雷公藤甲素与雷公藤红素含药血清对小鼠巨噬细胞一氧化氮分泌的影响

目的研究雷公藤甲素与雷公藤红素抗炎作用量效关系。方法健康雄性Wistar大鼠灌胃给予雷公藤甲素与雷公藤红素的混合液,分别于给药前0h和给药后0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0和12.0h收集血清,利用液相色谱-质谱联用法检测大鼠血清中雷公藤甲素和雷公藤红素的浓度;采用小鼠腹腔巨噬细胞线RAW264.7,利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作为刺激剂构建炎症模型,向细胞模型中分别加入雷公藤甲素、雷公藤红素药液或含药血清,采用Griess试剂利用紫外分光光度法检测孵化液中一氧化氮(NO)的分泌情况。结果雷公藤甲素质量浓度高于200μg·L-1,即可抑制LPS对RAW264.7细胞的刺激,雷公藤红素药液质量浓度高于80μg·L-1时,也可产生此作用,并呈现浓度依赖关系。血清中雷公藤甲素的质量浓度在0.5和1.0h时高于300μg·L-1,雷公藤红素的血清质量浓度在0.5⁶.0h内维持在200μg·L-1左右。大鼠服用雷公藤甲素和雷公藤红素后0.56.0h内维持在200μg·L-1左右。大鼠服用雷公藤甲素和雷公藤红素后0.5⁶.0h内的含药血清能明显抑制LPS对RAW264.7细胞的刺激作用,6.0h后含药血清抑制效果不显著。结论雷公藤甲素、雷公藤红素药液及大鼠服用雷公藤甲素和雷公藤红素后的含药血清均具有抗炎作用,该作用与这2种化合物体内浓度相关。     

HPLC-TOF/MS研究雷公藤甲素及雷公藤内酯酮体内代谢产物

目的 鉴定甘草干预后雷公藤甲素及雷公藤内酯酮在大鼠体内的代谢物,为其结构改造与新药研发提供参考.方法 采用高效液相色谱-飞行时间质谱(HPLC-TOF/MS)法研究甘草干预后雷公藤甲素及雷公藤内酯酮在大鼠尿液中的代谢物.结果 发现雷公藤甲素代谢物4个,分子量为376Da代谢物2个,390Da代谢物2个;雷公藤内酯酮代谢物5个,分子量为372Da代谢物1个,374Da代谢物1个,390Da代谢物3个.根据高分辨质谱精确分子量以及药物体内代谢规律鉴定为一羟基化雷公藤甲素(M1,M2,376Da),一羟基一羰基化雷公藤甲素(M3,M4,390Da);一羰基化雷公藤内酯酮(M5,372Da),一羟基化雷公藤内酯酮(M6,374Da),二羟基化雷公藤内酯酮(M7,M8,M9,390Da).结论 一羰基化雷公藤内酯酮(M5)及3个二羟基化雷公藤内酯酮(M7,M8,M9)代谢物为首次报道.     

人尿中苯丙哌林羟基化代谢产物的研究

目的　研究苯丙哌林在人体内的羟基化代谢过程。方法　选择10名健康男性受试者单剂量口服60 mg苯丙哌林,收集0～24 h尿样,经固相萃取后用LC/MSⁿ法检测羟基化代谢产物。利用微生物转化法和半制备HPLC获得其中两种代谢产物的对照品,并经NMR鉴定结构。根据质谱断裂规律进一步推测结合型代谢物的结构。结果 在人尿中发现苯丙哌林的5种羟基化代谢产物和它们与内源性葡糖醛酸和硫酸的结合物,与代谢物对照品的液相色谱和质谱信息比较,确证了其中两种代谢产物的结构分别为4″-羟基苯丙哌林和4″-羟基苯丙哌林。结论　苯丙哌林的羟基化代谢优先发生在芳环烷氧基对位,5种羟基化代谢产物在尿中主要以葡糖苷酸或硫酸酯结合物形式存在。     

