人类风湿关节炎滑膜中B7-H1分子的表达及意义

背景：B7同系物1（B7-HI）分子是共刺激分子B7家族的重要成员，在淋巴细胞及大部分外周组织可以广泛诱导性表达。研究表明，B7-H1在自身免疫性疾病中发挥重要作用，其在人类类风湿关节炎中的作用国内外均无报道。目的：观察类风湿关节炎关节滑膜组织中B7-H1蛋白的表达，探讨B7-H1在类风湿关节炎发病中的意义。设计、时间、地点：分组对照观察，于2007—07／12在河南省分子生物学重点实验室完成。对象：收集51例标本系2004—09／200707郑州大学第一附属医院微创骨科关节镜术中所取膝关节滑膜组织，其中类风湿关节炎35例，男16例，女19例，年龄11～62岁；骨关节炎10例：男4例，女6例，年龄45～72岁；正常对照组6例：男4例，女2例；年龄14～33岁。方法：关节滑膜标本均在手术中收集，病变滑膜取自镜下典型病变处，并经组织病理学检查证实。主要观察指标：采用免疫组织化学SABC法检测受试者膝关节滑膜组织中B7-H1蛋白的表达。结果：35例类风湿关节炎患者膝关节滑膜中的30例（85．7％）B7-HI蛋白表达阳性，10例骨关节炎患者中3例（30．0％）B7-H1蛋白表达阳性，而6例正常对照组中有1例（16．7％）表达阳性。且B7．H1蛋白在滑膜增生严重的类风湿关节炎患者中表达更高。结论：B7-H1在类风湿关节炎患者的膝关节滑膜组织中高表达，推测其可能直接参与了类风湿关节炎的发病过程。     

类风湿关节炎滑膜CD68阳性细胞筛选的意义

目的：探讨用CD68作为细胞标志筛选类风湿关节炎和正常滑膜组织中的滑膜巨噬细胞CD68^+细胞，并观察筛选后细胞的活性及特性。方法：滑膜组织来源于2003-02／2004-03南方大学南方医院脊柱骨病科收治的12例住院患者。类风湿关节炎组6例源自全膝关节置换术或经关节镜滑膜切除术的类风湿关节炎患者，正常滑膜组6例来自无关节炎病史的半月板损伤患者，均经病理诊断证实。从滑膜组织中分离滑膜细胞，免疫磁珠法筛选滑膜CD68^+和CD68^-细胞，用流式细胞仪检测筛选效能；用免疫组化染色观察类风湿关节炎组和正常滑膜组筛选前后滑膜CD68^+细胞所占比例；以四甲基偶氮唑盐比色法观察筛选后细胞体外培养增殖活性。结果：所获12例滑膜组织全部进入结果分析。①滑膜细胞分离后观察：滑膜细胞24h后贴壁生长，滑膜巨噬样细胞在类风湿关节组的比例较正常滑膜组高。②筛选后滑膜细胞的观察结果：免疫磁珠法筛选的CD68^+和CD68^-细胞均在2h内开始贴壁，24h后CD68^-细胞呈极向排列生长，贴壁能力强于CD68^+细胞。筛选后的滑膜CD68^+细胞与磁珠结合在一起，具有巨噬样细胞形态，胞周可有突起，分裂增殖较慢，但在体外能传数代；CD68^-细胞未与磁珠结合，表现为长梭形成纤维细胞样形态，细胞分裂增殖迅速。③CD68^+细胞的纯度分析：经流式细胞仪分析细胞纯度为93．6%，主峰右移，细胞平均体积增大。滑膜CD68^-细胞不能被FITC标记。④滑膜细胞CD68的表达观察：筛选后CD68^+细胞均为棕黄色。细胞核大、较疏松，细周有突起。CD68^-细胞基本为成纤维样细胞，胞浆未被黄染，细胞核位于细胞中央，呈卵圆形，核仁明显。⑤两组滑膜细胞体外增殖速度：在体外均有不同程度增殖活性。类风湿关节炎和正常滑膜CD68^-细胞增殖速度快于同一组织来源滑膜CD68^+细胞的增殖速度[(0．680&;#177;0．047)，(0．236&;#177;0．014)；(0．605&;#177;0．031)，(0．195&;#177;0．019)；τ=21．989，P&;lt;0．05]。类风湿关节炎滑膜CD68^+细胞增殖速度快于正常滑膜CD68^+细胞的增殖速度[(0.236&;#177;0．014)，(0．195&;#177;0．019)；τ=4．149，P&;lt;0．05]。结论：CD68可作为一种标志来筛得滑膜细胞中的巨噬细胞和其他滑膜细胞，筛选后滑膜细胞均具有良好增殖活性。CD68^+细胞具有典型巨嗜样细胞形态，CD68^-细胞主要为成纤维样细胞，两种细胞区分程度好有助于临床对疾病活动期和严重程度判断。     

