负载胰腺癌抗原的树突状细胞疫苗诱导T淋巴细胞抗肿瘤效应的研究

培养树突状细胞(DC),反复冻融法裂解培养的负载胰腺癌细胞(PC-3),提取细胞抗原,致敏DC,获得负载胰腺癌抗原的DC疫苗后诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的生成,MTT法检测CTL对不同肿瘤细胞的杀伤作用.发现负载PC-3细胞抗原的DC疫苗能诱导产生肿瘤特异性的CTL,其对PC-3细胞具有明显地杀伤效应,而对人乳腺癌细胞MCF-7、人肝癌细胞7721细胞杀伤作用弱.认为负载胰腺癌抗原的DC疫苗能够诱导高效而特异地CTT杀瘤活性,为将来DC疫苗在胰腺癌的免疫治疗中提供了实验依据.     

树突状细胞致敏的肿瘤疫苗对胰腺癌细胞的杀伤效应

目的:研究胰腺癌细胞冻融物致敏树突状细胞(DC)诱导的细胞毒性T细胞(CTL)对原代培养的自体胰腺癌细胞的杀伤作用．方法:从6例手术切除的胰腺癌组织中分离胰腺癌细胞,反复冻融获得肿瘤抗原;以该肿瘤抗原致敏外周血DC,诱导T细胞转变为CTL;采用Cr51释放法观察CTL对原代培养的自身胰腺癌细胞的杀伤活性,分别以来源于胰腺癌细胞株Pancl的肿瘤抗原致敏DC和未致敏DC刺激的CTL作为抗原对照和阴性对照．结果:实验组CTL对自身细胞的杀伤活性为69．05%±15．79%→88．05%±15．34％,抗原对照组CTL的杀伤活性为43．08％±6．92％→67．30％±8．91％,两组CTL杀伤率均显著高于阴性对照组(P<0．01);而实验组与抗原对照组相比,前者的杀伤活性显著高于后者者(P<0．05)．结论:胰腺癌细胞冻融物致敏的DC疫苗可以诱导T细胞产生高效的针对自体癌细胞的细胞毒效应;新鲜肿瘤组织来源的胰腺癌细胞比传代的Pancl细胞具有更好的抗原性．     

4种甲胎蛋白抗原表位肽段致敏树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤效应比较

目的 通过体外杀伤试验,比较4种人肝癌特异性甲胎蛋白抗原表位肽段PLFQVEPV[hAFP(137～145)],FMNKFIYEI[hAFP(158～166)]、GLSPNLNRFL[hAFP(325-334)]和GVAL,QTMKQ[hAFP(542～550)]修饰树突状细胞(DC)后诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对人肝癌细胞的特异性杀伤效应. 方法 选取健康人外周血单个核细胞,体外诱导成熟DC;合成4种hAFP抗原表位肽段分别修饰和诱导DC,体外刺激CTL,通过流式细胞仪法和细胞毒性检测法检测该修饰后的DC所诱导的CTL在体外对肝癌细胞株SMMC-7721细胞的杀伤作用.组间比较应用t检验进行统计学分析. 结果 4种人肝癌特异性甲胎蛋白片段均能在体外修饰和诱导DC细胞的增殖和成熟;这些成熟DC在体外均能诱导特异性CTL,CTL对SMMC-7721细胞均可产生杀伤效应.其中FMNKFIYEI[hAFP(158～166)]肽段诱导的CTL在效靶比分别为80:1、40:1及10:1时对肿瘤细胞的杀伤效应分别达到了78.1%±9.8%、43.9%±5.9%和28.2%±4.9%,比其他3种肽段的杀伤效应高(P<0.05). 结论 短肽段具有单独体外诱导特异CTL的作用,其诱导效果和杀伤效果均优于完整hAFP蛋白,其诱导的CTL有特异地杀伤SMM C-7721细胞的作用.     

