利拉鲁肽通过调控AMPK/mTOR自噬信号减轻糖尿病大鼠心肌炎症和氧化应激损伤

目的 探讨利拉鲁肽(liraglutide, LRG)改善2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌炎症和氧化应激损伤的可能机制。方法 选取40只雄性SD大鼠,分为对照组(CON)、T2DM组、LRG组、LRG+AMPK抑制剂Compound C组(LRG+CC)。4周后,检测大鼠血糖、血脂;彩色多普勒超声检测大鼠心功能;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;Western blot检测心肌炎症、氧化应激、凋亡、自噬及AMPK/mTOR通路相关蛋白表达。结果 LRG能降低T2DM大鼠高血糖、高血脂,改善心功能指标;LRG能降低T2DM大鼠心肌IL-6、TNF-α、IL-1β、NOX2、NOX4、cleaved caspase-3、Bax、p-mTOR/mTOR表达及MDA含量,增加Bcl-2、Atg5、Beclin-1、LC3-II/LC3-I、p-AMPK/AMPK表达及SOD、GSH活性,从而抑制心肌炎症、氧化应激和凋亡,并增强自噬,但使用AMPK抑制剂Compound C能够明显逆转LRG的作用。结论 LRG可通过调控AMPK/mTOR自噬信号减轻T2DM大鼠心肌炎症和氧化应激损伤。     

归肾经方含药血清对阿霉素诱导的足细胞损伤及自噬相关蛋白的影响

目的：研究归肾经方对阿霉素（adriamycin,ADR）诱导的肾小球足细胞损伤标志蛋白nephrin及自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p-mTOR等表达的影响。 方法：以ADR体外诱导的方法制作足细胞损伤的细胞模型。除空白组外均以ADR诱导足细胞,分为5组：空白组（control group,10%空白血清）、模型组（model group,10%空白血清+ADR 0.5 μg·mL^-1）、中药高剂量组（H-TCM group,10%高剂量归肾经方含药血清+ADR 0.5 μg·mL^-1）、中药低剂量组（L-TCM group,10%低剂量归肾经方含药血清+ADR 0.5 μg·mL^-1）、替米沙坦组（TMST group,10%替米沙坦含药血清+ADR 0.5 μg·mL^-1）。CCK-8检测各组细胞活性改变,Western blot法检测各组足细胞标志蛋白nephrin、desmin及自噬相关蛋白beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ等表达。 结果：①与空白组比较,模型组细胞活力显著降低（P<0.01）,与模型组比较,中药高剂量组及替米沙坦组细胞活性显著增高（P<0.05）;②Western blot检测结果显示,与control组比较,model组nephrin显著降低（P<0.01）,desmin、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、p-Akt、p-mTOR显著增高（P<0.01）;与Model组比较,H-TCM组及TMST组nehprin表达显著增高（P<0.05）,desmin表达显著降低（P<0.05）,H-TCM、L-TCM及TMST组Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、p-Akt、p-mTOR表达显著降低（P<0.01）;与H-TCM组比较,L-TCM组LC3Ⅱ/Ⅰ表达显著增高（P<0.05）。结论：归肾经方可以修复ADR诱导的足细胞损伤,改善细胞内的自噬水平,与上调细胞内nephrin、Beclin-1、p-Akt、p-mTOR的表达有关。     

金匮肾气汤促进糖尿病小鼠肾脏足细胞自噬

目的探讨金匮肾气汤对db/db糖尿病小鼠肾脏足细胞自噬的影响及机制。方法将6周龄db/db糖尿病小鼠随机分为生理盐水组、金匮肾气汤低、高剂量组、二甲双胍组,均灌胃给药;♂db/m小鼠作为正常对照组。于第18周龄处死动物,留24 h尿检测尿白蛋白、肌酐;取血,检测血糖、肌酐;留取肾脏组织,分别进行PAS染色观察肾小球内细胞外基质增生情况,免疫组织化学检测WT1在肾组织的表达,透射电子显微镜观察足细胞内自噬体情况,Western blot检测LC3Ⅰ/Ⅱ、p62、p-mTOR/mTOR、p-AMPK/AMPK在肾组织的表达。结果与db/db糖尿病小鼠组比较,金匮肾气汤治疗后,24 h尿白蛋白减少、尿白蛋/肌酐下降、血肌酐下降(P<0.05),肾小球内系膜增宽程度减轻,足细胞内自噬体增加,WT1阳性细胞核数量明显增加(P<0.05),肾皮质内LC3Ⅱ表达明显增强、p62表达明显降低(P<0.05),AMPK磷酸化明显增加,mTOR磷酸化受到抑制(P<0.05)。结论金匮肾气汤通过AMPK-mTOR途径,促进足细胞自噬,保护足细胞,延缓糖尿病肾病的进展。     