活动性类风湿关节炎患者IL-18的表达及临床意义

目的研究活动期RA患者血清中细胞因子IL-18的表达,并探讨它们与疾病活动程度的关系。方法 2008年12月-2010年1月将63例RA患者,根据DAS28将患者分为高度活动组和低度活动组,应用酶联免疫吸附法（ELISA）法检测63例RA患者和27例对照组的白细胞介素-18（IL-18）表达水平。分析IL-18的水平与临床指标的相关性。结果 IL-18在活动期RA中表达水平高于低度活动组、对照组,分别为（238.88±41.75）、（189.11±40.62）、（185.42±44.93）pg/mL,有统计学意义（P〈0.01）。RA活动组患者IL-18与外周血白细胞计数呈负相关（r=-0.628,P〈0.05）。结论 IL-18水平在RA活动期患者高表达,在RA发病和发展中起重要作用。     

类风湿关节炎滑膜CD68阳性细胞筛选的意义

目的:探讨用CD68作为细胞标志筛选类风湿关节炎和正常滑膜组织中的滑膜巨噬细胞CD68+细胞,并观察筛选后细胞的活性及特性。方法:滑膜组织来源于2003-02/2004-03南方大学南方医院脊柱骨病科收治的12例住院患者。类风湿关节炎组6例源自全膝关节置换术或经关节镜滑膜切除术的类风湿关节炎患者,正常滑膜组6例来自无关节炎病史的半月板损伤患者,均经病理诊断证实。从滑膜组织中分离滑膜细胞,免疫磁珠法筛选滑膜CD68+和CD68-细胞,用流式细胞仪检测筛选效能;用免疫组化染色观察类风湿关节炎组和正常滑膜组筛选前后滑膜CD68+细胞所占比例;以四甲基偶氮唑盐比色法观察筛选后细胞体外培养增殖活性。结果:所获12例滑膜组织全部进入结果分析。①滑膜细胞分离后观察:滑膜细胞24h后贴壁生长,滑膜巨噬样细胞在类风湿关节组的比例较正常滑膜组高。②筛选后滑膜细胞的观察结果:免疫磁珠法筛选的CD68+和CD68-细胞均在2h内开始贴壁,24h后CD68-细胞呈极向排列生长,贴壁能力强于CD68+细胞。筛选后的滑膜CD68+细胞与磁珠结合在一起,具有巨噬样细胞形态,胞周可有突起,分裂增殖较慢,但在体外能传数代;CD68-细胞未与磁珠结合,表现为长梭形成纤维细胞样形态,细胞分裂增殖迅速。③CD68+细胞的纯度分析:经流式细胞仪分析细胞纯度为93.6%,主峰右移,细胞平均体积增大。滑膜CD68-细胞不能被FITC标记。④滑膜细胞CD68的表达观察:筛选后CD68+细胞均为棕黄色。细胞核大、较疏松,细周有突起。CD68-细胞基本为成纤维样细胞,胞浆未被黄染,细胞核位于细胞中央,呈卵圆形,核仁明显。⑤两组滑膜细胞体外增殖速度:在体外均有不同程度增殖活性。类风湿关节炎和正常滑膜CD68-细胞增殖速度快于同一组织来源滑膜CD68+细胞的增殖速度[(0.680±0.047),(0.236±0.014);(0.605±0.031),(0.195±0.019);t=21.989,P<0.05]。类风湿关节炎滑膜CD68+细胞增殖速度快于正常滑膜CD68+细胞的增殖速度[(0.236±0.014),(0.195±0.019);t=4.149,P<0.05]。结论:CD68可作为一种标志来筛得滑膜细胞中的巨噬细胞和其他滑膜细胞,筛选后滑膜细胞均具有良好增殖活性。CD68+细胞具有典型巨嗜样细胞形态,CD68-细胞主要为成纤维样细胞,两种细胞区分程度好有助于临床对疾病活动期和严重程度判断。     

