骨髓增生异常综合征患者Id4基因甲基化研究

目的探讨骨髓增生异常综合征（MDS）患者中Id4基因甲基化状态。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MS-PCR）对56例不同类型MDS患者骨髓进行Id4基因启动子区甲基化状况检测,并以非恶性血液肿瘤骨髓作为对照。结果Id4基因在非恶性血液肿瘤骨髓中呈完全性非甲基化状态,在MDS各种类型中,骨髓中原始细胞比例分别低于和高于5%的两组患者中,Id4甲基化差异有显著性意义。结论骨髓原始细胞比例高的MDS患者骨髓Id4基因甲基化发生率高。     

慢性髓系白血病PDLIM4基因表达与其启动子甲基化水平的关系

目的:分析慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者PDLIM4(PDZ and LIM domain 4)基因转录本表达状况、启动子高甲基化改变及临床相关性。方法:应用实时定量PCR(RQ-PCR)及实时定量甲基化特异性PCR(RQ-MSP)技术分别检测CML患者PDLIM4基因转录本及启动子甲基化水平。结果:8/36例(22%)CML患者存在PDLIM4低表达,低表达率与21例对照组间差异有统计学意义(P=0.021);PDLIM4表达水平和CML患者bcr/abl融合基因转录本正相关(r=0.434,P=0.043)。13/59例(22%)CML患者出现PDLIM4启动子高甲基化改变,而24例对照未显示高甲基化,两组差异有统计学意义(P=0.016)。PDLIM4高甲基化与患者血液学相关参数无明显相关性。PDLIM4启动子高甲基化频率随疾病进展而增高,在慢性期、加速期及急变期中分别为16%(7/44)、33%(2/6)及44%(4/9)。结论:PDLIM4基因启动子甲基化改变可能与CML的疾病发展有关。     

白血病患者白细胞中分化抑制因子Id2 mRNA的表达

目的：探讨分化抑制因子Id2基因在白血病白细胞中的表达状况。方法：应用RT-PCR半定量分析16例急性非淋巴细胞白血病（ANLL）,10例慢性粒细胞白血病（CML）白细胞中Id2的mPNA表达水平。结果：Id2基因在急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病患者外周血白细胞中的表达水平均增高,有统计学意义（P〈0．05）,但两者间比较无统计学意义。结论：Id2基因在白血病细胞中的表达明显增高,可能与白血病的发病有一定相关性。     

分化抑制因子Id1基因在白血病细胞中的表达及意义

目的:研究分化抑制因子-1(inhibitors of differentiation,Id1)在白血病白细胞中的表达,探讨其与急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病发病的相关性,为白血病的诊断、治疗提供参考.方法:应用KT-PCR.方法,检测Id1在健康志愿者、急性非淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病白细胞中的表达情况.结果:与健康自愿者相比,Id1基因在急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病患者外周血白细胞中的表达均降低,有统计学意义(P<0.05),而后两者比较无统计学意义.结论:Id1在白血病细胞中的表达明显降低,与白血病的发病有一定相关性.     

IL-4基因多态性与慢性粒细胞白血病的相关性研究

目的 探讨IL-4基因启动子区域-590C/T基因多态性与慢性粒细胞白血病(CML)的相关性.方法 采用PCR-SNP技术, 检测30例CML患者组和40例正常对照组IL-4基因多态性.结果 IL-4基因-590C/T基因型频率和C等位基因频率在两组人群中的分布差异有统计学意义(P＜0.05, RR＝4.33 ), C等位基因携带者患CML的风险是T等位基因的5.65倍(P＜0.01,OR＝5.65).结论 IL-4基因-590C/T基因型多态性与CML的发病具有相关性,其中C等位基因可能是CML发病的遗传易感性基因, 携带C等位基因的个体可能通过降低IL-4的表达而增加CML的发病风险.     

