氧化修饰的低密度和极低密度脂蛋白对巨噬细胞单核趋化蛋白表…

探讨氧化修饰的低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）和氧化修饰的极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）是否能诱导巨噬细胞表达单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）ｍＲＮＡ和蛋白，以瘅二者在动脉粥样硬化发生中的作用，方法在巨噬细胞培养基中分别加入２５μｇ／ｍｌ的低密度脂蛋白（ＬＤＬ）极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）ＯＸ－ＬＤＬ和ＯＸ－ＶＬＤＬ，３７℃下温育２４小时，收集巨噬细胞的条件培养基，同时用异硫氰酸胍法提取巨噬细胞总ＲＮ     

正常和β-极低密度脂蛋白对糖尿病小鼠巨噬细胞内脂质堆积的影响

血浆正常极低密度脂蛋白(n-VLDL)能使体外培养的糖尿病小鼠腹腔巨噬细胞内甘油三酯0(TG)堆积量高于对照组;高胆固醇血症家兔血β-VLDL对糖尿病巨噬细胞内胆固醇酯(ChE)含量无影响,而使对照组细胞内ChE的堆积呈饱和性增加。结果表明,糖尿病巨噬细胞功能发生改变,其摄取n-VLDL能力增强,而对β-VLDL的摄取减弱。     

天然及氧化型低密度和极低密度脂蛋白诱导培养的内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α和血管细胞粘附分子1

为探讨天然及氧化修饰脂蛋白对培养的内皮细胞 MIP- 1α及 VCAM- 1m RNA表达的作用 ,取正常人新鲜血液 ,用超速梯度离心法分离出 L DL 和 VL DL 后 ,加 Cu2 使之氧化 ,成为 OX- L DL 和 OX- VL DL。培养人脐静脉内皮细胞 (EC) ,待其汇合后分别加入 L DL、OX- L DL 、VL DL、OX- VL DL,使其终浓度为 2 5 μg/ ml,对照组不加脂蛋白。培养 2 4h后 ,收集 EC,用异硫氰酸胍法提取其总 RNA,用地高辛标记的 MIP- 1α和 VCAM- 1c DNA探针进行斑点杂交。结果显示 ,培养的 EC能表达 MIP- 1α和 VCAM- 1m RNA,当其暴露于 L DL 和 VL DL 后 ,其 MIP- 1α和 VCAM- 1m RNA表达轻度增加 ,而当 EC暴露于 OX- L DL 和 OX- VL DL 后 ,其 MIP- 1α m RNA表达水平明显增高 ,分别为对照组的 3.2倍和 2 .5倍 ;VCAM- 1m RNA的表达分别为对照组的 2 .6倍和 2 .17倍。提示脂蛋白 ,特别是氧化修饰的脂蛋白 ,可促进 EC表达 MIP- 1α和 VCAM- 1m RNA,在动脉内膜单核细胞的募集中起重要作用     

脂蛋白和C反应蛋白对单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的 探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及其受体趋化因子受体2(CCR-2)经动脉粥样硬化相关因素刺激后表达量的变化情况.方法 密度梯度离心法从健康成人外周血中分离获得单个核细胞,体外培养48 h.给予氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、C反应蛋白(CRP)及高密度脂蛋白(HDL)进行干预.干预后用实时荧光定量RT-PCR技术检测单核细胞MCP-1 mRNA和CCR2 mRNA的含量,ELISA法检测MCP-1蛋白含量.结果 ox-LDL+CRP组、ox-LDL、CRP处理组MCP-1和CCR2 mRNA表达水平和MCP-1蛋白含量明显高于对照组(P<0.05).而经HDL处理的单核细胞表达MCP-1和CCR2 mRNA水平下调,MCP-1蛋白含量低于对照组(P<0.05).结论 在体外培养的条件下.CRP和ox-LDL可以促进MCP-1和CCR2 mRNA表达,继而导致MCP-1含量增加,增强炎症反应的范围和强度.HDL可以有效的抑制MCP-1的表达.     

