TGF-β1通过NF-κB上调成骨细胞自噬的作用

目的 探讨 TGF-β1、NF-κB通路与自噬间关系,为进一步了解牙齿萌出通道形成过程中骨动态平衡调节机制提供新的实验依据。方法 按照加入NF-κB通路阻断剂SN50和TGF-β1浓度不同,将成骨细胞分为以下12组:NC组:无SN50+无TGF-β1; KD1组:无SN50+TGF-β1(0.01ng/ml);KD2组:无SN50+TGF-β1(100ng/ml); KD3组:SN50(6.25μg/ml)无TGF-β1; KD4组:SN50 (6.25μg/ml)+TGF-β1(0.01ng/ml); KD5组:SN50 (6.25μg/ml)+TGF-β1(100ng/ml);KD6组:SN50 (12.25μg/ml)+无 TGF-β1; KD7组:SN50(12.25μg/ml)+TGF-β1 (0.01ng/ml); KD8组:SN50 (12.25μg/ml)+TGF-β1 (100ng/ml); KD9组:SN50 (25μg/ml)+无 TGF-β1; KD10组:SN50(25μg/ml)+TGF-β1(0.01ng/ml); KD11组:SN50 (25μg/ml)+TGF-β1 (100ng/ml)。单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine, MDC)法检测自噬小体形成,Simple Western assays法检测 LC3a蛋白表达。结果 NF-κB通路未被阻断时,TGF-β1可以上调成骨细胞自噬功能,但与浓度无显著相关性。浓度为25μg/ml SN50阻断NF-κB信号通路后成骨细胞自噬功能明显低于对照组,此时,再次加入TGF-β1不能上调成骨细胞自噬水平。结论 TGF-β1可能通过NF-κB影响成骨细胞的自噬功能,具体分子调控机制需进一步研究。     

NF-κB/IκB信号通路与皮肤病

核因子-κB (nuclear factor kappa binding,NF-)是广泛存在于细胞中的具有多向调节作用的蛋白质分子,可调节100多种靶基因的表达,其中的大多数均参与了宿主的免疫和炎症反应.NF-κB抑制蛋白 (inhibitor of NF-κB,IκB) 是NF-κB的抑制因子.本文主要就NF-κB/IκB信号通路的概况及其在某些皮肤病发病机制中的作用进行综述.     

NF-κB信号通路与胰岛素抵抗

NF-κB的信号通路与胰岛素抵抗发生发展的机制NF-κB的信号通路密切相关。NF-κB及其相关基因的异常表达在机体的不同部位会通过不同途径间接或直接的影响胰岛素信号的传导从而引发胰岛素抵抗的产生。本文通过阐述NF-κB信号通路分别在肝脏、骨骼肌及脂肪中对胰岛素抵抗的影响,进一步说明NF-κB信号通路与胰岛素抵抗之间的关系。     

AGEs调节NF-κB通路对软骨细胞炎症因子IL-1β的影响

目的观察AGEs调节NF-κB通路对软骨细胞炎症因子IL-1β表达的影响。方法将软骨细胞传代培养,取对数生长的软骨细胞接种于96孔板,分为对照组、低剂量AGEs(20μg/L)组、高剂量AGEs(40μg/L)组、NF-κB通路抑制剂PDTC(5μg/L)组和AGEs(40μg/L)+PDTC(5μg/L)组,共培养24 h后ELISA检测各组上清液中IL-1β的含量,Real-time PCR检测各组IL-1β和P65基因表达,Western-blot检测IL-1β和P65蛋白表达。结果对照组软骨细胞上清液中IL-1β的浓度明显高于低剂量AGEs组和高剂量AGEs组,差异有统计学意义(P<0.05);PDTC组和AGEs+PDTC组软骨细胞上清液中IL-1β含量与对照组比较明显下降(P<0.05)。对照组软骨细胞中IL-1β和P65 mRNA相对表达量高于低剂量组和高剂量组(P<0.05),低于PDTC组(P<0.05)。PDTC组IL-1β和P65 mRNA相对表达量低于AGEs+PDTC组(P<0.05)。对照组软骨细胞中IL-1β和P65蛋白相对表达量低于低剂量组和高剂量组(P<0.05),但高于PDTC组(P<0.05)。PDTC组软骨细胞中IL-1β和P65蛋白相对表达量较AGEs+PDTC组减少(P<0.05)。结论 AGEs上调软骨细胞IL-1β的表达,NF-κB通路可能是参与骨关节炎发生发展的重要通路之一。     

