氧化修饰的低密度和极低密度脂蛋白对巨噬细胞单核趋化蛋白表…

探讨氧化修饰的低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）和氧化修饰的极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）是否能诱导巨噬细胞表达单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）ｍＲＮＡ和蛋白，以瘅二者在动脉粥样硬化发生中的作用，方法在巨噬细胞培养基中分别加入２５μｇ／ｍｌ的低密度脂蛋白（ＬＤＬ）极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ，３７℃下温育２４小时，收集巨噬细胞的条件培养基，同时用异硫氰酸胍法提取巨噬细胞总ＲＮ     

氧化修饰LDL及VLDL对兔主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1mRNA表达的作用

单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）是一种强的单核细胞趋化因子，在体外可由多种细胞分泌，包括血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）。本研究采用斑点杂交方法检测了氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）及氧化修饰极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）对培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达的作用。结果表明，培养的ＳＭＣ可表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ，而且ＳＭＣ暴露于ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ后，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达水平明显增高，分别增高约１１倍、６倍和２０倍。因此我们认为ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ可以刺激培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ的表达。     

L—精氨酸和尼莫地平对脂多糖诱导的内皮细胞表达单核细胞趋化蛋 …

目的 观察Ｌ－精氨酸和尼莫地平对脂多糖（ＬＰＳ）诱导的内皮细胞（ＥＣ）的单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）ｍＲＮＡ和蛋白表达的影响。方法 在ＥＣ培养基中分别为ＬＰＳ,ＬＰＳ＋Ｌ－精氨酸和ＬＰＳ＋尼莫地平,培养８小时,用异硫氢酸胍法提了细胞的总ＲＮＡ,用γ＾２－３２Ｐ末端标记的ＭＣＰ－１寡核苷酸探针培养基（ＣＭ）中的ＭＣＰ－１蛋白含量,用免疫细胞化学方法检测ＥＣ的ＭＣＰ－１的蛋白的表达。结果 斑点杂     

天然及氧化型低密度和检低密度脂蛋白诱导培养的内皮细胞 …

为探讨天然及氧化修饰脂蛋白对培养的内皮细胞ＭＩＰ－１α及ＶＤＭ－１ｍＲＮＡ表达的作用，取正常人新鲜血液，用超速梯度离心法分离出ＬＤＬ和ＶＬＤＬ后，加Ｃｕ＾２＋使之氧化，成为ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ。培养人脐静脉内皮细胞（ＥＣ），待其汇合后分别加放ＬＤＬ、ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ、ＯＸ－ＶＬＤＬ，使其终浓度为２５ｕｇ／ｍｌ，对照组不加脂蛋白。培养２４ｈ后，收集ＥＣ，用异硫氰酸胍法提取其总ＲＮＡ，用     

氧化修饰LDL及VLDL对兔主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋…

单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）是一种强的单核细胞趋化因子，在体外可由多种细胞分泌，包括血管平滑肌细胞。本研究采用斑点杂交方法检测了氧化修饰低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及氧化修饰极低密度脂蛋白对培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达的作用。     

氧化修饰低密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞周期及增殖细胞核抗原的影响

应用流式细胞仪对氧化修饰低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）刺激动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖、细胞周期及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、Ｐ５３、Ｐ２７及ｃ－ｅｒｂＢ蛋白表达的影响进行了观察。结果发现：Ｏｘ－ＬＤＬ和天然低密度脂蛋白（Ｎ－ＬＤＬ）刺激培养人动脉ＳＭＣ细胞增殖时其Ｓ期细胞百分率增加，且Ｏｘ－ＬＤＬ的作用比Ｎ－ＬＤＬ强，表明Ｏｘ－ＬＤＬ和Ｎ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ细胞增殖时与Ｓ期细胞的增加有关；Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ增殖的同时ＰＣＮＡ蛋白阳性率增加，而与Ｐ５３、Ｐ２７和ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白的表达无关。提示ＰＣＮＡ可能参与了Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ的细胞增殖作用；特异性蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂ＧＦ１０９２０３Ｘ能降低Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ增殖过程中ＰＣＮＡ的阳性率，表明该细胞增殖过程中ＰＣＮＡ表达的抑制可能与ＰＫＣ信号传递通路有关。     