氧化修饰LDL及VLDL对兔主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1mRNA表达的作用

单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）是一种强的单核细胞趋化因子，在体外可由多种细胞分泌，包括血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）。本研究采用斑点杂交方法检测了氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）及氧化修饰极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）对培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达的作用。结果表明，培养的ＳＭＣ可表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ，而且ＳＭＣ暴露于ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ后，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达水平明显增高，分别增高约１１倍、６倍和２０倍。因此我们认为ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ可以刺激培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ的表达。     

氧化型低密度脂蛋白对单核巨噬细胞株U937表达Siglec-1蛋白及分泌细胞因子的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的致动脉粥样硬化(AS)作用是否通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1的表达发挥作用。方法制备ox-LDL并用不同浓度刺激人巨噬细胞株U937,48h后收集细胞和培养上清液,分别用流式细胞仪和RT-PCR检测不同浓度ox-LDL刺激后Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA的表达水平,并用ELISA试剂盒测定培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的浓度。结果与对照组相比,ox-LDL能刺激U937细胞表面Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA表达升高(P<0.01),培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的表达升高(P<0.01),并呈浓度依赖性。结论ox-LDL的致AS作用可能部分是通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1蛋白表达而活化巨噬细胞,分泌细胞因子和趋化因子诱导更多巨噬细胞和淋巴细胞的活化参与粥样斑块中的炎症反应。     

扇贝糖胺聚糖对巨噬细胞氧化修饰低密度脂蛋白的影响

动脉粥样硬化（AS）是缺血性心脑血管疾病的主要病理基础,其形成的确切机制尚未阐明。近年来研究证实氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）通过促进巨噬细胞源性泡沫细胞的形成、诱导调亡、促进血管平滑肌增殖等在AS的形成和发展中发挥着极为重要的作用。因此普遍认为减少体内OX-LDL的生成,能抑制AS的形成和发展。     

天然及氧化型低密度和极低密度脂蛋白诱导培养的内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1 α和血管细胞粘附分子

为探讨天然及氧化修饰脂蛋白对培养的内皮细胞MIP-1α及VCAM-1mRNA表达的作用，取正常人新鲜血液，用超速梯度离心法分离出LDL和VLDL后，加Cu2+使之氧化，成为OX-LDL和OX-VLDL。培养人脐静脉内皮细胞(EC)，待其汇合后分别加入LDL、OX-LDL、VLDL、OX-VLDL，使其终浓度为25μg／m1，对照组不加脂蛋白。培养24h后，收集EC，用异硫氰酸胍法提取其总RNA，用地高辛标记的MIP-1α和VCAM-1cDNA探针进行斑点杂交。结果显示，培养的EC能表达MIP-1α和VCAM-1mRNA，当其暴露于LDL和VLDL后，其MIP-1α和VCAM-1mRNA表达轻度增加，而当EC暴露于OX-LDL和OX-VLDL后，其MIP-1αmRNA表达水平明显增高，分别为对照组的3．2倍和2．5倍；VCAM-1mRNA的表达分别为对照组的2．6倍和2．17倍。提示脂蛋白，特别是氧化修饰的脂蛋白，可促进EC表达MIP-1α和VCAM-1mRNA，在动脉内膜单核细胞的募集中起重要作用。     