槲皮素对胃癌相关p53/AMPK/mTOR信号通路的影响

目的　探讨槲皮素（QE）对胃癌相关p53/AMPK/mTOR信号通路的影响。方法　将胃癌细胞分为QE组和溶剂组,QE组以DMSO为溶剂按配制QE浓度分别为0.02、0.04、0.06及0.08 mmol/L,对细胞进行干预,分别为QEA、QEB、QEC、QED组,溶剂组加入等量不含QE的溶剂。MTT实验检测槲皮素对胃癌细胞增殖的影响;MDC染色法检测槲皮素对胃癌细胞自噬的影响;双染法检测槲皮素对胃癌细胞凋亡的影响;实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞内p53、AMPK及mTOR的mRNA相对表达水平;Western blot检测细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P53、AMPK、mTOR蛋白表达差异。结果　与溶剂组相比,QE各剂量组胃癌细胞的自噬程度和凋亡率均显著增加,细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达量上调,p53、AMPK mRNA和蛋白水平均上调,mTOR的mRNA和蛋白表达量均下调（P＜0.05）,且呈剂量依赖性。结论　QE可以抑制胃癌细胞增殖,诱导其发生自噬、促进其凋亡,其作用机制可能与p53/AMPK/mTOR信号通路有关。     

3-溴丙酮酸通过AMPK/mTOR信号通路调控成纤维样滑膜细胞凋亡/自噬失衡的作用北大核心CSCD

目的基于AMPK/mTOR信号通路探讨3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BrPA)对大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡、自噬的调控作用和机制。方法使用肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导体外培养的大鼠FLS来构建类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)模型。MTT实验检测TNF-α诱导FLS以及3-BrPA治疗FLS的适宜浓度,划痕实验和Transwell实验检测3-BrPA对FLS迁移和侵袭能力的影响,流式细胞术和JC-1线粒体膜电位实验检测FLS的凋亡情况,mCherry-EGFP-LC3B过表达质粒检测FLS自噬流变化,Western blot检测FLS凋亡/自噬相关蛋白及AMPK/mTOR通路相关蛋白的表达。结果3-BrPA(15μmol·L^(-1))明显抑制了TNF-α(25μg·L^(-1))刺激下FLS的增殖、迁移和侵袭。此外,还促进FLS凋亡、下调FLS线粒体膜电位并阻断FLS的自噬流。Western blot检测结果显示,相比于TNF-α组,3-BrPA上调caspase-3、Bax、P62和p-mTOR/mTOR的表达,下调LC3B、Beclin1、Bcl-2和p-AMPK/AMPK的表达。结论3-BrPA能够在体外调节大鼠FLS凋亡/自噬失衡来抑制其异常活化,其机制可能与抑制AMPK/mTOR信号通路有关。     

白桦脂酸调节AMPK/mTOR/ULK1信号通路对冠心病大鼠血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响

目的 探究白桦脂酸通过调节腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/Unc-51样自噬激活激酶1(ULK1)信号通路对冠心病大鼠血管平滑肌细胞自噬和凋亡的影响。方法 原代培养冠心病大鼠血管平滑肌细胞,将其随机分为正常组(Control组)、模型组(Model组)、低浓度(20μmol/L)白桦脂酸组(BA-L组)、高浓度(40μmol/L)白桦脂酸组(BA-H组)和高浓度(40μmol/L)白桦脂酸+AMPK抑制剂(10μmol/L)Compound C组(BA-H+CC组)。CCK-8法检测大鼠血管平滑肌细胞的细胞活力。流式细胞术检测细胞凋亡。mRFP-GFP-LC3双荧光体系示踪大鼠血管平滑肌细胞的自噬小体。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测大鼠血管平滑肌细胞中AMPK、mTOR、ULK1 mRNA的表达。Western blot实验检测大鼠血管平滑肌细胞中AMPK、mTOR、ULK1、LC3、Bax、Bcl-2、Beclin-1蛋白表达水平。结果 与Control组相比,Model组血管平滑肌细胞的细胞活力(48 h、72 h)、Bcl-2蛋白...     

