测细胞周期及相关信号蛋白（共9个蛋白）的表达。结果：经细胞计数及MTT实验证实,25、50、75、100和200 mGy低剂量辐射组HCT-8细胞增殖率与假照组比较差异均无显著性（P>0.05）,与高剂量组比较差异均有显著性（P<0.05）。经流式细胞术检测,与假照组比较,75 mGy低剂量辐射12和24 h后,HCT-8细胞 G₀/G₁期比例增高(P>0.05),S期比例显著降低(P<0.05);G₂/M期比例显著升高（P<0.05）;48 h后G₀/G₁、S及G₂/M期HCT-8细胞比例与假照组比较差异均无显著性（P>0.05）。蛋白分析检测,低剂量辐射后HCT-8细胞中Akt、PCNA、P27、CDK2、cyclin E、EGFR、ERK1/2、p-ERK、p-GSK-3α/β等 9种蛋白表达量均较假照组降低。结论：低剂量辐射对HCT-8细胞增殖无促进作用,但在一定程度抑制细胞增殖及细胞周期相关蛋白的表达。     

葡萄糖对人血管内皮细胞周期和凋亡的影响

目的：观察高浓度葡萄糖对人血管内皮细胞周期和凋亡的影响。方法：用不同浓度葡萄糖（Glu）作用体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECS）24h、48h、72h，绘制细胞增殖曲线，用流式细胞仪分析细胞周期和凋亡的变化。结果：高浓度Glu(20mmol/L、40mmol/L)对内皮细胞的生长增殖有明显抑制作用，使G0/G1期细胞比例增加，S和G2/M期细胞比例下降，同时诱导了内皮细胞的凋亡，并随作用浓度增加、时间延长更为明显。结论：高糖使培养的HUVECS凋亡加速，同时抑制细胞增殖。细胞可能被阻滞在G1/S转变期。     

蜂毒多肽对人膀胱癌T24细胞增殖的抑制作用

目的探讨蜂毒多肽对人膀胱癌T24细胞的增殖及细胞周期的影响。方法以浓度为0.1、1.0、10.0、100.0μg/ml的蜂毒多肽作用于体外培养的人膀胱癌T24细胞,应用四甲基偶氮唑盐（MTT）的培养增殖抑制作用,用流式细胞仪检测蜂毒多肽对细胞增殖核抗原（PCNA）表达及对该细胞周期的影响。结果蜂毒多肽能够在体外抑制人膀胱癌T24细胞的增殖活性;抑制PCNA的表达,呈剂量依赖性,各浓度组PCNA量均较对照组降低（P〈0.05或P〈0.01）;干扰细胞周期,各浓度组G0/G1期均低于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,S期高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）,浓度10.0μg/ml和100.0μg/ml组G2/M期均高于对照组（P〈0.01）。结论蜂毒多肽可抑制膀胱癌T24细胞的增殖,其作用机制可能与PCNA的表达抑制及细胞周期受到干扰有关。     

雌激素受体拮抗剂ICI182780(Faslodex)对17β-雌二醇作用下子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182780(Faslodex)对17β-雌二醇(E2)作用下ER阳性的Ishikawa细胞和ER低表达的HEC-1A子宫内膜癌细胞系细胞的增殖、凋亡和细胞周期的影响,初步探讨ICI182780治疗子宫内膜癌的可行性.方法:应用四甲基亚唑蓝(MTT)法、流式细胞技术观察ICI182780对E2作用下的子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响.结果:随着E2浓度的增加和作用时间的延长,子宫内膜癌细胞在570 nm处的光密度值增大,Ishikawa细胞G0～G1期的比例减少,S期的比例增多,HEC-1A细胞各期的比例变化不显著.随着ICI182780的浓度增加,ICI182780可以使E2作用下Ishikawa细胞的光密度值逐渐下降至基础状态水平,并且使其发生细胞凋亡,表现为早期凋亡细胞增多,使细胞G0～G1期的比例升高,S期的比例下降;HEC-1A细胞的上述变化不显著.结论:ICI182780可以抑制E2对Ishikawa细胞的促增殖作用,促使其发生凋亡,同时也使细胞周期停滞在G1期;ICI182780对HEC-1A细胞的增殖、凋亡和细胞周期无明显影响.ICI182780有可能用于ER阳性子宫内膜癌的治疗.