PCR检测降钙素基因高甲基化在监测慢性髓细胞白血病恶化？…

目的 观察慢性髓细胞白血病（ＣＭＬ）病情恶化与降钙素（ＣＴ）基因高甲基化程度之间的关系，方法 用内切酶酶切和ＰＣＲ技术研究４５例ＣＭＬ患者（其中慢性期３３例，加速期２例，急变期１０例）的ＣＴ基因高甲基化程度，ＣＴ基因未高甲基化，则能被相应的内切酶断，无法扩增出的特异ＤＮＡ片断，否则，能扩增出特异ＤＮＡ片断，据此推断ＤＮＡ的甲基化程度。结果 ３例慢性期，２例加速期及８例急变期患者呈现降钙素基因高甲基     

Id4对K562细胞增生的影响及其机制的探讨

为了探讨Id4基因的反义核酸对人红白血病K5 62细胞增生的作用 ,用DNA重组技术将人反义Id4基因插入到真核表达载体pXJ41 neo上 ,重组质粒和空载体分别转染K5 62细胞 ,得到 pAId4和 pK5 62 (对照 )克隆细胞株。发现 :pAId4的生长受到抑制 ,倍增时间加长。免疫印迹实验分析相关蛋白的表达 ,其中CDK4和CyclinD1在 pAId4细胞中的表达量均低于对照细胞 pK5 62 ,而RB蛋白在 pAId4细胞中的表达量高于对照细胞pK5 62 ,揭示了反义Id4引起细胞出现生长抑制的可能机制 ,并探讨了Id4基因对人红白血病K5 62细胞增生的具体作用。研究结果对造血干细胞的体外扩增、分化及红白血病的基因治疗均有重要的参考价值。     

Id4基因与机体发育及肿瘤相关性的研究进展

DNA结合抑制因子4（inhibitor of DNA binding 4,Id4）是碱性螺旋环螺旋（basic helix-loop-helix,bHLH）转录因子的抑制因子。研究发现Id4基因在多种生物进程及肿瘤形成中发挥重要作用,其参与正常组织细胞的生长分化,调控细胞周期及增殖,并在肿瘤形成中起到癌基因或抑癌基因的作用。关于Id4基因的研究尚存在许多分歧,本文就Id4基因在机体发育及肿瘤形成中的作用进行综述。     

分化抑制因子Id4对K562细胞株凋亡的影响

目的探讨Id4基因的反义核酸对人红白血病K562细胞凋亡的影响。方法采用脂质体介导的反义寡核苷酸转染DNA重组技术,将人反义Id4基因插入到真核表达载体pXJ41-neo上,重组质粒和空载体分别转染K562细胞,加入凋亡诱导剂三尖杉酯碱(HT)后采用流式细胞术、TUNEL和免疫印迹(Western blot)技术检测细胞的凋亡率以及相关蛋白Bcl-xl、c-Myc、p27的表达变化。结果获得了pAId4(反义基因重组质粒)和pK562(对照)克隆细胞株;加入诱导剂HT后,反义寡核苷酸组的凋亡率明显增高到43.5%;检测K562细胞凋亡过程中,Bcl-xl蛋白在pAId4细胞株中表达减低。结论反义Id4基因的转入对K562细胞起到诱导凋亡作用,并推测Id4在K562细胞中可能通过影响Bcl-xl的表达量,进一步诱导细胞凋亡。     

PCR检测降钙素基因高甲基化在监测慢性髓细胞白血病恶化中的价值

目的观察慢性髓细胞白血病（ＣＭＬ）病情恶化与降钙素（ＣＴ）基因高甲基化程度之间的关系。方法用内切酶酶切和ＰＣＲ技术研究４５例ＣＭＬ患者（其中慢性期３３例，加速期２例，急变期１０例）的ＣＴ基因高甲基化程度。ＣＴ基因未高甲基化，则能被相应内切酶切断，无法扩增出特异ＤＮＡ片断，否则，能扩增出特异ＤＮＡ片断，据此推断ＤＮＡ的甲基化程度。结果３例慢性期，２例加速期及８例急变期患者呈现降钙素基因高甲基化；急变期组（包括加速期）甲基化率明显高于慢性期组，两组有显著性差别（Ｐ＜０．０１）；１例在慢性期呈现ＣＴ基因高甲基化者于１０个月后发生急粒变。结论该方法有助于监测ＣＭＬ的恶化     