白藜芦醇对人外周血单核/巨噬细胞CCR5表达的影响

目的:观察白藜芦醇对人外周血单核/巨噬细胞CC型趋化因子受体5(CCR5) 表达的调节作用.方法:采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,再经贴壁法纯化单核/巨噬细胞.采用IFN-γ(1×105U/L)诱导单核/巨噬细胞表达CCR5,再分别加入不同浓度的白藜芦醇(0.5,5,25,50和100 μmol/L)进行干预.培养24 h后收集细胞,RT-PCR法检测外周血单核/巨噬细胞CCR5 mRNA表达水平;流式检测单核/巨噬细胞CCR5表达阳性率.同时将CCR5荧光素酶报告基因(pGL3-Basic-CCR5)转染各组细胞,检测各转染组的荧光素酶相对活性.结果:中、高浓度白藜芦醇处理组(25,50和100 μmol/L)的CCR5 mRNA表达水平、CCR5阳性细胞率和CCR5-luc报告基因的荧光素酶相对活性比对照组均有所降低,低浓度白藜芦醇处理(0.5和5 μmol/L)对单核/巨噬细胞CCR5的表达无明显影响.结论:中、高浓度白藜芦醇可抑制外周血单核/巨噬细胞CCR5的表达.     

高密度脂蛋白氧化修饰对大鼠巨噬细胞胆固醇流出的影响及其…

研究高密度脂蛋白－３（ＨＤＬ３）氧化修饰对其介导大鼠腹腔巨噬细胞胆固醇（ｃｈ）流出功能影响及细胞ｃｈ流出机制。ＨＤＬ３和其组分载脂蛋白Ａ－Ｉ（ＡｏｏＡ－Ｉ）经Ｃｕ＾２＋氧化修饰后分别与巨噬细胞（ＭΦ）一起培养，测定细胞ｃｈ流出量。结果：牛血清白蛋白（对照组）介导３．９８％细胞ｃｈ流出，ＨＤＬ３和氧化ＨＤＬ３（Ｏｘ－ＨＤＬ３）组分别为４１．７８％和１７．４３％，ＡｐｏＡ－Ｉ和Ｏｘ－ＡｐｏＡ－Ｉ分别为     

氧化修饰的低密度脂蛋白对培养的人脐静脉内皮细胞的影响

以培养的人脐静脉内皮细胞(EC)为损伤模型,观察到氧化修饰的低密度脂蛋白(O—LDL,100μg/ml和叔丁基脂氢过氧化物(tbooH,10~(-2)mM)对内皮细胞的硒—谷胱甘肽过氧化物酶(SeGSH—Px)的活性,前列腺环素(PGI_2)的生成,脂质过氧化物(Lpo)含量及SeGSH—Px/Lpo比值有明显的时间依赖效应,即随作用时间的延长,O—LDL和tbooH使EC的SeGSH—Px活性下降,PGI_2生成减少,SeGSH—Px/Lpo比值降低;而Lpo含量则增加。提示O—LDL对EC的损伤实质是脂质过氧化物的作用。     

Effects of Oxidized Low Density Lipoprotein on the Expression and Function of ABCA1 in Macrophages

In the present study, we examined the regulation of the expression and function of ABCA1 by modified LDL (ox-LDL) in vitro. After incubation with apoA-I for 24 h, RAW264.7 cells effluxed 37.65 % cholesterol loaded by acetyl LDL (ac-LDL), and 9.78% cholesterol in ox-LDL group. The level of ABCA1 mRNA increased about three times either when cells were incubated with .100 μg/mL ac-LDL or with 100 μg/mL ox-LDL. However, the level of ABCA1 protein rose by 1.57 times in ac-LDL group and 1.26 times in ox-LDL group. These results demonstrated that ox-LDL had different effect on the expression and function of ABCA1, ox-LDL might decrease the cholesterol efflux mediated by ABCA1 through other unknown mechanisms.     