人单核细胞趋化蛋白1基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的：克隆表达具有重要生物功能的人单核细胞核细胞趋化蛋白１（ｈｕＭＣＰ－１）。方法：从人外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）中提取ｐｏｌｙ（Ａ）＾＋ＲＮＡ,用ＲＴ－ＰＣＲ法扩增出ｈｕＭＣＰ－１ｃＤＮＡ。将ｈｕＭＣＰ－１ｃＤＮＡ插入融合表达载体ｐＧＥＸＩＮ,１ｍｍｏｌ／Ｌ异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导后获得高效表达。结果：Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证明与ｈｕＭＣＰ－１单克隆抗体有明显交叉反应。结论     

地塞米松和阿斯匹林对猪肺血管内巨噬细胞环氧合酶II型的作

目的：探讨地塞米松（ＤＥＸ）和阿斯匹林（ＡＳＡ）对脂多糖致猪肺血管内巨噬细胞（ＰＩＭ）环氧合酶－－ＩＩ（ＣＯＸ－ＩＩ）表达及活性的影响。方法：改良分离,培养猪ＰＩＭ,分为：（１）对照组;（２）ＬＰＳ组：予ＬＰＳ刺激,以反转录聚合酶链反应和免疫组化染色法检测ＣＯＸ－ＩＩ ｍＲＮＡ及酶蛋白的改变,放射免疫分析法测定细胞上清ＰＧＥ２浓度,间接表示ＣＯＸ活性。结果：ＬＰＳ组ＰＩＭ ＣＯＸ－ＩＩ ｍＲＮＡ和     

白细胞介素1β对兔主动脉平滑肌细胞MCP—1及VCAM—1蛋白及 …

白细胞介素１β（ＩＬ－１β）是一种参与动脉粥样硬化斑块形成的细胞因子。为了研究ＩＬ－１β在动脉粥样硬化斑块形成过程中的作用,采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ观察ＩＬ－１β对培养的兔主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）单核细胞趋化蛋白（ＭＣＰ－１）和血管细胞粘附分子１（ＶＣＡＭ－１）蛋白分泌及ｍＲＮＡ表达的影响。结果表明,ＩＬ－１β对兔主动脉ＳＭＣ ＭＣＰ－１的蛋白分泌和ｍＲＮＡ     

在大肠杆菌中融合高效表达人MCP-1

目的：利用含强启动子的融合表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ对编码人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的基因进行高效表达。方法：基因重组技术及蛋白纯化技术。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示表达产物占菌体蛋白的５０％ 。Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ检测表明,表达产物可与抗ＭＣＰ－１ 抗体特异反应。生物学活性测定结果表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性。结论：融合蛋白对ＭＣＰ－１ 趋化活性无影响     

内皮氧化低密度脂蛋白受体介导了氧化低密度脂蛋白对内皮细胞的损伤

目的：探讨氧化低密度脂蛋白（ｏｘｉｄｉｚｅｄ ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ,ｏｘＬＤＬ） 血管内皮受体（ｌｅｃｔｉｎｌｉｋｅ ｏｘＬＤＬｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＬＯＸ１）在ｏｘＬＤＬ致内皮细胞损伤中的作用及其机制。方法：放射配基结合及竞争抑制实验检测人脐静脉内皮细胞（ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｃｅｌｌｓ,ＨＵＶＥＣｓ）存在ＬＯＸ１ 的高亲和位点,采用倒置相差显微镜观察细胞形态的改变,测定细胞及上清乳酸脱氢酶（ｌａｃｔｉｃ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ,ＬＤＨ）活性,计算细胞死亡率,发色底物法检测内皮细胞培养液中的组织纤溶酶原激活物（ｔｉｓｓｕｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ,ｔＰＡ） 和纤溶酶原激活物抑制剂（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒ１ ,ＰＡＩ１）的活性; 反转录聚合酶链反应检测ＬＯＸ１ ｍＲＮＡ 表达水平,Ｃａ２＋ 示踪测定细胞钙转运功能。结果：ＨＵＶＥＣｓ 存在ＬＯＸ１ 的高亲和位点［Ｂｍａｘ（５４ ±２０） ｎｇ／１０６ ｃｅｌｌｓ,Ｋｄ（２．０ ±０．６） ×１０－８ ｍｏｌ·Ｌ－ １］ ,单纯加入ｏｘＬＤＬ作用２４ ｈ      