NF-κB信号通路与胰岛素抵抗

NF-κB的信号通路与胰岛素抵抗发生发展的机制NF-κB的信号通路密切相关。NF-κB及其相关基因的异常表达在机体的不同部位会通过不同途径间接或直接的影响胰岛素信号的传导从而引发胰岛素抵抗的产生。本文通过阐述NF-κB信号通路分别在肝脏、骨骼肌及脂肪中对胰岛素抵抗的影响,进一步说明NF-κB信号通路与胰岛素抵抗之间的关系。     

通过调节NF-κB通路中的IκBα抑制乳腺癌的研究进展

NF-κB与乳腺癌之间存在着密切的关联,可在药物和基因方面来调节IκBα在NF-κB通路中的含量和状态对该通路产生预期影响,进而了解其在乳腺癌治疗研究方面的进展.抑制IκBα磷酸化,从而抑制NF-κB活化;上调IκBα含量,降低NF-κB活化;增加p-IκBα含量,促进NF-κB活化入核.观察其对乳腺癌的影响.IκBα...     

keap1-Nrf2与NF-κB信号通路相关性研究进展

keap1是细胞内信号通路中一种非常重要的调节蛋白,其最常见的靶标蛋白是核转录因子Nrf2,主要介导细胞抗氧化应激反应。keap1除了能调节Nrf2,还能直接影响NF-κB信号通路,与炎症、肿瘤、白血病、神经系统疾病等关系密切。keap1可以介导不同的信号通路,协调不同信号通路的反应。本文主要就keap1-Nrf2与NF-κB信号通路相关性的研究进展做一简要综述。     

姜黄素通过TGF-β1信号通路抑制人肺泡横纹肌肉瘤细胞株PLA-802的机制研究

目的：观察姜黄素对人横纹肌肉瘤(Rhabdomyosarcoma,RMS)细胞株PLA-802的抑制作用,以及对细胞内TGF-β1/Smad 4的表达的影响,探索姜黄素抑制RMS细胞生长的机制。方法：体外培养人RMS细胞株PLA-802,并用不同浓度的姜黄素作用不同的时间。用MTT检测姜黄素对PLA-802细胞生长情况的影响,用流式细胞术检测细胞周期的变化情况,RT-PCR和Western blot分别检测细胞内TGF-β1和Smad 4的mRNA和蛋白水平的表达。结果：MTT结果显示姜黄素显著降低了PLA-802细胞的存活率（P<0.05)。流式细胞结果表明姜黄素明显降低了S期而增加了G1期(P<0.05)。而TGF-β1和其下游因子Smad4的mRNA和蛋白水平的表达也明显受到姜黄素的抑制,且这种抑制作用呈浓度-时间依赖性(P<0.05)。结论：姜黄素发挥其抑制PLA-802细胞的作用可能是通过抑制TGF-β1信号通路,这将为临床治疗肺泡RMS提供新的思路。     

姜黄素通过TGF-β1信号通路抑制人肺泡横纹肌肉瘤细胞株PLA-802的机制研究

目的:观察姜黄素对人横纹肌肉瘤(Rhabdomyosarcoma,RMS)细胞株PLA-802的抑制作用,以及对细胞内TGF-β1/Smad 4的表达的影响,探索姜黄素抑制RMS细胞生长的机制。方法:体外培养人RMS细胞株PLA-802,并用不同浓度的姜黄素作用不同的时间。用MTT检测姜黄素对PLA-802细胞生长情况的影响,用流式细胞术检测细胞周期的变化情况,RT-PCR和Western blot分别检测细胞内TGF-β1和Smad 4的mRNA和蛋白水平的表达。结果:MTT结果显示姜黄素显著降低了PLA-802细胞的存活率(P<0.05)。流式细胞结果表明姜黄素明显降低了S期而增加了G1期(P<0.05)。而TGF-β1和其下游因子Smad4的mRNA和蛋白水平的表达也明显受到姜黄素的抑制,且这种抑制作用呈浓度-时间依赖性(P<0.05)。结论:姜黄素发挥其抑制PLA-802细胞的作用可能是通过抑制TGF-β1信号通路,这将为临床治疗肺泡RMS提供新的思路。     

