骨髓基质细胞诱导分化为神经细胞的研究进展

骨髓基质细胞是一类起源于骨髓中支持结构的细胞,在适当的实验条件下能分化为神经细胞,为细胞移植以及中枢神经系统功能重建和神经再生提供了新的途径。目前体外诱导MSCs向神经细胞分化的方案主要有化学试剂单独诱导、生长因子单独诱导及化学试剂和生长因子联合诱导,其中两种诱导剂联合诱导的效果较好。MSCs向神经细胞分化的研究已取得了一些成果,但仍存在许多问题,如MSCs的鉴定、MSCs向神经细胞诱导分化模式和分子调控机制等。     

大鼠骨髓基质细胞体外诱导分化为神经细胞的研究

①目的 探讨大鼠骨髓基质细胞体外向神经细胞分化的特性。②方法 大鼠的骨髓基质细胞传代培养4代后，以成纤维细胞生长因子（bFGF）及β-巯基乙醇预诱导24小时，再以β-琉基乙醇、二甲基亚砜和3-叔丁基4-羟基茴香醚联合进行正式诱导6小时。诱导后的细胞采用免疫组化法进行鉴定。③结果 诱导后大鼠骨髓基质细胞神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达率分别为84．13％和4．27％。④结论 G-巯基乙醇、二甲基亚砜和3-叔丁基4-羟基茴香醚可以促进大鼠骨髓基质细胞向神经元和神经胶质细胞分化。     

小鼠骨髓基质细胞诱导分化为神经细胞的实验研究

目的探讨小鼠骨髓基质细胞体外诱导及向神经细胞方向分化.方法从小鼠骨髓中分离培养骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSC),应用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF),维甲酸(retinoic acid, RA),二甲亚砜和神经生长因子(nerve growth factor, NGF)对细胞诱导分化,72 h后对细胞表达神经微丝蛋白(NF-200),胶质原性纤维酸性蛋白(GFAP),纤维结合素(fibronectin)的结果进行荧光和组化检测.结果诱导72 h后细胞形态类似神经细胞改变,免疫组化显示约60%细胞分化为NF-200阳性细胞,约50%细胞分化为GFAP阳性细胞,同时细胞fibronectin表达明显降低,与对照组比较相差显著.结论维甲酸,神经生长因子,二甲亚砜,碱性成纤维细胞生长因子的联合作用可体外诱导骨髓基质细胞向神经细胞分化.     

大鼠梗死脑组织上清诱导人骨髓基质细胞向神经细胞分化

目的:探讨梗死脑组织上清对骨髓基质细胞分化的诱导作用.方法:从正常人肋骨分离培养骨髓基质细胞,以梗死脑组织上清诱导骨髓基质细胞,相差显微镜以及免疫荧光染色检测诱导结果.结果:诱导后骨髓基质细胞出现分化,胞体呈锥形,细胞有长突起,交织成网.免疫荧光染色显示诱导后的骨髓基质细胞表达MAP-2和GFAP的比例明显高于其他组(P＜0.05),表达MAP-2的细胞明显多于表达GFAP阳性细胞(P＜0.05).结论:梗死脑组织上清可以诱导骨髓基质细胞向神经细胞分化.     

骨髓基质细胞向神经细胞诱导分化的研究进展

骨髓基质细胞(BMSCs)作为一种成体干细胞,具有一定的自我更新、高度增殖和多向分化的潜能。在适宜的条件下,可以诱导分化为神经样细胞。骨髓基质细胞来源方便,取材较容易,体外培养和扩增的技术条件简便,具有向神经系细胞分化的潜能,可以考虑作为细胞移植治疗的种子细胞。     

β-巯基乙醇诱导成年鼠骨髓基质细胞向神经细胞分化的研究

目的：探讨β—巯基乙醇诱导成年大鼠骨髓基质细胞成神经细胞的可能性。为神经再生和诱导剂的筛选提供一种新的参考方法。方法：从大鼠骨髓中分离出骨髓基质细胞并培养传至3—5代，诱导前24h用含lmmo1／1的β—巯基乙醇及含20％的DMEM培养液培养，再以含5mmo1／1 β—巯基乙醇的无血清DMEM培养液作诱导，用免疫细胞化学方法鉴定神经细胞特异性标志物NF、NSE及GFAP的表达。结果：诱导后lh，部分细胞发生形态学上的改变，6h后大部分细胞不仅在形态上表现为神经元样特征，而且NF、NSE等特异性抗体呈阳性表达，而GFAP抗体表达呈阴性。结论：β—巯基乙醇能将骨髓基质细胞诱导成神经元样细胞。     