低密度及氧化低密度脂蛋白对内皮细胞分泌肾上腺髓质素的影响

目的探讨低密度及氧化低密度脂蛋白对内皮细胞分泌肾上腺髓质素(ADM)的影响.方法利用培养的内皮细胞株ECV-304细胞,分别与不同浓度的低密度(50 100mg/L)、氧化低密度脂蛋白(50 100mg/L)及低密度脂蛋白(50 mg/L) 氧化低密度脂蛋白(50 mg/L)进行孵育,24 h后分别收集培养上清及细胞,用放免分析检测上清及细胞内肾上腺髓质素的含量.结果低密度脂蛋白对肾上腺髓质素的分泌无影响,而氧化型低密度脂蛋白能明显刺激ADM的分泌,二者合用的作用接近于100mg/L的OX-LDL.结论OX-LDL可能具有氧化LDL使其成为OX-LDL的作用,ADM的分泌可能是对细胞损伤的一种反应.     

不同类型心绞痛患者低密度脂蛋白及氧化型低密度脂蛋白的比较研究

目的 探讨低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白与冠状动脉心脏病之间的关系.方法 冠状动脉痉挛（CAS）患者及稳定性心绞痛（SAP）患者共86例,40例正常体检患者,检测三组的各项血脂水平并进行对比分析.结果 CAS组和SAP组的LDL-C平均值均高于正常人群,弥漫性痉挛组、节段性痉挛组、单支病变组、多支病变组LDL-C含量也高于正常人群,差异均有统计学意义（P＜0.05）.SAP组、单支病变组、多支病变组的平均OX-LDL含量均高于CAS组及正常人群.CAS组和SAP组的TC、HDL-C与正常人群比较差异无统计学意义（P＜0.05）.结论 氧化型低密度脂蛋白不仅与冠脉粥样硬化的发生有关,而且其在血浆中的含量有可能与动脉粥样硬化的病变程度相关,因此比低密度脂蛋白与冠心病的联系更加紧密,是此类研究的新靶点.     

氧化低密度脂蛋白与缺血性脑血管疾病

1 氧化低密度脂蛋白（OX—LDL） 1．1氧化低密度脂蛋白（OX—LDL）的形成及受体识别 LDL在体内发生氧化修饰的化学过程目前尚未完全阐明，但认为其可能是自由基攻击LDL上的多聚不饱和脂肪酸引发的链式反应过程。在体内自由基的产生可能是由于内皮细胞、血管平滑肌细胞、巨噬细胞、白细胞的细胞因子和／或细胞氧化酶或脂酶介导的，LDL中含有大量多价不饱和脂肪酸，     

氧化修饰低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡

通过观察凋亡细胞的核形态及特征DNA梯形图谱（DNAladder）．研究了氧化修饰低密度脂蛋白（Ox－LDL）诱导的巨噬细胞凋亡。结果显示：Ox－LDL可引起明显的巨噬细胞凋亡，表现在Ox－LDL处理的细胞核发生固缩，染色体DNA断裂的凝胶电泳图谱呈典型的梯形，正常和乙酰化LDL（N－LDL和AC－LDL）未引起明显的巨噬细胞凋亡。Ox－LDL引起的巨噬细胞凋亡具有浓度和时间效应且与其修饰程度有关，修饰程度越高，引起凋亡越明显．     

低密度脂蛋白对胰岛细胞功能的影响

目的:研究低密度脂蛋白对体外培养的胰岛细胞功能的影响.方法:体外分离培养Wistar大鼠胰岛细胞,并在低糖(2.8mmol/L)和高糖(16.7mmol/L)条件下与低密度脂蛋白(LDL)(从8mg/L开始)培养48h,应用放射免疫法测定葡萄糖刺激的大鼠胰岛细胞胰岛素分泌量.结果:①低糖刺激下,LDL对胰岛细胞的胰岛素分泌无明显影响,但在高糖刺激下,胰岛素分泌水平降低.②LDL和抗氧化剂维生素E,C共同培养48h,与LDL组比较,高糖刺激下胰岛素分泌水平增加.结论:胰岛细胞摄入LDL后发生氧化反应,损伤胰岛细胞功能,这一过程可被抗氧化剂抑制.     