4种甲胎蛋白抗原表位肽段致敏树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤效应比较

目的 通过体外杀伤试验,比较4种人肝癌特异性甲胎蛋白抗原表位肽段PLFQVEPV[hAFP(137～145)],FMNKFIYEI[hAFP(158～166)]、GLSPNLNRFL[hAFP(325-334)]和GVAL,QTMKQ[hAFP(542～550)]修饰树突状细胞(DC)后诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对人肝癌细胞的特异性杀伤效应. 方法 选取健康人外周血单个核细胞,体外诱导成熟DC;合成4种hAFP抗原表位肽段分别修饰和诱导DC,体外刺激CTL,通过流式细胞仪法和细胞毒性检测法检测该修饰后的DC所诱导的CTL在体外对肝癌细胞株SMMC-7721细胞的杀伤作用.组间比较应用t检验进行统计学分析. 结果 4种人肝癌特异性甲胎蛋白片段均能在体外修饰和诱导DC细胞的增殖和成熟;这些成熟DC在体外均能诱导特异性CTL,CTL对SMMC-7721细胞均可产生杀伤效应.其中FMNKFIYEI[hAFP(158～166)]肽段诱导的CTL在效靶比分别为80:1、40:1及10:1时对肿瘤细胞的杀伤效应分别达到了78.1%±9.8%、43.9%±5.9%和28.2%±4.9%,比其他3种肽段的杀伤效应高(P<0.05). 结论 短肽段具有单独体外诱导特异CTL的作用,其诱导效果和杀伤效果均优于完整hAFP蛋白,其诱导的CTL有特异地杀伤SMM C-7721细胞的作用.     

4种甲胎蛋白抗原表位肽段致敏树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤效应比较

目的 通过体外杀伤试验,比较4种人肝癌特异性甲胎蛋白抗原表位肽段PLFQVEPV[hAFP(137～145)],FMNKFIYEI[hAFP(158～166)]、GLSPNLNRFL[hAFP(325-334)]和GVAL,QTMKQ[hAFP(542～550)]修饰树突状细胞(DC)后诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对人肝癌细胞的特异性杀伤效应. 方法 选取健康人外周血单个核细胞,体外诱导成熟DC;合成4种hAFP抗原表位肽段分别修饰和诱导DC,体外刺激CTL,通过流式细胞仪法和细胞毒性检测法检测该修饰后的DC所诱导的CTL在体外对肝癌细胞株SMMC-7721细胞的杀伤作用.组间比较应用t检验进行统计学分析. 结果 4种人肝癌特异性甲胎蛋白片段均能在体外修饰和诱导DC细胞的增殖和成熟;这些成熟DC在体外均能诱导特异性CTL,CTL对SMMC-7721细胞均可产生杀伤效应.其中FMNKFIYEI[hAFP(158～166)]肽段诱导的CTL在效靶比分别为80:1、40:1及10:1时对肿瘤细胞的杀伤效应分别达到了78.1%±9.8%、43.9%±5.9%和28.2%±4.9%,比其他3种肽段的杀伤效应高(P<0.05). 结论 短肽段具有单独体外诱导特异CTL的作用,其诱导效果和杀伤效果均优于完整hAFP蛋白,其诱导的CTL有特异地杀伤SMM C-7721细胞的作用.     

Tα1对食管癌细胞RNA转染的脐血树突状细胞功能的影响

目的 探讨食管癌T.Tn细胞RNA转染脐血树突状细胞(DCs)对T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异性抗肿瘤作用的影响,以及胸腺肽α1(Tα1)对脐血DCs疫苗的免疫佐剂作用.方法 分离脐血单个核细胞,经重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人干细胞因子(rhSCF)、重组人IL-4(rhIL-4)诱导和T.Tn细胞RNA转染形成成熟DCs,加入Tα1制备肿瘤疫苗.检测RNA转染后DCs表型变化;MTT法检测各组脐血DCs诱导T细胞增殖和CTL细胞毒活性.结果 与转染前比较,T.Tn细胞RNA转染后脐血DCs表面MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ和CD54、CD80和CD86分子水平明显升高(P均<0.05);可显著促进T细胞增殖,有效诱导CTL的特异性杀瘤活性(P<0.05).而Tα1能显著促进RNA致敏脐血DCs的表面分子表达和T细胞功能(P<0.05).结论 Tα1联合食管癌细胞RNA转染脐血DCs可制备高效、特异的肿瘤疫苗,有望成为食管癌生物治疗的新途径.     