骨髓基质细胞向神经细胞诱导分化的研究进展

骨髓基质细胞，与胚胎干细胞一样具有多向分化潜能，在一定条件诱导下，可以跨谱系分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肝脏细胞、神经干细胞，并可生成神经元及神经胶质细胞等，脑内移植骨髓基质细胞能改善帕金森病大鼠模型的旋转和缺血小鼠的功能恢复。骨髓取材方便，骨髓基质细胞体外扩增后，进行基因工程修饰或诱导分化为神经干细胞进行自体移植，不存在免疫排斥反应，是干细胞移植治疗脑损伤和神经退行性变的理想材料，有广阔的应用前景。     

大鼠骨髓基质细胞体外诱导分化和脑内定位移植

目的 了解骨髓基质细胞（MSC）在体外对抗氧化剂和生长因子等的反应及其脑内移植后的情况。方法 体外培养成年大鼠MsC，用β-巯基乙醇、BDNF、GDNF、CNTF、forskolin诱导分化，并将MSC植入成鼠大脑皮质，观察MSC在体内外环境中是否能够分化为神经细胞。采用流式细胞术鉴定MSC，免疫荧光染色法鉴定神经细胞。结果 在本实验条件下，MSC未见被诱导成神经细胞，植入脑内的MSC能够存活并迁移，但也未见分化为神经细胞。结论 MSC横向分化为神经细胞可能是多因素作用的结果，需要更多的实验对其横向分化和定向分化进行探索。     

人骨髓基质细胞向神经细胞分化的方法学研究

目的改进采用人骨髓体外培养人骨髓基质细胞（hBMSCs），进行体外传代扩增，并探索体外诱导分化为神经元样细胞的方法。方法抽取人骨髓血，淋巴细胞分离液分离，DMEM／15％人血清培养传代。至第3～5代时加入巯基乙醇（BME），观察hBMSCs分化为神经元样细胞的形态学变化。结果该方法hBMSCs在体外可以实现数目扩增，在特定诱导剂的作用下向神经元样细胞分化。结论采用少量骨髓样本，既可培养获得充足的细胞量。可以满足定向诱导和细胞移植的需要。     

大鼠骨髓基质细胞体外诱导分化的研究

目的:探索骨髓基质细胞体外定向诱导分化为神经细胞的可能性。方法:取大鼠的骨髓基质细胞在体外培养,用免疫组化方法检测正常脊髓提取液和脑源性神经生长因子诱导分化,观察诱导后细胞的形态。结果:骨髓基质细胞在体外培养呈梭形。诱导后细胞呈神经元样细胞改变。神经元烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白染色阳性。结论:骨髓基质细胞可在体外诱导分化。     

骨髓基质细胞体外诱导分化为内皮细胞的超微结构研究

目的采用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)体外诱导骨髓基质细胞(BMSC)的方法,探讨BMSC向内皮细胞分化的可行性。方法在无菌条件下采集SD大鼠(雄性,体质量150~160g,10只)的长骨骨髓,获得骨髓细胞。实验组细胞以高质量浓度rhGM-CSF(400μg/L)为诱导剂,进行体外诱导分化;对照组培养基为常规1640培养液。培养至第8天,收集细胞后分别应用扫描电镜和透射电镜观察实验组分化后细胞的超微结构,并对分化后的细胞进行内皮细胞的鉴定。结果实验组细胞在透射电镜下可见内皮细胞结构特征及特征性的W-P小体结构,扫描电镜下可见细胞呈多边形,细胞膜表面有大量的细长丝状伪足及短小的微绒毛,符合内皮细胞的特点。结论BMSC在高浓度的rhGM-CSF诱导作用下分化的细胞具有内皮细胞的形态学特征。     

骨髓基质细胞体外成骨能力的实验研究

目的 研究骨髓基质细胞(BMSc)的体外成骨能力，为骨组织工程研究提供细胞来源。方法 采用密度梯度离心法将兔BMSc自小量骨髓中分离培养，并观察第2代BMSc在地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠诱导条件下的生长及成骨分化情况。结果 BMSc呈成纤维细胞样表现，增殖能力强，在诱导条件下碱性酸酶活性明显增高，并出现矿化结节。结论 BMSc体外增殖能力强，成骨能力肯定。地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠可促进BMSc向成骨细胞分化。     