厄贝沙坦激活PPAR-γ介导AMPK/mTOR通路诱导自噬改善LO2细胞脂肪变

摘要：目的　探讨厄贝沙坦调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR-γ）介导磷酸腺苷依赖的蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路及自噬对LO2细胞脂肪变的影响。方法　采用脂混合物（LM）诱导LO2细胞建立细胞脂肪变模型,将造模后细胞分为模型组、厄贝沙坦组和厄贝沙坦联合PPAR-γ抑制剂组,另设正常组。分别干预24 h后,采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测细胞三酰甘油（TG）和总胆固醇（TC）含量,并行油红O染色分析细胞内脂质沉积,通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞PPAR-γ、AMPK/mTOR信号通路相关蛋白的表达,应用激光共聚焦技术观察自噬标志蛋白LC3B的变化。结果　10 μmol/L及以下浓度的厄贝沙坦对LO2细胞生长无明显毒性作用,20 μmol/L厄贝沙坦对细胞毒性作用较大,表现出明显的抑制作用。与正常组比较,模型组LO2细胞内TG和TC含量升高,油红O染色显示脂质大量沉积,PPAR-γ、p-AMPK和LC3B蛋白表达水平降低,mTOR磷酸化水平升高（均P＜0.05）;与模型组比较,经厄贝沙坦治疗后,LO2细胞内TG和TC含量降低,油红O染色显示脂质沉积减少,PPAR-γ、p-AMPK和LC3B蛋白表达水平升高,mTOR磷酸化水平降低（均P＜0.05）;但经厄贝沙坦联合PPAR-γ抑制剂干预后,PPAP-γ抑制剂抑制了厄贝沙坦对LO2细胞脂肪变的治疗作用。结论　厄贝沙坦可通过激活PPAR-γ介导的AMPK/mTOR信号通路,促进LM诱导LO2细胞的自噬,从而减轻脂质沉积,改善肝细胞脂肪变。     

乙酰胆碱抑制自噬保护高糖诱导的H9c2细胞损伤

目的研究乙酰胆碱(ACh)对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响及机制。方法应用高糖处理H9c2细胞72 h,建立心肌细胞损伤模型。实验分为:①对照组(control);②高糖组(HG);③HG+ACh(10-4nmol·L~(-1))组;④HG+ACh+AICAR(0. 5 nmol·L~(-1))组;⑤HG+ACh+雷帕霉素(rapamycin,Rap)组(Rap 50 nmol·L-1);⑥HG+3-MA(2 mmol·L~(-1))组。MTT及ATP含量检测,评估各组细胞活性;Western blot观察各组自噬、凋亡及AMPK/m TOR信号通路相关蛋白表达变化;透射电镜观察各组细胞自噬小体的数量变化。结果与对照组相比,HG组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、pAMPK/AMPK比值降低(P <0. 05),p-mTOR/m TOR、Bax/Bcl-2比值升高(P <0. 05);与HG组相比,HG+3-MA组Bax/Bcl-2比值降低(P <0. 05),HG+ACh组心肌细胞活性增加(P <0. 05),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p-AMPK/AMPK、Bax/Bcl-2比值降低(P <0. 05),p-mTOR/m TOR比值升高(P <0. 05);与HG+ACh组相比,HG+ACh+AICAR组p-AMPK/AMPK比值升高(P <0. 05),p-mTOR/m TOR比值降低(P <0. 05),而LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高(P <0. 05),HG+ACh+Rap组Bax/Bcl-2比值升高(P <0. 05)。结论 ACh通过AMPK信号通路抑制自噬,保护高糖诱导的心肌细胞损伤。     

补阳还五汤通过AMPK/mTOR/ULK1信号通路调控自噬减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤

目的探讨补阳还五汤抗大鼠脑缺血/再灌注损伤的AMPK/mTOR/ULK1自噬信号通路机制。方法用改良线栓法建造大鼠左侧脑缺血模型,各组大鼠每24 h给药1次,共3次。再灌注72 h后观察大鼠神经损伤情况和脑梗死体积改变;尼氏染色法和TUNEL染色法观察神经细胞形态、数量以及凋亡情况;Western blot检测自噬蛋白和AMPK/mTOR/ULK1自噬信号通路相关蛋白表达情况。结果补阳还五汤改善大鼠神经功能缺陷,减少脑梗死体积和神经细胞凋亡,减轻脑组织病理损伤;抑制AMPK磷酸化活化,解除AMPK对下游mTOR和ULK1的抑制,促进二者磷酸化激活,抑制细胞自噬。AMPK激动剂Metformin提高细胞自噬水平,同时逆转了补阳还五汤抗大鼠脑缺血/再灌注损伤作用。结论补阳还五汤介导AMPK/mTOR/ULK1自噬信号通路对脑缺血/再灌注损伤大鼠发挥神经保护作用。     