热休克蛋白70激发树突状细胞抗肝癌作用的实验研究

目的探讨以树突状细胞（DC）为载体，用肝癌细胞提取的热休克蛋白70-肿瘤肽复合物（HSP-PC）刺激DC，观察经活化后的DC对肝癌细胞SMMC-7721的杀伤作用。方法用脐带血在体外培养诱导DC，用从SMMC-7721提取的HSP70—PC与DC共同培养，检测其对肝癌细胞的杀伤活性。结果经HSP70-Pc刺激后的DC对SMMC-7721的杀伤能力明显高于单纯DC对肿瘤细胞的杀伤能力。结论用HSP70—PC刺激的DC经体外实验证实具有明显的抗肿瘤效应，为临床肿瘤免疫治疗的开展提供了有效的数据。     

热休克肝癌细胞来源囊泡诱导细胞毒性T细胞的杀伤作用

目的研究热休克肝癌细胞来源囊泡(exosomes)刺激人树突状细胞(DC)能否诱导出肝癌细胞特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。方法 43℃热休克(水浴)1h培养肝癌细胞提取胞外囊泡,诱导DC刺激细胞毒性T淋巴细胞,MTT法测定CTL在体外对肝癌细胞的杀伤作用。结果热休克前后肝癌细胞胞外囊泡和肿瘤细胞裂解物刺激的DC均能促进对肝癌细胞的杀伤活性,热休克肝癌细胞胞外囊泡实验组较胞外囊泡和肝癌细胞冻融裂解物对照组有显著性差异(P0.05和P0.01)。结论热休克能够增强肝癌细胞胞外囊泡诱导的特异性抗肝癌细胞免疫反应。     

白血病抗原冲击致敏的树突状细胞诱导的抗肿瘤免疫反应

目的：研究树突状细胞(DC)的体外培养扩增及诱导特异性的抗肿瘤免疫反应。方法：使用mGM-CSF加mIL-4培养诱导骨髓细胞分化，采用反复冻融法制备L7212白血病细胞的冻融抗原(TAA)，在DC培养的第3天加入TAA，将TAA冲击致敏的DC与T淋巴细胞共培养，获得肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，采用MTT法检测CTL对L7212细胞的杀伤作用及其对野生型L7212细胞再攻击的免疫保护作用。结果：MTT检测发现CTL对L7212细胞有特异性杀伤抑制作用，L7212抗原冲击致敏的DC能显著提高和延长野生型L7212细胞再攻击小鼠的生存率和存活期。结论：mGM-CSF和mIL-4配伍可有效地从小鼠骨髓细胞中诱导出大量的成熟的功能性DC，L7212白血病TAA冲击致敏的DC可诱导机体产生较强的抗肿瘤免疫反应。     

脐血树突状细胞介导的食管癌疫苗实验研究

目的　用杂交瘤技术制备脐血树突状细胞 (DC)和食管癌细胞融合疫苗 ,分析其生物学特征及体外诱导特异性免疫应答的能力。方法　 2 0 0 2 - 0 12 0 0 3- 0 3汕头大学医院第一附属医院分离脐血CD3 4 干细胞并诱导扩增为成熟DC ,并与EC10 9细胞融合 ,免疫磁珠法筛选EC10 9 DC ;流式细胞术鉴定疫苗表型 ;绘制疫苗生长曲线 ;MTT法测定瘤苗诱导淋巴细胞增殖能力及体外特异性免疫应答能力。结果　疫苗可体外生长 ,高表达CD80 、CD83 和CD86,并能有效刺激淋巴细胞增殖反应 ,体外诱导细胞毒T细胞 (CTL)对EC10 9的杀伤活性显著高于对照组 (P <0 0 5 )。结论　EC10 9 DC具备了刺激免疫细胞活化的分子表型 ,能在体外刺激淋巴细胞增殖和诱导特异性CTL杀伤作用     