Dickkopf1(DKK-1)基因甲基化在急性白血病中的表达分析

目的探讨WNT/β-catenin通路的关键抑制因子Dickkopf1(DKK-1)基因异常甲基化与急性白血病(AL)发病机制的相关性。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测4个AL细胞系(NB4、Jurkat、Molt-4、CEM)、65例AL患者及20例正常对照骨髓单个核细胞中DKK-1基因mRNA的表达情况;采用甲基化特异性PCR(M SP)方法检测各标本及细胞系中DKK-1基因启动子区域的甲基化状态。结果与正常对照组比较,AL患者DKK-1基因mRNA表达量显著降低(P<0.05);正常对照组标本单个核细胞中不存在DKK-1基因的甲基化;DKK-1在AL患者中甲基化率为37.7%(24/65),其中急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中甲基化率为41.2%(14/34),急性髄系白血病(AML)患者中甲基化率为28.6%(10/31)。结论 DKK-1甲基化及异常表达在急性白血病中是一种较为普遍的现象,其参与了部分急性白血病的发病过程。     

非霍奇金淋巴瘤中分化抑制因子4的表达及意义

目的:观察分化抑制因子4(Id4)在非霍奇金淋巴瘤组织(non-Hodgkin’s lymphoma,NHL)和反应性增生(RH)组织中的表达差异,及其与肿瘤增殖活性的关系,探讨Id4在淋巴瘤发生、发展中的可能作用。方法:选取2006~2008年郑州大学第一附属医院病理科存档石蜡标本80例,其中NHL 70例,RH 10例。应用免疫组织化学S-P法检测Id4和Ki-67分别在NHL和RH中的表达水平。结果:Id4在NHL中的表达率为35.7%(25/70),而在RH中的表达率为70.0%(7/10),两者之间存在统计学差异(P<0.05)。Ki-67在NHL中的表达率为75.7%(53/70),明显高于RH中的表达率10.0% (1/10,P<0.05),而且Ki-67阳性强度随着NHL恶性程度的增加而增高。Id4和Ki-67的表达与患者性别、年龄、免疫分型及肿瘤原发部位等因素无明显相关(P>0.05)。结论:Id4在NHL中的表达明显降低,可作为NHL与RH鉴别诊断的一个参考指标。     

PTTG、c-myc基因在慢性粒细胞白血病中的表达

目的:检测垂体瘤转化基因(PTTG)在慢性粒细胞白血病(CML)患者中不同临床阶段的基因表达,为阐明CML演变的可能机制提供依据。方法:采用RT-PCR方法检测34例CML患者(慢性期16例,加速期11例,急变期7例)及10例对照者骨髓单个核细胞(BMMNC)中PTTG和c-myc基因的表达。结果:10例对照者中未检测到PTTG和c-myc基因的表达,34例CML患者中PTTG和c-myc基因在慢性期、加速期、急性变期的表达明显高于对照者(P<0.05),PTTG在加速期和急变期的表达升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。c-myc基因在急变期的表达明显升高(P<0.05)。结论:PTTG和c-myc基因的过度表达可能和CML的发生发展有关。     

干扰素-α治疗慢性粒细胞白血病疗效的观察

目的 探讨干扰素-α（IFN-α）治疗慢性粒细胞白血病（CML）的临床效果。方法 用RT-PCR检测116例CML bcr／abl基因。结果 116例CML病人有103例bcr／abl基因为阳性。阳性率为88．8％,ph（-）／bcr（-）CML病人经IFN-α治疗后效果较ph（-）／bcr（＋）差,两组相比,有显著统计学意义（P〈0．05）。结论 IFN-α治疗CML,尤其是初发的慢性病人有一定疗效,可延长患者的慢性期。     