白细胞介素-37在类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中白细胞介素(IL)-37的表达水平及意义。方法选取RA患者60例,其中活动期和稳定期各30例纳入研究。另外,以健康体检者30例作为对照组。收集上述人群外周血标本,分离外周血中的血清和PBMC,用实时荧光定量PCR检测PBMC中IL-37 mRNA的表达水平;用ELISA法检测血清中IL-37的水平,同时检测血清中类风湿因子(RF)和抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体水平,并对其进行比较分析。结果RA患者PBMC中IL-37 mRNA及血清IL-37表达水平均显著高于对照组(P<0.05),而RA活动期患者PBMC IL-37 mRNA和血清IL-37表达水平均显著高于稳定期患者(P<0.05)。RA患者血清中IL-37的水平与RF及抗CCP水平均呈正相关(r分别为0.384、0.468,P<0.05)。RA活动期与稳定期患者血清IL-37水平与RA患者病情诊断评分均呈正相关(r分别为0.792、0.563,P<0.05)。结论抑炎性因子IL-37在RA患者中呈高表达,在RA的疾病发展进程中可能起着负向调节作用。     

滑膜细胞代谢在类风湿关节炎中作用的研究进展

类风湿关节炎（RA）是一种全身性、难治性、自身免疫性疾病，其主要病理特点是滑膜细胞增生、衬里层增厚、多种炎性细胞浸润、血管翳形成等。这些病理改变是多种因素共同作用的结果。近年来，针对RA的发生机制展开了大量的实验研究，研究方向集中在滑膜增生、炎性因子、基因调控等方面。本文聚焦于滑膜细胞代谢在RA中的作用研究进展进行综述，期望能为其临床诊治提供新的模式及靶点。     

调节性B细胞与类风湿关节炎活动相关性

类风湿关节炎(RA)是以对称性多关节炎为主要临床表现的系统性自身免疫性疾病。其发病机制尚不明确。调节性细胞对于RA免疫平衡和自身稳定的维持有重要作用。具有负性调节功能的B细胞(Breg)可通过产生白细胞介素10(IL-10)或转化生长因子β(TGF-β)等抑制性细胞因子介导免疫耐受,抑制RA炎性反应,尤其对活动期RA有显著免疫抑制作用。本文主要讨论Breg在RA中的作用及其可能机制。     

类风湿关节炎血管新生中细胞因子作用及中医药对其影响

正类风湿关节炎(Rheumatoi Arthritis,RA)是一种可致多系统受累的、慢性、侵袭性自身免疫性疾病,病变多见四肢小关节受累,以关节滑膜慢性炎症为基本病理特征。滑膜炎症反复发生导致滑膜细胞进行性增生、滑膜组织血管新生、肥厚绒毛样突起形成血     

类风湿关节炎血清和滑液Th1／Th2细胞因子的水平及意义

目的初步探讨类风湿关节炎患者免疫功能紊乱的机制.方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测类风湿关节炎患者血清和关节滑膜液中Th1细胞分泌的细胞因子IL-2、IFN-γ和Th2细胞分泌的细胞因子IL-6、IL-10的水平.结果类风湿关节炎患者血清及滑膜液中IL-2、IFN-γ的水平与正常对照组相比明显升高,差异具有显著性(p＜0.01或p＜0.05),而IL-6、IL-10的水平降低,差异具有显著性(p＜0.01或p＜0.05).结论在类风湿关节炎患者血清及滑膜液中Th1/Th2细胞分泌的细胞因子水平存在着明显失衡,两者以Th1细胞分泌细胞因子占优势,这可能与其发病机制密切相关.     