人脐血和外周血树突状细胞诱导抗肝癌活性

目的　观察人脐血和外周血树突状细胞 (dendriticcells ,DC)的生物学特性及其对效应细胞体外杀伤人肝癌细胞株BEL 740 2 (B)的影响。方法　免疫组化和MTT法检测DC的生物学特性。抗肿瘤实验则分两大组 ,人外周血DC组为B +LAK +DC ,人脐血DC组为B +DC CTL ,检测效应细胞的细胞毒活性。结果　①人外周血和脐血DC均高表达HLA ABC、HLA DR、HLA DQ、CD54和S 10 0蛋白 ;刺激淋巴细胞增殖的效应均比对照组明显增高 (P <0 0 1) ,两种来源DC无显著性差异 (P >0 0 5)。②人外周血DC组和脐血DC组的细胞毒活性均为实验组 >对照组 (P <0 0 1) ,人脐血DC组 >人外周血DC组 (P <0 0 1)。结论　人外周血和脐血DC均为形态和功能成熟的DC ,均能明显增强效应细胞杀伤肝癌细胞的活性 ;而经肿瘤抗原致敏DC诱导的特异性CTL杀伤活性更强。提示临床上可根据患者的具体情况选择DC的来源     

体外负载冻融抗原的脐血树突状细胞诱导的抗肝癌效应

目的评价体外应用肝癌细胞冻融抗原负载的脐血树突状细胞（DC）所诱导的抗肝癌效应。方法采集健康足月剖宫产孕妇胎盘端脐血,分离脐血单个核细胞（CBMNC）及T淋巴细胞,用GM-CSF、IL-4及TNF-α联合诱导CBMNC分化为DC,观察形态学变化并以流式细胞术鉴定,选培养的第3天以肝癌细胞冻融抗原负载的CBMNC-DC,以负载抗原的DC刺激自体淋巴细胞活化为自体细胞毒性T淋巴细胞（CTL）,并用CTL对肝癌细胞进行杀伤,MTT法测定活化的自体淋巴细胞的相对数量和CTL对肝癌细胞的杀伤率。结果体外负载肿瘤冻融抗原的脐血DC可诱导显著的自体效应淋巴细胞增殖及抗肝癌效应。结论体外负载抗原的脐血DC可诱导显著的抗肝癌效应,是具有临床应用前景的肝癌疫苗。     

MAGE-3抗原肽致敏树突状细胞的体内抗膀胱癌作用及机制

目的 探讨黑色素瘤-3基因(MAGE-3)抗原肽致敏的树突状细胞(DC)体内对膀胱癌肿瘤的抑制作用及机制.方法 采用Ficoll法从HLA-A2型个体外周血中分离单个核细胞,用GM-CSF和IL-4诱导扩增DC,再经MAGE-3抗原肽致敏,致敏DC细胞和同型T淋巴细胞共培养诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL),经过尾静脉注入膀胱癌荷瘤小鼠,观察其对肿瘤体积及重量的影响.结果 MAGE-3抗原肽致敏的DC诱导产生的CTL可明显缩小瘤体、降低瘤重.结论 MAGE-3九肽致敏DC诱导CTL体内具有抑制膀胱癌细胞增长的作用;其机制可能为激活T淋巴细胞.     