异硫氰酸基雷公藤内酯醇活性代谢物雷公藤甲素在大鼠体内的药代动力学

目的观察大鼠单剂量静脉注射异硫氰酸基雷公藤内酯醇后雷公藤甲素的药代动力学。方法将大鼠分为2组(每组5只),分别单次尾静脉注射异硫氰酸基雷公藤内酯醇低、高剂量(4.25,8.50 mg·kg-1)。用LC-MS/MS法,检测大鼠血浆中雷公藤甲素的浓度,用BAPP 3.2软件计算药代动力学参数。结果低、高剂量的主要药代动力学参数如下:Cmax分别为(12.36±1.09),(55.74±21.20)ng·mL-1,Tmax均为(2.0±0.0)min,t1/2分别为(12.82±2.41),(13.73±2.84)h,AUC0-t分别为(245.93±42.50),(1034.45±471.76)ng·min.mL-1。结论在4.25～8.50 mg·kg-1,雷公藤甲素的药代动力学表现出非线性消除特征。     

雷公藤甲素及其氨基葡萄糖结合物的表观溶解度、表观油水分配系数和解离常数的测定

目的 测定雷公藤甲素及其氨基糖结合物的表观溶解度、表观油水分配系数和解离常数(pKTa).方法 采用平衡溶解度法、摇瓶法测定雷公藤甲素及其氨基糖结合物的表观溶解度和油水分配系数;采用分光光度指示剂法测定雷公藤甲素-氨基糖结合物的解离常数.结果 雷公藤甲素的表观溶解度随pH的增加而增加,其表观油水分配系数随pH的增加而降低,但变化并不显著.雷公藤甲素-氨基葡萄糖结合物的表观油水分布系数随pH的增加而增加,在纯水中的表观溶解度为1.9325±0.1373 g,pKT =5.938 ±0.191.结论 雷公藤甲素是一个难溶性的亲脂性化合物,而雷公藤甲素-氨基葡萄糖结合物是一个弱碱性的亲水性化合物.     

雷公藤甲素对Wistar大鼠免疫毒性相关基因表达的影响

目的应用基因芯片技术研究雷公藤甲素对大鼠胸腺全基因表达谱的影响,从基因水平探讨雷公藤甲素引起免疫抑制毒性的潜在分子作用机制。方法 Wistar大鼠,连续28 d ig给予雷公藤甲素0.5和1.0 mg·kg-1以及环孢素A 20 mg·kg-1(阳性对照),进行T细胞依赖抗体反应检测、免疫器官组织病理学检查和胸腺组织基因芯片实验。结果与溶媒对照组相比,雷公藤甲素0.5和1.0 mg·kg-1组和环孢素A组大鼠血清中T细胞依赖抗体应答水平均受到了显著抑制。组织病理学检查发现,雷公藤甲素1.0 mg·kg-1使胸腺皮髓质淋巴细胞数量轻度减少,环孢素A使胸腺髓质皮质化。基因芯片检测结果显示,雷公藤甲素1.0 mg·kg-1给药第7天引起422个显著差异表达基因,其基因功能主要涉及DNA依赖的细胞转录调节、核转运、微管蛋白复合体装配、核小体装配、线粒体DNA转录、氨基酸转运和线粒体DNA复制等。KEGG通路分析发现差异表达基因主要参与移植排斥和自身免疫性疾病等多个与免疫抑制相关的基因表达调控途径。结论雷公藤甲素1.0 mg·kg-1能够引起大鼠胸腺基因表达谱的显著性改变,其免疫毒性的主要机制可能是通过下调免疫毒性相关基因的表达,抑制淋巴细胞的增殖。     

反相高效液相色谱法测定雷公藤口服液中雷公藤甲素含量

目的 建立反相高效液相色谱法测定雷公藤口服液中雷公藤甲素含量的方法.方法 以ODS-BP(4.6 mm×250 mm)为色谱柱,水:甲醇(57:43)为流动相,流速1 mL·min-1,检测波长218 nm,分析时间90 min,测定雷公藤口服液中雷公藤甲素含量;结果 雷公藤甲素进样量在0.0247～0.7904 μg范围内峰面积线性关系良好,r=0.9995,加样回收率为99.56%.结论 该方法简便、准确、稳定性好,线性范围宽,可作为雷公藤甲素含量测定方法.     