卵巢肿瘤中B7-H1、B7-H3分子的表达及临床意义

目的探讨B7-H1、B7-H3在卵巢上皮性良性肿瘤、交界性肿瘤及各类卵巢恶性肿瘤组织中的表达及其临床意义。方法采用ElivsionTM免疫组织化学染色法检测B7-H1、B7-H3分子在84例卵巢肿瘤组织中的表达情况,其中卵巢浆液性囊腺瘤10例,交界性浆液性囊腺瘤20例,恶性肿瘤54例（浆液性囊腺癌36例,非浆液性囊腺癌18例）。比较B7-H1、B7-H3分子在卵巢上皮性良性肿瘤、交界性肿瘤及恶性肿瘤组织中的表达水平,并对其中54例卵巢恶性肿瘤组织中B7-H1、B7-H3的表达水平与年龄、病理类型、病理分期、病理分级及淋巴结转移之间的关系进行统计学分析。结果B7-H1、B7-H3分子主要表达于卵巢恶性肿瘤细胞的细胞质及细胞膜上,呈弥漫性棕黄色颗粒状染色。B7-H1分子在卵巢浆液性囊腺瘤、交界性浆液性囊腺瘤、浆液性囊腺癌中的阳性表达率分别为10．0％（1／10）、30．0％（6／20）、66．7％（24／36）,三者之间的差异有统计学意义（x^2=13．41,P〈0．05）。B7．H3分子在卵巢浆液性囊腺瘤、交界性浆液性囊腺瘤、浆液性囊腺癌中的阳性表达率分别为0．0％、25．0％（5／20）、69．4％（25／36）,三者之间的差异有统计学意义（x^2=20．07,P〈0．05）。恶性组中,B7-H1、B7-H3的表达水平与卵巢恶性肿瘤的FIGO分期、病理类型、病理分级、淋巴结转移或年龄等无显著相关性（P〉0．05）。结论B7-H1、B7-H3分子在卵巢恶性肿瘤中高表达,且恶性组表达阳性率明显高于交界组和良性组,提示其可能与肿瘤的发生发展有关,有望成为评估卵巢恶性肿瘤生物学行为的新的分子标志物。     

B7-H1基因在白血病细胞中的表达及其临床意义

本研究通过检测B7-H1基因在多种白血病细胞中的表达水平,探讨其临床意义。采用SYBR GreenⅠ实时定量PCR法检测9株白血病细胞系、4株IFN-γ体外诱导后的白血病细胞系,59例原代急性白血病细胞、10例原代白血病细胞诱导生成的树突状细胞(DC)以及2株实体肿瘤细胞系,10例正常人骨髓单个核细胞中B7-H1mRNA的表达水平,并对59例急性白血病患者的治疗反应与其白血病细胞中B7-H1基因表达水平之间的相关性进行了分析。结果显示:B7-H1 mRNA在白血病细胞系、原代急性白血病细胞中的表达水平较低,在IFN-γ体外诱导后的白血病细胞系、原代白血病细胞诱导生成的DC中的表达水平明显上调,在化疗后未获完全缓解(CR)的患者白血病细胞中B7-H1 mRNA表达水平明显高于化疗后获得CR的患者。结论:B7-H1基因在白血病细胞中的表达水平较低,但在某些因素作用下其表达水平明显上调。白血病细胞中B7-H1基因表达水平与患者的治疗反应有显著相关性。     