mTOR-自噬通路对脓毒症小鼠海马小胶质细胞表型的影响

目的 探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）-自噬通路对脓毒症小鼠海马小胶质细胞表型的影响。方法 54 只雄性 ICR 小鼠,按照随机数字表法分为 3 组（n=18）：假手术组（Sham 组）、脓毒症组（CLP 组）和脓毒症+mTOR抑制剂雷帕霉素组（CLP+Ra组）。Sham组只进行开腹手术操作;CLP组采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症小鼠模型;CLP+Ra 组于造模前 6 h腹腔注射雷帕霉素（1.5 mg/kg）。于造模后 24 h各组取 6只,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测海马组织肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、IL-10和转化生长因子（TGF）-β水平;采用免疫荧光染色法检测海马组织切片离子钙接头蛋白分子（Iba）-1/CD86和 Iba-1/CD206阳性细胞数量;采用蛋白免疫印迹法测定海马组织 mTOR磷酸化（p-mTOR）水平、自噬相关蛋白微管相关蛋白 1轻链 3Ⅱ（LC3Ⅱ）和 Beclin-1表达情况。结果 与 Sham组比较,CLP组 TNF-α、IL-1β、IL-10和 TGF-β水平升高,Iba-1/CD86和 Iba-1/CD206阳性细胞数量增加,p-mTOR水平上调,LC3Ⅱ和 Beclin-1表达下调（均 P＜0.05）。与 CLP组比较,CLP+Ra组 TNF-α和 IL-1β水平降低,IL-10和 TGF-β水平升高,Iba-1/CD86阳性细胞数量减少,Iba-1/CD206阳性细胞数量增加,p-mTOR水平下调,LC3Ⅱ和 Beclin-1表达上调（均 P＜0.05）。结论 mTOR-自噬通路通过调节小胶质细胞表型转化,影响脓毒症小鼠海马炎症反应。     

柚皮素通过AMPK通路介导的自噬对顺铂耐药宫颈癌细胞(HeLa/DDP)顺铂耐药性的影响

目的探究柚皮素对顺铂耐药宫颈癌细胞(HeLa/DDP)顺铂耐药性的影响,并探究其分子机制。方法体外培养人HeLa/DDP细胞、HeLa细胞,CCK-8法检测不同质量浓度顺铂对HeLa/DDP、He La细胞增殖的影响及不同质量浓度柚皮素对HeLa/DDP细胞增殖的影响。设置对照组、顺铂组(2 mg/L顺铂)、顺铂+柚皮素组(2 mg/L顺铂+60 mg/L柚皮素)和顺铂+柚皮素+AMPK通路抑制剂组(2mg/L顺铂+60mg/L柚皮素+50μmol/LCompoundC);CCK-8法检测各组HeLa/DDP细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组HeLa/DDP细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(Westernblotting)法检测各组HeLa/DDP细胞中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、p-AMPK、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表达情况。结果顺铂对HeLa/DDP细胞、HeLa细胞的半数抑制浓度(IC50)分别在4～8、1～2 mg/L,柚皮素对HeLa/DDP细胞的IC50在30～60mg/L。与对照组相比,顺铂组He La/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率及细胞中p-AMPK/AMPK、Bax、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P0.05),LC3Ⅰ蛋白表达水平显著降低(P0.05);与顺铂组相比,顺铂+柚皮素组HeLa/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率及细胞中p-AMPK/AMPK、Bax、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P0.05),LC3Ⅰ蛋白表达水平显著降低(P0.05);与柚皮素组相比,AMPK通路抑制剂组He La/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率及细胞中p-AMPK/AMPK、Bax、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达水平显著降低(P0.05),LC3Ⅰ蛋白表达水平显著升高(P0.05)。结论柚皮素可能通过激活AMPK通路介导的自噬反应,与顺铂联用发挥对HeLa/DDP细胞增殖抑制作用及凋亡促进作用。     