一种获取氧化修饰型低密度脂蛋白(Ox-LDL)的有效方法

探讨了不同培养体系对血单核细胞源性巨噬细胞氧化修饰低密度脂蛋白能力的影响,旨在录求一种获得Ｏｘ－ＬＤＬ的有效方法。实验分为４组,分别为ＨａｍＦ－１０、ＭＤＥＭ、ＤＭＥＭ＋３μｍｏｌ／ＬＦｅ＾２＋、ＤＭＥＭ＋１μｍｏｌ／ＬＣｕ＾２＋。通过测定细胞存活率以及培养液上清中硫代巴比妥酸反应物（ＴＢＡＲＳ）,反映不同培养体系对巨噬细胞生长状态及氧化修饰ＬＤＬ能力的影响。结果表明：ＨａｍＦ－１０培养液对血单核     

冠心病与低密度脂蛋白及脂蛋白(a)

近年来已有大量临床研究及5项著名的大规模冠心病(CHD)一级或二级预防试验(4S,WOS,CARE,LJPID,AFCAPS等多中心协作计划)都明确指出强化降脂治疗降低血清总胆固醇(TC)与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)可以预防CHD临床事件(如心肌梗死、不稳定型心绞痛、猝死)的发生,减少CHD死亡.……     

低密度脂蛋白亚组份的分离及初步应用

目的：探讨低密度脂蛋白（ＬＤＬ）亚组份不同特性在动脉粥样硬化中的作用。方法：采用密度梯度超速离心法分离不同密度ＬＤＬ亚组份；分析冠心病（ＣＨＤ）患者和健康人群ＬＤＬ亚组份分布特征。结果：密度梯度超速离心法直接分离出血清中不同密度的ＬＤＬ亚组份，随着密度逐渐增加，电泳迁移率逐渐增大。ＣＨＤ组总ＬＤＬ１、ＬＤＬ２、ＬＤＬ３、ＬＤＬ４显著增高；ＬＤＬ１～４占总ＬＤＬ比例（％）分别为１４．１±４．１、２３．１±７．５、２８．６±９．２、３４．２±１３．７，而对照组为２１．５±１３．５、２１．８±８．７、２７．４±１０．９、２９．３±１３．６，冠心病患者ＬＤＬ分布向小而重ＬＤＬ亚组份倾移。结论：小而重ＬＤＬ亚组份是冠心病发生的危险因素。本法亦为ＬＤＬ亚组份的特性在动脉粥样硬化中的作用研究提供可靠方法     

小而密低密度脂蛋白与脑卒中及其危险因素的关系

目的　探讨血浆小而密低密度脂蛋白 (sLDL)与脑卒中及其他危险因素的关系。方法采用 2 %～ 16 %的非变性梯度胶电泳检测经头颅CT和核磁共振检查证实的 2 0 4例脑卒中患者 (其中缺血性脑梗死 10 3例 ,腔隙性脑梗死 5 1例 ,脑出血 5 0例 )的血浆sLDL水平。对照 341例 ,性别、年龄匹配并经严格检查排除了脑卒中。观察各组间sLDL的变化及与预后的关系 ,对sLDL的影响因素采用多元逐步回归进行分析。结果　缺血性脑梗死组和腔隙性脑梗死组的血浆sLDL水平为 5 4 %±8%和 5 2 %± 7%明显高于对照组 (4 7%± 11% ,P <0 0 1～P <0 0 0 1) ;脑出血组的血浆sLDL水平(5 0 %± 9% )与对照组比较差异无显著意义 (P >0 0 5 )。多元逐步回归分析显示 ,危险因素中的甘油三酯、年龄、收缩压、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白影响血浆sLDL水平 ,(P <0 0 5～ 0 0 1)。Logistic回归分析结果显示 ,sLDL >5 0 %者发生缺血性脑梗死的危险性增加 (OR值 =3 1,95 %可信区间1 6 4 9～ 5 6 91,P <0 0 0 1) ;sLDL异常与腔隙性脑梗死和脑出血的关系无显著统计学意义 (P >0 0 5 )。结论　sLDS水平与缺血性脑梗死的发生密切相关 ,可能是缺血性脑梗死新的危险因素。