NF-κB与Wnt/β-catenin信号通路在调控成骨方面的研究进展

<正>骨缝牵张成骨的机制是目前研究的热点之一,当骨缝受到牵张应力的刺激后会发生成骨效应,上颌骨的前牵引和腭中缝的扩大就是利用骨缝的生长改建以协调上下颌骨的形态和位置关系[1-3]。因此,了解骨缝在受到机械牵张力刺激后发生适应性改建的分子生物学机制,对寻找最佳治疗时机、缩短治疗时间及防止复发意义重大。成骨细胞是骨形成的主要功能细胞,调节骨形成的信号转导途径有多条,其中NF-κB通路和Wnt/β-catenin信号通路的不同组成部分相互调节,相互作     

NF-κB靶向性哑铃形圈套寡核苷酸抑制肾小球系膜细胞TGF-β1的表达

目的:设计合成靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs,并检测其对NF-κB转录活性和肾小球系膜细胞TGF-β1表达的抑制效应.方法:采用电泳迁移率改变实验(EMSA)体外检测哑铃形圈套ODNs对NF-κB转录活性的抑制效应.提取大鼠肾小球系膜细胞,随机分为正常对照组、LPS刺激组、哑铃形圈套ODNs处理组、无关圈套ODNs处理组和脂质体处理组.采用阳离子脂质体将2,4,8 mg/L不同剂量哑铃形圈套ODNs转染大鼠肾小球系膜细胞,6 h后用LPS刺激,收集转染后8,12,18 h上清和细胞.用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清TGF-β1蛋白表达,逆转录PCR(RT-PCR)法检测TGF-β1mRNA转录.结果:哑铃形圈套ODNs在体外能有效地抑制NF-κB与其顺式元件的结合;4,8 mg/L剂量哑铃形圈套ODNs可明显抑制LPS诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1转录和表达.结论:靶向NF-κB的哑铃形圈套ODNs在体外可抑制NF-κB的转录活性,从而对体外培养的肾小球系膜细胞炎性因子TGF-β1的表达具有抑制效应.     

胰高血糖素样肽-1通过抑制NF-κB信号通路减轻白介素-1β诱导的INS-1细胞损伤

目的 探讨胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对白介素-1β(IL-1β)诱导INS-1细胞损伤的影响及其可能机制.方法 体外培养大鼠胰岛素瘤细胞株细胞(INS-1)至对数生长期,根据干预方案进行分组:正常对照组、IL-1β组、GLP-1+IL-1β组.采用MTT法观察细胞活力、荧光实时定量PCR检测细胞内IKKβmRNA水平的表达,免疫印迹法(Westernblotting)检测转入细胞核内NF-κBp65亚基的蛋白水平.结果 与对照组相比,IL-1β组细胞活力下降29%,差异具有统计学意义(P＜0.001);当加入GLP-1预处理后,细胞活力上升了30%,差异具有统计学意义(P＜0.001).与对照组相比,IL-1β组的IKKβmRNA表达显著增加(1.967±0.091vs1±0);当加入GLP-1预处理后,与IL-1β组相比,GLP-1+IL-1β组的IKKβmRNA表达显著降低(1.967±0.091vs1.287±0.084).与对照组相比,IL-1β组核内NF-κB蛋白水平显著增高(0.814±0.111vs0.396±0.026);而加入GLP-1预处理后,与IL-1β组相比,GLP-1+IL-1β组核内NF-κB蛋白水平显著减少(0.622±0.059vs0.814±0.111).结论 GLP-1抑制IL-1β诱导的INS-1细胞损伤,其机制可能与其抑制NF-κB信号通路有关.     

敲低WDSUB1通过抑制NF-κB通路减轻实验性小鼠结肠炎

目的 采用体内转染小干扰RNA（siRNA）和口服葡聚糖硫酸钠（DSS）的方法构建小鼠结肠炎模型,研究WDSUB1对小鼠结肠炎症损伤的影响并探讨可能的机制。 方法 在小鼠成纤维细胞L929中转染不同的WDSUB1 siRNA序列,采用Western blotting (WB)检测的方法,选择WDSUB1敲低效果最佳的siRNA序列进行小鼠体内转染实验。选择12只雄性C57BL/6小鼠随机进行尾静脉注射siRNA（siWDSUB1/siControl）,口服2.5% DSS饮用水,构建两组DSS诱导的结肠炎小鼠模型,根据siRNA不同,分为WDSUB1敲低组和对照组,6只/组。通过WB和RT-PCR方法验证两组小鼠结肠组织中WDSUB1的表达水平,记录实验过程中结肠炎小鼠的体质量及粪便性状,并进行临床症状评分。采用RT-PCR和WB方法,分别检测两组结肠炎恢复期小鼠结肠组织中炎性因子IL-6,COX-2,TNFα的mRNA表达水平,以及NF-κB通路中IκBα和P65的表达变化。结果 L929细胞中转染不同WDSUB1 siRNA 序列后,选择敲低效果最佳的WDSUB1 2#完成体内转染,构建结肠炎小鼠模型。RT-PCR和WB结果均表明,WDSUB1敲低组小鼠的结肠组织中WDSUB1 mRNA和蛋白表达均明显低于对照组（P<0.05）。在分析两组小鼠结肠炎症状时,WDSUB1 敲低组结肠炎小鼠的体质量丢失明显少于对照组,腹泻和便血程度较对照组也明显减轻（P<0.05）。WDSUB1敲低组小鼠结肠组织中COX-2,IL-6和TNFα mRNA均明显低于对照组（P<0.05）,且IκBα表达明显受抑制,而p65表达无明显变化。结论 敲低WDSUB1能够减轻实验性小鼠结肠炎症程度,此过程可能是通过抑制NF-κB通路和炎性因子表达实现的。     