大黄衍生物B对白介素-6诱导宫颈癌Hela生物学行为的影响

目的探讨大黄衍生物B通过AMPK/mTOR通路对白介素-6(IL-6)诱导的子宫癌细胞凋亡、迁移及侵袭的影响。方法将宫颈癌Hela细胞分为对照组、IL-6组、高剂量组、中剂量组和低剂量组。IL-6组添加25 ng/ml IL-6,低剂量组添加25 ng/ml IL-6+40μmol/L大黄衍生物B,中剂量组添加25 ng/ml IL-6+80μmol/L大黄衍生物B,高剂量组添加25 ng/ml IL-6+120μmol/L大黄衍生物B。MTT试剂检测宫颈癌细胞增殖,流式细胞仪检测宫颈癌细胞凋亡,细胞划痕测定宫颈癌细胞迁移能力,Transwell小室测定宫颈癌细胞侵袭能力,RT-PCR检测各组细胞中AMPK、mTOR、TSC1和TSC2 mRNA表达,Western blot检测各组细胞AMPK、mTOR、p-AMPK、p-mTOR、TSC1和TSC2表达。结果各剂量组宫颈癌细胞增殖抑制率和凋亡率明显低于IL-6组(P0.01)。各剂量组宫颈癌细胞细胞划痕愈合率和穿膜细胞数明显低于IL-6组(P0.01)。各剂量组宫颈癌细胞AMPK、TSC1和TSC2 mRNA表达明显高于IL-6组(P0.01),mTOR mRNA表达明显低于IL-6组(P0.01)。各剂量组宫颈癌细胞AMPK、p-AMPK、TSC1和TSC2蛋白表达明显高于IL-6组(P0.01),mTOR和p-mTOR蛋白表达明显低于IL-6组(P0.01)。结论大黄衍生物B通过上调AMPK和下调mTOR通路能够明显抑制白介素-6诱导宫颈癌Hela增殖、迁移及侵袭。     

西格列汀通过调控自噬和凋亡减轻棕榈酸诱导的心肌细胞损伤

目的：观察西格列汀是否通过调节心肌细胞自噬来减轻棕榈酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡。方法：棕榈酸和西格列汀处理H9c2细胞24 h后,CCK-8试剂盒检测细胞存活率;共聚焦和Western blotting检测自噬标志蛋白LC3的表达情况;TUNEL试剂盒检测细胞凋亡情况;Western blotting分析凋亡相关蛋白C-Casp3、C-PARP和Cyt C以及相关调控因子AMPK和mTOR等的表达。结果：棕榈酸抑制H9c2细胞活性,减少LC3的蛋白表达,增加TUNEL阳性的凋亡细胞比率,增加凋亡相关蛋白的表达,抑制AMPK的磷酸化;而西格列汀可抑制PA对H9c2的这些作用,促进LC3蛋白表达,减少凋亡蛋白表达和凋亡细胞比率,增加AMPK的磷酸化。结论：本研究显示西格列汀可能通过促进自噬和减轻细胞凋亡来对抗棕榈酸诱导的细胞损伤,且这种作用可能是通过AMPK信号通路介导的。     