MLL-AF6融合基因阳性急性髓系白血病的临床特征及预后

目的: 探讨MLL-AF6融合基因阳性的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)患者的临床特征和预后。方法: 回顾分析11例初治MLL-AF6阳性AML患者的临床和实验室资料,复习文献,总结该类疾病的临床特征及预后。结果: 11例患者中男6例,女5例,中位年龄36岁,急性白血病的分型诊断标准FAB分型(French-American-British classification systems)M5 6例,M4 5例。起病症状为牙龈肿痛6例,发热5例,初诊时中位白细胞计数55.5×10⁹/L,免疫分型可见髓系细胞、单核细胞系统及干细胞系列抗原表达。MLL-AF6融合基因水平(实时定量PCR法)为14.2%~214.5%,6/11例(54.5%)合并EVI1基因高表达。4例患者二代测序检测出合并KRAS、TET2、ASXL1、TP53、DNMT3A及FLT3-ITD基因突变。染色体G显带检查,2例为t(6;11)(q27,q23)伴复杂核型异常,4/9例(44.4%)伴有+8异常,2例为正常核型。给予患者常规诱导化疗,达到完全缓解者8/11例(72.7%),3例患者原发耐药。8例完全缓解的患者中,2例达到微小残留病(minimal residual disease, MRD)阴性,中位完全缓解的持续时间为4.5个月。2例MRD阳性及3例难治复发患者接受了异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, allo-HSCT), 后均死于白血病进展。随访至2019年12月1日, 2例存活,9例死亡,中位生存时间9个月。结论: MLL-AF6融合基因阳性AML多为年轻患者,FAB分型以M4、M5居多,常以发热起病,白细胞增高,可伴器官浸润,合并EVI1基因高表达多见。本病常规化疗的缓解率不低,但达到分子学缓解困难,极易出现早期复发,持续分子学阴性状态下尽早行allo-HSCT可能获得长期完全缓解。     

A study on DNA methylation status in promoter region of p15 gene in patients of acute myeloid leukemia and myelodysplastic syndrome

BackgroundAcute myeloid leukemia (AML) and myelodysplastic syndrome (MDS) are a spectrum of hematological malignancies with a multistep process of accumulated genetic and epigenetic alterations. DNA methylation is most extensively studied epigenetic alteration in malignancies. Recent research studies in the field have brought out translational implications of promoter methylation of tumor suppressor gene p15 in tumors. Therefore, we studied the role of DNA Methylation of p15 gene in AML and MDS.MethodsThe study was carried out in 41 consecutive AML/MDS cases reporting to hematological OPD of a tertiary care center along with 25 age and sex-matched healthy controls. The methylation status in the promoter region of the p15 gene was assessed by methylation-specific PCR (MSP) from blood samples after ethical approval and informed consent of the patients and controls. The association of methylation status was studied with clinical presentations, AML subtypes, and cytogenetics using Chi-square test/Fisher''s exact test tools.ResultsA total of 41 cases included in the study comprised 33 cases of AML and 08 cases of MDS with an age range between 06 months and 82 years. Of the 41 cases, 29 revealed promoter methylation of the p15 gene, which compared to healthy controls was found statistically significant (p < 0.001). The methylation status did not significantly correlate with AML subtypes or the cytogenetic abnormalities detected in cases.ConclusionThe outcome of the study indicates p15 promoter DNA methylation in cases of AML and MDS may identify those individuals who might benefit from the targeted therapeutic approaches.     

转阿片肽基因治疗慢性疼痛的研究现状和展望

慢性疼痛发生过程中通常伴随有神经系统的复杂改变。因此，慢性疼痛应被视为神经系统的一种病理状态。在探索治疗慢性疼痛的新途径时，基因方案显示出了巨大的潜力。基因治疗是将镇痛性的蛋白质导入与疼痛相关联的结构中，并使其在靶细胞附近进行持久表达。近来，这些技术在许多慢性疼痛的动物模型上进行了成功实验，显示出某些基因特别是前阿片肽如阿片促黑皮质素原或脑啡肽原A在脊髓水平上的转运，以及由此所引起的编码产物的大量产生，能够有效减弱炎症性和神经源性的疼痛．