微管在骨髓基质细胞向肌细胞分化过程中的表达

目的 探索微管在骨髓基质细胞（BMSCs）向肌细胞分化过程中的动态变化，为研究BMSCs向肌细胞分化的信号传导途径提供思路。方法 实验分3组，A组：单纯培养BMSCs；B组：将BMSCs与心肌细胞共同培养．但两种细胞不相互接触；C组：将BMSCs与心肌细胞共同培养，使细胞间相互接触，以模拟其所处的心脏微环境。使用4，6-二胺基苯吲哚（DAPI）标记BMSCs并追踪微管组装的动态过程，分析各组BMSCs的形态结构和表型的变化。结果 A、B组BMSCs无明显改变。C组BMSCs在共同培养7d后，与相邻的心肌细胞形成同步收缩的细胞团块，邻近心肌细胞的BMSCs首先表现出微管的组装明显增加，随后才表达出肌细胞特异性蛋白。结论 BMSCs与心肌细胞相互作用过程中，微管可能起信号传导作用，心肌细胞对邻近BMSCs的周期性机械牵拉作用是促进微管的组装及细胞分化的关键因素。     

诱导兔骨髓基质细胞向神经干细胞分化的初步实验研究

目的：观察兔骨髓基质细胞体外培养的生长行为及增殖、分化情况，探讨由骨髓分离培养神经干细胞的可行性和有效性。方法：无菌条件下行骨穿术，密度梯度离心分离获取骨髓基质细胞，利用多种增殖、分化诱导因子和神经干细胞培养液进行培养、分化诱导，用免疫细胞化学方法进行鉴定。结朵：骨髓基质细胞在体外培养中能形成NESTIN抗原阳性的细胞克隆团，进一步分化，部分细胞胞体增大并出芽，逐渐发育成为较成熟的长突起细胞，长突起相互连接、交织成网并建立纤维联系。结论：骨髓基质细胞具有较强的自我更新能力和多向分化潜能，易于取材、体外培养和增殖，在一定诱导条件下可以生成神经干细胞。     

Mechanism of in Vitro Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells into Neuron-like Cells

Marrowstromalcells (MSCs)arethenon hematopoieticprecursorsinthebonemarrowstromaofadultmammal.Underspecificexperimentalcondi tions,itcandifferentiateintoneuron[1] .Thephe nomenonhasgivenresearchersagreatsurprise .Andnow ,thehotspotistofinditstrueevidence ,…     

诱导人骨髓间充质干细胞向运动神经元分化的研究

目的探讨人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal stemcells,hMSCs）在体外诱导向运动神经元分化的潜能。方法用密度梯度离心法分离hMSCs,在含有10%FBS的DMEM/F12培养基中的培养扩增。将传代后的第1代hMSCs分为诱导组和对照组,诱导组的细胞在完全培养基中加入终浓度为10μg/L碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）预处理24h后,用0.5μg/mL维甲酸（RA）和200ng/mL音速波状蛋白（shh）联合诱导10d。对照组不加上述诱导剂。光镜下观察其分化过程中hMSCs的形态变化,免疫组化检测诱导前后细胞是否表达神经干细胞特异性标志蛋白,用流式细胞仪检测是否产生运动神经元及在总的细胞数种所占比率,并用流式软件分析结果。结果诱导组hMSCs经诱导后能分化为具有典型神经元形态的细胞,部分细胞表达抗人神经巢蛋白（Nestin）,表达率达到（25.0±4.8）%;流式检测诱导后运动神经元特异性标志蛋白HB9表达,表达率达到（50.0±5.3）%。对照组细胞形态无改变,无Nestin表达,HB9表达小于5%。结论hMSCs在体外条件下能诱导分化为运动神经元样细胞。     

骨髓基质细胞定向成脂分化的实验研究

目的为了研究髓内脂肪细胞的作用,并为相关实验提供脂肪细胞来源,并观察地塞米松诱导骨髓基质细胞向脂肪细胞分化的作用。方法采用原代骨髓基质细胞体外培养技术,取大鼠双侧股骨骨髓细胞,用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液离心分离,获取骨髓基质细胞。以地塞米松作为脂肪细胞分化诱导剂处理骨髓基质细胞,油红O染色,光镜下脂肪细胞计数。结果以递增浓度(0,1×10-8,1×10-7,1×10-6,1×10-5moL/L)地塞米松处理骨髓基质细胞,并培养21天,1×10-5moL/L组中诱导分化生成的脂肪细胞达到90%以上,对照组中脂肪细胞几乎为0。各组脂肪细胞比例随地塞米松浓度增大而增多,具有一定的浓度依赖性。结论在高浓度的地塞米松诱导下,骨髓基质细胞可分化为脂肪细胞,这可能是激素性骨质疏松的发病原因之一。     