基于LKB1/AMPK信号通路探究金雀异黄酮对癫痫大鼠海马神经元凋亡和自噬的影响

摘要：目的:基于肝激酶B1（LKB1）/5’-磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMPK）信号通路探究金雀异黄酮对癫痫大鼠海马神经元凋亡和自噬的影响。方法:于腹腔内注射氯化锂与匹罗卡品诱导建立癫痫大鼠模型,随机分为5组（每组12只）:模型组、金雀异黄酮低剂量组(7 mg·kg-1)、金雀异黄酮高剂量组(14 mg·kg-1)、金雀异黄酮(14 mg·kg-1)+空载（空载质粒）组、金雀异黄酮(14 mg·kg-1)+LKB1敲低（LKB1 siRNA质粒）组,另取12只Wistar大鼠,腹腔内注射等剂量生理盐水作为正常对照组,以金雀异黄酮和质粒分组给药干预后,检测各组大鼠癫痫评分及平均癫痫发作时间;以跳台实验检测各组大鼠学习记忆能力;以原位末端标记法（TUNEL）染色检测各组大鼠海马神经元凋亡率;以酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒测量各组大鼠血清致炎因子环氧化酶-2（COX-2）、白细胞介素（IL）-1β、IL-17水平;以免疫印迹检测各组大鼠脑组织自噬、凋亡及LKB1/AMPK通路蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠癫痫评分、平均癫痫发作时间、跳台实验犯错次数、海马神经元凋亡率、血清COX-2、IL-1β及IL-17水平、脑组织凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）表达水平显著升高（P＜0.05）,大鼠跳台实验潜伏期、脑组织自噬蛋白LC3-II/LC3-I、P62及LKB1/AMPK通路蛋白p-AMPK/AMPK、LKB1表达水平显著降低（P＜0.05）;与模型组相比,金雀异黄酮低、高剂量组大鼠癫痫评分、平均癫痫发作时间、跳台实验犯错次数、海马神经元凋亡率、血清COX-2、IL-1β及IL-17水平、脑组织凋亡蛋白caspase-3、Bax表达水平显著降低（P＜0.05）,大鼠跳台实验潜伏期、脑组织自噬蛋白LC3-II/LC3-I、P62及LKB1/AMPK通路蛋白p-AMPK/AMPK、LKB1表达水平显著升高（P＜0.05）,且金雀异黄酮低、高剂量组间各指标差异均有统计学意义（P＜0.05）;与金雀异黄酮高剂量组相比,金雀异黄酮+LKB1敲低组大鼠癫痫评分、平均癫痫发作时间、跳台实验犯错次数、海马神经元凋亡率、血清COX-2、IL-1β及IL-17水平、脑组织凋亡蛋白caspase-3、Bax表达水平显著升高（P＜0.05）,大鼠跳台实验潜伏期、脑组织自噬蛋白LC3-II/LC3-I、P62及LKB1/AMPK通路蛋白p-AMPK/AMPK、LKB1表达水平显著降低（P＜0.05）。结论:金雀异黄酮可通过激活LKB1/AMPK信号而减轻癫痫大鼠炎症,增强脑组织自噬,抑制大鼠海马神经元凋亡,提高其学习记忆能力,改善其癫痫症状。     

苍术素调节腺苷酸活化蛋白激酶 /沉默信息调节因子 1信号通路对白细胞介素 -1β诱导软骨细胞自噬和凋亡的影响

目的探讨苍术素(ATR)通过调节腺苷酸活化蛋白激酶 /沉默信息调节因子 1(AMPK/SIRT1)信号通路对白细胞介素 1β(IL-1β)诱导的乳鼠软骨细胞自噬与凋亡的影响。方法 2022年 1―8月从乳鼠中分离软骨细胞并鉴定;使用不同浓度苍术素(0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 μmol/L)预处理软骨细胞,再使用 IL-1β诱导软骨细胞培养 24 h,噻唑蓝( MTT)法检测增殖活性,筛选最佳药物浓度;将软骨细胞分为对照组、 IL-1β组( 10 μg/L IL-1β)、苍术素组( 10 μg/L IL-1β+20μmol/L苍术素)、苍术素 +AMPK抑制剂组(苍术素 +compound C组, 10 μg/L IL-1β+20 μmol/L苍术素 +50 μmol/L compound C);流式细胞术与 TUNEL法检测软骨细胞凋亡,单丹磺酰尸胺( MDC)染色观察自噬小体;蛋白质印迹法检测自噬及 AMPK/SIRT1通路相关蛋白表达。结果与对照组比较, IL-1β组软骨细胞增殖活性、自噬水平、微管相关蛋白轻链 3Ⅱ/Ⅰ(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)［( 0.47±0.08)比( 1.23±0.14)］、 Beclin-1［( 0.67±0.09)比( 1.45±0.19)］、自噬相关基因 -5(Atg5)［( 0.35±0.06)比( 1.14±0.13)］、磷酸化 AMPK(p-AMPK)［(0.37±0.05)比( 0.91±0.05)］、SIRT1［(0.51±0.06)比( 1.31±0.14)］磷酸化 Unc-51样自噬激活蛋白酶(p-ULK1)蛋白表达［(0.25±0.04)比(0.85±0.11)］降低,细胞凋亡率［(28.46±3.55)%比( 2.54±0.82)%］升高( P<0.05);与 IL-1β组比较,苍术素组细胞增殖活性、自噬水平、 LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin-1、Atg5、p-AMPK、SIRT1、p-ULK1蛋白表达升高,细胞凋亡率降低( P<0.05); compound C可逆转苍术素对 IL-1β诱导的软骨细胞自噬激活作用。结论苍术素通过激活 AMPK/SIRT1信号通路促进 IL-1β诱导的大鼠软骨细胞自噬,抑制细胞凋亡。     