蛋白激酶D1在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用

目的研究蛋白激酶D1（PKD1）在烟曲霉介导的NF-κB信号通路激活及转录活性中的作用,为进一步探讨PKD1在烟曲
霉感染引起的肺曲霉病中的作用及其机制奠定基础。方法首先将GFP、GFP-PKD1表达质粒分别转染人肺腺癌细胞A549和
HEK293细胞中,分别将灭活的烟曲霉分生孢子（1×105 CFU/ml）于不同时间处理上述两组细胞,Western blotting证实PKD1的
过表达,并检测PKD1的磷酸化活性;其次在A549细胞中分别转染GFP-PKD1、siRNA-PKD1并以灭活的烟曲霉分生孢子处理
细胞30 min,分别检测下游NF-κB通路相关信号分子的磷酸化活性;最后,将NF-κB-luc 荧光素酶报告基因及内参照报告质
粒海肾荧光素酶（pRL-SV40）共转染入表达GFP、GFP-PKD1的A549细胞中,两组细胞在有无烟曲霉分生孢子的作用下处理
24 h,收集细胞裂解液,进行双色荧光素酶活性检测。结果Western blotting证实PKD1的过表达时间依赖性地增强烟曲霉刺激
的A549细胞和HEK293 细胞中PKD1的磷酸化活性及NF-κB通路中IКB和p65（pS276）的磷酸化活性,反之,敲低PKD1的表
达则抑制烟曲霉介导的NF-κB通路中IКB和p65（pS276）的磷酸化活性。过表达PKD1明显增加NF-κB-luc荧光素酶的转录激
活活性。结论PKD1可能在烟曲霉刺激的NF-κB通路的激活及转录活性中起重要作用。
     

富马酸二甲酯通过NF-κB通路抑制IL-1β诱导的小鼠软骨细胞炎症

目的探讨富马酸二甲酯对软骨细胞炎症的治疗作用及其机制。方法用不同浓度的富马酸二甲酯处理IL-1β诱导的小鼠ATDC5细胞。通过CCK-8实验检测富马酸二甲酯对软骨细胞毒性、增殖的影响;阿利新蓝染色分析富马酸二甲酯对细胞表型的影响;实时定量荧光PCR检测MMP3、MMP9、MMP13和SOX9的mRNA表达;Western印迹法检测MMP9、MMP13、Col2a1及NF-κB通路相关蛋白表达水平;免疫荧光染色检测p65磷酸化入核的影响。结果富马酸二甲酯在0~25 μmol/L对ATDC5细胞的增殖活性没有影响;与对照组相比,IL-1β刺激ATDC5细胞后NF-κB通路被激活,IκBα蛋白表达下降,而p-IKKα、p-IκBα和p-p65蛋白表达增加,活化的NF-κB p65进入细胞核中,MMP3、MMP9、MMP13的表达上升,Col2a1和SOX9的表达下降（P＜0.05）;与IL-1β组比较,富马酸二甲酯治疗后提高IκBα表达,降低了p-IKKα、p-IκBα和p-p65的表达,阻断了NF-κB p65进入细胞核中,MMP3、MMP9、MMP13的表达下降,Col2a1和SOX9的表达上升（P＜0.05）。结论富马酸二甲酯可能通过抑制NF-κB通路来发挥对软骨细胞的保护作用,以改善软骨细胞的炎症反应。     