骨髓基质干细胞定向分化成心肌样细胞的基础研究

目的：骨髓基质干细胞在体外能定向分化成心肌样细胞。本研究旨在将分离出来的骨髓基质干细胞标记后注射到心壁内，观察其能否分化成心肌样细胞。方法：将骨髓基质干细胞体外培养扩增后用Brd U标记，将标记后的骨髓基质干细胞注射入结扎冠状动脉左前降支远端的大鼠左心室壁内，假手术组仅注射等量的培养液(元细胞)。结果：反复传代可获得大量纤维状的骨髓基质干细胞，Brd U对骨髓基质干细胞的标记率约为41．4l％。手术组细胞注射部位心脏组织中部分细胞内可见抗心室肌肌凝蛋白重链单克隆抗体(MHC)、抗Brd U抗体及抗心房利钠肽抗体、抗Brd U抗体双染色阳性颗粒，假手术组仅为单染色阳性颗粒。结论：移植的骨髓基质干细胞能在心脏提供的特殊微环境下分化成心肌样细胞。     

大鼠骨髓基质细胞的生长特点和在诱骨条件下的成骨特性

目的　研究大鼠骨髓基质细胞 (r MSCs)的生长特点和在诱导条件下的成骨特性。方法　使用密度梯度法分离成年大鼠骨髓基质细胞进行培养 ,保留贴壁细胞传代 ,观察、测试在培养液中添加成骨诱导剂地塞米松 (Dex) 10 - 8mol/ L、β-甘油磷酸钠 (β- GP) 10 mm ol/ L,抗坏血酸 (AA) 5 0 μg/ ml条件下骨髓基质细胞的生长变化和成骨分化。结果　形态学观察表明 ,r MSCs贴壁细胞呈集落生长 ,有成纤维细胞样外观。利用 MTT法和流式细胞术 (FCM)测定增殖的结果表明 ,传代次数增加 ,r MSCs的增殖活性升高。成骨诱导剂促进骨髓基质细胞的增殖 ,而且对多次传代细胞促增殖作用明显。成骨诱导剂促进骨髓基质细胞成骨 ,在诱导 3周时即出现明显的钙化结节。组织化学染色结果显示 ,非诱导条件下 MSCs的碱性磷酸酶 (AL P)水平会随传代而升高。传 3代 r MSCs的 AL P的表达较弱 ,诱导一周后 AL P的表达明显升高 ,超过未加诱导剂的传一代大鼠成骨细胞 (OB)的 AL P表达。结论　本实验表明所培养的 r MSCs仍处于低分化水平 ,具有骨祖细胞的特性。     

体外诱导大鼠骨髓基质细胞向心肌细胞的分化

目的　通过体外诱导研究骨髓基质细胞 (MSC)向心肌样细胞的分化和心肌细胞特异性标志的表达。方法　抽取雄性SD大鼠骨髓 ,进行体外培养和连续传代 ,获得较纯的MSC。采用第 8代的MSC ,以去甲基化药物 5 氮杂胞苷进行体外诱导 ,相差显微镜下观察其形态变化 ,通过流式细胞仪 (FACS)分析细胞形态比例 ,以免疫组化方法鉴定心肌特征性蛋白Desmin和肌钙蛋白T(cTnT)表达 ,并通过RT PCR鉴定心肌特异因子基因的表达。结果　诱导前MSC多呈扁平多突起形态 ,诱导后形态发生变化 ,10d细胞呈长梭形 ,2 0d后细胞之间形成连接 ,排列方向渐趋一致 ,1月时出现肌管样结构。FACS检测发现诱导后MSC形态构成发生变化 ,以形态较小细胞为主。免疫组化检测Desmin阳性比例近 35 % ,有cTnT免疫荧光阳性细胞出现 ,约占 10 %。RT PCR显示诱导后MSC后有GATA 4、ANP和a MHC基因表达。结论　成体中的MSC在一定诱导条件下可以表现心肌样特征 ,是临床心肌细胞成形术理想的移植细胞