两种不同抗原致敏方式负载DC疫苗对Lovo细胞的体外杀伤作用

目的比较重组痘苗病毒负载人癌胚抗原（CEA）基因转染方式与Lovo细胞裂解物诱导方式对产生DC疫苗的影响。方法分别采用重组痘苗病毒负载CEA基因转染方式及Lovo肿瘤细胞裂解物转染方式转染未成熟DC,诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）。体外培养CTL并检测其活性;MTT法检测两组CTL对kovo细胞的杀伤作用。结果两种方式致敏DC均可诱导激活CTL并分泌INF-γ,而重组痘苗病毒转染Dc组CTL诱导率高于细胞裂解物组;重组痘苗病毒转染组诱导的CTL对Lovo细胞的特异性杀伤活性显著高于细胞裂解物组。结论两种不同抗原致敏方式负载DC疫苗均能够诱导高效而特异的CTL杀瘤活性,而使用重组痘苗病毒转染CEA至DCs的方式明显优于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式,为DC疫苗用于结肠癌的免疫治疗奠定基础。     

负载肿瘤抗原的DC体外诱导抗肿瘤免疫反应的实验研究

目的 研究自体及同种异体树突状细胞(DC)体外负载肿瘤抗原后刺激T淋巴细胞增殖及诱导抗肿瘤免疫反应的能力.方法 利用细胞因子诱导人骨髓单个核细胞生成DC,尼龙毛柱法分离T淋巴细胞,3H-TdR掺入法检测负载肺癌细胞凋亡小体的自体及同种异体DC体外刺激T细胞增殖反应,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测负载肺癌细胞凋亡小体的自体及同种异体DC刺激的T细胞对肺癌细胞和乳腺癌细胞系MCF-7的杀伤作用.结果 骨髓细胞诱生的自体及同种异体DC负载肿瘤抗原后,均具有刺激T淋巴细胞增殖的能力,负载肿瘤抗原的自体及异体DC激活的T淋巴细胞后均可杀伤两种靶细胞,T细胞对MCF-7的杀伤力明显低于对患者肺癌细胞的杀伤力. 结论人自体或异体DC体外负载细胞性肿瘤抗原后,可有效地刺激T淋巴细胞的增殖,产生特异性肿瘤杀伤作用.     

树突状细胞诱导抗胃癌移植瘤免疫

目的　研究树突状细胞 (DC)体外诱导的抗肿瘤免疫能否抑制裸鼠移植瘤生长并预防其发生。方法　联合应用粒 /巨噬细胞集落刺激因子 (GM -CSF)及白介素 4(IL 4)直接从胃癌患者外周血中培养出DC ;以SGC -790 1细胞的肿瘤抗原粗提物刺激DC使其激活同源的T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞 (CTL) ;建立裸鼠SGC -790 1细胞移植瘤模型 ;DC诱导的CTL治疗裸鼠SGC -790 1细胞移植瘤 ,观察移植瘤生长 ;DC诱导的CTL预防性治疗裸鼠 ,观察随后接种的SGC -790 1细胞移植瘤发生情况。结果　DC诱导的CTL不仅能抑制裸鼠移植瘤生长并能预防其发生。结论　经肿瘤抗原激活的DC作为一新概念上的抗肿瘤疫苗有可能在治疗肿瘤及预防其术后复发和转移中发挥重要作用。     

致敏DC诱导CTL特异性杀伤HL-60细胞的实验研究

目的 :探讨来自外周血单个核细胞的树突状细胞 (DC)负载冻融或弱酸洗脱的HL 6 0多肽抗原 ,体外诱导产生细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)对HL 6 0细胞的杀伤作用。方法 :应用GM CSF、TNF α和IL 4自外周血单个核细胞诱导出DC ,使其负载两种HL 6 0多肽抗原 ,致敏同种T淋巴细胞 ,产生CTL。以胃癌细胞系SGC790 1为对照组 ,观察DC∶CTL∶HL 6 0 /SGC 790 1为 1∶10 0∶2 ,CTL对HL 6 0特异性免疫杀伤活性。结果 :弱酸洗涤法或冻融法所提取的抗原多肽致敏DC诱导的CTL对HL 6 0细胞的杀伤率分别为 6 8.2 9%± 11.37%和4 5 .95 %± 8.4 7% ,二者差异有极显著性意义 (P <0 .0 1)。对SGC 790 1细胞的杀伤率分别为 2 4 .6 0 %± 4 .4 0 %和 16 .0 9%± 4 .98% ,二者差异有极显著性意义 (P <0 .0 1)。结论 :相对于冻融HL 6 0细胞抗原多肽 ,DC可更有效地提呈酸洗HL 6 0抗原多肽 ,并通过特异性CTL产生对HL 6 0细胞高效而特异的杀伤作用     