巨噬细胞和内皮细胞对不同氧化修饰程度低密度脂蛋白的结合与降解

低密度脂蛋白(LDL)经氧化修饰后可被巨噬细胞和内皮细胞所识别,被两种细胞的结合量与降解量随LDL修饰程度升高而增加。     

血凝素样氧化低密度脂蛋白受体与内皮细胞p38丝裂素活化蛋白激酶关系的研究

目的探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)活化人脐静脉内皮细胞p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路中的作用。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用不同浓度的ox-LDL孵育,通过W estern印迹检测LOX-1、p38MAPK蛋白水平,逆转录聚合酶链法观察LOX-1 mRNA表达,并以LOX-1特异阻断性抗体(JTX92)预处理内皮细胞,检测p38MAPK蛋白水平。四氮唑蓝法观察ox-LDL对细胞活力的影响。结果ox-LDL引起内皮细胞形态结构的改变,而且抑制内皮细胞的生长(P<0.05);ox-LDL呈浓度依赖性地上调LOX-1蛋白和mRNA表达(均P<0.05),并呈浓度依赖性激活p38MAPK通路,不同浓度ox-LDL(25μg/m l,50μg/m l,100μg/m l)组p-p38MAPK蛋白质表达水平均明显高于对照组(48±7,79±15,113±14 vs 24±5,P<0.01);JTX92+ox-LDL(100μg/m l)组p-p38MAPK蛋白水平明显低于ox-LDL(100μg/m l)组,(58±13 vs 113±14,P<0.01)。结论ox-LDL通过LOX-1途径激活p38MAPK信号通路,LOX-1上调是ox-LDL致动脉粥样硬化的重要环节。     

小而密低密度脂蛋白与脑卒中及其危险因素的关系

目的　探讨血浆小而密低密度脂蛋白 (sLDL)与脑卒中及其他危险因素的关系。方法采用 2 %～ 16 %的非变性梯度胶电泳检测经头颅CT和核磁共振检查证实的 2 0 4例脑卒中患者 (其中缺血性脑梗死 10 3例 ,腔隙性脑梗死 5 1例 ,脑出血 5 0例 )的血浆sLDL水平。对照 341例 ,性别、年龄匹配并经严格检查排除了脑卒中。观察各组间sLDL的变化及与预后的关系 ,对sLDL的影响因素采用多元逐步回归进行分析。结果　缺血性脑梗死组和腔隙性脑梗死组的血浆sLDL水平为 5 4 %±8%和 5 2 %± 7%明显高于对照组 (4 7%± 11% ,P <0 0 1～P <0 0 0 1) ;脑出血组的血浆sLDL水平(5 0 %± 9% )与对照组比较差异无显著意义 (P >0 0 5 )。多元逐步回归分析显示 ,危险因素中的甘油三酯、年龄、收缩压、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白影响血浆sLDL水平 ,(P <0 0 5～ 0 0 1)。Logistic回归分析结果显示 ,sLDL >5 0 %者发生缺血性脑梗死的危险性增加 (OR值 =3 1,95 %可信区间1 6 4 9～ 5 6 91,P <0 0 0 1) ;sLDL异常与腔隙性脑梗死和脑出血的关系无显著统计学意义 (P >0 0 5 )。结论　sLDS水平与缺血性脑梗死的发生密切相关 ,可能是缺血性脑梗死新的危险因素。     

维生素C对LDL氧化修饰和已受到氧化修饰LDL的作用

本文观察了维生素C(VC)对低密度脂蛋白(LDL)氧化修饰及对已受到氧化修饰LDL的作用。在Cu~(2+)与LDL温育前加入VC,能使硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)的生成及琼脂糖电泳迁移率增加,使荧光物质的强度受到抑制,防止维生素E含量减低。但当Cu~(2+)与LDL温育3h后加入VC,再继续温育24h,与不加VC相比,TBARS 含量和琼脂糖电泳迁移率无明显差异。结果说明VC对LDL氧化修饰有抑制作用,对已受到氧化修饰的LDL(O-LDL)无阻断作用。     