姜黄素对糖尿病大鼠心肌自噬,凋亡及AMPK-mTOR信号通路的影响

目的:基于心脏组织AMPK/mTOR信号通路、自噬和凋亡来探讨姜黄素(curcumin,Cur)对糖尿病大鼠心脏损伤的保护作用。方法:50只雄性SD大鼠被随机分为3组:正常对照组(Con,n=10)给予正常饮食以及等量生理盐水腹腔注射;糖尿病模型组(DM,n=40)大鼠给予高糖高脂饮食联合连续5 d腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ) (35 mg·kg^-1·d^-1),给药组(Cur+DM),部分糖尿病大鼠(n=20)在其饮用水中给予Cur(300 mg·kg^-1·d^-1)进行干预16周。HE染色观察大鼠心脏组织形态改变;透射电镜观察大鼠心脏组织粒体形态变化;TUNEL染色,免疫组织化学和蛋白印迹等方法检测心脏组织自噬、凋亡,AMPK/mTOR信号通路等相关蛋白的表达情况。结果:与正常对照组相比,糖尿病模型组大鼠心肌肥大,线粒体嵴稀疏、断裂,自噬及相关蛋白表达水平下降(P<0.05),细胞凋亡及相关蛋白表达水平显著增加(P<0.05),P-AMPK/AMPK蛋白表达水平降低(P<0.05)而P-mTOR/mTOR增加(P<0.05)。与糖尿病模型组比较,给药组大鼠心肌肥大水平和线粒体断裂程度减轻,自噬及相关蛋白表达水平增加(P<0.05),细胞凋亡及相关蛋白表达水平减轻(P<0.05),P-AMPK/AMPK蛋白表达水平增加(P<0.05),而P-mTOR/mTOR减少(P<0.05)。结论:姜黄素可能通过活化AMPK/mTOR信号通路增强糖尿病大鼠心脏组织自噬水平,减轻心脏组织细胞凋亡,从而改善糖尿病大鼠心脏损伤。     

芦荟大黄素对胃癌SGC-7901细胞凋亡、自噬及p53/AMPK/mTOR信号通路的影响

摘 要 目的：探讨芦荟大黄素（AE）对胃癌SGC-7901细胞凋亡、自噬及p53蛋白（p53）/磷酸腺苷蛋白激酶（AMPK）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。 方法: 实验分为对照组（AE 0 μmol·L-1）、AE低（10 μmol·L-1）、中（30 μmol·L-1）、高（50 μmol·L-1）剂量组和自噬阻断剂3 甲基腺嘌呤（3 MA）+ AE组（20 μmol·L-1+50 μmol·L-1）。CCK 8法检测各组细胞增殖抑制率,采用透射电镜及单丹磺酰尸胺（MDC）染色观察各组细胞自噬体及自噬溶酶体的变化,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定（TUNEL）法观察各组细胞凋亡率变化,Western blot法检测各组细胞p53、AMPK、mTOR信号通路蛋白及自噬标致蛋白Beclin 1蛋白（Beclin 1）、微管相关轻链蛋白Ⅰ（LC3Ⅰ）及微管相关轻链蛋白Ⅱ（LC3Ⅱ）表达情况。 结果: 与对照组相比,AE各剂量组及3 MA+AE组细胞的增殖抑制率、凋亡指数（AI）显著升高（P<0.05）,且呈剂量依赖性;AE中、高剂量组的增殖抑制率和AI与3 MA+AE组相比差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比,AE各剂量组细胞自噬体、自噬空泡增多,溶酶体积分光密度（IOD）/所选区域面积（Area）值及p53、AMPK、Beclin 1表达显著升高,mTOR表达及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ比值显著降低（P<0.05）,且呈剂量依赖性;3 MA+AE组细胞自噬体、自噬空包等超微结构减少,IOD/Area值及p53、AMPK及Beclin 1表达显著降低,mTOR表达及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ比值显著升高（P<0.05）。 结论: AE可通过提高胃癌SGC-7901细胞自噬水平,诱导SGC-7901细胞凋亡,其机制可能与促进p53/AMPK/mTOR信号通路表达有关。     