HPLC法测定雷公藤粗制品中雷公藤甲素的含量

目的：建立高效液相色谱法测定雷公藤粗制品中雷公藤甲素的含量。方法：雷公藤粗制品经洗脱提取后，采用十八烷基键合硅胶柱，以乙腈-水（30：70）为流动相，以218nm为检测波长，检测雷公藤粗制品中雷公藤甲素的含量。结果：雷公藤甲素在1．92～11．52μg／ml范围内线性良好，r=0．9999，平均回收率为95．32％，RSD为1．16％。结论：本法操作简便、结果准确，可用于雷公藤粗制品中雷公藤甲素的含量测定。     

雷公藤红素新型衍生物体外抗肿瘤活性

目的探讨几种雷公藤红素新型衍生物的体外抗肿瘤活性。方法取对数生长期的大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株PC12细胞以及大鼠神经胶质瘤C6细胞,加入雷公藤红素、雷公藤红素衍生物(Cel-1～Cel-13)及阳性对照药顺铂,48 h后,通过四甲基偶氮唑盐比色法,测定各化合物半数抑制浓度(IC50),用以观察雷公藤红素各衍生物对PC12细胞以及C6两种细胞株增殖的影响。结果雷公藤红素衍生物Cel-1、Cel-3、Cel-6和Cel-13对PC12细胞的IC50值分别为(1.6±0.3)、(2.2±0.3)、(1.3±0.3)和(2.4±0.1)μmol.L-1,明显小于母核雷公藤红素(3.2±0.4)μmol.L-1(P<0.05,P<0.01);Cel-1对C6细胞的IC50值为(0.6±0.2)μmol.L-1,明显小于母核雷公藤红素(1.5±0.3)μmol.L-1(P<0.05);而且Cel-1、Cel-3、Cel-6和Cel-13明显小于顺铂对PC12和C6的IC50[(11.6±0.8)、(59.0±4.0)μmol.L-1](P<0.01)。结论雷公藤红素新型衍生物中4个化合物有较好的体外抗肿瘤活性,比母体雷公藤红素活性强。     

不同雷公藤制剂雷公藤甲素、雷公藤内酯甲及雷公藤总内酯含量的比较

目的比较雷公藤片、雷公藤多苷片、昆明山海棠片中雷公藤甲素、雷公藤内酯甲及雷公藤总内酯日用量的差异,为该类制剂的质量控制及临床应用评价提供参考。方法采用HPLC法测定雷公藤甲素、雷公藤内酯甲的含量,采用紫外分光光度法测定雷公藤总内酯的含量,比较不同厂家3种成分日用量的差异。雷公藤甲素以甲醇-水(45:55)为流动相,柱温为30℃,检测波长为218 nm;雷公藤内酯甲以乙腈-水(85:15)为流动相,柱温为30℃,检测波长为210 nm。结果雷公藤片中雷公藤甲素、雷公藤内酯甲及雷公藤总内酯3种成分的含量为最高,其次为雷公藤多苷片,昆明山海棠片最低,雷公藤甲素仅为雷公藤片的1/50、雷公藤内酯甲及总内酯为雷公藤片的1/8~1/10。临床上雷公藤甲素最高用量为53μg·d-1、最低用量仅为1.8μg·d-1,雷公藤内酯甲最高用量为1.2 mg·d-1、最低用量为0.1 mg·d-1,雷公藤总内酯最高用量为8.4mg·d-1、最低用量为1.3 mg·d-1。同一厂家不同批号的雷公藤片雷公藤甲素相差近5倍、雷公藤内酯甲相近、总内酯相差近1倍。结论不同雷公藤片、雷公藤多苷片、昆明山海棠片中雷公藤甲素、雷公藤内酯甲及雷公藤总内酯的日用量存在明显差异,以雷公藤片最高、其次为雷公藤多苷片、昆明山海棠片为最低。同一厂家不同批号的雷公藤片之间、雷公藤多苷片之间及不同厂家的雷公藤多苷片之间所测成分均有一定的差异,但不同厂家的昆明山海棠片相差不大。