大鼠中晚期纤维化肝组织NF-κB、TGF-β1及其Ⅰ型受体表达的改变

目的探讨肝纤维化中、晚期大鼠肝组织核转录因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及其Ⅰ型受体(TβRⅠ)表达的改变.方法采用12.5% CCl4 诱导的大鼠肝纤维化模型,分别于造模的第8、13周末处死动物,取左叶肝组织石蜡包埋,制作组织芯片,免疫组化S-P法检测NF-κB p65、 TGF-β1及TβRⅠ蛋白的表达,原位杂交检测TGF-β1及TβRⅠmRNA的表达,并用MetaMorph图像分析系统对免疫组化及原位杂交结果进行定量分析.结果第8、13周纤维化肝组织NF-κB p65蛋白、TGF-β1及TβRⅠ蛋白和mRNA的表达均较正常组显著增强(P《0.01),其表达相互间均呈正相关(P《0.01).结论中晚期肝纤维化中,TGF-β1及TβR Ⅰ mRNA水平的增高是其蛋白表达上调的主要机制,NF-κB、TGF-β1及TβR Ⅰ共同作用促进肝纤维化发展.     

炎性微环境下TGF-β1通过TGF-β1/Smad3 通路促进BMSCs成骨分化

目的 研究炎性微环境下转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的影响及作用机制。方法 应用肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)体外模拟炎性微环境,检测不同浓度TGF-β1对BMSC增殖活性的影响。实验分为对照组[BMSC+成骨诱导液(osteogenic medium,OM)]、实验组(BMSC+TGF-β1+OM)和抑制组[BMSC+SB431542 (TGF-β1拮抗剂)+OM]。应用ALP染色、茜素红染色、实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)及Western blot法对BMSCs成骨分化能力和TGF-β信号通路因子Smad2、Smad3进行检测并比较3组间的差异。结果 低浓度TGF-β1作用下BMSCs增殖活性较高,高浓度(50ng/ml)抑制BMSCs增殖活性;成骨诱导7天和10天时,实验组与其他两组比较,ALP染色较深、面积最大;茜素红染色结果显示,实验组体外矿化结节形成均高于其他两组;RT-qPCR检测结果显示,实验组成骨分化基因OPN、RUNX2与ALP表达均增高,TGF-β信号通路中Smad3在实验组表达最高,抑制组表达最低,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot法检测结果显示,实验组内OPN、RUNX2与ALP蛋白表达水平增高,差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β信号通路中Smad3蛋白表达在3组中差异不明显,而p-Smad3在实验组中表达明显增高、抑制组中明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 炎性微环境中TGF-β1通过激活TGF-β/Smad3信号通路促进了BMSCs成骨分化。     

AMPK抑制NF-κB信号及炎症反应的研究进展

腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）是能量代谢平衡的重要调节器,AMPK可以抑制由核因子-κB （NF-κB）信号诱导的炎症反应.AMPK不直接作用于NF-κB,通过其下游靶分子如SIRT1、PGC-1α、P53和FoxO等,抑制NF-κB信号及炎症反应.综述AMPK参与的抑制NF-κB信号途径及炎症反应,强调激活AMPK对维持机体健康和延缓衰老具有重大作用.     

SIRT1通过抑制NF-κB信号通路而抑制oxLDL诱导的VSMC源性泡沫细胞形成

目的探讨激活去乙酰化酶1(SIRT1)是否可以抑制血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs向泡沫细胞转化,并且探讨NF-κB炎性信号通路在其中的调节作用。方法利用小鼠主动脉组织贴块法培养原代VSMCs;免疫荧光双标染色鉴定原代VSMCs;油红O染色定性检测细胞内脂质沉积; Western blot检测VSMCs中SIRT1、p-IκBα和NF-κB p65蛋白的表达情况。结果氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox LDL)刺激原代培养的VSMCs 48小时后,细胞内油红O染色阳性脂滴显著增加,差异有统计学意义(P<0. 05); ox LDL刺激VSMCs不同时间(6、12、24、48、72小时)后p-IκBα和NF-κB p65蛋白的表达呈上升趋势(P<0. 05); SRT1720(SRT)激活SIRT1可以呈浓度梯度减少ox LDL诱导的VSMC中红色脂滴的数量; SRT呈浓度梯度地上调SIRT1蛋白的表达,以及呈浓度梯度地下调p-IκBα和NF-κB p65蛋白蛋白的表达; BAY 11-7082(BAY)抑制p-IκBα和核内NF-κB p65蛋白的表达,也显著降低了oxLDL诱导的VSMC中红色脂滴的数量。结论本研究证实激活SIRT1可以抑制ox LDL诱导的VSMC源性泡沫细胞形成,且与NF-κB信号通路的抑制有关。