B7-H1在人骨髓间充质干细胞上的表达及其对T淋巴细胞增殖的影响

目前关于人骨髓间充质干细胞（hBMMSC）的免疫调节机制尚不完全清楚。为探讨B7-H1在hBMSC上的表达水平及hBMMSC的免疫调节机制是否与B7-H1介导的信号通路（B7-H1／PD-1）有关,首先分离、培养、鉴定hBMMSC,采用流式细胞术、RT—PCR、Western—blot检测B7-H1在hBMMSC上的表达水平。进一步采用混合淋巴细胞培养法（MLC）观察hBMMSC对T淋巴细胞增殖的抑制作用,然后使用功能级的抗B7-H1单克隆抗体阻断B7-H1．用CCK-8试剂盒检测阻断前后T淋巴细胞增殖活性。结果表明：hBMMSC高表达B7-H1分子;表达B7-H1的hBMMSC能有效地抑制T淋巴细胞的增殖,其抑制作用与hBMMSC数量呈剂量依赖性;使用抗B7-H1单克隆抗体阻断B7-H1后hBMMSC对T淋巴细胞增殖的抑制作用显著降低,抑制率由64．1％降低至38．75％。结论：B7-H1在hBMMSC上高表达,B7-H1介导的信号通路（B7-H1／PD-1）参与了hBMMSC的免疫调节作用。     

B7-H4在膀胱尿路上皮癌组织和血清中的表达及临床意义

目的了解膀胱尿路上皮癌组织及患者血清中B7-H4的表达情况及其临床意义。方法应用免疫组化方法检测49例膀胱尿路上皮癌患者组织中B7-H4的表达,ELISA检测45例患者外周血可溶性B7-H4（sB7-H4）的含量,分析癌组织和血清中B7-H4的表达水平及与患者临床病理指标的相关性。结果膀胱尿路上皮癌组织中B7-H4阳性表达率为49.0%（24/49）,而正常膀胱组织中无B7-H4表达（P〈0.05）,其表达水平与患者的肿瘤TNM分期和组织学分级密切相关（P〈0.05）;膀胱尿路上皮癌患者血清中sB7-H4的浓度较正常人显著增高（P〈0.05）,高级别患者表达量显著高于低级别患者（P〈0.05）。结论 B7-H4在膀胱尿路上皮癌中表达上调,在膀胱尿路上皮癌的发生、发展及免疫逃逸中发挥着重要作用,封闭肿瘤组织中的B7-H4有可能干预膀胱尿路上皮癌的复发与进展。     

子宫肌瘤和肌壁组织B7-H3 mRNA表达水平及意义

目的探讨子宫肌瘤患者肌瘤组织和正常子宫肌壁B7-H3 mRNA的表达水平及其在子宫肌瘤患者发病中的作用。方法利用逆转录多聚酶链反应法和实时荧光定量PCR法检测44例子宫肌瘤患者的肌瘤组织和正常子宫肌壁的B7-H3 mRNA表达水平。结果子宫肌瘤的肌瘤组织表达的B7-H3 mRNA高于正常子宫肌壁。结论子宫肌瘤组织高表达B7-H3 mRNA,B7-H3 mRNA高表达可能与子宫肌瘤发生发展有关。     

B7-H4和B7-H6在卵巢癌中的表达及意义

目的:探讨B7-H4和B7-H6蛋白在卵巢良性和恶性肿瘤中的表达及其临床病理意义。方法:收集同济大学附属同济医院卵巢肿瘤标本101例,其中卵巢恶性肿瘤58例、同期卵巢良性肿瘤43例。采用免疫组织化学染色检测B7-H4和B7-H6蛋白在良性及恶性卵巢肿瘤中的表达及分布。采用χ~2检验及非参数秩和检验分析卵巢恶性肿瘤中B7-H4和B7-H6蛋白表达与临床病理参数的相关性。结果:B7-H4和B7-H6蛋白在卵巢恶性肿瘤中表达率分别为82.76%(48/58)、79.31%(46/58),在卵巢良性肿瘤中的表达率分别为13.95%(6/43)、16.28%(7/43);B7-H4和B7-H6的表达在卵巢良恶性肿瘤间差异有统计学意义(P0.000 1)。B7-H4和B7-H6蛋白在卵巢恶性肿瘤细胞浆和细胞膜上均有表达。B7-H4和B7-H6蛋白的表达与卵巢恶性肿瘤患者的年龄、组织分型及p53蛋白表达相关(P0.05)。结论:B7-H4和B7-H6蛋白在卵巢恶性肿瘤中呈高表达,提示两者可能与卵巢恶性肿瘤的发生、发展有关。     