高良姜素对非小细胞肺癌A549细胞SIRT1/mTOR通路及放射敏感性的影响

摘要：目的:探讨高良姜素对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞沉默信息调节因子1（SIRT1）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路及放射敏感性的影响。方法:体外培养NSCLC A549细胞,细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测不同浓度(10,20,40,60,80,100μmol·L-1)高良姜素处理的A549细胞的增殖抑制率;将A549细胞经不同剂量（0,1,2,4,6,8 Gy）放射处理,并设置各剂量与35μmol·L-1高良姜素联用组,克隆形成实验观察高良姜素的放射增敏作用;将A549细胞分为高良姜素+放射线组(35μmol·L-1+6 Gy)、高良姜素组(35μmol·L-1)、放射线组（6 Gy）及对照组,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法检测增殖蛋白细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、细胞增殖核抗原（Ki67）、凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-9及STRT1/mTOR通路蛋白SIRT1、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、磷酸化mTOR（p-mTOR）、mTOR的表达。结果:与对照组比较,随着高良姜素浓度的增加,A549细胞增殖抑制率逐渐增加（P<0.05）;与各剂量射线单独处理的A549细胞相比,35μmol·L-1高良姜素+各剂量射线处理的A549细胞存活分数降低（P<0.05）,辐射增敏比（SER）=1.522;与对照组比较,高良姜素组、放射线组、高良姜素+放射线组A549细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高,CyclinD1、Ki67、SIRT1、p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低（P<0.05）;与高良姜素组、放射线组比较,高良姜素+放射线组A549细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高,高良姜素+放射线组CyclinD1、Ki67、SIRT1、p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论:高良姜素可能通过调控SIRT1/mTOR通路影响A549细胞的增殖凋亡及放射敏感性,可能是治疗NSCLC的潜在药物。     

天麻素在甲基苯丙胺诱导SH-SY5Y细胞自噬中的作用及机制研究

目的研究天麻素(gastrodin)在甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)诱导SH-SY5Y细胞自噬中的作用,并探讨其作用机制。方法体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,不同浓度的METH(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mmol·L~(-1))处理SY5Y细胞,并在6、12、24、48 h观察SY5Y细胞自噬的情况,确定自噬的最佳浓度和时间点。提前1 h给予1mmol·L~(-1)天麻素进行干预,用显微镜观察细胞形态变化,采用激光共聚焦显微镜观察LC3-Ⅱ的改变,Western blot检测天麻素干预前后LC3-Ⅱ、Beclin-1以及Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的表达情况。结果随着METH浓度(0~3.0 mmol·L~(-1))的增加,SY5Y细胞逐渐变圆、突起逐渐变短、消失,同时部分细胞质内可见大小不等的空泡结构形成,细胞间隙逐渐增宽,最终细胞呈漂浮状态。随着METH浓度的增加,SY5Y细胞LC3-Ⅱ表达水平逐渐增强。激光共聚焦显微镜结果显示,天麻素+METH组LC3-Ⅱ的表达水平比METH组降低。与对照组相比,METH组LC3-Ⅱ和Beclin-1表达水平明显增强(P<0.01),mTOR和Akt差异无显著性,p-mTOR、p-Akt表达水平明显降低(P<0.01);给予天麻素干预后,与METH组相比,LC3-Ⅱ和Beclin-1表达水平降低,而mTOR、p-mTOR、Akt、p-Akt表达水平升高。结论 METH可诱导SY5Y细胞自噬,天麻素可减弱METH诱导的SY5Y细胞自噬,这一作用与天麻素调控Akt和mTOR信号通路密切相关。     

小檗碱调控AMPK-TSC1/LC3-Ⅱ信号通路促进高糖高脂应激下NIT-1胰岛β细胞的自噬

目的：观察小檗碱（berberine,BBR）对高糖高脂应激条件下的NIT-1胰岛β细胞自噬的影响并探讨其潜在的分子机制。方法：分别采用高浓度葡萄糖（25 mmol·L^-1）和软脂酸（0.25 mmol·L^-1）诱导NIT-1胰岛β细胞建立高糖、高脂模型,予以小檗碱处理,用放射免疫法检测胰岛素水平,通过电镜观察自噬体的形成;然后予以腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）激动剂AICAR,腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂Compound C,自噬诱导剂雷帕霉素（Rapa）进行干预,Western blot方法检测各组细胞AMPK的活化、自噬相关蛋白结节性硬化复合物1（TSC1）、微管相关蛋白1轻链蛋白3（LC3-Ⅱ）的表达。结果：在高糖高脂诱导的NIT-1胰岛β细胞中,小檗碱可以促进胰岛素的分泌和自噬体的形成,促进自噬相关蛋白TSC1,LC3-Ⅱ的表达,并活化其上游的AMPK。结论：小檗碱在高糖高脂的应激条件下可能通过促进自噬来发挥保护胰岛β细胞功能的作用,其分子机制可能与小檗碱调控AMPK-TSC1/LC3-II信号通路相关蛋白有关。