内皮氧化低密度脂蛋白受体介导了氧化低密度脂蛋白对内皮细胞的损伤

目的：探讨氧化低密度脂蛋白（ｏｘｉｄｉｚｅｄ ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ,ｏｘＬＤＬ） 血管内皮受体（ｌｅｃｔｉｎｌｉｋｅ ｏｘＬＤＬｒｅｃｅｐｔｏｒ,ＬＯＸ１）在ｏｘＬＤＬ致内皮细胞损伤中的作用及其机制。方法：放射配基结合及竞争抑制实验检测人脐静脉内皮细胞（ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｃｅｌｌｓ,ＨＵＶＥＣｓ）存在ＬＯＸ１ 的高亲和位点,采用倒置相差显微镜观察细胞形态的改变,测定细胞及上清乳酸脱氢酶（ｌａｃｔｉｃ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ,ＬＤＨ）活性,计算细胞死亡率,发色底物法检测内皮细胞培养液中的组织纤溶酶原激活物（ｔｉｓｓｕｅ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ,ｔＰＡ） 和纤溶酶原激活物抑制剂（ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒｉｎｈｉｂｉｔｏｒ１ ,ＰＡＩ１）的活性; 反转录聚合酶链反应检测ＬＯＸ１ ｍＲＮＡ 表达水平,Ｃａ２＋ 示踪测定细胞钙转运功能。结果：ＨＵＶＥＣｓ 存在ＬＯＸ１ 的高亲和位点［Ｂｍａｘ（５４ ±２０） ｎｇ／１０６ ｃｅｌｌｓ,Ｋｄ（２．０ ±０．６） ×１０－８ ｍｏｌ·Ｌ－ １］ ,单纯加入ｏｘＬＤＬ作用２４ ｈ      

Oxidatively Modified Very Low Density Lipoprotein Enhances Monocyte Adhesion to Endothelial Cells

ＯｘｉｄａｔｉｖｌｙＭｏｄｉｆｉｅｄＶｅｒｙＬｏｗＤｅｎｓｉｔｙＬｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎＥｎｈａｎｃｅｓＭｏｎｏｃｙｔｅＡｄｈｅｓｉｏｎｔｏＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＣｅｌｌｓＦＥＮＧＹｏｕ－ｍｅｉ（冯友梅）；ＺＨＡＮＧＺｈｉ－ｂｉｎｇ（张志兵）；ＷＡＮＧ...     

羟自由基、低密度脂蛋白和胆固醇对血管内皮细胞钙响应能力的影响

目的：探讨分别经羟自由基、低密度脂蛋白和胆固醇处理后，血管内皮细胞对外钙浓度增加的响应能力的改变，为研究动脉粥样硬化的发生发展机制提供新线索。方法：用人脐静脉内皮细胞作为模型细胞，分别用羟自由基、低密度脂蛋白、胆固醇和氧化胆固醇进行单独或组合处理，利用Fluo—3荧光标记细胞内游离Ca^2 ，以激光共聚焦手段考察了当细胞外液[Ca^2 ]增加时胞内[Ca^2 ]的变化。结果：正常血管内皮细胞对胞外[Ca^2 ]增加响应灵敏，胞内[Ca^2 ]升高到一定程度后，迅速下降至初始水平；细胞经羟自由基处理后，对Ca^2 的响应明显迟钝，胞内[Ca^2 ]达到峰值的时间延长了350s，细胞形态也有损伤迹象；细胞经低密度脂蛋白处理后，胞内[Ca^2 ]达到峰值的时间延长了250s，且对[Ca^2 ]的调节作用明显失常，使细胞处于高钙水平；而细胞经羟自由基和低密度脂蛋白依次处理后，细胞内[Ca^2 ]达到峰值的时间延长了500s，损伤程度更大，当胞外[Ca^2 ]增加时细胞破裂死亡；细胞经胆固醇处理后，当胞外[Ca^2 ]突然升高时，胞内[Ca^2 ]不仅没有升高，反而缓慢降低；细胞经羟自由基和胆固醇依次处理后，对胞外[Ca^2 ]的突然升高反应紊乱。结论：羟自由基、低密度脂蛋白和胆固醇可干扰血管内皮细胞对钙离子的响应，致内皮细胞损伤，这可能是此类致病因子引起动脉粥样硬化的机制之一。