B7-H4与移植免疫

B7-H4是2003年发现的B7家族成员,在T细胞介导的免疫中起负调节作用,抑制T细胞增殖和细胞因子分泌。尽管其mRNA在淋巴组织和非淋巴组织均有表达,但其蛋白质在正常组织、细胞中不表达或极低表达。本文就B7-H4与移植免疫的相关研究进展作一综述。     

B7-H4蛋白在胃癌患者中的表达及临床意义

目的探讨B7-H4在胃癌组织中表达及与患者临床病理特征、预后的相关性和可能的临床意义。方法应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术及免疫组织化学染色检测B7-H4在胃癌组织中的表达,统计分析B7-H4表达与临床病理参数的关系。结果 B7-H4在胃癌中高表达(71/100),其表达强度与浸润深度、淋巴结转移及病理分期相关。生存期≤5年的患者B7-H4阳性表达率高于生存期>5年的患者,差异有统计学意义(P<0.05),此外,B7-H4阳性患者的预后较B7-H4阴性患者差,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 B7-H4蛋白表达与胃癌患者预后密切相关,可能成为胃癌的一个肿瘤标志物。     

肝炎患者T淋巴细胞PD-1/B7-H1通路表达的变化及其临床意义

目的探讨重型肝炎(SH)患者T淋巴细胞程序性死亡因子-1(PD-1)以及其配体B7-H1的表达以及对患者预后的影响。方法选择该院30例SH患者,30例慢性乙型肝炎,另选取30例健康患者作为对照。分别检测3组T淋巴细胞PD-1/B7-H1的表达水平以及T细胞亚群计数,同时对生存以及死亡重型肝炎患者的PD-1/B7-H1进行分析。结果重型肝炎患者T淋巴细胞PD-1、B7-H1的阳性表达率为[(5.32±0.64)%、(7.65±0.82)%];慢性乙型肝炎阳性表达率为[(9.98±1.63)%、(15.97±2.48)%)];与健康组[(1.69±0.31)%、(1.83±0.28)%]比较,差异具有统计学意义(均P<0.05);重型肝炎患者的CD4+、CD8+细胞数分别是(43.0±9.2)%、(11.0±4.8)%与健康组[(55.0±9.7)%、(24.5±7.9)%]比较,差异具有统计学意义(P<0.05);死亡重型肝炎患者的PD-1/B7-H1为(6.32±0.95)%和(9.15±1.02)%,生存患者为(3.79±0.63)%和(5.82±0.67)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论重型肝炎患者的T淋巴细胞PD-1/B7-H1表达水平明显的提高,跟患者的预后情况具有密切的相关性。     

宫颈癌患者血清可溶性B7-H4检测及临床意义

目的探讨宫颈癌患者血清可溶性B7-H4的水平及临床意义。方法在建立了检测可溶性B7-H4(sB7-H4)ELISA夹心法的检测50例宫颈癌患者、40例子宫肌瘤患者血清sB7-H4水平,以50例体检健康者血清sB7-H4水平为对照。结果正常体检者、子宫肌瘤患者和宫颈癌患者血清sB7-H4浓度分别为(31.62±9.85)μg/L(、34.49±8.17)μg/L和(43.70±8.60)μg/L。对照组者与子宫肌瘤患者血清sB7-H4水平差异无显著性(P0.05),宫颈癌患者血清sB7-H4水平显著高于对照组和子宫肌瘤患者(P均0.01)。手术前宫颈癌患者血清sB7-H4水平(46.88±8.89)μg/L明显高于术后患者(39.29±5.99)μg/L(P0.01)。宫颈癌患者血清sB7-H4水平与鳞状上皮癌肿瘤(SCC)水平呈正相关(P0.01)。结论 sB7-H4与宫颈癌的发病有关,可能是宫颈癌的一种较好的肿瘤标志物,检测sB7-H4对宫颈癌的辅助诊断和疗效观察具有一定的临床意义。