rAAV／HCV核心抗原基因转染树突状细胞的免疫功能研究

目的 研究通过rAAV／HCV（hepatitis Cvirus,HCV）核心抗原基因（Coregene）转染树突状细胞（dendritic cell,DC）制备DC疫苗的免疫功能。方法分离外周血单个核细胞（DC前体细胞）,以rAAV／Core／Neo病毒转染DC前体细胞（基因转染组）,同时设293细胞裂解物刺激为对照组,转染12h后,均采用GM-CSF、IL-4、TNF-α诱导成熟。7天后收集细胞,流式细胞仪检测rAAV／Core／Neo病毒转染效率（即HCV核心抗原表达率）及DC表面标志CDl4、CD40、CD80、CD83、CD86的表达情况,混合淋巴细胞实验检测DC刺激自体T细胞增殖的能力,^51Cr释放法检测CTL对抗原阳性靶细胞的杀伤效率及特异性。结果rAAV／Core／Neo转染DC的效率超过90％,成熟DC高表达CD40、CD80、CD83、CD86,转染后的DC具有较强的刺激自体T细胞增殖能力,其CTL对HCV核心抗原阳性靶细胞具有很高的杀伤率及抗原特异性。结论rAAV／Core／Neo能够高效转染DC,转染后的DC能刺激自体T细胞增殖,使CTL对HCV核心抗原阳性靶细胞具有杀伤活性。     

树突状细胞诱导的抗肿瘤免疫诱导移植瘤细胞凋亡并抑制其增殖

目的研究树突状细胞(DC)体外诱导的细胞免疫能否抑制裸鼠移植瘤生长及其机制.方法联合应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素-4(IL-4)直接从肝癌患者外周血中培养出DC,以源于人肝癌细胞系HepG2肿瘤细胞的肿瘤抗原粗提物刺激DC,DC激活同源的T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞(CTL),建立裸鼠人肝癌细胞系HepG2移植瘤模型.以CTL治疗裸鼠HepG2移植瘤并观察治疗效果,检测移植瘤标本肿瘤细胞凋亡情况.结果DC诱导的CTL通过诱导肿瘤细胞凋亡并抑制其增殖而抑制移植瘤生长.结论经肿瘤抗原激发的DC有可能在肿瘤的治疗中发挥重要作用.     

急性髓性白血病细胞体外诱导脐血细胞毒性T淋巴细胞增殖及抗白血病作用的研究

目的研究体外培养急性髓性白血病树突状细胞（AML-DC）,并利用该细胞联合细胞因子诱导脐血产生细胞毒性T淋巴细胞（CTL）,观察CTL对急性白血病细胞的杀伤效应,探讨从AML．DC体外诱导产生CTL的可行性。方法从急性髓性白血病细胞诱导AML—DC,联合细胞因子体外诱导脐血T细胞活化及增殖,流式细胞术检测培养前后的T淋巴细胞亚群变化,利用LDH试剂盒检测诱导后T细胞对相应急性白血病细胞的杀伤活性。结果可从人AML细胞中诱导出AML-DC,脐血T细胞在体外经过诱导培养后可获得增殖,T淋巴细胞比例较培养前明显增高,其中在AML—DC诱导组中,CD3^＋T淋巴细胞亚群比例达到（79．7±3．70）％,该T淋巴细胞对相应急性白血病细胞的杀伤效率最高达（48．35±12．75）％,与培养前及培养后无AML—DC刺激组相比,经过特异诱导培养的T细胞对相应白血病细胞杀伤作用大大加强（P〈0．05）。结论AML—DC联合细胞因子可以诱导活化脐血白血病细胞特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）,该细胞能对相应白血病细胞产生特异性杀伤效应。